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HBV病毒蛋白在C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU小鼠中的表达

第二军医大学学报 2005年第3期26卷 275-278页

作者：訾晓渊巴月熊俊张树忠姚玉成张南李建秀王新民马凤云叶煦亭丛文铭胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 郑州大学公共卫生学院环境卫生学教研室郑州450052 第二军医大学东方肝胆外科医院病理科上海200438

目的:分析C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系转基因小鼠血清和组织中病毒蛋白的表达及其特征.方法:以138只F6～F17代C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系的转基因小鼠为研究对象,采用血清ELISA检测和免疫组织化学的方法分... 详细信息

目的:分析C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系转基因小鼠血清和组织中病毒蛋白的表达及其特征.方法:以138只F6～F17代C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系的转基因小鼠为研究对象,采用血清ELISA检测和免疫组织化学的方法分析病毒蛋白在转基因小鼠中的表达.结果:转基因小鼠血清中HBsAg和HBeAg的阳性率分别为55.18%和25.00%,血清中HBsAg的出现时间多在3个月龄之前(占93.33%),且持续时间在9个月以上(占95.56%),个体之间具有一定差异.转基因小鼠肝组织中至少可检测到一种病毒蛋白,HBsAg、HBcAg和X蛋白的检出率分别为85.82%、58.24%和49.61%.HBsAg分布于肝细胞质中,HBcAg和X蛋白既可分布于肝细胞核中,也可分布干肝细胞质中.HBsAg的表达具有细胞特异性(门管区周围的肝细胞)和组织特异性(肝和肾),X蛋白除在肝脏和肾脏中表达外,还可在脑组织中表达.结论:C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系转基因小鼠血清和肝肾等组织中有病毒蛋白的表达,病毒蛋白的分布具有组织细胞特异性和个体差异.

关键词：肝炎病毒乙型小鼠转基因病毒蛋白质类

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PTEN基因突变与遗传性癌症综合征及其相关疾病的研究进展

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第二军医大学学报 2005年第1期26卷 90-92页

作者：刘玉环王锡智蔡在龙俞超芹崔英沙金燕第二军医大学长海医院妇产科上海200433 长海医院泌尿外科基础医学部生物化学与分子生物学教研室长海医院中医科

PTEN基因是具有双重特异性磷酸酶功能的抑癌基因,其脂质磷酸酶活性降调PKB/Akt信号转导,使细胞周期阻滞在G1期,诱导其凋亡。已证实在人类许多恶性肿瘤中存在体细胞PTEN基因突变,如神经胶质细胞瘤、子宫内膜癌、前列腺癌、肾癌、乳腺癌... 详细信息

PTEN基因是具有双重特异性磷酸酶功能的抑癌基因,其脂质磷酸酶活性降调PKB/Akt信号转导,使细胞周期阻滞在G1期,诱导其凋亡。已证实在人类许多恶性肿瘤中存在体细胞PTEN基因突变,如神经胶质细胞瘤、子宫内膜癌、前列腺癌、肾癌、乳腺癌等。近年来的研究发现,PTEN基因种系突变与人类多种遗传性癌症综合征有关。本文概括介绍了PTEN基因种系突变与人类遗传性癌症综合征及其相关疾病的关系,重点介绍了考登综合征(Cowden syndrome, CS)、Bannayan Ri ley Ruvalcaba syndrome(BRRS)、Proteus syndrome (PS)、Proteus like syndromes(PS like)等疾病。随着对这些综合征认识的加深,应用基因突变分析作为分子诊断工具,将有可能对这些患者极其家庭成员进行疾病的早期诊断及必要的癌症监测。

关键词： PTEN基因基因突变遗传性癌症综合征

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携带野生型PTEN基因的重组腺病毒治疗子宫内膜癌的体外研究

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第二军医大学学报 2005年第9期26卷 997-1001页

作者：刘玉环杨培丽蔡在龙崔英俞超琴王锡智惠宁古航沙金燕第二军医大学长海医院妇产科上海200433 基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 长海医院中医科长海医院泌尿外科

目的:观察携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)体外转染子宫内膜癌细胞后的表达,并探讨其对肿瘤细胞产生抑制增殖、诱导凋亡的作用及机制。方法:细菌内同源重组方法构建Ad-PTEN,体外转染PTEN基因突变的子宫内膜腺癌RL95-2细胞中,X-... 详细信息

目的:观察携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)体外转染子宫内膜癌细胞后的表达,并探讨其对肿瘤细胞产生抑制增殖、诱导凋亡的作用及机制。方法:细菌内同源重组方法构建Ad-PTEN,体外转染PTEN基因突变的子宫内膜腺癌RL95-2细胞中,X-gal染色检测转染效率。应用RT-PCR、Western印迹、细胞免疫组化检测Ad-PTEN在RL95-2细胞中的转录及表达;应用细胞计数、MTT实验,观察Ad-PTEN对RL95-2细胞生长的影响;应用光镜、透射电镜观察外源性PTEN基因表达对RL95-2细胞形态学及超微结构的影响;应用流式细胞分析仪(FCM)检测Ad-PTEN对RL95-2细胞周期分布的影响、凋亡诱导作用及半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶casapase-3的激活。结果:外源性野生型PTEN基因经腺病毒介导成功转入RL95-2细胞,3种方法均检测出有PTENmRNA及PTEN蛋白的表达,当感染复数(MOI)为50时,体外转染效率达到100%。Ad-PTEN显著抑制RL95-2细胞生长并诱导其凋亡。此外,Ad-PTEN还能诱导RL95-2细胞周期G0/G1期阻滞以及caspase-3的激活。结论:重组腺病毒Ad-PTEN是高效的基因转移系统,能将PTEN目的基因转移到丧失该基因功能的子宫内膜癌RL95-2细胞中,对RL95-2细胞产生强有力的生长抑制及凋亡诱导作用,其机制可能包括细胞周期G0/G1阻滞及caspase-3蛋白酶的激活。

关键词：子宫内膜癌基因治疗 PTEN基因腺病毒细胞周期细胞凋亡体外研究

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变性高压液相层析技术在遗传性多囊肾病突变检测中的应用

变性高压液相层析技术在遗传性多囊肾病突变检测中的应用

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中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会

作者：张树忠胡以平梅长林第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海长征医院肾内科

常染色体显性遗传型多囊肾病(autosomal dominant polycystic kidney disease,ADPKD)是一种十分常见、但目前尚缺乏有效治疗手段的遗传性肾脏疾病。其发病与Ⅰ、Ⅱ型致病基因(PKD1、PKD2) 突变有关,其中85％ADPKD的发生由PKD1异常所导... 详细信息

常染色体显性遗传型多囊肾病(autosomal dominant polycystic kidney disease,ADPKD)是一种十分常见、但目前尚缺乏有效治疗手段的遗传性肾脏疾病。其发病与Ⅰ、Ⅱ型致病基因(PKD1、PKD2) 突变有关,其中85％ADPKD的发生由PKD1异常所导致。由于PKD1基因结构复杂及同源序列的干扰,使其突变检测不仅操作繁琐,而且影响了结果的准确性。本研究采用变性高压液相层析技术 (denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)分别对涵盖PKD1全部编码区(含46 个外显子)的72组PCR扩增片段进行分析,结果分别从85位健康者和19个汉族人ADPKD家系的67位家庭成员中检测出9个正常多态性位点和11个致病突变,后者包括8个错义突变、2个无义突变和1个移码突变,有10个致病突变是新发现的。突变检出率达到57．89％。并发现检出的突变存在以下特点:(1)突变散布在PKD1各外显子内,未见突变热点出现;(2)突变以DNA碱基转换为主;(3)大多数突变位于基因中GC重复序列区附近;(4)均以杂合基因的形式存在,支持“二次打击”致病假说;(5)致病突变常引发编码氨基酸所带电荷与亲水性的改变;(6)PKD1突变位点可能影响起病时的表现症状,尤其是同一家系的个体间表现更为突出。总之,同以前采用单链构象多态性方法(SSCP)相比,DHPLC分析技术不仅操作周期短,而且突变检出率明显提高,随着该检测条件的进一步完善和检测费用的降低,有望成为进行ADPKD患者发病前基因突变检测,甚至产前诊断的有效常规途径。

关键词：多囊肾病高压液相层析突变检测 ADPKD

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嗅鞘细胞移植促进大鼠坐骨神经的再生

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第二军医大学学报 2004年第3期25卷 301-303页

作者：马玉海张勇曹莉张少成潘永太麻文谦孙来卿路长林第二军医大学长海医院骨科上海200433 第二军医大学基础医学部神经生物学教研室

目的 :研究嗅鞘细胞 (OECs)移植对大鼠坐骨神经再生的作用。方法 :30只 SD大鼠随机分为 OECs组和对照组 ,每组 1 5只 ;切除 3m m右侧坐骨神经并用预先充填可吸收明胶的硅胶管套接修复 ,OECs组和对照组硅胶管内分别给予体外培养纯化的 O... 详细信息

目的 :研究嗅鞘细胞 (OECs)移植对大鼠坐骨神经再生的作用。方法 :30只 SD大鼠随机分为 OECs组和对照组 ,每组 1 5只 ;切除 3m m右侧坐骨神经并用预先充填可吸收明胶的硅胶管套接修复 ,OECs组和对照组硅胶管内分别给予体外培养纯化的 OECs和生理盐水 ;术后 4、8和 1 2周分别行电生理和组织学检查。结果 :术后 4、8和 1 2周 ,OECs组和对照组修复神经均有不同程度再生 ,OECs组运动神经传导速度、神经肌肉动作电位幅度、有髓神经纤维数目和直径均明显高于对照组(P<0 .0 5 )。结论 :外源性

关键词：嗅鞘细胞大鼠坐骨神经神经再生细胞移植

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羟甲芬太尼对慢性缺氧大鼠呼吸功能的影响

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第二军医大学学报 2004年第2期25卷 168-171页

作者：许欣李强孙学军张殿尧王成海第二军医大学长海医院呼吸内科上海200433 第二军医大学基础医学部神经生物学教研室

目的 :探讨 μ阿片受体激动剂羟甲芬太尼 (OMF)对慢性缺氧大鼠呼吸功能的影响。方法 :将 86只雄性 SD大鼠随机分为正常组和慢性缺氧组 ,慢性缺氧模型由经尾静脉 6次注射木瓜蛋白酶而建立。正常组大鼠侧脑室微量注射 OMF(n=1 0 )和同体... 详细信息

目的 :探讨 μ阿片受体激动剂羟甲芬太尼 (OMF)对慢性缺氧大鼠呼吸功能的影响。方法 :将 86只雄性 SD大鼠随机分为正常组和慢性缺氧组 ,慢性缺氧模型由经尾静脉 6次注射木瓜蛋白酶而建立。正常组大鼠侧脑室微量注射 OMF(n=1 0 )和同体积人工脑脊液 (a CSF) (n=1 0 )。慢性缺氧组大鼠又随机分为 :(1 )侧脑室组 ,分别微量注射阿片受体拮抗剂纳络酮(NL X) (n=1 2 )和 OMF(n=1 2 ) ,同时另有两组均注射 a CSF(n=1 2 )作为对照 ;(2 )孤束核组 ,分别微量注射 OMF(n=9)和同体积 a CSF(n=9)。在注射后 5、1 5、30、4 5、6 0 min测定各组大鼠呼吸频率 (RR)和潮气量 (VT)。结果 :正常大鼠侧脑室注射OMF后 1 5、30、4 5、6 0 min,RR、VT 均显著下降 (P<0 .0 5 ) ;慢性缺氧大鼠侧脑室及孤束核注射 OMF后 1 5、30、4 5、6 0 m in,RR、VT 均显著降低 (P<0 .0 1 ) ,侧脑室注射 NL X后 1 5、30、4 5、6 0 m in,RR、VT均显著增高 (P<0 .0 5 )。结论 :μ阿片受体激动剂可能通过中枢相应受体降低 RR、VT 等呼吸指标。

关键词：羟甲芬太尼慢性缺氧大鼠呼吸功能 μ阿片受体激动剂

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大鼠肺缺血再灌注损伤引起肺细胞的凋亡

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第二军医大学学报 2004年第3期25卷 295-297页

作者：谢东甫秦雄徐志飞第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 长征医院胸心外科上海200003

目的 :观察肺缺血再灌注损伤对肺细胞凋亡的影响。方法 :雄性 SD大鼠 4 0只 ,体质量 30 0～ 35 0 g,随机分为 8组(缺血再灌注 6组 ,单纯缺血组 ,对照组 ) ,每组 5只。通过阻断肺门建立大鼠原位肺缺血再灌注模型 ,应用末端脱氧核苷酸转... 详细信息

目的 :观察肺缺血再灌注损伤对肺细胞凋亡的影响。方法 :雄性 SD大鼠 4 0只 ,体质量 30 0～ 35 0 g,随机分为 8组(缺血再灌注 6组 ,单纯缺血组 ,对照组 ) ,每组 5只。通过阻断肺门建立大鼠原位肺缺血再灌注模型 ,应用末端脱氧核苷酸转移酶 (Td T)介导的 d U TP缺口末端标记技术 (TU NEL)检测缺血再灌注损伤所引起的肺细胞凋亡的变化及其与再灌注时间的相关性 ;DNA电泳进行肺组织细胞 DNA片段分析 ;电镜观察凋亡细胞的超微结构。结果 :在肺缺血再灌注后早期 (30 min)发生明显的肺细胞凋亡 ,凋亡细胞数峰值位于再灌注后 2 h,再灌注后 1 2 h凋亡细胞数与对照组无显著差别 ;缺血而无再灌注的肺细胞凋亡无明显变化。结论

关键词：大鼠肺缺血再灌注损伤肺细胞细胞凋亡

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嵌合水蛭肽的构建与活性分析

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中国生物化学与分子生物学报 2004年第5期20卷 702-706页

作者：沈雳陈少萍蔡在龙杨生生秦永文第二军医大学长海医院心内科上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

A fused hirudin peptide was designed, synthesized and purified and its antithrombin and antiplatelet functions were *** bifunctional anticoagulation peptide was composed of three inhibitory regions: (1)the tail of hirudin (hirudin 53-64 ), a potent direct antithrombin , binds to the anion binding exosite (ABE) of *** 53-64 blocks fibrinogen recognition site of thrombin and consequently inhibits thrombin directly;(2) Arg -Pro -Pro -Gly - Phe (RPPGF) amino acid sequence, a metabolite of bradykinin,binds to the active site of thrombin and thereby inhibits the amidolytic activity of thrombin;(3)Arg-Gly-Asp(RGD)amino acid sequence, an inhibitor of GP IIb/IIIa, blocks the final path of platelets aggregation by preventing fibrinogen binding to platelets. This 26 amino acid fused hirudin peptide was artificially synthesized, purified and *** study finally showed that the fused hirudin peptide had activities of antithrombin and antiplatelet. It is feasible to construct a hybrid multifunctional peptide that targets various components of haemostatic process.

关键词：血栓水蛭素抗凝血酶功能嵌合水蛭肽

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HBV基因疫苗诱导正常及HBV转基因小鼠产生体液免疫应答

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 47-50页

作者：余宏宇陈新龙宋维余永伟张乐之胡以平第二军医大学长征医院病理科上海200003 长海医院烧伤科长征医院贵宾诊疗科长海医院病理科长海医院实验诊断科基础医学部细胞生物学教研室

目的 :用乙型肝炎病毒 (HBV)蛋白基因真核表达载体诱导正常小鼠及 HBV转基因小鼠产生特异性体液免疫应答 ,以探讨其预防及治疗 HBV慢性感染的可行性。方法 :将 HBV S2 .S基因的真核表达载体 p CMV- S2 .S(PS)和相应的空载体 pc D-NA3.0... 详细信息

目的 :用乙型肝炎病毒 (HBV)蛋白基因真核表达载体诱导正常小鼠及 HBV转基因小鼠产生特异性体液免疫应答 ,以探讨其预防及治疗 HBV慢性感染的可行性。方法 :将 HBV S2 .S基因的真核表达载体 p CMV- S2 .S(PS)和相应的空载体 pc D-NA3.0分别免疫正常 C5 7BL/ 6小鼠及同一品系 HBV转基因小鼠 (n=5 )。每只小鼠肌内注射纯化质粒 1 0 0 μg。用 EL ISA方法检测小鼠血清抗 HBs和抗 pre S2效价及 HBV转基因小鼠血清 HBs Ag和 HBe Ag的水平。注射基因疫苗后第 8周 ,活检取转基因小鼠肝脏组织 ,制备石蜡切片并行 H- E染色 ,光镜下观察其病理改变。结果 :PS诱导正常及转基因小鼠产生了抗 HBs及抗pre S2 ,并且抗 pre S2的出现早于抗 HBs约 1～ 2周。PS免疫 8周后 ,转基因小鼠血清 HBs Ag和 HBe Ag为阴性。注射基因疫苗后第 8周病理检查转基因小鼠肝脏组织 ,肝细胞出现程度不同的广泛浊肿和水样变性 ,而相应的对照组无明显改变。免疫前后肝组织内单个核淋巴细胞数量无显著变化。结论 :研究表明 HBV中蛋白基因疫苗能够有效诱导 HBs Ag特异性的体液免疫应答 ,能够清除转基因小鼠血清中的 HBs Ag和 HBe Ag;初步的实验结果为研制治疗

关键词： HBV 基因疫苗转基因小鼠体液免疫免疫应答乙型肝炎病毒

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外源性神经生长因子促神经端侧吻合后侧支发芽的作用

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第二军医大学学报 2004年第10期25卷 1131-1132页

作者：李旭东季正伦何清濂王成海解放军第411医院整形外科上海200081 第二军医大学长海医院整形外科上海200433 长征医院整形外科上海200003 基础医学部神经生物学教研室上海200433

目的 :通过研究周围神经端侧吻合后外源性神经生长因子 (NGF)的作用 ,探讨改善端侧吻合侧支发芽的方法。方法 :雄性 SD大鼠 2 0只 ,体质量 2 2 0～ 2 4 0 g,建立胫腓神经端侧吻合模型 ,随机分为 NGF组和生理盐水 (SAL)组 (n=10 ) ,NGF... 详细信息

目的 :通过研究周围神经端侧吻合后外源性神经生长因子 (NGF)的作用 ,探讨改善端侧吻合侧支发芽的方法。方法 :雄性 SD大鼠 2 0只 ,体质量 2 2 0～ 2 4 0 g,建立胫腓神经端侧吻合模型 ,随机分为 NGF组和生理盐水 (SAL)组 (n=10 ) ,NGF组术后 1周每日胫前肌注射 NGF 5 μg,SAL 组注射生理盐水 5 μl,术后 8周行 HRP逆行追踪和乙酰胆碱转移酶(Ch AT)活性测定。结果 :再生神经元存活百分率 (% ) ,NGF组运动神经元为 4 7.5± 13.1、感觉神经元为 4 5 .6± 6 .4 ,SAL 组运动神经元为 36 .7± 12 .2、感觉神经元为 32 .8± 8.5 ,两组比较均有显著差异 (P<0 .0 5 )。 NGF组 Ch AT活性为 (1.94±0 .2 3)× 10 1 2 Bq,达正常对照 (2 .39± 0 .38)× 10 1 2 Bq的 81% ,高于 SAL 组 [(1.72± 0 .33)× 10 1 2 Bq,占正常对照的 72 % ]。结论 :端侧吻合术后给予 NGF可以促进神经侧支发芽 ,提高神经元存活率。

关键词：神经再生端侧吻合侧支发芽HRP逆行追踪乙酰胆碱转移酶神经生长因子

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