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第二军医大学学报 1998年第3期19卷 205-208页

作者：曹广文戚中田潘欣张晓琴高军崔龙孔宪涛第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院普通外科第二军医大学长征医院实验诊断科

目的：克隆酪氨酸酶（Ｔｙｒ）启动子并探索其调控细菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）在黑色素瘤基因治疗中的应用价值。方法：用ＰＣＲ法从小鼠恶性黑色素瘤细胞Ｂ１６基因组中克隆Ｔｙｒ启动子片段并与正常序列比较，并于逆转录病毒载体Ｇ１Ｎ... 详细信息

目的：克隆酪氨酸酶（Ｔｙｒ）启动子并探索其调控细菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）在黑色素瘤基因治疗中的应用价值。方法：用ＰＣＲ法从小鼠恶性黑色素瘤细胞Ｂ１６基因组中克隆Ｔｙｒ启动子片段并与正常序列比较，并于逆转录病毒载体Ｇ１Ｎａ中调控ＣＤ基因（ＴｙｒＣＤ）。测体外表达和体内抗肿瘤作用。结果：来源于Ｂ１６基因组的Ｔｙｒ启动子重要反式作用位点未见突变。该Ｔｙｒ启动子可使ＣＤ基因在Ｂ１６中特异表达。转ＴｙｒＣＤ的Ｂ１６可以抑制亲代细胞的成瘤作用。含ＴｙｒＣＤ的重组病毒可在体内感染黑色素瘤细胞和骨髓细胞。体内注射５氟胞嘧啶后可使黑色素瘤消退，并对骨髓细胞有保护作用。结论：来源于正常组织或肿瘤组织的Ｔｙｒ启动子指导的ＣＤ基因在恶性黑色素瘤ｉｎｖｉｖｏ基因治疗方面是安全。

关键词：酪氨酸酶胞嘧啶脱氨酶黑色素瘤基因治疗

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大肠癌组织CEA基因启动子序列克隆及与正常组织相应序列的比较

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第二军医大学学报 1997年第4期18卷 301-305页

作者：曹广文杜平崔龙高军潘欣戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院普通外科

目的：研究人类不同组织细胞中癌胚抗原（ＣＥＡ）产生与其基因顺式作用序列改变的关系，评价该顺式作用序列在大肠癌组织特异性基因治疗中的应用价值。方法：采用套式ＰＣＲ方法分别从人新鲜大肠癌、相应癌旁粘膜组织、正常血细胞、正... 详细信息

目的：研究人类不同组织细胞中癌胚抗原（ＣＥＡ）产生与其基因顺式作用序列改变的关系，评价该顺式作用序列在大肠癌组织特异性基因治疗中的应用价值。方法：采用套式ＰＣＲ方法分别从人新鲜大肠癌、相应癌旁粘膜组织、正常血细胞、正常胎盘组织及建株癌基因组中扩增ＣＥＡ基因启动子核心序列，ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法确定扩增序列可靠性。用ＰＣＲ－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）和ＤＮＡ序列分析方法确定扩增序列突变情况。用Ｂａｎｄ－Ｓｈｉｆｔ分析法检验扩增序列的启动子功能。结果：不同组织细胞基因组中的ＣＥＡ基因转录起始位点上游－１３０ｂｐ～＋６９ｂｐ的ＣＥＡ基因启动子核心序列区段未发现明显序列差异。大肠癌组织中ＣＥＡ基因的转录与大肠癌基因组中ＣＥＡ基因启动子核心序列无明显的对应关系。从大肠癌组织和正常组织ＤＮＡ中扩增出来的ＣＥＡ启动子序列与ＣＥＡ阳性的ＬｏＶｏ大肠癌细胞核蛋白提取物的结合能力一致，但不能与ＣＥＡ阴性的ＲＣ９４０６人肾癌细胞结合。结论：ＣＥＡ基因在大肠癌细胞中的特异转录不是由于ＣＥＡ基因启动子序列的突变。来源于正常细胞或者大肠癌细胞基因组的ＣＥＡ基因启动子均适合大肠癌组织特异性基因治疗。

关键词：大肠肿瘤癌胚抗原基因启动子基因治疗

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携带HuIL-3基因的人肝癌特异性逆转录病毒载体的构建

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第二军医大学学报 1997年第1期18卷 9-12页

作者：高军曹广文戚中田杜平仇晓芳杨文国崔龙孙如美第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 第二军医大学长海医院普通外科

目的:构建携带人白细胞介素3（HuIL－3）cDNA的人肝癌特异性逆转录病毒载体。方法和结果：将HuIL－3cDNA克隆到逆转录病毒载体pMNSM的PL位点，构建SV40早期启动子驱动的载体pMNS－IL－3；从质粒pGEM．7Zf－AFPe中游离人甲胎蛋白（AFP）... 详细信息

目的:构建携带人白细胞介素3（HuIL－3）cDNA的人肝癌特异性逆转录病毒载体。方法和结果：将HuIL－3cDNA克隆到逆转录病毒载体pMNSM的PL位点，构建SV40早期启动子驱动的载体pMNS－IL－3；从质粒pGEM．7Zf－AFPe中游离人甲胎蛋白（AFP）增强子核心序列，先克隆到pMNSM的PL位点上，再将HuIL－3cDNA片段克隆到PL位点上，构建出SV40早期启动子和AFP增强子驱动的人肝癌特异性表达载体PMNSA－IL－3。结论：该载体为肝癌特异性转基因治疗提供了一条途径。

关键词：肝肿瘤逆转录病毒载体 HuIL-3 基因治疗

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几种从凝胶中回收YAC DNA的方法及其效果的比较

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第二军医大学学报 1997年第5期18卷 483-484页

作者：朱冠山缪为民周炜姚玉河焦炳华柴建华第二军医大学长海医院感染科第二军医大学基础医学部微生物学教研室复旦大学遗传所人类基因组实验室

几种从凝胶中回收ＹＡＣＤＮＡ的方法及其效果的比较＊朱冠山缪为民△周炜▲姚玉河▲焦炳华△柴建华▲自１９８７年首次构建了人类基因组酵母人工染色体（ＹＡＣ）分子克隆库［１］，目前ＹＡＣ的克隆容量已达８００～１０００ｋｂ，由... 详细信息

几种从凝胶中回收ＹＡＣＤＮＡ的方法及其效果的比较＊朱冠山缪为民△周炜▲姚玉河▲焦炳华△柴建华▲自１９８７年首次构建了人类基因组酵母人工染色体（ＹＡＣ）分子克隆库［１］，目前ＹＡＣ的克隆容量已达８００～１０００ｋｂ，由此而成为基因组作图和测序的一个最重...

关键词：染色体 YAC 凝胶 PFGE 回收 DNA 分离

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胞嘧啶脱氨酶基因体外特异性前药转换抗大肠癌作用研究

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外科 1997年第2期2卷 84-87页

作者：崔龙屠岳曹广文杜平戚中田高军吴宗娣仇小芳王元和第二军医大学附属长海医院外科 200433 第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学附属长征医院普通外科 200003

为使胞嘧啶脱氨酶(CD)基因在大肠癌细胞中特异表达。方法:构建了以CEA基因顺式转录调控序列驱动CD基因的组织特异型重组逆转录病毒载体G1CEACDNa,以脂质体法将重组载体及转录受LTR驱动的CD基因逆转录病毒载体pCD2分别转导入高分泌CEA的... 详细信息

为使胞嘧啶脱氨酶(CD)基因在大肠癌细胞中特异表达。方法:构建了以CEA基因顺式转录调控序列驱动CD基因的组织特异型重组逆转录病毒载体G1CEACDNa,以脂质体法将重组载体及转录受LTR驱动的CD基因逆转录病毒载体pCD2分别转导入高分泌CEA的大肠癌细胞LoVo中,经G418完全选择后进行前药5-FC敏感试验。结果:转导普通型及组织特异型CD基因的LoVo细胞较亲代细胞对5-FC的前药转换抑瘤效应明显(均为P<0.01);而转导组织特异性CD基因的LoVo细胞较转导普通型CD基因的LoVo细胞对5-FC的敏感性显著增高(P<0.01),其IC_(50)分别为0.1mmol/L和0.5mmol/L。结论:表明CEA TRS可驱动自杀基因在高分泌CEA大肠癌细胞中特异性表达,在一定程度上达到了靶向杀伤肿瘤细胞的目的。

关键词：大肠癌胞嘧啶脱氨酶癌胚抗原基因治疗

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携带HSV－tk基因的人肝癌特异性逆转录病毒载体的构建

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第二军医大学学报 1996年第2期17卷 101-104页

作者：高军曹广文戚中田仇小芳吴宗娣杜平杨文国崔龙第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院普通外科

构建携带单纯疱疹病毒ｔｋ基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的人肝癌特异性逆转录病毒载体。方法和结果：切除逆转录病毒载体ｐＭＮＳＭ内部的ＳＶ４０启动子使之成为ｐＭＮＭ；从真核表达载体ｐＢＰＧＫ－ｔｋ质粒中游离带有磷酸甘油酸激酶基因（... 详细信息

构建携带单纯疱疹病毒ｔｋ基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的人肝癌特异性逆转录病毒载体。方法和结果：切除逆转录病毒载体ｐＭＮＳＭ内部的ＳＶ４０启动子使之成为ｐＭＮＭ；从真核表达载体ｐＢＰＧＫ－ｔｋ质粒中游离带有磷酸甘油酸激酶基因（ｐｇｋ）启动子调控的ＨＳＶ－ｔｋ片段，克隆到ｐＭＮＭ的ＰＬ位点上，构建成普通型ＰＭＮｐ－ｔｋ逆转录病毒载体；从ｐＧＥＭ．７Ｚ－ＡＦＰｅ质粒中游离人甲胎蛋白基因增强子核心序列，克隆到ｐＭＮｐ－ｔｋ的ｐｇｋ启动子上游，构建成人肝癌特异型ｐＭＮＡＰ－ｔｋ逆转录病毒载体。结论：该载体对肝癌特异性前药转换基因治疗有重要意义。

关键词：肝肿瘤基因治疗逆转录病毒载体 HSV-tk

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逆转录病毒介导的人肝癌特异性HSV－tk／ACV的体外抗肝癌作用

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第二军医大学学报 1996年第6期17卷 505-508页

作者：高军曹广文戚中田吴宗娣杜平仇小芳崔龙杨文国第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院普通外科

目的：建立肝癌特异性前药转换基因治疗的方法。方法和结果：构建携带单纯疮疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的人肝癌特异性逆转录病毒载体，经过ＰＡ３１７细胞包装及病毒滴度测定后，感染肝癌ＨｅｐＧ２和ＳＭＭＣ７７２１细胞，... 详细信息

目的：建立肝癌特异性前药转换基因治疗的方法。方法和结果：构建携带单纯疮疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的人肝癌特异性逆转录病毒载体，经过ＰＡ３１７细胞包装及病毒滴度测定后，感染肝癌ＨｅｐＧ２和ＳＭＭＣ７７２１细胞，用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法证明ＨＳＶ－ｔｋ基因在ＡＦＰ高分泌的ＨｅｐＧ２细胞中得到特异转录，以阿昔洛韦（ＡＣＶ）为前药攻击转基因的肝癌细胞显示对ＨｅｐＧ２有相对选择性杀伤作用。结论：该ＡＦＰｅ／ＨＳＶ－ｔｋ／前药转换疗法为肝癌特异性基因治疗提供了有价值的资料。

关键词：肝肿瘤胸苷激酶甲胎蛋白增强子基因治疗

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小鼠Alb　e／p序列与肝癌细胞核蛋白之间的相互作用

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海军军医大学学报 1996年第4期17卷 354-357页

作者：杨文国曹广文高军吴宗娣谢苏庆崔龙潘欣杜平戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院普通外科第二军医大学长海医院消化内科

目的：研究肝癌组织特异性基因治疗的机理。方法：从小鼠肝细胞、肝癌细胞和黑色素瘤细胞中分别提取核蛋白组分和胞浆蛋白，分别与小鼠白蛋白增强子／启动子（Ａｌｂｅ／ｐ）、白蛋白增强子（Ａｌｂｅ）和白蛋白启动子（Ａｌｂｐ）结合... 详细信息

目的：研究肝癌组织特异性基因治疗的机理。方法：从小鼠肝细胞、肝癌细胞和黑色素瘤细胞中分别提取核蛋白组分和胞浆蛋白，分别与小鼠白蛋白增强子／启动子（Ａｌｂｅ／ｐ）、白蛋白增强子（Ａｌｂｅ）和白蛋白启动子（Ａｌｂｐ）结合。结果：Ｂａｎｄ－Ｓｈｉｆｔ试验和竞争试验发现某些肝癌细胞核蛋白组分能与Ａｌｂｅ／ｐ特异结合，其中与Ａｌｂｅ和Ａｌｂｐ特异结合的核蛋白在不同的组分中，而肝癌细胞胞浆蛋白和黑色素瘤细胞核蛋白不能与Ａｌｂｅ／ｐ结合。结论：提示肝癌细胞核中能与Ａｌｂｅ和Ａｌｂｐ作用的核蛋白是应用Ａｌｂｅ／ｐ调控目的基因于肝癌细胞中特异表达的基础。

关键词：肝肿瘤核蛋白白蛋白增强子启动子

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含CD基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建

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第二军医大学学报 1996年第3期17卷 289-291页

作者：崔龙曹广文王元和屠岳孟荣贵高军仇小芳吴宗娣谢苏庆第二军医大学长海医院普外科第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长征医院普外科

含ＣＤ基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建崔龙，曹广文，王元和，屠岳，孟荣贵，高军，仇小芳，吴宗娣，谢苏庆关键词大肠癌；胞嘧啶脱氨酶基因；逆转录病毒载体；癌胚抗原；转录调控序列胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）是真菌及某些大肠... 详细信息

含ＣＤ基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建崔龙，曹广文，王元和，屠岳，孟荣贵，高军，仇小芳，吴宗娣，谢苏庆关键词大肠癌；胞嘧啶脱氨酶基因；逆转录病毒载体；癌胚抗原；转录调控序列胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）是真菌及某些大肠杆菌等ＤＮＡ嘧啶补救合成途径中的关...

关键词：大肠肿瘤 CD基因逆转录病毒载体病毒载体

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肝癌细胞核蛋白对白蛋白增强子／启动子序列的体外转录调控作用

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第二军医大学学报 1996年第4期17卷 350-353页

作者：曹广文高军谢苏庆杨文国崔龙潘欣杜平戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院消化内科第二军医大学长海医院普通外科

目的：研究肝癌细胞核蛋白调控白蛋白＂持家基因＂转录调控序列对目的基因转录的作用。方法：分别从小鼠肝癌细胞、肝细胞和黑色素瘤细胞中提取核蛋白组分，用于体外启动白蛋白增强子／启动子的转录作用。结果：发现某些肝癌细胞和肝细... 详细信息

目的：研究肝癌细胞核蛋白调控白蛋白＂持家基因＂转录调控序列对目的基因转录的作用。方法：分别从小鼠肝癌细胞、肝细胞和黑色素瘤细胞中提取核蛋白组分，用于体外启动白蛋白增强子／启动子的转录作用。结果：发现某些肝癌细胞和肝细胞核蛋白组分具有明显的转录作用，而细胞浆蛋白和其他肿瘤核蛋白组分没有转录作用，将同一肝癌细胞某些核蛋白组分合并可使转录活性增强。结论：本研究在基因转录调控水平部分解释了应用白蛋白增强子／启动子调控目的基因于肝癌细胞中特异表达的机理。

关键词：肝肿瘤核蛋白转录分析白蛋白增强子启动子

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