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第二军医大学学报 2017年第10期38卷 1225-1230页

作者：杨文军黄金凤刘岩朱怡卿王芳孙树汉第二军医大学长海医院临床遗传科上海200433 第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433

目的探讨自噬在电离辐射诱导小鼠精母细胞GC-2凋亡过程中的作用。方法将小鼠精母细胞GC-2分为空白对照组和不同剂量(2、4和8Gy)60Co辐射处理组。采用原位末端转移酶标记法(TUNEL法)和流式细胞术检测细胞凋亡情况,通过蛋白质印迹实验观... 详细信息

目的探讨自噬在电离辐射诱导小鼠精母细胞GC-2凋亡过程中的作用。方法将小鼠精母细胞GC-2分为空白对照组和不同剂量(2、4和8Gy)60Co辐射处理组。采用原位末端转移酶标记法(TUNEL法)和流式细胞术检测细胞凋亡情况,通过蛋白质印迹实验观察自噬相关蛋白LC3(LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ)和Beclin1表达水平的改变,使用荧光显微镜观察GC-2细胞内自噬小体的变化。用5mmol/L自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理GC-2细胞2h再给予60 Co辐射处理,观察自噬抑制剂联合电离辐射对细胞凋亡率的影响以及自噬相关蛋白表达水平的改变。结果与空白对照组相比,GC-2细胞经60Co辐射处理后细胞凋亡率升高(P<0.05),荧光显微镜下可见细胞自噬体明显增多,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ以及Beclin1蛋白表达水平增加(P<0.05)。预先用5mmol/L 3-MA处理GC-2细胞2h再给予60Co辐射处理,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ以及Beclin1蛋白表达水平与未经3-MA处理组相比降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05)。结论电离辐射可以诱导精母细胞发生自噬,抑制细胞自噬后可增强电离辐射对精母细胞的杀伤作用。

关键词：电离辐射精母细胞自噬细胞凋亡

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孕妇血样采集后体外存放对血浆中胎儿游离DNA水平的影响

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第二军医大学学报 2008年第9期29卷 1042-1045页

作者：李勤张毅丁宇烽胡振林孙树汉惠宁第二军医大学长海医院妇产科上海200433 第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433

目的:探讨孕妇血样采集后体外存放过程中血浆游离DNA水平的影响因素。方法:采集孕妇血样,体外4℃存放6、36h后,实时定量PCR检测孕妇外周游离DNA水平,Annexin Ⅴ/PI双染色法流式分析血样白细胞死亡情况,速率法检测血浆乳酸脱氢酶(LDH)活... 详细信息

目的:探讨孕妇血样采集后体外存放过程中血浆游离DNA水平的影响因素。方法:采集孕妇血样,体外4℃存放6、36h后,实时定量PCR检测孕妇外周游离DNA水平,Annexin Ⅴ/PI双染色法流式分析血样白细胞死亡情况,速率法检测血浆乳酸脱氢酶(LDH)活性,单相酶扩散法测定血浆DNA酶活性。结果:血样体外存放36h后,血浆中β-globin基因的拷贝数较存放6h的样品显著增加,而SRY基因拷贝数明显减少;4℃存放条件下,妊娠晚期孕妇外周血中胎儿DNA占总DNA百分比从6h的(10.3±5.6)%下降到36h的(3.0±2.1)%,差异有统计学意义(P<0.05)。体外存放6h的血样中基本未检出死亡细胞,而存放36h的血样中分别检出了坏死和凋亡的白细胞;36h样品血浆中LDH活性较6h样品显著升高(P<0.05)。单相酶扩散法结果表明,血浆DNA酶在4℃时虽然活性显著减弱,但仍然保持降解DNA的能力。结论:血样采集后体外存放时间过长会导致血浆总游离DNA增多,而胎儿DNA减少,这种变化可能与血样体外存放过程中白细胞死亡和血浆DNA酶对胎儿DNA的降解作用有关;胎儿DNA抽提应在血样采集后尽早(6h内)进行。

关键词：孕妇血浆胎儿游离DNA Dnase 乳酸脱氢酶

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CpG-ODN气道内应用抑制哮喘小鼠过敏性气道炎症及GATA-3的表达

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第7期24卷 540-544页

作者：商艳李强胡振林施柯周凤娟刘忠令孙树汉第二军医大学长海医院呼吸内科上海200433 第二军医大学医学遗传学教研室

目的　研究气道内应用CpG寡脱氧核苷酸 (CpG ODN)对小鼠哮喘模型气道过敏性炎症的治疗作用及对肺内GATA 3表达的影响。方法　鸡卵蛋白 (OVA)免疫BALB c小鼠建立哮喘模型 ,激发后 1h气道内滴入 10 0 μgCpG ODN ,处死动物后观察支气管... 详细信息

目的　研究气道内应用CpG寡脱氧核苷酸 (CpG ODN)对小鼠哮喘模型气道过敏性炎症的治疗作用及对肺内GATA 3表达的影响。方法　鸡卵蛋白 (OVA)免疫BALB c小鼠建立哮喘模型 ,激发后 1h气道内滴入 10 0 μgCpG ODN ,处死动物后观察支气管肺泡灌洗液 (BALF)中白细胞总数、嗜酸性粒细胞百分比 (EOS % )的变化及IL 4、IL 5、IL 12、IFN γ的含量变化。取肺组织行病理切片HE染色、AB PAS染色检查 ,观察小鼠气道炎症情况 ,免疫组化染色观察CpG ODN对小鼠哮喘模型肺部GATA 3表达的影响。结果　CpG ODN治疗组BALF中IL 12和IFN γ的产生增加 ,IL 4、IL 5的产生减少 ,BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞比例降低 ,肺部炎症情况明显减轻 ,肺血管周围及支气管周围表达GATA 3的细胞数较哮喘模型组及对照寡核苷酸治疗组明显减少。结论　哮喘小鼠激发阶段气道内滴入CpG可能通过诱导IL 12、IFN γ产生 ,抑制GATA 3的表达 ,导致TH2型细胞因子的产生减少 ,从而减轻哮喘气道过敏性炎症。

关键词： CpG-ODN气道哮喘小鼠过敏性气道炎症 GATA-3 基因表达细胞因子

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携带抑胃多肽序列的HBc病毒样颗粒蛋白疫苗的制备及其免疫效果

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第二军医大学学报 2009年第11期30卷 1230-1235页

作者：田建卿王越林宁邹大进孙树汉第二军医大学长海医院内分泌科上海200433 第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433 第二军医大学长海医院临床营养科上海200433

目的：设计及制备携带抑胃多肽（GIP）抗原序列的HBc病毒样颗粒（VLP）蛋白疫苗,并研究其免疫效果,为肥胖免疫干预治疗提供新的策略。方法：克隆GIP cDNA序列,并与HBc VLP（1-144aa）cDNA序列进行融合,通过原核表达及纯化,制备携带GIP... 详细信息

目的：设计及制备携带抑胃多肽（GIP）抗原序列的HBc病毒样颗粒（VLP）蛋白疫苗,并研究其免疫效果,为肥胖免疫干预治疗提供新的策略。方法：克隆GIP cDNA序列,并与HBc VLP（1-144aa）cDNA序列进行融合,通过原核表达及纯化,制备携带GIP序列的HBc VLP疫苗（HBc-GIP）;同时将该融合基因的cDNA序列克隆入pVAX1真核表达载体,制备GIP核酸疫苗。用2种疫苗免疫大鼠并进行免疫学指标评价。结果：成功制备了携带GIP抗原序列的HBc-GIP,并同时制备了编码该融合蛋白序列的核酸疫苗pVAX1-HBc-GIP。经过两种疫苗的联合免疫,可以获得高滴度的GIP特异性抗体IgG,显示了良好的免疫效果。结论：采用HBc（1-144aa）作为GIP的载体,制备VLP蛋白疫苗,联合核酸疫苗免疫可以有效地诱导靶向大鼠GIP的特异性体液免疫反应,打破大鼠自身抗原耐受。该疫苗可以作为一种新的控制肥胖的免疫干预药物来进一步深入研究。

关键词：抑胃多肽病毒样颗粒肥胖症免疫疗法蛋白疫苗

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缺血性急性肾功能衰竭病程进展中p27^(kip1)作用的研究

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中华肾脏病杂志 2002年第4期18卷 301-302页

作者：傅鹏崔若兰袁伟杰戴建新孙树汉第二军医大学长海医院肾内科上海200433 第二军医大学长海医院基础部医学遗传学教研室上海200433

在缺血性急性肾功能衰竭(ARF)中,肾脏能否通过受损肾小管上皮细胞的再生、增殖而实现其结构和功能的自我修复是病程转归的关键。而作为细胞增殖和分化共同途径的细胞周期,其运转过程由一系列调控因子即细胞周期调节蛋白(cellcycle regul... 详细信息

在缺血性急性肾功能衰竭(ARF)中,肾脏能否通过受损肾小管上皮细胞的再生、增殖而实现其结构和功能的自我修复是病程转归的关键。而作为细胞增殖和分化共同途径的细胞周期,其运转过程由一系列调控因子即细胞周期调节蛋白(cellcycle regulatory proteins,CCRP)所控制[1]。其中p27kip1是重要的负性CCRP,表现为p27kip1抑制细胞增殖[1],同时还可促进细胞分化成熟、诱导细胞凋亡[2]。为此,我们动态观察了缺血性ARF大鼠肾脏细胞增殖程度以及肾组织内p27kip1的表达,并探讨了p27kip1的表达量与肾小管上皮细胞增殖程度之间的关系,以明确缺血性ARF病程中p27kip1的可能作用。

关键词：缺血性急性肾功能衰竭 p27^kipl 肾小管上皮细胞细胞增殖动物实验

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大豆异黄酮对^(60)Co-γ线照射小鼠肝组织过氧化状态的影响(英文)

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第二军医大学学报 2005年第2期26卷 151-154页

作者：宋立华蔡东联颜宏利陈小莉李雅慧马莉胡同杰第二军医大学长海医院营养科第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室

目的:观察大豆异黄酮对60Co γ射线引起小鼠肝组织过氧化损伤的影响。方法:实验根据体质量将80 只雌性昆明小鼠随机均分为5组,即正常对照、阳性对照(单纯辐照组)及低、中、高剂量大豆异黄酮实验组(50、100、400 mg/kg)。辐照前正常对照... 详细信息

目的:观察大豆异黄酮对60Co γ射线引起小鼠肝组织过氧化损伤的影响。方法:实验根据体质量将80 只雌性昆明小鼠随机均分为5组,即正常对照、阳性对照(单纯辐照组)及低、中、高剂量大豆异黄酮实验组(50、100、400 mg/kg)。辐照前正常对照、阳性对照组及实验组每天分别以溶剂0.5%羧甲基纤维素钠(CMC Na)和不同剂量大豆异黄酮连续灌胃14 d,灌胃至第7天,除正常对照组外,其余各组小鼠均接受4.56 Gy 60Co γ全身性照射1次,照射后继续灌胃2 d及7 d后杀鼠取肝组织作生化分析。结果:照射后第2天100、400 mg/kg大豆异黄酮组及照射后第7 天3 个浓度大豆异黄酮组显著提高肝细胞质过氧化氢酶的活性(P<0.05);照射后第7天100 mg/kg大豆异黄酮组的肝组织谷胱甘肽过氧化物酶活性有显著提高(P<0.05);照射后第2天50 mg/kg大豆异黄酮使肝组织总超氧化物歧化酶活性显著下降(P<0.05),其余各组间无显著差异;照射后第7天100 mg/kg大豆异黄酮使肝组织丙二醛含量下降,与对照组有显著差异(P<0.05),照射后第2 天各照射组肝组织丙二醛含量有一过性升高,但第7天实验组已降至正常水平。结论:大豆异黄酮可提高受照小鼠肝组织的抗氧化能力,但不呈量效关系。

关键词：肝损伤 γ射线自由基抗氧化酶大豆异黄酮

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庆大霉素诱导LLC-PK1细胞凋亡与p27^(Kip1)表达关系的研究

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中国抗生素杂志 2002年第8期27卷 485-489页

作者：傅鹏崔若兰袁伟杰周凤娟梅小斌戴建新孙树汉第二军医大学长海医院肾内科上海200433 第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433

目的　观察庆大霉素对体外培养的肾小管上皮细胞凋亡的诱导作用 ;研究细胞周期调节蛋白 p2 7Kip1蛋白和mRNA表达在凋亡过程中的变化 ;并探讨细胞凋亡与p2 7Kip1之间的关系。方法　对体外培养的猪肾近端小管上皮细胞株 (LLC PK1细胞 )... 详细信息

目的　观察庆大霉素对体外培养的肾小管上皮细胞凋亡的诱导作用 ;研究细胞周期调节蛋白 p2 7Kip1蛋白和mRNA表达在凋亡过程中的变化 ;并探讨细胞凋亡与p2 7Kip1之间的关系。方法　对体外培养的猪肾近端小管上皮细胞株 (LLC PK1细胞 )予以不同浓度的庆大霉素溶液分别作用 2 4～ 96h ,以MTT法测定庆大霉素对LLC PK1细胞增殖的抑制率 ,抽提细胞DNA进行琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡条带 ,流式细胞术测定细胞凋亡率和细胞增殖动力学 ,WesternBlot法检测细胞内p2 7Kip1的蛋白表达 ,RT PCR法检测细胞p2 7Kip1mRNA表达的变化。结果　庆大霉素对LLC PK1细胞增殖有抑制作用 ,具诱导LLC PK1细胞凋亡的作用 ,凋亡率呈药物浓度和作用时间依赖性 ;庆大霉素致细胞周期停滞于G1期。p2 7Kip1蛋白在细胞内的表达随着干预的庆大霉素浓度增加而逐渐上调 ,蛋白水平与凋亡率之间呈正相关 ,其mRNA表达趋势与其蛋白表达一致。结论　庆大霉素诱导的LLC PK1细胞凋亡与细胞周期蛋白p2 7Kip1表达密切相关。

关键词：庆大霉素 LLC-PK1细胞 p27^Kip1 细胞凋亡 MTT法

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缺血性急性肾衰病程中cyclinE和CDK2的作用

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第二军医大学学报 2002年第7期23卷 745-748页

作者：傅鹏崔若兰袁伟杰于光苏红戴建新孙树汉第二军医大学长海医院肾内科上海200433 第二军医大学长海医院基础医学部医学遗传学教研室

目的 :探讨 cyclin E和周期素依赖性激酶 2 (CDK2 )在缺血性急性肾衰大鼠肾组织中的表达及其与肾小管上皮细胞增殖之间的关系。方法 :急性肾衰大鼠分别在第 0、2、7、10、14天处死 ,取血测定肌酐值 ,免疫组化法观察肾细胞增殖程度以及 ... 详细信息

目的 :探讨 cyclin E和周期素依赖性激酶 2 (CDK2 )在缺血性急性肾衰大鼠肾组织中的表达及其与肾小管上皮细胞增殖之间的关系。方法 :急性肾衰大鼠分别在第 0、2、7、10、14天处死 ,取血测定肌酐值 ,免疫组化法观察肾细胞增殖程度以及 cyclin E和 CDK 2的分布 ,蛋白印迹法检测肾组织中 cyclin E和 CDK2蛋白表达。结果 :大鼠血清肌酐值在缺血再灌注第2天时显著增高 ,第 7天时最高 ,第 10天时开始降低 ,第 14天时基本降至正常。对照组肾组织的细胞增殖指数 (PI)为 0 .7% ,肾缺血后第 2、7、10和 14天分别为 14 .8%、30 .9%、2 3.6 %和 12 .4 %。 Cyclin E和 CDK2蛋白在肾组织内主要分布于肾小管 ,且第 2天表达弱阳性 ,第 7和 10天表达分别为强阳性和阳性 ,第 14天表达减弱 ;两种蛋白的水平与免疫组化结果一致。两种蛋白表达水平和 PI之间均呈正相关。结论 :缺血性急性肾衰大鼠肾小管上皮细胞增殖与肾组织 cyclin E和 CDK2表达上调密切相关。

关键词：急性肾功能衰竭细胞周期蛋白E 细胞周期蛋白依赖性激酶2

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胰腺癌患者外周血游离K-ras基因突变检测的临床意义

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第二军医大学学报 2002年第3期23卷 276-278页

作者：王文耀胡先贵曹贵松唐岩孙树汉胡育新第二军医大学长海医院普通外科上海200433 第二军医大学长海医院基础医学部医学遗传学教研室长海医院肿瘤科

目的 :通过检测胰腺癌患者外周血中游离 K- ras基因突变 ,探索无创性胰腺癌诊断的新方法。方法 :采用两步法聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性分析 ( PCR- RFL P)技术 ,部分样本行 DNA直接测序确证 ,检测胰腺良性病变患者 ( 11例 )... 详细信息

目的 :通过检测胰腺癌患者外周血中游离 K- ras基因突变 ,探索无创性胰腺癌诊断的新方法。方法 :采用两步法聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性分析 ( PCR- RFL P)技术 ,部分样本行 DNA直接测序确证 ,检测胰腺良性病变患者 ( 11例 )血浆、恶性病变患者 ( 3 0例 )血浆及肿瘤组织 K- ras基因的突变情况。对照组为 8例慢性胰腺炎和 3例胆石症患者。结果 :胰腺癌和慢性胰腺炎病例外周血 K- ras基因突变率分别为 60 .0 % ( 18/ 3 0 )和 12 .5 % ( 1/ 8) ,3例胆石症未见 K- ras基因突变。其中肿瘤组织 K- ras基因突变阳性病例外周血检测阳性率为 69.6% ( 16/ 2 3 )。结论 :胰腺癌患者外周血游离 K-

关键词：胰腺肿瘤血浆 K-ras基因聚合酶链反应基因突变

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BCG-DNA对哮喘患者外周血单个核细胞IFN-γ和IL-4产生的作用

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第二军医大学学报 2004年第7期25卷 718-720页

作者：商艳胡振林李强施柯刘忠令孙树汉第二军医大学长海医院呼吸内科上海200433 第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室

目的 :研究免疫活性物质卡介苗基因组 DNA(BCG- DNA)对哮喘患者外周血单个核细胞 (PBMC) IFN- γ和 IL- 4产生的影响。方法 :分离哮喘患者 PBMC,分别加入 BCG- DNA、地塞米松刺激培养 ,EL ISA检测培养上清中 IFN- γ及 IL- 4含量 ,RT- ... 详细信息

目的 :研究免疫活性物质卡介苗基因组 DNA(BCG- DNA)对哮喘患者外周血单个核细胞 (PBMC) IFN- γ和 IL- 4产生的影响。方法 :分离哮喘患者 PBMC,分别加入 BCG- DNA、地塞米松刺激培养 ,EL ISA检测培养上清中 IFN- γ及 IL- 4含量 ,RT- PCR检测 PBMC IFN-γ m RNA及 IL - 4 m RNA的表达量 ,并与空白对照组相比较。结果 :地塞米松在体外对哮喘患者PBMC产生的 IFN-γ m RNA和蛋白、IL - 4 m RNA和蛋白均有抑制作用 ;BCG- DNA抑制哮喘患者 PBMC IL - 4 m RNA和蛋白的分泌 ,而促进 IFN -γ m RNA和蛋白的分泌 ,与对照组比较差异显著 (P<0 .0 1 ) ,且在体外对 PBMC无毒性。结论 :BCG-DNA不仅具有和地塞米松相同的下调 IL - 4表达的作用 ,而且还具有地塞米松所没有的诱导 IFN -γ表达的作用 ,利于纠正哮喘患者体内存在的 Th1 / Th2比例失衡状态。

关键词： BCG-DNA 哮喘外周血单个核细胞 IFN-r IL-4

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