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金雀异黄素和槲皮素对大鼠肝星状细胞增殖、胶原合成及Ⅰ型原胶原nRNA水平的影响(英文)

Acta Pharmacologica Sinica 2001年第9期22卷 27-30页

作者：康鲁平齐荔红张俊平史宁张珉吴堂明陈竞上海中国 200433 福州总院药剂科第二军医大学药学院生化药学教研室第二军医大学药学院生化药学教研室福州 350001

目的:研究金雀异黄素和槲皮素对HSC-T6大鼠肝星状细胞增殖和胶原合成及Ⅰ型原胶原mRNA表达的影响。方法:细胞增殖和胶原合成分别采用结晶紫染色法和[~3H]-脯氨酸掺入法。原胶原mRNA水平用RT-PCR法测定。结果:金雀异黄素(25-70μmol/L)... 详细信息

目的:研究金雀异黄素和槲皮素对HSC-T6大鼠肝星状细胞增殖和胶原合成及Ⅰ型原胶原mRNA表达的影响。方法:细胞增殖和胶原合成分别采用结晶紫染色法和[~3H]-脯氨酸掺入法。原胶原mRNA水平用RT-PCR法测定。结果:金雀异黄素(25-70μmol/L)和槲皮素(6.25-50μmol/L)浓度依赖抑制HSC-T6细胞增殖和胶原合成,对Ⅰ型原胶原mRNA表达也有抑制作用。结论:金雀异黄素和槲皮素抑制肝星状细胞增殖和胶原合成可能对肝纤维化有保护作用。

关键词：金雀异黄素槲皮素肝硬化细胞分裂胶原逆转录聚合酶链反应信使RNA

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GM-CSF基因修饰、抗原预激的树突状细胞体内诱导白血病细胞分化的实验研究

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中华血液学杂志 1998年第6期19卷 299-302页

作者：赵勇曹雪涛第二军医大学免疫学教研室

目的：探讨树突状细胞在肿瘤免疫治疗过程中的作用及机制。方法：以小鼠ＦＢＬ３红白血病细胞皮下接种Ｃ５７ＢＬ／６小鼠建立荷瘤模型，采用流式细胞仪分析和透射电镜等技术，观察了粒巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）基因修... 详细信息

目的：探讨树突状细胞在肿瘤免疫治疗过程中的作用及机制。方法：以小鼠ＦＢＬ３红白血病细胞皮下接种Ｃ５７ＢＬ／６小鼠建立荷瘤模型，采用流式细胞仪分析和透射电镜等技术，观察了粒巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）基因修饰的抗原预激的树突状细胞体内治疗作用。结果：采用ＧＭＣＳＦ基因修饰的抗原预激的树突状细胞治疗，可以明显抑制白血病细胞生长；白血病细胞表达ＣＤ１４水平增加，同时ＭＨＣⅡ、Ｂ７１、Ｂ７２、ＶＣＡＭ１表达水平亦显著升高；组织学观察显示瘤组织内具有不同分化阶段的单核细胞，电镜下可见白血病细胞体积减小、细胞器较成熟、胞浆中出现较多的溶酶体、核／浆比值减小及白血病细胞的凋亡。肿瘤内部及外周血中，ＣＤ８＋细胞百分率亦较各对照组明显升高。结论：采用ＧＭＣＳＦ基因修饰的抗原预激的树突状细胞治疗。

关键词：白血病基因治疗 GM-CSF 树突状细胞

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大鼠下丘脑视交叉上核及视上核内加压素神经元心理应激后的变化

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解剖学杂志 1992年第6期15卷 434-436页

作者：朱成刘淑琴孟璘宋田斌钱国桢严进何北平陈宜张第二军医大学组胚教研室上海200433 第二军医大学生理教研室第二军医大学解剖教研室

为探讨心理因素对下丘脑精酸加压素(AVP)神经元的影响,采用心理应激动物模型,以免疫组织化学及微机图像分析等方法,检测大鼠下丘脑的视交叉上核(SCN)及视上核(SON)等AVP阳性细胞的总面积,将闪光间期长短不均加电刺激组(A组)和光、电刺激... 详细信息

为探讨心理因素对下丘脑精酸加压素(AVP)神经元的影响,采用心理应激动物模型,以免疫组织化学及微机图像分析等方法,检测大鼠下丘脑的视交叉上核(SCN)及视上核(SON)等AVP阳性细胞的总面积,将闪光间期长短不均加电刺激组(A组)和光、电刺激与A组相同但闪光间期衡定组(B组)及仅给同量闪光的对照组(C组)的AVP阳性物互相比较.结果,在SCN,A组>B组>C组的;在SON,则B组>A组>C组的.观测正中隆起(ME)外带的阳性纤维,A组的呈色深且面积大,B组和C组的呈色均较浅且面积小.此外,不论A组或B组,同一组的SCN及SON内AVP阳性物总面积的变化皆呈现负相关的增长关系,其相关系数(r)分别为-0.8024和-0.7679,t检验表明,其相关性有显著意义,据此,著者认为:SON及SCN的AVP神经元都与心理应激反应有关,但变化方向有所不同,其意义有待研究.

关键词：鼠视交叉上核视上核心理应激

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IL-2和(或)IL-3重组腺病毒直接体内注射对大剂量化疗后小鼠造血功能恢复的影响

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中华血液学杂志 1998年第2期19卷 78-81页

作者：于敏曹雪涛杨建民章卫平张明徽孟沛霖第二军医大学长海医院上海第二军医大学免疫学教研室

目的：检测应用直接腹腔注射白细胞介素２（ＩＬ－２）重组腺病毒和（或）白细胞介素３（ＩＬ－３）重组腺病毒方法对化疗后小鼠造血功能恢复的影响。方法：正常小鼠腹腔注射大剂量环磷酰胺（２００ｍｇ／ｋｇ）２４小时后，直接腹腔注... 详细信息

目的：检测应用直接腹腔注射白细胞介素２（ＩＬ－２）重组腺病毒和（或）白细胞介素３（ＩＬ－３）重组腺病毒方法对化疗后小鼠造血功能恢复的影响。方法：正常小鼠腹腔注射大剂量环磷酰胺（２００ｍｇ／ｋｇ）２４小时后，直接腹腔注射ＩＬ－２重组腺病毒（Ａｄ－ＩＬ－２）和（或）ＩＬ－３重组腺病毒（Ａｄ－ＩＬ－３），用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测相应细胞内细胞因子ｍＲＮＡ，并持续观察小鼠外周血白细胞、股骨单个核细胞、骨髓ＣＦＵ－ＧＭ的恢复情况。结果：腹腔注射Ａｄ－ＩＬ－２和（或）Ａｄ－ＩＬ－３组小鼠腹腔细胞可测及相应细胞因子ｍＲＮＡ，血清中可测及相应细胞因子；腹腔注射Ａｄ－ＩＬ－３组小鼠外周血白细胞、股骨单个核细胞、骨髓ＣＦＵ－ＧＭ最低值均显著提高（Ｐ＜０．０５），但腹腔注射Ａｄ－ＩＬ－２组小鼠对化疗后小鼠造血功能无明显影响，联合应用Ａｄ－ＩＬ－２和Ａｄ－ＩＬ－３与单独应用Ａｄ－ＩＬ－３相比无显著性差异。结论：腹腔直接注射Ａｄ－ＩＬ－３能促进化疗后小鼠造血功能的恢复。

关键词： IL-2 IL-3 基因治疗造血功能肿瘤重组腺病毒

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烫伤大鼠远隔器官热休克抑制基因表达的研究

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生理学报 1997年第4期49卷 370-374页

作者：郭兴中刘宇健王易伦徐仁宝第二军医大学基础部生物化学教研室上海200433 第二军医大学病理生理学教研室上海200433 第二军医大学遗传学教研室上海200433

为了研究应激是否可诱导完整高等动物远隔器官细胞的热休克反应，在已发现烫伤大鼠肝、脑有热休克蛋白诱导的基础上，本文进一步研究了正常基因表达的抑制。雄性SD大鼠背部烫伤后，于10～240min分别断头处死，然后通过斑点印迹法分析热... 详细信息

为了研究应激是否可诱导完整高等动物远隔器官细胞的热休克反应，在已发现烫伤大鼠肝、脑有热休克蛋白诱导的基础上，本文进一步研究了正常基因表达的抑制。雄性SD大鼠背部烫伤后，于10～240min分别断头处死，然后通过斑点印迹法分析热休克抑制基因-1信使核糖核酸的变化。结果发现：其在烫伤大鼠肝、脑中迅速减少，烫伤后240min仍未恢复到对照水平；其减少与烫伤程度成比例。因而可得出如下结论：应激可以诱导完整动物远隔器官的热休克反应，并讨论了其可能的病理意义。

关键词：灼伤应激热休克反应基因表达热休克抑制基因

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小鼠肝脏中细胞角蛋白19阳性细胞的肝向分化特性

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第二军医大学学报 2017年第5期38卷 536-542页

作者：陆炼陈费于兵赵健胡以平第二军医大学基础部细胞生物学教研室上海200433 第二军医大学国际合作肿瘤研究所上海200433

目的明确小鼠肝脏中的细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)阳性(CK19^+)细胞是否可分化为成熟肝细胞。方法利用CK19^(CreERT)小鼠和Rosa26-GFP小鼠杂交得到CK19^(CreERT)/Rosa26-GFP双转基因小鼠,注射他莫昔芬(tamoxifen,TM)后检测小鼠肝脏中CK19^+细胞的GFP标记情况。在此基础上分别构建3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氢-2,4,6-三甲基吡啶和四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)肝脏损伤模型,采用肝脏组织冰冻切片结合免疫荧光染色检测肝脏中GFP标记的CK19^+细胞的分化情况。结果获得CK19^(CreERT)/Rosa26-GFP双转基因小鼠,免疫荧光染色结果显示CK19^+细胞可被GFP标记。在DDC肝脏损伤模型小鼠中检测到增生性小胆管内有GFP^+细胞,这些GFP^+细胞表达胆管上皮细胞标志物CK19,且DDC肝损伤模型小鼠中GFP^+胆管细胞比例高于未损伤对照组[(63.5±6.3)%vs(53.6±4.8)%,P<0.05];在CCl4肝损伤模型组小鼠中检测到肝脏实质细胞中有GFP^+细胞,这些GFP^+细胞表达成熟肝细胞标志物白蛋白(ALB),且CCl4肝损伤模型组小鼠肝脏中GFP^+细胞比例高于未损伤对照组[(0.15±0.02)%vs(0.008±0.003)%,P<0.01]。结论小鼠肝脏内的CK19^+细胞群体中存在具有肝向分化潜能的前体细胞,可能为真正的肝干细胞的识别鉴定提供一个新线索。

关键词：肝干细胞 CK19 转基因小鼠 CK19CreERT Rosa26-GFP

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糖皮质激素对兔炎症过程中中性粒细胞粘附的影响

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中华医学杂志 1995年第5期75卷 270-272页

作者：陈骏龚肖崎钟纪根第二军医大学病理生理教研室

为了探讨糖皮质激素（ＧＣ）在分子水平抑制炎症过程中中性粒细胞粘附的作用机理，分别测定了兔中性粒细胞ＣＤ１８的表达以及中性粒细胞与ＩＣＡＭ－１包被磁珠的粘附率，并对两者进行相关性分析。结果发现：糖皮质激素抑制肿瘤坏死因... 详细信息

为了探讨糖皮质激素（ＧＣ）在分子水平抑制炎症过程中中性粒细胞粘附的作用机理，分别测定了兔中性粒细胞ＣＤ１８的表达以及中性粒细胞与ＩＣＡＭ－１包被磁珠的粘附率，并对两者进行相关性分析。结果发现：糖皮质激素抑制肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）引起的兔中性粒细胞ＣＤ１８的表达增加，这种抑制作用可被糖皮质激素受体（ＧＲ）的阻断剂ＲＵ３８４８６所逆转；不同浓度地塞米松作用的中性粒细胞的粘附与ＣＤ１８表达呈明显的正相关（ｒ＝０．９６６）。说明ＧＣ通过ＧＲ的介导，抑制ＴＮＦ引起的兔中性粒细胞ＣＤ１８表达的增加，从而在抑制中性粒细胞的粘附中起重要作用。

关键词：糖皮质激素炎症细胞粘连嗜中性白细胞

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一种新型的双功能体内突变检测系统的建立

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第2期34卷 199-203页

作者：姚真真黎怀星车文良贺艳傅继梁第二军医大学医学遗传教研室上海200433 第二军医大学医学遗传教研室

将含有两个LacI靶基因的穿梭质粒pMCLacI/neo整合入小鼠的基因组中 ,建立一种能同时分析体内表达基因和沉默基因的双功能的新型体内突变检测系统 ,使在体内比较分析不同组织、器官中表达基因和沉默基因的突变谱和突变率成为可能。486个... 详细信息

将含有两个LacI靶基因的穿梭质粒pMCLacI/neo整合入小鼠的基因组中 ,建立一种能同时分析体内表达基因和沉默基因的双功能的新型体内突变检测系统 ,使在体内比较分析不同组织、器官中表达基因和沉默基因的突变谱和突变率成为可能。486个经显微注射过 pMCLacI/neo质粒的C5 7BL/ 6小鼠的受精卵 ,分别移植入 18只假孕母鼠的输卵管中 ,产下 32只存活小鼠 ,进一步检测证实 :(1)有 5只小鼠在基因组中整合有 pMCLacI/neo基因 ;(2 )该质粒中的两个LacI靶基因 ,只有一个表达 ;(3)能有效地从小鼠基因组中回收 pMCLacI/neo基因。因此 ,成功建立了pMCLacI/neo的转基因小鼠品系 ;可以将该小鼠用于整体动物水平研究表达基因和沉默基因突变机制的模型 ;该模型为一种具有双功能的新型体内突变检测系统

关键词：转基因小鼠突变检测 LacI 质粒

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日本血吸虫潜在药物靶点β-碳酸酐酶的表达与鉴定

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中国血吸虫病防治杂志 2016年第2期28卷 161-166页

作者：张聪慧朱淮民第二军医大学病原生物学教研室上海200433

目的原核表达日本血吸虫(Schistosoma japonicum)潜在的药物靶点β-碳酸酐酶(β-CA)并测定其催化活性。方法根据β-CA保守序列,在日本血吸虫基因组中鉴定β-CA序列,核酸序列全合成后将其导入原核表达系统进行融合表达。SDS-PAGE及Wester... 详细信息

目的原核表达日本血吸虫(Schistosoma japonicum)潜在的药物靶点β-碳酸酐酶(β-CA)并测定其催化活性。方法根据β-CA保守序列,在日本血吸虫基因组中鉴定β-CA序列,核酸序列全合成后将其导入原核表达系统进行融合表达。SDS-PAGE及Western blotting鉴定表达蛋白后,采用Ni亲和层析方法纯化目的蛋白,并测定碳酸酐酶活性。结果c DNA序列Sjp_0056790.1具有β-CAs的保守序列;成功将该核酸序列导入重组表达载体p ET-32a(+)-Sja CA中;SDSPAGE和Western blotting检测结果显示融合蛋白分子量大小约为38 k Da;碳酸酐酶活性测定结果显示该蛋白具有碳酸酐酶活性,且该活性受乙酰唑胺抑制。结论 Sjp_0056790.1编码日本血吸虫β-CA,本研究成功表达了具有催化活性的日本血吸虫的β-CA,为后续的药物筛选奠定了基础。

关键词：日本血吸虫 β-碳酸酐酶(β-CA) 药物靶点表达活性测定

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绿色荧光蛋白标记的D氨基酸氧化酶基因在人宫颈癌细胞中的表达研究(英文)

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Acta Genetica Sinica 2004年第11期31卷 1175-1181页

作者：何志颖江千里陈元晓温丽敏姚玉成王新民李文林王健民胡以平第二军医大学细胞生物学教研室上海200433 第二军医大学附属长海医院血液内科上海200433 昆明医学院生物学教研室昆明650031

为了探讨绿色荧光蛋白标记的红色酵母D 氨基酸氧化酶 (DAAO)基因在人宫颈癌细胞 (HeLa细胞 )中的表达及其功能 ,采用基因重组技术构建了含有CMV启动子和EGFP、DAAO基因开放阅读框 (ORF)的真核表达载体 pIRES DAAO。脂质体法转染HeLa细... 详细信息

为了探讨绿色荧光蛋白标记的红色酵母D 氨基酸氧化酶 (DAAO)基因在人宫颈癌细胞 (HeLa细胞 )中的表达及其功能 ,采用基因重组技术构建了含有CMV启动子和EGFP、DAAO基因开放阅读框 (ORF)的真核表达载体 pIRES DAAO。脂质体法转染HeLa细胞 ,荧光显微镜下观察转染细胞中绿色荧光蛋白的表达 ,流式细胞术分析转染效率并筛选荧光阳性细胞 ,命名为HeLa D。以不同浓度的前药D Ala处理HeLa D细胞 ,MTT法检测细胞存活率。结果显示 ,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白在HeLa D细胞中表达 ,流式细胞术成功筛选出HeLa D细胞。前药D Ala能明显杀伤HeLa D细胞。结果表明 ,EGFP可作为报告基因快速筛选DAAO表达载体转染的细胞 ,DAAO/D

关键词：绿色荧光蛋白 D-氨基酸氧化酶自杀基因报告基因基因表达宫颈癌

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