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第二军医大学药学院生药学教研室简介

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药学实践杂志 2000年第5期18卷 361-页

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蛇床子总香豆素抑制大鼠多核破骨细胞的形成和分化

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Acta Pharmacologica Sinica 2003年第2期24卷 181-186页

作者：秦路平张巧艳田野苹郑汉臣黄矛黄宝康第二军医大学基础医学部免疫学教研室第二军医大学新药评价中心第二军医大学药学院生药学教研室第二军医大学药学院生药学教研室上海 200433 中国

目的:研究蛇床子总香豆素(TCFC)对破骨细胞的作用,探讨其抗骨质疏松的作用机制。方法:采用原代培养的成骨细胞和骨髓单核细胞联合培养的方法,在1,25-(OH)2维生素D3和地塞米松作用下,使骨髓单核细胞分化形成破骨细胞。通过相差显微镜下... 详细信息

目的:研究蛇床子总香豆素(TCFC)对破骨细胞的作用,探讨其抗骨质疏松的作用机制。方法:采用原代培养的成骨细胞和骨髓单核细胞联合培养的方法,在1,25-(OH)2维生素D3和地塞米松作用下,使骨髓单核细胞分化形成破骨细胞。通过相差显微镜下的形态观察,抗酒石酸酸性磷酸酶染色和骨片上骨吸收陷窝的形成来鉴定破骨细胞。磷酸苯二钠法测定破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶的活性,计算机图像分析技术测定骨片上破骨性骨吸收陷窝的面积,原子吸收光谱法测定破骨细胞和骨片联合培养的培养上清中钙的浓度。结果:蛇床子总香豆素(TCFC)2.5—25mg/L抑制破骨细胞的形成和分化。TCFC0.25-25mg/L作用24-72h,可以显著抑制抗酒石酸酸性磷酸酶的活性,TCFC 25mg/L作用48h和72h分别可使其降低26.3%和24.1%。TCFC 25mg/L可使破骨细胞在骨片上形成的吸收陷窝的面积减少25.05%,骨片中Ca2+的释放减少41.73%。结论:TCFC通过抑制破骨细胞的形成、抗酒石酸酸性磷酸酶的活性和骨吸收作用减少骨质丢失。

关键词：蛇床子香豆素类骨质疏松破骨细胞骨吸收

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仙茅酚苷类成分促进成骨细胞骨形成和抑制破骨细胞骨吸收

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第二军医大学学报 2016年第5期37卷 562-568页

作者：张乃丹蒋益萍薛黎明韩婷张巧艳辛海量第二军医大学药学院生药学教研室上海200433

目的以新生大鼠颅盖骨成骨细胞和由骨髓单核细胞诱导的破骨细胞为模型，观察仙茅代表性酚苷类成分仙茅苷、仙茅素A、苔黑酚葡萄糖苷和苔黑酚龙胆二糖苷的抗骨质疏松作用。方法MTT法测定成骨细胞的增殖；磷酸苯二钠法测定成骨细胞碱性磷... 详细信息

目的以新生大鼠颅盖骨成骨细胞和由骨髓单核细胞诱导的破骨细胞为模型，观察仙茅代表性酚苷类成分仙茅苷、仙茅素A、苔黑酚葡萄糖苷和苔黑酚龙胆二糖苷的抗骨质疏松作用。方法MTT法测定成骨细胞的增殖；磷酸苯二钠法测定成骨细胞碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）和破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP）的活性；茜素红染色观察成骨细胞骨矿化结节的形成；TRAP染色测定破骨细胞的数目；罗丹明一鬼笔环肽染色和激光共聚焦显微镜观察成骨细胞细胞骨架和破骨细胞肌动蛋白环的结构和形态；将破骨细胞与骨片共同培养，计算机图像处理测定破骨细胞在骨片上形成的骨吸收陷窝的面积。结果仙茅苷在1O叫和10邓mol／L的浓度下可促进成骨细胞的增殖（P〈0．05），10^-7 -10^-5mol／L浓度时抑制破骨细胞TRAP的活性（P〈O．05）。仙茅苷、苔黑酚葡萄糖苷和苔黑酚龙胆二糖苷可减少破骨细胞的数目，抑制破骨细胞的形成（P〈O．05）。仙茅苷在1010mol／L，仙茅素A、苔黑酚葡萄糖苷和苔黑酚龙胆二糖苷在10叫mol／L浓度时均可增加成骨细胞ALP的活性和骨矿化结节的形成（P〈O．01），在一定程度上使1，25-二羟维生素战损伤的成骨细胞细胞骨架的结构得以恢复；减少破骨细胞在骨片上形成的骨吸收陷窝面积，破坏破骨细胞伪足和F-actin的结构。结论仙茅酚苷类成分仙茅苷、仙茅素A、苔黑酚葡萄糖苷和苔黑酚龙胆二糖苷均可促进成骨细胞的骨形成，抑制破骨细胞的骨吸收，具有显著的抗骨质疏松作用。

关键词：仙茅酚苷类化合物成骨细胞破骨细胞

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大孔树脂对草乌生物碱的吸附性能及提纯工艺

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复旦学报（医学版） 2003年第3期30卷 267-269页

作者：黄建明郭济贤陈万生陆斌孙明明段更利复旦大学药学院药物分析教研室上海200032 复旦大学药学院生药学教研室上海200032 第二军医大学药学院生药学教研室上海200433 复旦大学药学院

目的研究大孔树脂对草乌生物碱的吸附性能及提纯工艺。方法采用酸性染料比色法测定总生物碱含量。结果正交试验优选的吸附条件为:SIP 1300大孔树脂优于AB-8大孔树脂;原液浓度为0.2 g生药/mL,pH=5,流速为4 BV(柱床体积)/h。洗脱液采... 详细信息

目的研究大孔树脂对草乌生物碱的吸附性能及提纯工艺。方法采用酸性染料比色法测定总生物碱含量。结果正交试验优选的吸附条件为:SIP 1300大孔树脂优于AB-8大孔树脂;原液浓度为0.2 g生药/mL,pH=5,流速为4 BV(柱床体积)/h。洗脱液采用80％乙醇时,解吸效果较好。结论大孔树脂适用于草乌生物碱的提纯。

关键词：草乌大孔树脂总生物碱含量酸性染料比色法生药 BV 洗脱液提纯工艺原液吸附性能

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红花cDNA-AFLP反应体系的优化研究

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中草药 2008年第8期39卷 1242-1246页

作者：冯娜郭美丽张汉明第二军医大学药学院生药学教研室上海200433

目的为构建红花的遗传连锁图谱和功能基因的研究,探讨影响红花cDNA扩增片段长度多态性(cDNA amplified fragment length polymorphism,cDNA-AFLP)的各种因素,建立并优化红花cDNA-AFLP反应体系。方法以红花新鲜花瓣为材料,针对其内含物... 详细信息

目的为构建红花的遗传连锁图谱和功能基因的研究,探讨影响红花cDNA扩增片段长度多态性(cDNA amplified fragment length polymorphism,cDNA-AFLP)的各种因素,建立并优化红花cDNA-AFLP反应体系。方法以红花新鲜花瓣为材料,针对其内含物特殊性对Trizol法加以改进提取RNA,采用无RNase H活性的鼠源反转录酶(M-MLV RTase)结合置换合成法反转录双链cDNA;两步法酶切与连接,优化酶切时间;连接产物和预扩产物分别设置不同稀释倍数扩增并对选扩反应体系略微调整后,用6%的聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳分离,银染检测。结果改进Trizol法得到的红花总RNA样品较为完整,纯度较高,可直接用于双链的合成;经无RNase H活性反转录酶结合置换合成法得到高质量的cDNA模板。建立优化后的红花cDNA-AFLP体系为:250ng cDNA 37℃6 h经限制性内切酶MseI和EcoRI完全酶切,16℃连接12 h;连接产物最佳稀释倍数为10倍;预扩产物稀释为150倍;PAGE电泳得到清晰、稳定、分辨率较高的多态性条带。结论本研究建立的反应体系适用于红花功能基因的cDNA-AFLP研究。

关键词：红花 cDNA-AFLP 优化

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覆盆子二氯甲烷萃取物中的化学成分

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第二军医大学学报 2009年第10期30卷 1199-1202页

作者：游孟涛李亚葵郭美丽第二军医大学药学院生药学教研室上海200433

目的:研究覆盆子二氯甲烷萃取物的化学成分。方法:利用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱及重结晶等技术提取分离覆盆子化学成分,用EI-MS、ES-MS、1H NMR、13C NMR、HMQC及HMBC等光谱方法鉴定化合物结构。结果:得到10种化合物,鉴定其中... 详细信息

目的:研究覆盆子二氯甲烷萃取物的化学成分。方法:利用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱及重结晶等技术提取分离覆盆子化学成分,用EI-MS、ES-MS、1H NMR、13C NMR、HMQC及HMBC等光谱方法鉴定化合物结构。结果:得到10种化合物,鉴定其中9种化合物,分别为二十六烷醇(Ⅰ)、β-谷甾醇(Ⅱ)、4-羟基-3-甲氧基苯甲醛(Ⅲ)、对羟基苯甲醛(Ⅳ)、齐墩果酸(Ⅴ)、stigmast-5-en-3-ol,oleate(Ⅵ)、1H-2-indenone,2,4,5,6,7,7a-hexahydro-3-(1-methylethyl)-7a-methyl(Ⅷ)、4-羟基-3-甲氧基苯甲酸(Ⅸ)、liballinol(Ⅹ)。结论:化合物Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅷ、Ⅹ均首次从该植物中分离得到。

关键词：覆盆子化学成分酚木质素

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与红花苞叶刺性状紧密连锁的SRAP分子标记研究

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药学学报 2007年第7期42卷 794-797页

作者：郭庆华郭美丽第二军医大学药学院生药学教研室上海200433

利用相关序列扩增多态性(SRAP)技术研究与红花苞叶刺性状紧密连锁的基因,为研究与红花重要性状相关的遗传基础及红花的分子标记辅助育种提供实验依据。采用分离体分组混合分析法(BSA),以杂交F2代红花个体苞叶刺多而长以及苞叶无刺的极... 详细信息

利用相关序列扩增多态性(SRAP)技术研究与红花苞叶刺性状紧密连锁的基因,为研究与红花重要性状相关的遗传基础及红花的分子标记辅助育种提供实验依据。采用分离体分组混合分析法(BSA),以杂交F2代红花个体苞叶刺多而长以及苞叶无刺的极端性状为依据,分别构建有刺与无刺两个近等基因池。利用SRAP标记技术,在两亲本及基因池间筛选45对引物,通过单株验证,获得与红花苞叶刺性状连锁的1个SRAP标记(M3E3)。从聚丙烯酰胺凝胶上回收和克隆SRAP片段(M3E3),并测序。该标记在苞叶有刺的20个单株中,有16株扩增出该特异性条带,4株未扩增出该条带。苞叶无刺的15个单株均无该条带。经计算,该标记和有刺红花基因之间的交换值为11.4%,说明两者之间紧密连锁。该片段的精确长度为349bp,其碱基组成为A+T=41.08%。与红花苞叶刺性状紧密连锁的SRAP标记M3E3可作为无刺红花品种选育的辅助分子标记。

关键词：红花 SRAP 苞叶刺

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苦参碱抑制小鼠腹膜巨噬细胞纤维化细胞因子的产生和作用(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2001年第8期22卷 97-100页

作者：张俊平张珉金城周斌谢渭芬郭澄张纯钱定华中国 200433 第二军医大学药学院生化药学教研室第二军医大学药学院生化药学教研室上海长征医院

目的:研究苦参碱对小鼠腹腔巨噬细胞释放纤维化细胞因子以及对巨噬细胞条件培养基(MCM)促HSC-T6大鼠储脂细胞和NIH3T3成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法:巨噬细胞先后用卡西霉素1μmol/L和脂多糖100μg/L刺激诱导产生纤维化因子。... 详细信息

目的:研究苦参碱对小鼠腹腔巨噬细胞释放纤维化细胞因子以及对巨噬细胞条件培养基(MCM)促HSC-T6大鼠储脂细胞和NIH3T3成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法:巨噬细胞先后用卡西霉素1μmol/L和脂多糖100μg/L刺激诱导产生纤维化因子。细胞上清中促细胞增殖活性和促胶原合成活性分别用结晶紫染色法和[~3H]-脯氨酸掺入法测定。转化生长因子β活性采用貂肺上皮MV-l-Lu细胞增殖抑制法测定。结果:苦参碱(0.5-2mmol/L)显著抑制LPS诱导的促胶原合成活性和TGFβ的产生,但不能抑制巨噬细胞产生促细胞增殖活性;苦参碱还能剂量依赖地抑制MCM诱导的HSC-T6细胞以及NIH3T3细胞增殖和胶原合成。结论:苦参碱抗肝纤维化作用与抑制巨噬细胞纤维化因子的产生和阻断其作用有关。

关键词：苦参碱巨噬细胞肝硬化细胞分裂胶原转化生长因子β

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苦参碱体内外抗大鼠肝纤维化的作用(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2001年第2期22卷 91-94页

作者：张俊平张珉周俭平刘福堂周斌谢渭芬郭澄张纯钱定华第二军医大学药学院生化药学教研室第二军医大学药学院生化药学教研室上海中国 200433 长征医院

目的:研究体外苦参碱对HSC-T6大鼠储脂细胞和NIH3T3成纤维细胞增殖和胶原合成的影响,以及体内对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的影响。方法:细胞增殖和胶原合成分别采用结晶紫染色法和[~3H]脯氨酸掺入法。肝纤维化评价以血清透明质酸和肝... 详细信息

目的:研究体外苦参碱对HSC-T6大鼠储脂细胞和NIH3T3成纤维细胞增殖和胶原合成的影响,以及体内对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的影响。方法:细胞增殖和胶原合成分别采用结晶紫染色法和[~3H]脯氨酸掺入法。肝纤维化评价以血清透明质酸和肝中羟脯氨酸含量为指标。结果:苦参碱(1～2mmol·L-1)显著减少血清刺激的HSC-T6细胞以及NIH3T3细胞增殖和胶原合成;苦参碱(0.25～2mmol·L-1)浓度依赖地抑制血小板源生长因子(PDGF)促HSC-T6细胞增殖以及抑制转化生长因子β1(TGF-β1)促胶原合成的作用。体内苦参碱(50,100mg·kg-1)均能显著降低血清透明质酸和肝脏羟脯氨酸水平。结论:苦参碱阻断PDG和TGF-β1的作用,抑制储脂细胞增殖和胶原合成可能是其抗肝纤维化作用的机制之一。

关键词：苦参碱肝硬化细胞分裂胶原血小板源生长因子转化生长因子β

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青葙SRAP体系的建立和优化

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中草药 2008年第2期39卷 263-266页

作者：郭庆华郭美丽薛芊冯娜张汉明第二军医大学药学院生药学教研室上海200433

目的探讨影响青葙SRAP(sequence-related amplified polymorphism)扩增的各种因素,建立并优化青葙SRAP反应体系,为分子水平鉴定青葙子及其伪品,探讨青葙不同种质间的亲缘关系奠定基础。方法用CTAB法提取青葙DAN,设计Taq酶浓度(0.02、0.0... 详细信息

目的探讨影响青葙SRAP(sequence-related amplified polymorphism)扩增的各种因素,建立并优化青葙SRAP反应体系,为分子水平鉴定青葙子及其伪品,探讨青葙不同种质间的亲缘关系奠定基础。方法用CTAB法提取青葙DAN,设计Taq酶浓度(0.02、0.04、0.06U/μL)、dNTP浓度(0.10、0.20、0.30mmol/L)、Primer浓度(0.15、0.30、0.45μmol/L)3水平3因素试验和Mg2+浓度(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mmol/L)8水平单因素试验。在25μL体系中加入模板DNA20ng,对体系进行优化,用琼脂糖进行检测。结果建立了适合青葙的SRAP体系,在25μL体系中,DNA为20ng,Taq酶浓度为0.04U/μL,dNTP浓度为0.30mmol/L,Primer浓度为0.30μmol/L,Mg2+浓度为2.5mmol/L,优化后的体系目标条带增多,且比较稳定,重现性好,得到了较好的扩增效果。结论本研究建立的反应体系适合青葙SRAP的研究。为从分子水平鉴定青葙子正品与伪品以及鉴定青葙不同种质资源奠定了基础。

关键词：青葙 SRAP 反应体系

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