检索结果-内蒙古大学图书馆

氧化型低密度脂蛋白对RAW264．7细胞Siglec-1表达及分泌细胞因子的影响

中华微生物学和免疫学杂志 2010年第1期30卷 51-55页

作者：熊怡淞朱烨陆慧琦李畅韩志君仲人前第二军医大学长征医院实验诊断科全军医学免疫诊断中心全军临床免疫重点实验室上海200003

目的通过氧化型低密度脂蛋白（oxidized low—density lipoprotein，ox-LDL）活化巨噬细胞系对Siglec-1（sialic acid—binding immunoglobulin-like lectin 1，唾液酸黏附素）表达及细胞因子分泌的影响探讨对动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）发病的可能作用。方法制备ox—LDL，并用不同浓度ox-LDL刺激小鼠巨噬细胞株RAW264．7，48h后收集细胞和上清，分别用流式细胞仪和RT—PCR检测不同浓度ox-LDL刺激后细胞表面Siglec-1蛋白和基因表达水平，并测定培养上清液中巨噬细胞炎性蛋白-1α（MIP-1α）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和IL-8的浓度。结果与对照组相比，ox—LDL能刺激RAW264．7细胞表面Siglec-1蛋白和mRNA表达升高（P〈0．01），培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的表达升高（P〈0．01），并呈浓度依赖性。结论ox—LDL可呈剂量依赖性刺激RAW264．7巨噬细胞诱导Siglec-1表达及分泌炎性细胞因子增加，在动脉粥样硬化的发生发展中可能起一定作用。

关键词：动脉粥样硬化氧化型低密度脂蛋白 Siglec-1 RAW264.7

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原发性胆汁性肝硬化患者血清中Th17相关细胞因子的表达

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第二军医大学学报 2009年第6期30卷 703-705页

作者：周运恒荣光华熊怡淞朱烨耿红莲杨再兴仲人前第二军医大学长征医院实验诊断科全军医学免疫诊断中心全军临床免疫重点实验室上海200003

目的:观察原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者血清中Th17分化相关细胞因子(IL-1β、IL-6、IL-17、IL-23、TGF-β)的变化,探讨Th17细胞在PBC发病过程中的作用。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法比较PBC患者(n=... 详细信息

目的:观察原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者血清中Th17分化相关细胞因子(IL-1β、IL-6、IL-17、IL-23、TGF-β)的变化,探讨Th17细胞在PBC发病过程中的作用。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法比较PBC患者(n=78)、乙型肝炎后肝硬化患者(PHC,n=30),健康对照(HC,n=60)血清中Th17分化相关细胞因子含量。结果:与HC组相比,PBC患者血清IL-1β、IL-6、IL-17A和IL-23水平显著升高(P<0.05),而TGF-β水平差异无统计学意义;与PHC组相比,PBC患者血清IL-1β、IL-6和TGF-β水平显著降低,而IL-17和IL-23水平显著升高(P<0.05)。结论:PBC患者处于慢性炎症状态,Th17细胞可能在PBC的发病和发展过程中发挥着重要的作用。

关键词：原发性胆汁性肝硬化 Th17细胞细胞因子

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定量RT-PCR测定冠心病患者外周血Siglec-1(CD169)的基因表达水平

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第二军医大学学报 2008年第11期29卷 1307-1310页

作者：熊怡淞王皓吴炜霖周运恒梁艳杨再兴荣光华仲人前第二军医大学长征医院实验诊断科全军医学免疫诊断中心全军临床免疫重点实验室上海200003

目的:建立检测人Siglec-1(sialic acid-binding immunoglobulin-like lectins,唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素1,CD169)mRNA含量的实时荧光定量RT-PCR的方法,并用来测定冠心病患者外周血单个核细胞(PBMCs)中Siglec-1的基因表达水平,探讨Siglec-1基因表达水平与冠状动脉粥样硬化发生发展的关系。方法:基于SYBR Green荧光标记技术,建立实时荧光相对定量RT-PCR方法,在ABI PRISM 7000荧光定量PCR仪上测定了57例冠状动脉粥样硬化性心脏病患者和38例健康对照者外周血中Siglec-1 mRNA的含量。生化常规测定所有入选者血脂水平。结果:冠心病组Siglec-1 mR-NA的平均拷贝数显著高于健康对照组,为健康对照组的3.23(1.28～8.11)倍(P<0.01);其中急性心肌梗死组(AMI)、稳定型心绞痛组(SA)和不稳定型心绞痛组(UA)分别为对照组的3.32(1.38～7.97)、2.56(0.88～7.42)、3.35(1.25～8.96)倍,而三组之间差异无统计学意义;冠心病血脂正常组和血脂异常组的Siglec-1 mRNA平均拷贝数无显著差异。结论:成功建立了人Siglec-1基因表达含量的实时荧光定量RT-PCR检测方法;冠心病患者Siglec-1 mRNA的含量显著高于健康对照组,且其含量高低与血脂无关;Siglec-1mRNA含量在冠心病患者外周血单核细胞上表达显著升高,说明冠心病患者外周血单核细胞已经发生巨噬细胞化,单核巨噬细胞介导的免疫炎症反应在冠心病发生发展过程中起重要作用。

关键词：冠状动脉硬化 Siglec-1 逆转录聚合酶链反应

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氧化型低密度脂蛋白对单核巨噬细胞株U937表达Siglec-1蛋白及分泌细胞因子的影响

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第二军医大学学报 2010年第1期31卷 33-36页

作者：熊怡淞吴韦霖张玲珍周运恒韩志君仲人前第二军医大学长征医院实验诊断科全军医学免疫诊断中心全军临床免疫重点实验室上海200003

目的探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的致动脉粥样硬化(AS)作用是否通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1的表达发挥作用。方法制备ox-LDL并用不同浓度刺激人巨噬细胞株U937,48h后收集细胞和培养上清液,分别用流式细胞仪和RT-PCR检测不同浓... 详细信息

目的探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的致动脉粥样硬化(AS)作用是否通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1的表达发挥作用。方法制备ox-LDL并用不同浓度刺激人巨噬细胞株U937,48h后收集细胞和培养上清液,分别用流式细胞仪和RT-PCR检测不同浓度ox-LDL刺激后Siglec-1蛋白和Siglec-1mRNA的表达水平,并用ELISA试剂盒测定培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的浓度。结果与对照组相比,ox-LDL能刺激U937细胞表面Siglec-1蛋白和Siglec-1mRNA表达升高(P<0.01),培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的表达升高(P<0.01),并呈浓度依赖性。结论ox-LDL的致AS作用可能部分是通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1蛋白表达而活化巨噬细胞,分泌细胞因子和趋化因子诱导更多巨噬细胞和淋巴细胞的活化参与粥样斑块中的炎症反应。

关键词：动脉粥样硬化氧化型低密度脂蛋白 Siglec-1 细胞因子类单核巨噬细胞

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原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞趋化因子受体的表达及临床意义

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第二军医大学学报 2009年第2期30卷 142-146页

作者：韩志君吴传勇蒋廷旺唐裕杰周晔陈燕谷明莉邓安梅仲人前第二军医大学长征医院实验诊断科全军医学免疫诊断中心全军临床免疫重点实验室上海200003

目的:初步探讨趋化因子受体(chemokine receptor)与原发性胆汁性肝硬化(PBC,primary biliary cirrhosis)发生发展的关系。方法:采用实时荧光定量PCR和流式细胞术,分别从基因转录和蛋白表达水平检测60例PBC、60例乙型肝炎肝硬化患者(疾... 详细信息

目的:初步探讨趋化因子受体(chemokine receptor)与原发性胆汁性肝硬化(PBC,primary biliary cirrhosis)发生发展的关系。方法:采用实时荧光定量PCR和流式细胞术,分别从基因转录和蛋白表达水平检测60例PBC、60例乙型肝炎肝硬化患者(疾病对照)和60例健康对照者的外周血单个核细胞(PBMCs)中CCR1、CCR3和CCR5的表达;生化常规测定PBC患者和健康对照者的总胆红素(TBIL)、γ-谷氨酰基转移酶(γ-GT)水平,分析它们与趋化因子之间的相关性。结果:PBC患者PBMCs中的CCR1、CCR3、CCR5的mRNA和蛋白表达均明显低于健康对照组和疾病对照组(P<0.05),而疾病对照组和健康对照组PBMCs中CCR1、CCR3、CCR5 mRNA和蛋白表达无统计学差异(P>0.05);PBC患者Ⅲ、Ⅳ期PBMCs中的CCR1、CCR3、CCR5的mRNA和蛋白表达较Ⅰ、Ⅱ期明显降低(P<0.05);PBC患者CCR1蛋白表达水平与TBIL水平显著负相关(r=-0.445,P<0.01),与γ-GT无线性相关关系(r=-0.230,P>0.05);CCR3蛋白表达水平与TBIL水平无线性相关关系(r=-0.173,P>0.05),与γ-GT水平负相关(r=-0.295,P<0.05);CCR5蛋白表达水平与TBIL、γ-GT水平均负相关(r=-0.531,P<0.01;r=-0.665,P<0.01)。结论:CCR1、CCR3、CCR5的表达与PBC的发生发展存在一定的相关性,可能参与了PBC的调控机制,为PBC的诊断和预防提供了新线索。

关键词：胆汁性肝硬化趋化因子受体流式细胞术单个核细胞

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Siglec-1在巨噬细胞吞噬脂质及分泌趋化因子中的作用

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中华检验医学杂志 2010年第7期33卷 691-696页

作者：熊怡淞李畅孙懿仲人前第二军医大学长征医院实验诊断科全军医学免疫诊断中心全军临床免疫重点实验室上海200003

目的研究ox-LDL刺激对体外培养小鼠巨噬细胞株RA-W264.7和原代小鼠骨髓巨噬细胞Siglec-1表达的影响,及M-CSF促进巨噬细胞Siglec-1高表达或小干扰RNA（si-RNP,）靶向抑制Siglec-1表达特点,并观察巨噬细胞吞噬脂质和分泌趋化因子的变化,... 详细信息

目的研究ox-LDL刺激对体外培养小鼠巨噬细胞株RA-W264.7和原代小鼠骨髓巨噬细胞Siglec-1表达的影响,及M-CSF促进巨噬细胞Siglec-1高表达或小干扰RNA（si-RNP,）靶向抑制Siglec-1表达特点,并观察巨噬细胞吞噬脂质和分泌趋化因子的变化,以探讨Siglec-1在巨噬细胞参与AS中的作用.方法用铜氧化法制备ox-LDL,根据预实验结果,选取ox-LDL 100μg/ml作为刺激物,在含巨噬细胞溶液中加入不同类型si-RNA或不同浓度M-CSF后,分为6组[正常对照组（仅加巨噬细胞）、ox-LDL 100μg/ml组、ox-LDL 100 μg/ml＋Si-RNA 25092 ng/ml组、ox-LDL 100μg/ml＋si-RNA 36182 ng/ml组、ox-LDL 100 μg/ml＋M-CSF 5 ng/ml组和ox-LDL 100μg/ml＋M-CSF 10 ng/ml 组].分别用si-RNA转染巨噬细胞抑制Siglec-1表达,M-CSF刺激促进巨噬细胞Siglec-1表达,并用荧光定量PCR检测Siglec-1抑制或表达增强效果.再用ox-LDL刺激48 h收集细胞和培养上清液,ELISA测定培养上清液中MIP-1 alpha、MCP-1和IL-8的浓度（每组3复孔）,以观察巨噬细胞活化情况;油红0染色观察Siglec-1抑制或表达增强后对巨噬细胞吞噬脂质颗粒的影响（每组3复孔）.结果巨噬细胞经si-RNA转染后,用荧光显微镜观察,si-RNA能有效转染巨噬细胞,转染效率约90%;荧光定量PCR检测si-RNA的结果显示,当si-RNA 2509和si-RNA,3618在最佳转染浓度（40 pmol/L）时,对Siglec-1抑制率分别为0.54±0.11和0.52±0.16;比正常对照组（1.00±0.24）高（t值分别为5.227、4.992,P均〈0.01）.M-CSF 10.g/ml刺激48 h后Siglec-1 mRNA表达增加约4倍（4.16±1.25比1.00±0.24,t=7.448,P〈0.01）.si-RNA 3618干扰Siglec-1后,MCP-1、MIP-1alpha和NIP-23个巨噬细胞趋化因子的分泌分别为（359.28±47.80）pg/ml、（33.76±14.28）ng/ml、（7.87±1.55）ng/ml,比单纯加ox-LDL 100μg/ml组明显降低[分别为（577.89±35.95）pg/ml、（69.17±11.82）ng/ml、（12.28±1.19）ng/ml,P分别〈0.001、0.05、0.01];而加M-CSF 10 ng/ml组可明显促进巨噬细胞趋化因子分泌[分别为（672.89±43.80）pg/ml、（101.31±24.17）ng/ml、（14.81±0.54）ng/ml],比单纯加ox-LDL 100μg/ml组明显升高（P均〈0.05）.同时,单纯加ox-LDL100μg/ml组可见部分细胞吞噬ox-LDL,胞内出现红色颗粒,巨噬细胞转变为泡沫细胞,M-CSF10 ng/ml和5 ng/ml组可见大量红色脂肪颗粒充满巨噬细胞胞浆,导致大量泡沫细胞形成,而si-RNA 2509和Si-RNA3618组巨噬细胞内红色脂肪颗粒比单纯加ox-LDL 100μg/ml组少,且泡沫细胞形成少.结论 Siglec-1有可能作为潜在脂质吞噬受体,参与巨噬细胞吞噬脂质演变成泡沫细胞,并激活巨噬细胞,分泌MIP-1 alpha、MCP-1和IL-8等趋化因子,诱导更多巨噬细胞和淋巴细胞的活化,从而参与粥样斑块中的炎症反应.靶向抑制Siglec-1可降低巨噬细胞脂质吞噬和分泌趋化因子能力,也有可能成为潜在治疗或延缓AS发展的新靶点.

关键词：动脉粥样硬化氧化型低密度脂蛋白唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素-1 巨噬细胞吞噬趋化因子

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IL-22抑制ox-LDL诱导的CRL-1730细胞凋亡并上调其Bcl-2表达

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第二军医大学学报 2011年第3期32卷 233-237页

作者：孙懿胡志德黄元兰熊怡淞邓安梅仲人前第二军医大学长征医院实验诊断科全军医学免疫诊断中心全军临床免疫重点实验室上海200003

目的研究IL-22对ox-LDL诱导的CRL-1730细胞(人脐静脉内皮细胞)凋亡的影响及其机制。方法 100μg/ml ox-LDL刺激CRL-1730细胞,不同时间点经实时荧光定量RT-PCR检测CRL-1730细胞中IL-22受体R1(IL-22R1)mRNA的表达状况。然后在ox-LDL诱导的... 详细信息

目的研究IL-22对ox-LDL诱导的CRL-1730细胞(人脐静脉内皮细胞)凋亡的影响及其机制。方法 100μg/ml ox-LDL刺激CRL-1730细胞,不同时间点经实时荧光定量RT-PCR检测CRL-1730细胞中IL-22受体R1(IL-22R1)mRNA的表达状况。然后在ox-LDL诱导的CRL-1730细胞凋亡模型中加入20 ng/ml外源性IL-22,通过AnnexinⅤ-PI凋亡试剂盒检测其对细胞凋亡的影响,经实时荧光定量反转录PCR检测Bcl-2、Bcl-xl、Bcl-w、caspase 3及STAT3mRNA的表达,采用免疫印迹法分析STAT3磷酸化和Bcl-2蛋白的水平。结果 IL-22R1 mRNA在ox-LDL刺激后表达明显增高(P<0.05),且于12 h达峰值(P<0.01);加入IL-22可明显抑制ox-LDL刺激诱导的内皮细胞凋亡(P<0.01),促进抗凋亡基因Bcl-2、Bcl-xl和Bcl-w表达,而降低caspase 3 mRNA表达(P<0.01)。此外,IL-22作用1～2 h STAT3发生磷酸化,4 h后Bcl-2蛋白表达升高(P<0.01)。结论 IL-22可抑制ox-LDL诱导的CRL-1730细胞凋亡,这可能与其促使STAT3磷酸化,上调抗凋亡分子Bcl-2、Bcl-xl和Bcl-w的表达,抑制促凋亡分子caspase 3的表达有关。

关键词：白细胞介素人脐静脉内皮细胞氧化LDL 细胞凋亡 Bcl-2基因 STAT3蛋白

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唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素1在冠状动脉粥样硬化性心脏病患者外周血单个核细胞的表达及临床意义

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中华检验医学杂志 2009年第7期32卷 772-776页

作者：熊怡淞周运恒吴炜霖张玲珍梁艳杨再兴耿红莲王皓王爱华荣光华仲人前第二军医大学长征医院实验诊断科全军医学免疫诊断中心全军临床免疫重点实验室上海200003

目的观察唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素1（sialic acid—binding immunoglobulin—like lectin 1，Siglec．1，也称CD169）在冠状动脉粥样硬化性心脏病（CHD）患者外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞上的表达水平，并探讨其与冠状动... 详细信息

目的观察唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素1（sialic acid—binding immunoglobulin—like lectin 1，Siglec．1，也称CD169）在冠状动脉粥样硬化性心脏病（CHD）患者外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞上的表达水平，并探讨其与冠状动脉粥样硬化发生发展的关系。方法流式细胞术检测57例CHD患者及38名健康对照者外周血CD14,CD169双阳性细胞的表达率；生化常规测定所有入选者血脂水平；实时荧光相对定量逆转录（FQ—RT）-PCR方法检测入选对象外周血单个核细胞（PBMCs）中CD169 mRNA的含量。结果流式细胞仪检测发现，CD169在健康对照组及CHD组淋巴细胞和中性粒细胞上均无表达；CHD组单核细胞CD14CD169双阳性率为（12．7±2．4）％，显著高于健康对照组[（1．0±0．3）％，t＝23．2，P〈0．01]；CHD组CD169 mRNA的拷贝数显著高于健康对照组拷贝数（t=6．59，P〈0．01），为健康对照组的3．2倍；而CHD血脂正常组和血脂异常组的CD169阳性率[分别为（12．2±2．3）％和（13．4±2．5）％，f=1．87，P〉0．05]和mRNA平均拷贝数（分别为健康对照组的3．64和2．79倍，t=0．98，P〉0．05）差异均无统计学意义。结论CD169组成性表达于特定组织巨噬细胞上，健康人外周血单核细胞上并不表达，单核巨噬细胞受到炎症刺激时，CD169表达迅速上调。CD169蛋白及mRNA含量在CHD患者外周血单核细胞上表达显著升高，CHD患者外周血单核细胞已发生巨噬细胞化，单核巨噬细胞介导的免疫炎症反应在CHD发生发展过程中起重要作用。

关键词：冠心病白细胞单核膜糖蛋白类受体免疫流式细胞术

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统计在临床免疫学的应用

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中国免疫学杂志 2009年第6期25卷 568-570页

作者：韩志君杨小丽邓安梅仲人前第二军医大学长征医院实验诊断科全军医学免疫诊断中心全军临床免疫重点实验室上海200003

随着对人类疾病的免疫学机制和相关标记的深入了解,研究人类疾病、细胞因子与免疫学参数之间关系的报道也逐年增多,这不仅包括分析两个参数之间的简单关系,而且包括分析免疫力、疾病、环境、社会和遗传因素之间的复杂关系[1].免疫学参... 详细信息

随着对人类疾病的免疫学机制和相关标记的深入了解,研究人类疾病、细胞因子与免疫学参数之间关系的报道也逐年增多,这不仅包括分析两个参数之间的简单关系,而且包括分析免疫力、疾病、环境、社会和遗传因素之间的复杂关系[1].免疫学参数之间的复杂关系也给免疫学工作者带来了挑战:如何选择适当的统计方法,并从数据中最大量的获得信息.本文总结了免疫学数据的统计学方法,讨论了免疫学研究的具体方面,帮助免疫学工作者在遇到特定的研究问题时选择合适的统计学方法.下面我们对统计在临床免疫学研究中的应用进行综述.

关键词：临床免疫学统计方法免疫学参数统计学方法人类疾病免疫学机制细胞因子遗传因素

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微小RNA在免疫系统中作用机制的研究进展

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中华检验医学杂志 2011年第10期34卷 953-956页

作者：秦保东梁艳杨再兴仲人前第二军医大学附属长征医院实验诊断科全军医学免疫诊断中心全军临床免疫重点实验室 200003

miR作为一类内源性短序列[约21—25核苷酸（nt）]非编码的RNA，作用于基因的转录后水平，通过与mRNA的3’端非翻译区的特异性结合达到间接抑制翻译或直接降解mRNA的目的，进而参与调控机体细胞的增殖、分化、代谢、凋亡等生物学活动^[1... 详细信息

miR作为一类内源性短序列[约21—25核苷酸（nt）]非编码的RNA，作用于基因的转录后水平，通过与mRNA的3’端非翻译区的特异性结合达到间接抑制翻译或直接降解mRNA的目的，进而参与调控机体细胞的增殖、分化、代谢、凋亡等生物学活动^[1]。近年研究发现，在免疫系统中，

关键词：微小RNA 免疫系统 mRNA 非翻译区特异性结合生物学活动机体细胞核苷酸

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