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用体内激活的启动子调控HCV核心抗原表达可增强重组鼠伤寒沙门氏菌的免疫原性

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第3期35卷 266-270页

作者：赵平柯屾王宏卫钱锋戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433 第二军医大学病原生物学教研室第二军医大学微生物学教研室北京100853 解放军总医院基础医学研究所

为提高抗原表达质粒在重组伤寒沙门氏菌中的稳定性以增强重组伤寒沙门氏菌诱导的免疫应答 ,克隆鼠伤寒沙门氏菌pagC基因启动子 ,以其为转录调控元件构建HCV核心抗原表达质粒 ,转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌中。体外培养时 ,Mg2 +能够剂量依... 详细信息

为提高抗原表达质粒在重组伤寒沙门氏菌中的稳定性以增强重组伤寒沙门氏菌诱导的免疫应答 ,克隆鼠伤寒沙门氏菌pagC基因启动子 ,以其为转录调控元件构建HCV核心抗原表达质粒 ,转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌中。体外培养时 ,Mg2 +能够剂量依赖性抑制该重组菌表达HCV核心抗原。将该重组菌和组成性表达的重组菌分别口服接种BALB/c小鼠 ,观察质粒的稳定性和小鼠的免疫应答。结果表明 ,体内激活的pagC基因启动子能明显提高质粒在重组鼠伤寒沙门氏菌中的稳定性和增强重组菌诱导的体液和细胞免疫应答 ,这为发展高效免疫、成本低廉的口服丙肝疫苗提供了一个新思路

关键词：体内激活的启动子减毒鼠伤寒沙门氏菌丙型肝炎病毒免疫应答

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枸杞多糖联合LAK／IL－2疗法对75例晚期肿瘤的疗效观察

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中华肿瘤杂志 1994年第6期16卷 428-431页

作者：曹广文杨文国杜平王雄彪张丽云戚中田上海第二军医大学微生物学教研室上海长海医院

用枸杞多糖（ＬｙｃｉｕｍＢａｒｂａｒｕｍＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＬＢＰ）联合ＬＡＫ／ＩＬ－２疗法临床试验治疗７９例晚期肿瘤患者，其中７５例可评估病人资料分析提示，ＬＢＰ联合ＬＡＫ／ＩＬ－２疗法组疗效（４０．９... 详细信息

用枸杞多糖（ＬｙｃｉｕｍＢａｒｂａｒｕｍＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＬＢＰ）联合ＬＡＫ／ＩＬ－２疗法临床试验治疗７９例晚期肿瘤患者，其中７５例可评估病人资料分析提示，ＬＢＰ联合ＬＡＫ／ＩＬ－２疗法组疗效（４０．９％）显著优于ＬＡＫ／ＩＬ－２疗法组（１６．１％）。两种治疗方案对恶性黑色素瘤、肾癌、直结肠癌、肺癌、恶性胸水和鼻咽癌有一定的疗效。ＬＢＰ联合ＬＡＫ／ＩＬ－２治疗组的缓解持续时间显著长于ＬＡＫ／ＩＬ－２治疗组。ＬＢＰ联合ＬＡＫ／ＩＬ－２治疗组治疗前后外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）的ＮＫ、ＬＡＫ活性增高程度均显著大于ＬＡＫ／ＩＬ－２治疗组，说明ＬＢＰ能够提高ＬＡＫ／ＩＬ－２疗法对晚期肿瘤的治疗效果。

关键词：枸杞枸杞多糖 LAK 肿瘤白细胞介素中医药疗法

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外显子捕捉法快速分离新基因的原理和方法

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生物化学与生物物理进展 1997年第3期24卷 207-211页

作者：朱冠山缪为民焦炳华第二军医大学第一附属医院传染病学教研室上海200433 第二军医大学微生物学教研室上海200433

从大片段基因组DNA中快速分离转录序列是疾病基因定位克隆 (positionalcloning)中的关键步骤 .外显子捕捉法是一种较为成功的方法 .文章对该法的基本原理。

关键词：基因分离方法外显子捕捉法

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IL-12对结构优化的HBV核心抗原DNA疫苗诱导免疫应答的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2003年第5期23卷 355-358页

作者：高军赵平柯金山戚中田第二军医大学微生物学教研室第二军医大学长征医院实验诊断科

目的　探讨IL 12对一种结构优化的HBV核心抗原 (HBcAg)DNA疫苗免疫效果的影响。方法　将小鼠IL 12基因插入结构优化的DNA疫苗pST HBc,构成pST HBc/IL12 ,将pST HBc/IL12转染COS7细胞 ,ELISA检测培养上清中的HBcAg和小鼠IL 12。分别将pST... 详细信息

目的　探讨IL 12对一种结构优化的HBV核心抗原 (HBcAg)DNA疫苗免疫效果的影响。方法　将小鼠IL 12基因插入结构优化的DNA疫苗pST HBc,构成pST HBc/IL12 ,将pST HBc/IL12转染COS7细胞 ,ELISA检测培养上清中的HBcAg和小鼠IL 12。分别将pST HBc/IL12和pST HBc肌肉注射接种BALB/c小鼠 ,检测小鼠的体液和细胞免疫应答。结果　ELISA检测到培养上清液中的HBcAg和小鼠IL 12 ,pST HBc/IL12诱导的抗 HBc总IgG阳转率和抗体水平不及pST HBc ,但其诱导的脾细胞增殖反应和细胞毒性T淋巴细胞反应均强于pST HBc。结论　IL 12可进一步增强这种HBcAgDNA疫苗诱导的细胞免疫应答。

关键词：乙型肝炎病毒 DNA疫苗 HBV核心抗原白细胞介素-12

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巨细胞病毒性视网膜炎一例

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中华眼科杂志 1993年第4期29卷 246-247页

作者：夏风华韩丽荣 200433，上海第二军医大学长海医院眼科 00433，上海第二军医大学长海医院微生物学教研室

巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)性视网膜炎是一种视网膜和脉络膜的坏死性炎症,现报告1例如下。患者女,44岁,因左眼前黑影飘动及视力波动性下降1年余,疑诊"脉络膜肿瘤"于1991年7月25日入院。患者曾在外院分别诊为"视网... 详细信息

巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)性视网膜炎是一种视网膜和脉络膜的坏死性炎症,现报告1例如下。患者女,44岁,因左眼前黑影飘动及视力波动性下降1年余,疑诊"脉络膜肿瘤"于1991年7月25日入院。患者曾在外院分别诊为"视网膜中央静脉阻塞"、"球内占位病变"、"继发性视网膜脱离"等。患者

关键词：视网膜炎巨细胞病毒

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携带HCV核心蛋白原核表达质粒与真核表达质粒的减毒伤寒沙门菌诱导小鼠免疫应答之比较

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生物工程学报 2007年第5期23卷 862-866页

作者：陈志辉赵平吴淑梅曹洁张斌万谟彬柯金山戚中田第二军医大学长海医院感染科上海200433 第二军医大学微生物学教研室上海200433 第二军医大学长海医院实验诊断科上海200433

丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白是丙肝疫苗的重要候选抗原,然而,该蛋白因具有免疫调控作用而影响免疫应答的诱导。构建了HCV核心蛋白的两种表达质粒,一种是体内激活型原核表达质粒pZW-C,另一种是真核表达质粒pCI-C。将该两种质粒转化减毒鼠... 详细信息

丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白是丙肝疫苗的重要候选抗原,然而,该蛋白因具有免疫调控作用而影响免疫应答的诱导。构建了HCV核心蛋白的两种表达质粒,一种是体内激活型原核表达质粒pZW-C,另一种是真核表达质粒pCI-C。将该两种质粒转化减毒鼠伤寒沙门菌SL7207,得到重组菌SL7207/pZW-C和SL7207/pCI-C,分别将重组菌口服接种小鼠,检测小鼠的免疫应答,结果发现:①SL7207/pCI-C免疫鼠的CD3+CD4+T细胞持续降低,而SL7207/pZW-C免疫鼠的CD3+CD4+T细胞无明显改变;②SL7207/pCI-C免疫只诱导低水平抗HCV核心蛋白抗体,加强免疫对抗体阳转率及抗体水平无明显影响,而SL7207/pZW-C免疫组所有小鼠均产生较高水平的抗核心蛋白抗体。③SL7207/pCI-C免疫鼠脾细胞的体外增殖活性、细胞毒性T细胞活性以及加强免疫对细胞免疫应答的增强作用均明显不及SL7207/pZW-C免疫鼠。结果提示:携带真核表达质粒pCI-C的沙门菌因在小鼠细胞内表达天然形式(结构以及磷酸化修饰)的HCV核心蛋白,可能通过对T细胞的免疫抑制作用而弱化免疫应答。而以携带原核表达质粒pZW-C的沙门菌免疫可避免这一问题,并具有接种方便,成本低廉等优点,从而可望作为基于HCV核心蛋白为靶抗原的HCV疫苗的候选免疫方式。

关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白减毒伤寒沙门菌疫苗免疫应答

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TT型病毒基因组的克隆与进化分析

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微生物学报 2001年第4期41卷 408-414页

作者：任浩董辉朱分禄缪晓辉王文戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长征医院感染科

利用PCR方法从输血传播性病毒(transfusion transmitted virus,TTV)阳性标本中获得不同长度且重叠覆盖TTV基因组的DNA片段.将PCR扩增片段克隆到pT-Adv载体中,筛选获得阳性克隆.DNA序列测定结果表明所克隆的片段为TTV基因组序列.利用DNA... 详细信息

利用PCR方法从输血传播性病毒(transfusion transmitted virus,TTV)阳性标本中获得不同长度且重叠覆盖TTV基因组的DNA片段.将PCR扩增片段克隆到pT-Adv载体中,筛选获得阳性克隆.DNA序列测定结果表明所克隆的片段为TTV基因组序列.利用DNA片段中特有的限制性内切酶位点将TTV的DNA片段首尾相连,得到近全长的基因组克隆,命名为TTV021.对TTV021的核酸序列进行分析,TFV021长3 472 nt,存在2个阅读框架ORF1和ORF2,分别编码785和146个氨基酸.将TTV021与其它已知的TTV基因组全序列进行了同源性比较,并进行进化分析.结果表明,TTV021序列与TTV分离株CHN2、BDH1的遗传距离较近,而与其它分离株相对较远.

关键词：输血传播性病毒克隆同源性进化分析

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红细胞增强白细胞吞噬作用形态学检测法的研究

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上海免疫学杂志 1989年第3期9卷 169-170页

作者：徐瑛郭峰叶天星第二军医大学长海医院免疫室第二军医大学长海医院微生物学教研室

本文简化和改进了Forslid提出的红细胞增强吞噬作用的荧光检测法,建立了形态学检测法(MM)。此法简单,易掌握,不需荧光染色等特殊技术。基层单位也能推广应用,为进一步研究红细胞免疫功能提供了有效手段。材料和方法一、材料:右旋糖酐(... 详细信息

本文简化和改进了Forslid提出的红细胞增强吞噬作用的荧光检测法,建立了形态学检测法(MM)。此法简单,易掌握,不需荧光染色等特殊技术。基层单位也能推广应用,为进一步研究红细胞免疫功能提供了有效手段。材料和方法一、材料:右旋糖酐(Dextran 7-500),蒸馏水配制成3～4％备用: 2%台盼蓝染料;Ficoll分离液。

关键词：红细胞白细胞吞噬形态检测

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Flt3配体增强HCV核心-包膜E2融合基因DNA疫苗诱导的细胞免疫应答

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生物工程学报 2003年第2期19卷 158-162页

作者：柯金山赵平曹洁于嘉屏戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433 第二军医大学长征医院实验诊断科上海200003

建立一种可高效诱导细胞免疫应答 ,对丙型肝炎病毒 (HCV)感染可能起预防和治疗作用的DNA疫苗。将小鼠Flt3配体 (FL)信号肽和胞外段cDNA插入结构优化的HCV核心包膜E2融合抗原DNA疫苗pST CE2t,构建成pST CE2t FL。将pST CE2t FL转染COS7... 详细信息

建立一种可高效诱导细胞免疫应答 ,对丙型肝炎病毒 (HCV)感染可能起预防和治疗作用的DNA疫苗。将小鼠Flt3配体 (FL)信号肽和胞外段cDNA插入结构优化的HCV核心包膜E2融合抗原DNA疫苗pST CE2t,构建成pST CE2t FL。将pST CE2t FL转染COS7细胞 ,Westernblot和ELISA检测表明该重组质粒能表达HCV核心包膜E2融合抗原和可溶性小鼠FL。分别将pST CE2t、pST CE2t FL和空载体pCI neo肌肉注射接种BALB c小鼠 ,检测小鼠的体液和细胞免疫应答。结果表明两种DNA结构均能在小鼠体内诱生细胞和体液免疫应答 ,但pST CE2t诱导的体液免疫应答强于pST CE2t FL ,而后者诱导的细胞免疫应答明显强于前者。FL能明显增强HCV核心包膜E2融合抗原DNA疫苗诱导的细胞免疫应答 ,对于发展HCV预防和治疗性疫苗有潜在的应用价值。

关键词：丙型肝炎病毒 DNA疫苗 fms样酪氨酸激酶受体3配体细胞免疫应答

来源：评论

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微量酶联杂交法定量检测HBV基因竞争PCR扩增产物

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中华微生物学和免疫学杂志 2001年第1期21卷 101-104页

作者：缪晓辉戚中田孔宪涛第二军医大学附属长征医院感染科第二军医大学附属长征医院第二军医大学微生物学教研室

目的　建立一种简便、敏感、精确的微反应板酶联杂交技术 ,以鉴定HBV基因的竞争PCR扩增产物。方法　设计了两种捕获探针 ,能分别与竞争PCR扩增产物中的野生片段和突变片段杂交。捕获探针通过 3′ 端修饰的氨基与微量DNA结合板孔表面的NO... 详细信息

目的　建立一种简便、敏感、精确的微反应板酶联杂交技术 ,以鉴定HBV基因的竞争PCR扩增产物。方法　设计了两种捕获探针 ,能分别与竞争PCR扩增产物中的野生片段和突变片段杂交。捕获探针通过 3′ 端修饰的氨基与微量DNA结合板孔表面的NOS基团化学结合而被“竖直”地包被在反应板上 ;将热变性后的产物加入两种捕获探针反应孔内 ,产物中带有生物素的野生或突变片段的一条单链与相应的捕获探针杂交 ;最后用链亲和素碱性磷酸酶及底物检测杂交信号。结果　该方法检测PCR产物DNA的灵敏度为 80ng/ml,大于琼脂糖凝胶电泳染色鉴定法。获得野生片段和突变片段杂交信号值后 ,可根据公式计算扩增前野生模板的初始量。结论　本方法操作简单、灵敏度高、结果数据化、特异性强 ,适用于竞争PCR产物分析。

关键词：酶联杂交联合酶链反应基因定量乙型肝炎病毒

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