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第六届全国儿科微生态学学术会议暨儿科微生态学新进展学习班

作者：上海市双歧三联活菌协作组徐正婕王兴鹏江石湖袁耀宗刘文忠谢渭芬李兆申洪秀华交通大学附属上海市第一人民医院消化科上海第二医科大学附属瑞金医院消化科上海第二医科大学附属仁济医院消化研究所第二军医大学附属长征医院消化科第二军医大学附属长海医院消化科第二医科大学微生物教研室

目的观察双歧三联活菌对腹泻型肠易激综合征(IBS)的疗效和安全性。方法采用多中心、随机、开放的临床试验。97例腹泻型IBS患者口服双歧三联活菌胶囊27d。记录并量化治疗前、后患者的症状和大便性状,检查血、尿、粪常规,记录治疗中的不... 详细信息

目的观察双歧三联活菌对腹泻型肠易激综合征(IBS)的疗效和安全性。方法采用多中心、随机、开放的临床试验。97例腹泻型IBS患者口服双歧三联活菌胶囊27d。记录并量化治疗前、后患者的症状和大便性状,检查血、尿、粪常规,记录治疗中的不良事件;7例患者服药前后前后进行选择性粪细菌培养。结果口服双歧三联活菌27d后,患者各项IBS症状评分明显下降,各项症状改善率为74.2%～87.6%,大便Bristol评分显著下降。粪细菌培养显示口服双歧三联活菌使乳杆菌和肠球菌在肠道定植。不良事件2例,与服药无关。结论双歧三联活菌可明显改善腹泻型IBS的症状,且安全性高,耐受性好。

关键词：肠易激综合征双歧三联活菌

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携带HCV核心蛋白原核表达质粒与真核表达质粒的减毒伤寒沙门菌诱导小鼠免疫应答之比较

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生物工程学报 2007年第5期23卷 862-866页

作者：陈志辉赵平吴淑梅曹洁张斌万谟彬柯金山戚中田第二军医大学长海医院感染科上海200433 第二军医大学微生物学教研室上海200433 第二军医大学长海医院实验诊断科上海200433

丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白是丙肝疫苗的重要候选抗原,然而,该蛋白因具有免疫调控作用而影响免疫应答的诱导。构建了HCV核心蛋白的两种表达质粒,一种是体内激活型原核表达质粒pZW-C,另一种是真核表达质粒pCI-C。将该两种质粒转化减毒鼠... 详细信息

丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白是丙肝疫苗的重要候选抗原,然而,该蛋白因具有免疫调控作用而影响免疫应答的诱导。构建了HCV核心蛋白的两种表达质粒,一种是体内激活型原核表达质粒pZW-C,另一种是真核表达质粒pCI-C。将该两种质粒转化减毒鼠伤寒沙门菌SL7207,得到重组菌SL7207/pZW-C和SL7207/pCI-C,分别将重组菌口服接种小鼠,检测小鼠的免疫应答,结果发现:①SL7207/pCI-C免疫鼠的CD3+CD4+T细胞持续降低,而SL7207/pZW-C免疫鼠的CD3+CD4+T细胞无明显改变;②SL7207/pCI-C免疫只诱导低水平抗HCV核心蛋白抗体,加强免疫对抗体阳转率及抗体水平无明显影响,而SL7207/pZW-C免疫组所有小鼠均产生较高水平的抗核心蛋白抗体。③SL7207/pCI-C免疫鼠脾细胞的体外增殖活性、细胞毒性T细胞活性以及加强免疫对细胞免疫应答的增强作用均明显不及SL7207/pZW-C免疫鼠。结果提示:携带真核表达质粒pCI-C的沙门菌因在小鼠细胞内表达天然形式(结构以及磷酸化修饰)的HCV核心蛋白,可能通过对T细胞的免疫抑制作用而弱化免疫应答。而以携带原核表达质粒pZW-C的沙门菌免疫可避免这一问题,并具有接种方便,成本低廉等优点,从而可望作为基于HCV核心蛋白为靶抗原的HCV疫苗的候选免疫方式。

关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白减毒伤寒沙门菌疫苗免疫应答

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可卡因苯丙胺调节转录肽相互作用蛋白的筛选

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基础医学与临床 2007年第1期27卷 25-30页

作者：陈娟赵瑛由振东第二军医大学长征医院神经内科上海200433 第二军医大学神经生物教研室上海200433

目的寻找可卡因苯丙胺调节转录肽(CART)受体或与其相互作用的蛋白。方法建立大鼠脑cDNA文库,以CART为诱饵,应用细菌双杂交方法筛选与CART相互作用的蛋白。结果成功构建大鼠脑pTRG-cDNA文库及诱饵质粒pBT-CART41-102。文库容量为3.37... 详细信息

目的寻找可卡因苯丙胺调节转录肽(CART)受体或与其相互作用的蛋白。方法建立大鼠脑cDNA文库,以CART为诱饵,应用细菌双杂交方法筛选与CART相互作用的蛋白。结果成功构建大鼠脑pTRG-cDNA文库及诱饵质粒pBT-CART41-102。文库容量为3.37×106,重组率98.5%。筛选约5.01×106个共转化克隆,证实为阳性克隆93个,全部DNA测序。经生物信息学方法分析得到stathm in等6个可能与CART相互作用的蛋白,并得到可能与CART相互作用的未知新蛋白,它们与22个已知膜蛋白或受体有短的极相似片段。结论CART可能与stathmin等6个已知蛋白相互作用,并可能与一些未知蛋白相互作用,这些未知蛋白与22个膜蛋白或受体有短的相似保守结构。

关键词： cDNA文库 CART 细菌双杂交系统蛋白质-蛋白质相互作用

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抗肝纤冲剂治疗慢性乙型肝炎肝纤维化前后临床及病理研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2007年第4期21卷 369-371页

作者：肖和杰石次国张爱萍李平范中善三峡大学第三临床学院葛洲坝中心医院感染科宜昌443002 第二军医大学微生物教研室

目的观察抗肝纤冲剂治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床疗效,探讨其可能的作用机制。方法随机将57例慢性乙型肝炎肝纤维化患者分为两组。治疗组45例采用抗肝纤冲剂配合常规护肝药物治疗;对照组12例仅用常规护肝药物治疗。观察两组患者治疗... 详细信息

目的观察抗肝纤冲剂治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床疗效,探讨其可能的作用机制。方法随机将57例慢性乙型肝炎肝纤维化患者分为两组。治疗组45例采用抗肝纤冲剂配合常规护肝药物治疗;对照组12例仅用常规护肝药物治疗。观察两组患者治疗前后血清肝功能、肝纤维化指标,并观察治疗前后肝组织病理及肝内Ⅳ型胶原免疫组化的改变。结果治疗组患者肝功能、肝纤维化指标、肝组织病理及肝内IV型胶原恢复程度均好于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论抗肝纤冲剂配合常规护肝药物治疗慢性乙型肝炎肝纤维化患者疗效显著,为临床治疗慢性肝炎肝纤维化开辟了新的治疗途径。

关键词：抗肝纤冲剂肝炎乙型慢性肝硬化肝/病理学

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TNF-α对子宫内膜间质细胞VEGF表达的影响

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生殖与避孕 2007年第7期27卷 450-453,493页

作者：王建军李怀芳廖小玲同济大学附属同济医院妇产科上海200065 第二军医大学微生物学教研室上海200433

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外培养的子宫内膜异位症(EMs)在位内膜间质细胞生长及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:应用MTS法分析TNF-α对来自EMs和非EMs症各10例患者的在位子宫内膜间质细胞生长的影响;并以荧光定量... 详细信息

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外培养的子宫内膜异位症(EMs)在位内膜间质细胞生长及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:应用MTS法分析TNF-α对来自EMs和非EMs症各10例患者的在位子宫内膜间质细胞生长的影响;并以荧光定量PCR、Western blot和定量ELISA检测不同浓度TNF-α作用下间质细胞VEGF的表达情况。结果:TNF-α呈剂量依赖方式促进EMs患者子宫内膜间质细胞的生长,并显著上调VEGF的表达;但对非EMs患者的子宫内膜间质细胞无上述作用。结论:TNF-α能明显促进EMs患者在位内膜间质细胞的生长并促进其VEGF的表达。

关键词：子宫内膜异位症(EMs) 间质细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α) 血管内皮生长因子(VEGF)

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犬骨髓多能成体祖细胞的体外培养、鉴定及向平滑肌样细胞的诱导分化

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第二军医大学学报 2007年第6期28卷 593-597页

作者：温昱李彬党瑞山张传森张喜刘艳春李瑞第二军医大学基础部人体解剖学教研室生物医学工程研究所上海200433 第二军医大学长征医院骨科上海200003 第二军医大学基础部人体解剖学教研室生物医学工程研究所上海200433

目的:探讨犬骨髓多能成体祖细胞(MAPC)的体外培养条件、生物学特性及其向平滑肌样细胞分化的可能性。方法:观察体外培养犬骨髓多能成体祖细胞的形态、生长情况,检测其表面标志,利用流式细胞技术检测MAPC的生长周期及特异表面标志表达率... 详细信息

目的:探讨犬骨髓多能成体祖细胞(MAPC)的体外培养条件、生物学特性及其向平滑肌样细胞分化的可能性。方法:观察体外培养犬骨髓多能成体祖细胞的形态、生长情况,检测其表面标志,利用流式细胞技术检测MAPC的生长周期及特异表面标志表达率;并以分化培养基诱导培养,采用RT-PCR方法检测骨髓多能成体祖细胞OCT-4及分化细胞SM-MHC (smooth muscle cells-myosin heavy chain)表达;检测分化细胞有无平滑肌细胞表面标志的表达。结果:光镜下观察犬骨髓多能成体祖细胞体积偏大,长多角型,数个细长伪足,细胞核大,胞质丰富,细胞增殖能力旺盛;表达表面标志CD13和SSEA-1.不表达CD44、CD45、CD133和MHCⅡ;RT-PCR结果显示表达OCT-4。诱导分化后,分化细胞表达平滑肌细胞表面标志——α^- SMA、calponin、SM-MHC;RT-PCR结果显示表达SM-MHC。结论:体外成功培养犬骨髓多能成体祖细胞,具有与文献报道类似的生物学特征;MAPC在一定诱导条件下具有向平滑肌样细胞分化的潜能。

关键词：骨髓多能成体祖细胞细胞培养细胞分化平滑肌样细胞

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大鼠脊髓横断性损伤后细胞周期蛋白D3的表达变化

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中华实验外科杂志 2007年第12期24卷 1573-1574页

作者：杨文贵肖锋季玉红孙琳琳孙文健马兆龙袁文赵剑沈爱国南通大学神经再生重点实验室江苏南通226001 南通大学医学院微生物与免疫学教研室第二军医大学附属梅山医院骨科

目的探讨细胞周期蛋白 D3(Cyclin D3)在横断性脊髓损伤(tSCI)后的表达变化以及定位情况。方法将48只成年 SD 大鼠随机分为8组:正常对照组,T9横断伤2、8 h、1、3、5、7和14 d 组,每组6只。采用 Western blot 测定损伤后各时间段 Cyclin D... 详细信息

目的探讨细胞周期蛋白 D3(Cyclin D3)在横断性脊髓损伤(tSCI)后的表达变化以及定位情况。方法将48只成年 SD 大鼠随机分为8组:正常对照组,T9横断伤2、8 h、1、3、5、7和14 d 组,每组6只。采用 Western blot 测定损伤后各时间段 Cyclin D3蛋白水平在脊髓中的表达变化。采用免疫组织化学方法检测 Cyclin D3在正常以及损伤后脊髓中的分布和定位。结果 West-ern blot 显示,Cyclin D3蛋白水平在 tSCI 后头、尾段均呈现先升高后下降的趋势,尾段明显:CyclinD3的表达于损伤后8 h 开始逐渐升高,3d 达到高峰,一直持续到第5天,之后逐渐下降。免疫组织化学表明 Cyclin D3在正常脊髓中均匀分布,损伤后3 d,Cyclin D3在脊髓白质和灰质中表达明显增强;免疫荧光双标记表明 Cyclin D3与神经元的标记物 neuronal nucleus(NeuN)、少突胶质细胞标记物 cyclic nucleotide 3′phosphohydrolase(CNPase)有明显共定位,与星形胶质细胞标记物 glial fibril-lary acidic protein(GFAP)和小胶质细胞标记物 OX-42也存在部分共定位。结论脊髓损伤后 Cyc-lin D3蛋白水平呈现明显的时相变化,并且与神经元、少突胶质细胞、星形胶质细胞和小胶质细胞存在共定位,提示 Cyclin D3参与了脊髓损伤后的病理生理过程。

关键词：脊髓损伤细胞周期表达

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沙利度胺对子宫内膜异位症的内膜间质细胞体外表达VEGF的影响

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中国新药与临床杂志 2007年第9期26卷 641-645页

作者：王建军李怀芳赵平同济大学附属同济医院妇产科上海200065 中国人民解放军第二军医大学微生物学教研室上海200433

目的:观察沙利度胺(ThD)对子宫内膜异位症病人内膜间质细胞的增殖及其血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:刮取子宫内膜异位症病人的子宫内膜组织,经体外分离、培养,用波形蛋白单抗进行免疫组化染色鉴定,应用四唑盐(MTS)分析肿瘤... 详细信息

目的:观察沙利度胺(ThD)对子宫内膜异位症病人内膜间质细胞的增殖及其血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:刮取子宫内膜异位症病人的子宫内膜组织,经体外分离、培养,用波形蛋白单抗进行免疫组化染色鉴定,应用四唑盐(MTS)分析肿瘤坏死因子α(TNF-α)和ThD对间质细胞生长的影响,以实时荧光定量PCR、Western Blot和定量ELISA分析在存在外源TNF-α的情况下,不同浓度ThD对间质细胞表达VEGF的影响。结果:TNF-α能促进子宫内膜间质细胞的增殖和分泌VEGF,而ThD能剂量依赖性抑制内膜间质细胞的增殖,并逆转TNF-α对VEGF的上调作用。结论:ThD可抑制体外培养的子宫内膜异位症内膜间质细胞的增殖及其VEGF的表达和分泌,提示ThD对于治疗子宫内膜异位症可能具有一定的作用。

关键词：沙利度胺子宫内膜异位症体外研究血管内皮生长因子

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含CpG免疫刺激序列的质粒能增强HBsAg诱导的免疫应答

含CpG免疫刺激序列的质粒能增强HBsAg诱导的免疫应答

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第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：陈志辉柯金山赵平戚中田第二军医大学附属长海医院第二军医大学微生物学教研室

来源于细菌基因组 DNA 的含非甲基化的胞嘧啶和鸟嘌呤核苷酸(CpG)基序的寡脱氧核苷酸(ODN)能激活脊椎动物的免疫细胞,在病毒感染、肿瘤以及过敏性疾病的治疗中具有广阔的应用前景,数种作为疫苗佐剂或者单一治疗制剂的

关键词：

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中国人群中眼附属器MALT淋巴瘤Bcl10基因的新的突变及其在临床诊断中的意义

中国人群中眼附属器MALT淋巴瘤Bcl10基因的新的突变及其在临床诊...

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第六届全国中医中西医结合眼科学术交流会

作者：朱婧魏锐利王梁华焦炳华第二军医大学长征医院眼科第二军医大学长征医院眼科第二军医大学生物化学与分子生物学教研室第二军医大学生物化学与分子生物学教研室

目的探讨 Bcl10基因在中国人群眼附属器黏膜相关淋巴组织 MALT 淋巴瘤、不典型淋巴组织增生和淋巴组织反应性增生中的表达和存在的新的突变,分析其突变,确定新的突变类型在临床诊断和发病机制中的作用。方法收集临床手术切除的新鲜冰冻... 详细信息

目的探讨 Bcl10基因在中国人群眼附属器黏膜相关淋巴组织 MALT 淋巴瘤、不典型淋巴组织增生和淋巴组织反应性增生中的表达和存在的新的突变,分析其突变,确定新的突变类型在临床诊断和发病机制中的作用。方法收集临床手术切除的新鲜冰冻组织标本共55例,经病理诊断为眼附属器 MALT 淋巴瘤23例,不典型淋巴组织增生标本10例,淋巴组织反应性增生10例,同时以正常外周淋巴结组织12例做为阴性对照组。用酸性酚氯仿法从新鲜冰冻肿瘤组织中提取总 RNA;逆转录合成 cDNA,行聚合酶链反应 PCR 和巢式 PCR 检测眼附属器 MALT 淋巴瘤和淋巴组织反应性增生及正常外周淋巴结组织中 Bcl10基因的表达,连接 PMD18-T载体转化 BL21大肠杆菌株,用双脱氧 San- ger 法行 DNA 测序,通过 Blast 比对分析,把发现的突变碱基对照国外报道的突变序列。同时光镜下 HE 染色,用石蜡包埋的标本通过免疫组织化学法和免疫荧光染色,在激光共聚焦显微镜下检测 Bcl10和 NF-κB 的共定位情况。所有参与研究的患者均通过眼科检查,接受手术并明确病理分型。结果在23例 MALT 淋巴瘤组中,有15例检出 Bcl10基因 cDNA 表达,对照国外报道的突变序列,发现有新的突变11例。10例不典型淋巴组织增生中发现有突变1例,与国外报道的相同。10例淋巴组织反应性增生中发现有新的突变1例。12例正常外周淋巴结组织均未检出 Bcl10基因的表达。Bcl10蛋白在20例 MALT 淋巴瘤石蜡标本中表达（86．96%）,其中中等强度核表达13例,弱到中等强度胞浆表达 7例。5例不典型增生标本中胞浆弥漫表达,1例反应性增生标本中胞核胞浆表达。NF- kappaB 的反应因子 I在18例 MALT 淋巴瘤中胞核胞浆有弥漫性表达,其中 Bcl10和 I 共表达有13例。有 Bcl10表达的标本一定有 I的表达,但有 I的表达却不一定有 Bcl10的表达。结论 Bcl10基因在中国人群眼附属器 MALT 淋巴瘤中有新的突变形式, 其中以第213位氨基酸甘氨酸突变为谷氨酸在该研究人群中为主要新的突变形式;其次为截断型突变即由 Bcl10的 CARD 结构域至 C 端截断,是为全长233位北基酸截断为99位氨基酸。该突变序列我们已发布于 GENBANK（EF189176）,突变型 Bcl10基因见于核表达和 NF-kappaB 共定位,与 Bcl10核转位激活 NF-kappaB 转录入核引起凋亡的改变是一致的。在不典型淋巴组织增生和淋巴组织反应性增生中发现了新的突变证明 Bcl10基因突变的检测灵敏于病理诊断,能在尚没有形态学改变及其他可鉴别指标下,判断出病变阶段和性质的改变。能对患者提供准确和及时的早期诊断,避免误诊和漏诊,为取得满意的疗效提供机会。由此可见 Bcl10基因的突变与肿瘤的恶性程度有关,并可能在激活 NF- kappaB 信号转导通路抑制淋巴瘤细胞凋亡的致瘤机制中有重要作用,可作为判断预后的灵敏指标。

关键词： Bcl10基因眼附属器 MALT 淋巴瘤黏膜相关淋巴组织基因突变检测 NF-kappaB 免疫荧光激光共聚焦诊断

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