检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 1997年第5期18卷 483-484页

作者：朱冠山缪为民周炜姚玉河焦炳华柴建华第二军医大学长海医院感染科第二军医大学基础医学部微生物学教研室复旦大学遗传所人类基因组实验室

几种从凝胶中回收ＹＡＣＤＮＡ的方法及其效果的比较＊朱冠山缪为民△周炜▲姚玉河▲焦炳华△柴建华▲自１９８７年首次构建了人类基因组酵母人工染色体（ＹＡＣ）分子克隆库［１］，目前ＹＡＣ的克隆容量已达８００～１０００ｋｂ，由... 详细信息

几种从凝胶中回收ＹＡＣＤＮＡ的方法及其效果的比较＊朱冠山缪为民△周炜▲姚玉河▲焦炳华△柴建华▲自１９８７年首次构建了人类基因组酵母人工染色体（ＹＡＣ）分子克隆库［１］，目前ＹＡＣ的克隆容量已达８００～１０００ｋｂ，由此而成为基因组作图和测序的一个最重...

关键词：染色体 YAC 凝胶 PFGE 回收 DNA 分离

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外参照PCR及其产物酶联杂交定量检测HBV DNA

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第二军医大学学报 2000年第2期21卷 120-123页

作者：缪晓辉戚中田孔宪涛第二军医大学长征医院感染科上海200003 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200003 长征医院实验诊断科

目的 :建立一种敏感、特异和精确的乙型肝炎病毒 (HBV )基因 PCR及其产物的酶联杂交定量分析技术。方法 :(1)常规 PCR法扩增 HBV DNA质粒和血清 HBV DNA,引物 (SP1 ,SP2 )为一对 HBV DNA S区基因特异引物 ,扩增片段长 319bp,SP2 的 5′... 详细信息

目的 :建立一种敏感、特异和精确的乙型肝炎病毒 (HBV )基因 PCR及其产物的酶联杂交定量分析技术。方法 :(1)常规 PCR法扩增 HBV DNA质粒和血清 HBV DNA,引物 (SP1 ,SP2 )为一对 HBV DNA S区基因特异引物 ,扩增片段长 319bp,SP2 的 5′端用生物素修饰。扩增条件经过严格优化组合 ,以最大限度减少非特异片段 ,包括引物二聚体的产生。设定 5个不同梯度的 HBV DNA外参照管 ,制作标准曲线。 (2 )酶联杂交分析 :PCR产物经 10 0℃解链并稀释后 ,与捕获探针 (长 2 0 nt,3′端用氨基修饰 ,借氨基与 DNA- BINDTM反应板结合 )杂交 ;用亲和素 -碱性磷酸酶及相应显色系统检测杂交信号。结果 :目的片段含量较低的 PCR产物 ,在琼脂糖凝胶电泳时未见光带 ,但可被后续的酶联杂交检出 ,故灵敏度可超过普通 PCR定性法。结论 :本定量方法操作相对简单 ,结果数据化 ,不受主观因素干扰 ,灵敏度很高 ,而且省时、省材。

关键词：聚合酶链反应乙型肝炎 HBV DNA

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中国姥鲨软骨源新生血管抑制因子(Sp8)的分离纯化及生物学活性

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第二军医大学学报 2000年第2期21卷 107-110页

作者：陈建鹤焦炳华缪为民王路王梁华缪辉南解放军第422医院内二科广东湛江524005 第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的 :从中国姥鲨软骨组织抽提蛋白质中筛选具有新生血管抑制活性和抗肿瘤活性的分子。方法 :盐酸胍抽提姥鲨软骨蛋白 ,采用超滤和分子筛柱层析等方法分离纯化获得相对分子质量为 8.3× 10 3的蛋白质 (Sp8) ,以体外抑制血管内皮细... 详细信息

目的 :从中国姥鲨软骨组织抽提蛋白质中筛选具有新生血管抑制活性和抗肿瘤活性的分子。方法 :盐酸胍抽提姥鲨软骨蛋白 ,采用超滤和分子筛柱层析等方法分离纯化获得相对分子质量为 8.3× 10 3的蛋白质 (Sp8) ,以体外抑制血管内皮细胞增殖、体内抑制新生血管生长和抑制小鼠移植 S180肉瘤生长作为筛选指标。结果 :Sp8可在体外抑制血管内皮细胞增殖 ,40μg/ml浓度时抑制率为 2 0 % ;在体内具有抑制新生血管生长的作用 ,兔角膜模型抑制率为 72 .7% ,鸡胚模型 (CAM)抑制率为 79% ;并能明显抑制小鼠体内移植 S180肉瘤的生长 (P<0 .0 0 1)。结论 :Sp8介导了鲨鱼软骨中的抗肿瘤活性 ,其作用可能是通过抑制肿瘤诱生新生血管形成这一途径来实现的。

关键词：鲨鱼软骨抑制因子新生血管抗肿瘤活性

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不同发育阶段人胚胎原始生殖细胞的定位及体外培养

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第二军医大学学报 2003年第9期24卷 944-946页

作者：刘善荣刘厚奇汤淑萍惠宁冀凯宏蒋正戚中田冯根生第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 长海医院妇产科基础医学部微生物学教研室 Burham InstituteSanDiegoCA92037USA

目的:对不同发育阶段的人胚胎原始生殖细胞(PGC)进行定位并比较其体外培养的差异.方法:取4～7周发育阶段的人胚胎,应用组织化学法检测PGC内碱性磷酸酶(AP)以对其定位.体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织进行培养,第1次传代后,用AP标记,... 详细信息

目的:对不同发育阶段的人胚胎原始生殖细胞(PGC)进行定位并比较其体外培养的差异.方法:取4～7周发育阶段的人胚胎,应用组织化学法检测PGC内碱性磷酸酶(AP)以对其定位.体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织进行培养,第1次传代后,用AP标记,计数不同发育阶段AP阳性的PGC和体外培养的阳性克隆并进行比较.结果:在卵黄囊、原肠、背侧肠系膜和生殖嵴处有AP强阳性细胞,阳性信号位于胞质内.阳性细胞散在分布,在生殖嵴处聚集成团.不同发育阶段的胚胎组织培养均有阳性克隆出现.统计学分析结果表明,4～7周人胚胎内AP阳性的PGC数目及细胞内信号强度无明显差异(P>0.05);由胚胎组织培养获得的AP阳性克隆数也无显著差异.结论:人PGC位于卵黄囊、原肠、背侧肠系膜和生殖嵴处.4～7周发育阶段,胚胎内PGC数目和体外培养的克隆数无明显变化.

关键词：胚胎原始生殖细胞体外培养定位碱性磷酸酶

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血液透析患者中TT病毒感染的检测及序列分析

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第二军医大学学报 2001年第4期22卷 331-333页

作者：倪武任浩缪晓辉戚中田叶朝阳第二军医大学长征医院感染病科上海200003 基础医学部微生物学教研室 3. 长征医院肾内科长征医院肾内科

目的 :研究血液透析患者中 TT病毒 (TTV)的感染状况及其致病性。方法 :针对病毒基因保守区设计引物 ,采用套式 PCR方法对 6 9例血液透析患者血清标本进行 TTV DNA检测及序列分析 ,并同时检测患者血清丙氨酸转氨酶 (AL T)及丙型肝炎病... 详细信息

目的 :研究血液透析患者中 TT病毒 (TTV)的感染状况及其致病性。方法 :针对病毒基因保守区设计引物 ,采用套式 PCR方法对 6 9例血液透析患者血清标本进行 TTV DNA检测及序列分析 ,并同时检测患者血清丙氨酸转氨酶 (AL T)及丙型肝炎病毒抗体 (抗 - HCV)。结果 :患者血清 TTV DNA总阳性率为 2 7.5 %。对其中 1例 PCR扩增产物测序 ,结果与其他TVV分离株如 GH1、TA2 78、TTVCHN1和 TTVCHN2的核苷酸序列同源性为 89%～ 10 0 % ,推测的氨基酸序列同源性为87%～ 10 0 %。抗 - HCV阳性与阴性患者的 TTV DNA阳性率无明显差异。所有患者均未见 AL T明显升高。结论 :血液透析患者存在较严重的 TTV感染 ,TTV感染与 HCV感染无明显相关性 ,未发现 TTV感染导致 AL T明显升高的证据。

关键词： TT病毒血液透析基因分析序列分析

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庚型肝炎病毒NS3蛋白在杆状病毒载体中的表达及其抗原性研究

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第二军医大学学报 2000年第9期21卷 849-852页

作者：朱分禄任浩朱诗应谢南潘卫董辉戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 南昌市传染病医院中心实验室

目的 :利用 Bac- to- Bac HT杆状病毒系统在 Sf9昆虫细胞中表达庚型肝炎病毒 (HGV) NS3蛋白 ,并对表达产物的免疫原性进行研究。方法 :将 HGV NS3基因片段定向克隆至转座载体 p Fast Bac HTa,转化 DH10 Bac感受态细胞 ,37℃振荡培养 4... 详细信息

目的 :利用 Bac- to- Bac HT杆状病毒系统在 Sf9昆虫细胞中表达庚型肝炎病毒 (HGV) NS3蛋白 ,并对表达产物的免疫原性进行研究。方法 :将 HGV NS3基因片段定向克隆至转座载体 p Fast Bac HTa,转化 DH10 Bac感受态细胞 ,37℃振荡培养 4h使发生转座 ,用抗生素平皿筛选重组 bacmid。脂质体介导转染 Sf9昆虫细胞 ,待细胞形态明显改变后收获细胞和培养上清液 ,将上清液再次感染 Sf9细胞以大量表达 HGV NS3重组蛋白。利用 SDS- PAGE和 Western- blotting方法分析重组蛋白。结果 :SDS- PAGE分析发现表达产物在 Mr43810处有一条明显的蛋白带 ,占细胞总蛋白量的 30 %以上 ;应用 Ni- NTA亲和层析柱获得了纯化的重组蛋白 ;Western- blotting显示该抗原可与 HGV RNA阳性血清发生特异反应。结论 :获得了昆虫细胞内表达的 HGV NS3重组蛋白 ,并证明该蛋白有可能用于 HGV感染的抗体检测。

关键词：免疫原性杆状病毒载体庚型肝炎 NS3蛋白

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从系统论角度探讨神经系统疾病的研究思路

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第二军医大学学报 2006年第3期27卷 337-339页

作者：褚澄薛利军扬州市第一人民医院神经内科扬州225001 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

随着社会人口老龄化的出现,脑血管病、阿尔茨海默病等神经系统疾病的发病率正逐渐增加。作为一种理论和方法学基础,系统论在神经系统疾病研究中具有重要作用。本文根据系统论的原则,分别从整体性、层次性与时序性三个层面出发,通过近年... 详细信息

随着社会人口老龄化的出现,脑血管病、阿尔茨海默病等神经系统疾病的发病率正逐渐增加。作为一种理论和方法学基础,系统论在神经系统疾病研究中具有重要作用。本文根据系统论的原则,分别从整体性、层次性与时序性三个层面出发,通过近年神经系统疾病病因学及诊断与治疗等方面研究的相关进展,对神经系统疾病的研究思路作一探讨。

关键词：系统论神经系统疾病发病机制诊断治疗学

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胞嘧啶脱氨酶基因体外特异性前药转换抗大肠癌作用研究

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外科 1997年第2期2卷 84-87页

作者：崔龙屠岳曹广文杜平戚中田高军吴宗娣仇小芳王元和第二军医大学附属长海医院外科 200433 第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学附属长征医院普通外科 200003

为使胞嘧啶脱氨酶(CD)基因在大肠癌细胞中特异表达。方法:构建了以CEA基因顺式转录调控序列驱动CD基因的组织特异型重组逆转录病毒载体G1CEACDNa,以脂质体法将重组载体及转录受LTR驱动的CD基因逆转录病毒载体pCD2分别转导入高分泌CEA的... 详细信息

为使胞嘧啶脱氨酶(CD)基因在大肠癌细胞中特异表达。方法:构建了以CEA基因顺式转录调控序列驱动CD基因的组织特异型重组逆转录病毒载体G1CEACDNa,以脂质体法将重组载体及转录受LTR驱动的CD基因逆转录病毒载体pCD2分别转导入高分泌CEA的大肠癌细胞LoVo中,经G418完全选择后进行前药5-FC敏感试验。结果:转导普通型及组织特异型CD基因的LoVo细胞较亲代细胞对5-FC的前药转换抑瘤效应明显(均为P<0.01);而转导组织特异性CD基因的LoVo细胞较转导普通型CD基因的LoVo细胞对5-FC的敏感性显著增高(P<0.01),其IC_(50)分别为0.1mmol/L和0.5mmol/L。结论:表明CEA TRS可驱动自杀基因在高分泌CEA大肠癌细胞中特异性表达,在一定程度上达到了靶向杀伤肿瘤细胞的目的。

关键词：大肠癌胞嘧啶脱氨酶癌胚抗原基因治疗

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改良酚－胍法提取大鼠肝组织总RNA

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第二军医大学学报 1995年第2期16卷 24-24页

作者：纪徐淮潘卫崔晓红戴晓晶李石第二军医大学长征医院消化内科第二军医大学基础医学部微生物学教研室

改良酚－胍法提取大鼠肝组织总ＲＮＡ纪徐淮，潘卫，崔晓红，戴晓晶，李石提取组织细胞中总ＲＮＡ是进行点印迹（Ｄｏｔｂｌｏｔ）、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹（Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ）杂交的必经步骤。常用的方法为胍－氯化铯离心法与... 详细信息

改良酚－胍法提取大鼠肝组织总ＲＮＡ纪徐淮，潘卫，崔晓红，戴晓晶，李石提取组织细胞中总ＲＮＡ是进行点印迹（Ｄｏｔｂｌｏｔ）、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹（Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ）杂交的必经步骤。常用的方法为胍－氯化铯离心法与盐酸胍－有机溶剂提取法，尽管这两种...

关键词：肝 RNA 酚-胍法提取

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肝癌组织特异性小鼠IL─3、TNF逆转录病毒载体的构建及在肝癌细胞中的表达

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第二军医大学学报 1995年第2期16卷 104-104页

作者：曹广文杜平杨文国吴清璇戚中田孔宪涛第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长征医院实验诊断科

从ｐＳＶ２３ＳＭＴＮＦ和ｐＳＰＭｏＩＬ─３质粒分别切下小鼠肿瘤坏死因子（ｍＴＮＦ）和小鼠白细胞介素３（ｍＩＬ─３）ｃＤＮＡ，并切除ｍＩＬ─３ｃＤＮＡ３＇端ＡＴＴＴＡＴＴＴＡ不稳定序列，以两种细胞因子ｃＤＮＡ作为目的基... 详细信息

从ｐＳＶ２３ＳＭＴＮＦ和ｐＳＰＭｏＩＬ─３质粒分别切下小鼠肿瘤坏死因子（ｍＴＮＦ）和小鼠白细胞介素３（ｍＩＬ─３）ｃＤＮＡ，并切除ｍＩＬ─３ｃＤＮＡ３＇端ＡＴＴＴＡＴＴＴＡ不稳定序列，以两种细胞因子ｃＤＮＡ作为目的基因，分别克隆到逆转录病毒载体ｐＭＮＳＭ多克隆位点，再于目的基因上游分别插入小鼠白蛋白启动子增强子序列（Ａｌｂｅ／ｐ），构建成功两种肝癌组织特异表达性细胞因子逆转录病毒载体，经磷酸钙共沉淀法导入包装细胞ｐＡ３１７中包装成重组病毒颗粒，并测转染率。经ＮＩＨ／３Ｔ３细胞测定重组病毒Ｎｅｃ抗性感染率后，在８μｇ／ｍｌＰｏｌｙｂｒｅｎｅ存在下感染肿瘤细胞，经４００μｇ／ｍｌ活性Ｇ４１８选择后测转基因肿瘤细胞培养上清中表达相应细胞因子，证明ｍＩＬ─２、ｍＩＬ─３特异地在表达白蛋白的小鼠肝癌细胞中表达（Ｐ＜０．００１）。

关键词：肿瘤坏死因子白细胞介素基因表达肝肿瘤

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