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第四届全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：王文王锦红缪晓辉 Mark A Feitelson 戚中田第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海200433 上海长征医院感染科上海200003 Department of Biology College of Science and TechnologyTemple UniversityPhiladelphiaPA 19122Unit

目的：建立用合成多肽抗原检测原发性肝癌血清标志物的ELISA方法，并进行初步应用。方法：利用已经筛选到的5种与乙型肝炎病毒X抗原(HBx)诱导肝癌相关的细胞蛋白URG4、URG7、URG11、S15a和Suil，作为原发性肝癌的筛查和早期诊断的... 详细信息

目的：建立用合成多肽抗原检测原发性肝癌血清标志物的ELISA方法，并进行初步应用。方法：利用已经筛选到的5种与乙型肝炎病毒X抗原(HBx)诱导肝癌相关的细胞蛋白URG4、URG7、URG11、S15a和Suil，作为原发性肝癌的筛查和早期诊断的血清标志物，根据上述5种蛋白的序列合成多肽(L4A/L4B、L7B、L11-1/L11-3/L11-4、L12A/L12B和SuilA/SuilB)，作为检测抗原，建立检测上述标志物抗体的间接ELISA方法，并进行敏感性、特异性、精密性评价及临床应用。结果：以合成多肽为包被抗原的间接ELlSA检测方法，敏感性为93.5％、特异性为97.9％、试验内和试验间变异系数分别为3.8％～5.6％和7.4％～10.3％;检测161份肝癌、肝硬化及乙型肝炎患者血清样本中，1种指标以上阳性检出率分别为90.4％、92.6％和61.7％，2种指标以上阳性检出率分别为78.6％、70.6％和48.3％;39份正常献血员血清中，1种指标以上阳性检出率为12.2％，2种指标以上阳性率为6.3％。结论：所建立的检测原发性肝癌血清标志物的ELISA方法，可用于原发性肝癌高危人群的筛选和小肝癌的早期诊断，可作为目前的AFP和MRI诊断方法的有益补充。

关键词：原发性肝癌免疫学检验血清抗体多肽抗原

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HIV-1 HXB2株蛋白酶的原核表达、纯化及其Gag蛋白CAP2NC的切割活性分析

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第二军医大学学报 2008年第4期29卷 365-370页

作者：陈铭潘欣贾建安何俊蒋少华陈璐姚静娟陈秋莉曹洁潘卫第二军医大学基础部微生物学教研室上海200433 安徽医科大学病理学教研室合肥230032 第二军医大学长征医院感染科上海200003

目的:原核表达、纯化HIV-1型HXB2株蛋白酶(protease,PR),用于对HIV-1 Gag P2/NC蛋白酶切割位点序列随机突变的噬菌体展示文库的切割筛选及构建新的蛋白酶抑制剂(protease inhibitor,PI)类药物体外筛选模型。方法:根据HIV-1 HXB2株PR DN... 详细信息

目的:原核表达、纯化HIV-1型HXB2株蛋白酶(protease,PR),用于对HIV-1 Gag P2/NC蛋白酶切割位点序列随机突变的噬菌体展示文库的切割筛选及构建新的蛋白酶抑制剂(protease inhibitor,PI)类药物体外筛选模型。方法:根据HIV-1 HXB2株PR DNA序列设计引物,在PR序列上游添加自切割位点MGTVSFNF 8个氨基酸编码获得PR107 DNA编码序列,将PR107 DNA克隆至原核表达载体pET-32a,序列测定后转化大肠杆菌BL21 DE3进行诱导表达。表达产物经用Ni-NTA亲和柱纯化,经复性后,进行靶蛋白CAP2NC切割试验,SDS-PAGE检测切割结果。结果:成功合成了使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1 PRl07的DNA编码序列,序列测定显示其编码氨基酸序列与原始序列完全一致;成功构建了HIV-1 PR原核表达质粒pETa2a—PR107,转化大肠杆菌BL21 DE3经IPTG诱导后,表达出相对分子质量为30 000的HIV-1 PR融合蛋白,纯化的目的蛋白浓度为2.54 mg/ml;纯化蛋白经复性后具有对底物蛋白CAP2NC的切割活性,该作用能被PI药物抑制。结论:成功构建大肠杆菌偏好密码子带自切割位点的HIV-1 PR原核表达载体pET32a—PR107,在大肠杆菌中表达,经纯化复性获得了具有切割活性的HIV-1 PR融合蛋白。

关键词： HIV 蛋白酶基因表达切割

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抗震救灾部队官兵皮肤病发病率及其影响因素分析

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第二军医大学学报 2008年第7期29卷 741-743页

作者：张迁常文军朱诗应阮芳铭曹广文第二军医大学长海医院感染科上海200433 第二军医大学卫生勤务学系流行病学教研室上海200433 第二军医大学基础部微生物学教研室上海200433 第二军医大学海军医学系军队卫生教研室上海200433

目的:调查汶川映秀镇抗震救灾部队官兵皮肤病的发病情况,分析其影响因素,并对营区内杀虫措施效果进行评价。方法:2008年6月15日至6月20日,以映秀镇的两支抗震救灾部队为研究对象,回顾性调查部队官兵在震后1个月内的皮肤病发病情况、帐... 详细信息

目的:调查汶川映秀镇抗震救灾部队官兵皮肤病的发病情况,分析其影响因素,并对营区内杀虫措施效果进行评价。方法:2008年6月15日至6月20日,以映秀镇的两支抗震救灾部队为研究对象,回顾性调查部队官兵在震后1个月内的皮肤病发病情况、帐篷卫生条件和杀虫措施实施情况等内容,采用χ2检验确定差异显著性。结果:映秀镇抗震救灾部队官兵在震后1个月的皮肤病发病率为42.20%,其中虫咬性皮炎和毛囊炎的构成比分别为82.05%和15.38%;震后1、2、4周的皮肤病发病率水平明显高于震前水平(P<0.05),震后4周发病率的升高与在山上过夜相关;采用2.5%溴氰菊酯等杀虫剂对帐篷内外环境进行杀虫,皮肤病发病率由震后2周的26.61%降低至震后3周的0.92%(P<0.05)。结论:抗震救灾部队官兵在震后皮肤病的发病率明显升高,震后恶劣的卫生环境、蚊虫叮咬是官兵皮肤病的主要因素,定期杀虫能有效降低皮肤病的发病率。

关键词：地震皮肤疾病发病率虫咬和虫螫

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丙型肝炎病毒高变区1模拟表位的交叉反应性分析

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病毒学报 2008年第4期24卷 249-254页

作者：杨苗赵平边中启任艳丽龚育平戚中田第二军医大学微生物学教研室全军医学微生物学重点实验室上海市医学生物防护重点实验室上海200433 成都军区昆明总医院感染病中心昆明650032

研究丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)高变区1(Hypervariable region 1,HVR1)抗原表位的交叉反应性,获取高反应性的抗原表位。设计并合成5种HVR1模拟表位基因,构建编码HVR1模拟表位的表达载体,表达并纯化表位蛋白。ELISA法检测表位... 详细信息

研究丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)高变区1(Hypervariable region 1,HVR1)抗原表位的交叉反应性,获取高反应性的抗原表位。设计并合成5种HVR1模拟表位基因,构建编码HVR1模拟表位的表达载体,表达并纯化表位蛋白。ELISA法检测表位蛋白与35份HCV抗体阳性血清的交叉反应性。包装HCV假病毒(HCVpseudotype particles,HCVpp),评价表位蛋白免疫BALB/c鼠血清在假病毒感染Huh7.5细胞中的作用。结果表明,表达纯化的5种表位蛋白(P1、P2、P5、P6、P8)均可与HCV抗体阳性血清反应,阳性反应率分别为54.3%(P1)、62.9%(P2)、80%(P5)、68.6%(P6)、54.3%(P8)。表位蛋白P6、P8免疫BALB/c鼠血清对HCV假病毒感染Huh7.5细胞具明显的抑制作用。结果提示,选取的HVR1模拟表位在HCV感染免疫与疫苗研制中可能具有潜在的价值。

关键词：丙型肝炎病毒高变区1 模拟表位交叉反应性

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肥大细胞负调控分子与变态反应性疾病

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中国呼吸与危重监护杂志 2008年第6期7卷 485-487页

作者：任艳丽戚中田李莉第二军医大学微生物学教研室全军医学微生物学重点实验室上海200433 上海交通大学附属第一人民医院检验科

Ⅰ型变态反应病的发生率逐年上升,目前缺乏有效的治疗方法,严重影响人类的健康和患者的生活质量。近年来,利用免疫负调控作用的信号分子,抑制肥大细胞和嗜碱粒细胞释放炎性介质和细胞因子,为Ⅰ型变态反应性疾病的免疫治疗开辟了新的途... 详细信息

Ⅰ型变态反应病的发生率逐年上升,目前缺乏有效的治疗方法,严重影响人类的健康和患者的生活质量。近年来,利用免疫负调控作用的信号分子,抑制肥大细胞和嗜碱粒细胞释放炎性介质和细胞因子,为Ⅰ型变态反应性疾病的免疫治疗开辟了新的途径。肥大细胞和嗜碱粒细胞表面表达的IgE高亲和力受体(FceRI)在Ⅰ型变态反应发生中起着重要作用,[第一段]

关键词： Ⅰ型变态反应性疾病肥大细胞调控分子 IgE高亲和力受体细胞表面表达免疫治疗变态反应病治疗方法

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高迁移率族蛋白1在高容量血液滤过防治MODS中的变化及意义

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温州医学院学报 2008年第2期38卷 115-118页

作者：沈贤沈淑蓉薛向阳林富林朱冠保方国恩温州医学院第一附属医院普外科浙江温州325000 第二军医大学附属长海医院普外科上海200433 温州医学院微生物学教研室浙江温州325035

目的:通过观察高迁移率族蛋白1(HMGB1)在多脏器功能障碍综合征(MODS)发生过程中的变化趋势,探讨MODS发生机制及高容量血液滤过(HVHF)防治MODS的理论依据。方法:采用失血性休克复苏+内毒素血症复合因素建立猪MODS模型,将19只健康雄性家... 详细信息

目的:通过观察高迁移率族蛋白1(HMGB1)在多脏器功能障碍综合征(MODS)发生过程中的变化趋势,探讨MODS发生机制及高容量血液滤过(HVHF)防治MODS的理论依据。方法:采用失血性休克复苏+内毒素血症复合因素建立猪MODS模型,将19只健康雄性家猪随机分成MODS组和HVHF组,HVHF组动物内毒素注射后予血液滤过,血滤采用F50聚砜膜滤器,超滤量3 L/h。Western blot法检测血浆HMGB1蛋白含量变化,并通过与各自基础值的比较,了解HMGB1蛋白相对变化趋势。结果:HVHF组2例发生MODS,占20%(2/10),显著低于MODS组88.9%(8/9)(P<0.01),主要器官功能明显改善。HMGB1蛋白水平于内毒素注射后1 h无明显升高,至24 h两组均显著升高,后呈缓慢下降趋势。HVHF组,HMGB1蛋白相对于基础值水平升高幅度明显低于MODS组。结论:HMGB1蛋白等炎症介质的过度表达是MODS发生的本质原因之一;HVHF能够降低血循环中HMGB1等炎症介质的峰值浓度,有效遏制过度的炎症反应,防止MODS发生。

关键词：多器官功能衰竭血液滤过 HMGB1蛋白

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携带HCV核心蛋白原核表达质粒与真核表达质粒的减毒伤寒沙门菌诱导小鼠免疫应答之比较

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生物工程学报 2007年第5期23卷 862-866页

作者：陈志辉赵平吴淑梅曹洁张斌万谟彬柯金山戚中田第二军医大学长海医院感染科上海200433 第二军医大学微生物学教研室上海200433 第二军医大学长海医院实验诊断科上海200433

丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白是丙肝疫苗的重要候选抗原,然而,该蛋白因具有免疫调控作用而影响免疫应答的诱导。构建了HCV核心蛋白的两种表达质粒,一种是体内激活型原核表达质粒pZW-C,另一种是真核表达质粒pCI-C。将该两种质粒转化减毒鼠... 详细信息

丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白是丙肝疫苗的重要候选抗原,然而,该蛋白因具有免疫调控作用而影响免疫应答的诱导。构建了HCV核心蛋白的两种表达质粒,一种是体内激活型原核表达质粒pZW-C,另一种是真核表达质粒pCI-C。将该两种质粒转化减毒鼠伤寒沙门菌SL7207,得到重组菌SL7207/pZW-C和SL7207/pCI-C,分别将重组菌口服接种小鼠,检测小鼠的免疫应答,结果发现:①SL7207/pCI-C免疫鼠的CD3+CD4+T细胞持续降低,而SL7207/pZW-C免疫鼠的CD3+CD4+T细胞无明显改变;②SL7207/pCI-C免疫只诱导低水平抗HCV核心蛋白抗体,加强免疫对抗体阳转率及抗体水平无明显影响,而SL7207/pZW-C免疫组所有小鼠均产生较高水平的抗核心蛋白抗体。③SL7207/pCI-C免疫鼠脾细胞的体外增殖活性、细胞毒性T细胞活性以及加强免疫对细胞免疫应答的增强作用均明显不及SL7207/pZW-C免疫鼠。结果提示:携带真核表达质粒pCI-C的沙门菌因在小鼠细胞内表达天然形式(结构以及磷酸化修饰)的HCV核心蛋白,可能通过对T细胞的免疫抑制作用而弱化免疫应答。而以携带原核表达质粒pZW-C的沙门菌免疫可避免这一问题,并具有接种方便,成本低廉等优点,从而可望作为基于HCV核心蛋白为靶抗原的HCV疫苗的候选免疫方式。

关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白减毒伤寒沙门菌疫苗免疫应答

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TNF-α对子宫内膜间质细胞VEGF表达的影响

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生殖与避孕 2007年第7期27卷 450-453,493页

作者：王建军李怀芳廖小玲同济大学附属同济医院妇产科上海200065 第二军医大学微生物学教研室上海200433

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外培养的子宫内膜异位症(EMs)在位内膜间质细胞生长及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:应用MTS法分析TNF-α对来自EMs和非EMs症各10例患者的在位子宫内膜间质细胞生长的影响;并以荧光定量... 详细信息

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外培养的子宫内膜异位症(EMs)在位内膜间质细胞生长及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:应用MTS法分析TNF-α对来自EMs和非EMs症各10例患者的在位子宫内膜间质细胞生长的影响;并以荧光定量PCR、Western blot和定量ELISA检测不同浓度TNF-α作用下间质细胞VEGF的表达情况。结果:TNF-α呈剂量依赖方式促进EMs患者子宫内膜间质细胞的生长,并显著上调VEGF的表达;但对非EMs患者的子宫内膜间质细胞无上述作用。结论:TNF-α能明显促进EMs患者在位内膜间质细胞的生长并促进其VEGF的表达。

关键词：子宫内膜异位症(EMs) 间质细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α) 血管内皮生长因子(VEGF)

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沙利度胺对子宫内膜异位症的内膜间质细胞体外表达VEGF的影响

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中国新药与临床杂志 2007年第9期26卷 641-645页

作者：王建军李怀芳赵平同济大学附属同济医院妇产科上海200065 中国人民解放军第二军医大学微生物学教研室上海200433

目的:观察沙利度胺(ThD)对子宫内膜异位症病人内膜间质细胞的增殖及其血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:刮取子宫内膜异位症病人的子宫内膜组织,经体外分离、培养,用波形蛋白单抗进行免疫组化染色鉴定,应用四唑盐(MTS)分析肿瘤... 详细信息

目的:观察沙利度胺(ThD)对子宫内膜异位症病人内膜间质细胞的增殖及其血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:刮取子宫内膜异位症病人的子宫内膜组织,经体外分离、培养,用波形蛋白单抗进行免疫组化染色鉴定,应用四唑盐(MTS)分析肿瘤坏死因子α(TNF-α)和ThD对间质细胞生长的影响,以实时荧光定量PCR、Western Blot和定量ELISA分析在存在外源TNF-α的情况下,不同浓度ThD对间质细胞表达VEGF的影响。结果:TNF-α能促进子宫内膜间质细胞的增殖和分泌VEGF,而ThD能剂量依赖性抑制内膜间质细胞的增殖,并逆转TNF-α对VEGF的上调作用。结论:ThD可抑制体外培养的子宫内膜异位症内膜间质细胞的增殖及其VEGF的表达和分泌,提示ThD对于治疗子宫内膜异位症可能具有一定的作用。

关键词：沙利度胺子宫内膜异位症体外研究血管内皮生长因子

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含CpG免疫刺激序列的质粒能增强HBsAg诱导的免疫应答

含CpG免疫刺激序列的质粒能增强HBsAg诱导的免疫应答

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第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：陈志辉柯金山赵平戚中田第二军医大学附属长海医院第二军医大学微生物学教研室

来源于细菌基因组 DNA 的含非甲基化的胞嘧啶和鸟嘌呤核苷酸(CpG)基序的寡脱氧核苷酸(ODN)能激活脊椎动物的免疫细胞,在病毒感染、肿瘤以及过敏性疾病的治疗中具有广阔的应用前景,数种作为疫苗佐剂或者单一治疗制剂的

关键词：

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