检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2003年第9期24卷 941-943页

作者：刘善荣刘厚奇汤淑萍惠宁冀凯宏熊俊蒋正戚中田第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 长海医院妇产科基础医学部微生物学教研室

目的:初步探讨人胚胎生殖系细胞的分离与体外培养.方法:体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织,按单纯机械分离、酶消化分离、二者结合法及是否有饲养层将组织分为5种不同的方式培养后,用碱性磷酸酶标记,计数阳性克隆并进行比较.结果:酶消... 详细信息

目的:初步探讨人胚胎生殖系细胞的分离与体外培养.方法:体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织,按单纯机械分离、酶消化分离、二者结合法及是否有饲养层将组织分为5种不同的方式培养后,用碱性磷酸酶标记,计数阳性克隆并进行比较.结果:酶消化法培养所获得的克隆较单纯机械分离方法多,原代培养时种植到饲养层上效果较好.将分离到的组织用0.25%胰酶消化3 min,种植到丝裂霉素C处理过的小鼠胚胎成纤维细胞上培养3 d,挑取克隆传代,在第10天形成30.7 个阳性克隆,显著高于其他方法获得的阳性克隆数.用碱性磷酸酶标记的细胞(克隆)具有多样性,细胞胞体为圆形,分为有突起和无突起两种;阳性细胞克隆呈圆球形、条带形和块形,与周围细胞分界清楚.结论:人胚胎体内的微环境限制生殖系细胞的体外扩增培养,原代培养需要在饲养层上进行且宜用酶消化法尽早传代.

关键词：胚胎生殖系细胞细胞分离体外培养碱性磷酸酶

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HCV 1a/1b型嵌合体能在HepG2细胞内复制与表达

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中国病毒学 2003年第5期18卷 423-427页

作者：王宏卫赵平谢南张珉朱诗应戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433 南昌市第九医院江西南昌330002

采用HCV 1a/1b嵌合体cDNA构建表达质粒转染HepG2细胞,以免疫组化和Western blotting检测HCV蛋白表达,RT-PCR检测HCV正、负链RNA,研究丙型肝炎病毒(HCV)1a和1b型嵌合体全长cDNA在HepG2细胞中的复制和表达。结果证明,转染细胞中检测到分... 详细信息

采用HCV 1a/1b嵌合体cDNA构建表达质粒转染HepG2细胞,以免疫组化和Western blotting检测HCV蛋白表达,RT-PCR检测HCV正、负链RNA,研究丙型肝炎病毒(HCV)1a和1b型嵌合体全长cDNA在HepG2细胞中的复制和表达。结果证明,转染细胞中检测到分子量约70kDa的HCVNS3蛋白,转染细胞连续传20代,仍能检测到HCV正、负链RNA。表明该HCV嵌合体可以在细胞中复制和表达,HCV 1b型的RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)可以起始含1a型非编码区的病毒复制。HCV 5′端非翻译区第11、12、13、34和35位核苷酸改变可不影响其与核糖体结合。3′非翻译区9400,9403和9407位核苷酸改变,9435位缺失“A”,9409,9410位及9495,9496,9497位分别插入“TT”和“AAT”可不影响RORp的生物活性。本研究对阐明HCV复制和翻译机制有重要意义。

关键词：丙型肝炎病毒嵌合体cDNA HepG2细胞 RNA聚合酶表达

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不同发育阶段人胚胎原始生殖细胞的定位及体外培养

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第二军医大学学报 2003年第9期24卷 944-946页

作者：刘善荣刘厚奇汤淑萍惠宁冀凯宏蒋正戚中田冯根生第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 长海医院妇产科基础医学部微生物学教研室 Burham InstituteSanDiegoCA92037USA

目的:对不同发育阶段的人胚胎原始生殖细胞(PGC)进行定位并比较其体外培养的差异.方法:取4～7周发育阶段的人胚胎,应用组织化学法检测PGC内碱性磷酸酶(AP)以对其定位.体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织进行培养,第1次传代后,用AP标记,... 详细信息

目的:对不同发育阶段的人胚胎原始生殖细胞(PGC)进行定位并比较其体外培养的差异.方法:取4～7周发育阶段的人胚胎,应用组织化学法检测PGC内碱性磷酸酶(AP)以对其定位.体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织进行培养,第1次传代后,用AP标记,计数不同发育阶段AP阳性的PGC和体外培养的阳性克隆并进行比较.结果:在卵黄囊、原肠、背侧肠系膜和生殖嵴处有AP强阳性细胞,阳性信号位于胞质内.阳性细胞散在分布,在生殖嵴处聚集成团.不同发育阶段的胚胎组织培养均有阳性克隆出现.统计学分析结果表明,4～7周人胚胎内AP阳性的PGC数目及细胞内信号强度无明显差异(P>0.05);由胚胎组织培养获得的AP阳性克隆数也无显著差异.结论:人PGC位于卵黄囊、原肠、背侧肠系膜和生殖嵴处.4～7周发育阶段,胚胎内PGC数目和体外培养的克隆数无明显变化.

关键词：胚胎原始生殖细胞体外培养定位碱性磷酸酶

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内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒对新生血管的抑制效应

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生物技术通讯 2003年第5期14卷 439-443页

作者：潘欣王泳张珉赵平潘卫戚中田第二军医大学微生物学教研室第二军医大学附属长海医院眼科上海200433

内皮抑素与血管内皮细胞抑制因子均为内源性新生血管抑制分子。为了探讨两分子融合后的生物学功能,以重组腺病毒为载体介导融合基因在体内外表达。体外实验表明重组腺病毒Ad-hENDO-VEGI151能够在ECV304、HepG2、L929等细胞中表达41000... 详细信息

内皮抑素与血管内皮细胞抑制因子均为内源性新生血管抑制分子。为了探讨两分子融合后的生物学功能,以重组腺病毒为载体介导融合基因在体内外表达。体外实验表明重组腺病毒Ad-hENDO-VEGI151能够在ECV304、HepG2、L929等细胞中表达41000大小的融合蛋白,对血管内皮细胞增殖有明显的特异性抑制作用,对HepG2和L929细胞无抑制作用(F=13112.13,P=0.0001)。体内实验表明Ad-hENDO-VEGI151重组腺病毒表达的融合蛋白可以显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管的生成;与AdLacZ对照组相比,Ad-hENDO-VEGI151对兔炎症性角膜新生血管的抑制明显(F=1413.11P=0.0001),免疫组化结果显示,融合蛋白主要在角膜上皮层表达;治疗荷肝癌裸鼠,注射Ad-hENDO-VEGI151的肿瘤体积(487.7±241.2mm3)与AdLacZ对照组(4075.9±1849.9mm3)差异显著(F=14.80P=0.0085),抑瘤率达到88.03%,免疫组化结果显示,胞膜染色阳性,Ad-hENDO-VEGI151组肿瘤的微血管密度30.75±3.31%与AdLacZ组50.25±8.65%差异明显F=17.72P=0.0056抑制率为39%。结果提示:重组腺病毒Ad-hENDO-VEGI151能够表达有生物学活性的融合蛋白,并发挥特异性的新生血管抑制作用。

关键词：内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒新生血管抑制效应生物活性

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用抗HCV多抗从随机15肽库中筛选抗原表位

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第1期19卷 65-67页

作者：柯屾朱继萍温新宇施明贺永怀沈倍奋赵平姚志建解放军总医院基础医学研究所北京100853 军事医学科学院基础医学研究所第二军医大学微生物学教研室北方基因中心

目的:分析丙肝患者血清中抗HCV抗体的抗原表位。方法: 制备Protein A亲和层析柱,从丙肝患者血清中纯化、制备抗HCV多克隆抗体;并以此为筛选配基,对噬菌体表面展示的随机15肽库进行亲和筛选。结果:三轮筛选的投入产出比逐轮升高至3.3... 详细信息

目的:分析丙肝患者血清中抗HCV抗体的抗原表位。方法: 制备Protein A亲和层析柱,从丙肝患者血清中纯化、制备抗HCV多克隆抗体;并以此为筛选配基,对噬菌体表面展示的随机15肽库进行亲和筛选。结果:三轮筛选的投入产出比逐轮升高至3.3×10-3,假阳性率逐轮降低至0.2％,提示具有良好的富集效果。对从第3轮挑选出的16个克隆进行结合试验,发现9个克隆只与HCV抗体有较强的结合力而不与正常人血清起反应。测序表明,8个克隆的外源肽含有核心序列WPWS。用阳性噬菌体克隆检测20例丙肝患者血清,有程度不等的阳性反应。结论:用多克隆抗体从噬菌体随机肽库中,筛选到有一定功能的模拟表位。

关键词：噬菌体随机肽库抗原表位丙型肝炎病毒

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内皮抑素-可溶性血管内皮细胞生长抑制因子融合基因重组腺病毒的包装与鉴定

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世界华人消化杂志 2003年第6期11卷 741-744页

作者：李喆潘欣潘卫曹贵松闻兆章方国恩戚中田毕建威华积德中国人民解放军第二军医大学附属长海医院普通外科上海市200433 中国人民解放军第二军医大学微生物学教研室上海市200433

目的:构建内皮抑素-可溶性血管内皮细胞生长抑制因子融合基因重组腺病毒载体并包装成重组腺病毒,为下一步基因治疗打下基础。方法:用PCR方法在hENDO基因的5’端引入IL_3信号肽、3’端引入弹性蛋白连接肽序列(linker),再与sVEGI基因连接... 详细信息

目的:构建内皮抑素-可溶性血管内皮细胞生长抑制因子融合基因重组腺病毒载体并包装成重组腺病毒,为下一步基因治疗打下基础。方法:用PCR方法在hENDO基因的5’端引入IL_3信号肽、3’端引入弹性蛋白连接肽序列(linker),再与sVEGI基因连接,插入到pCAl3腺病毒载体中,用脂质体介导包装出重组腺病毒,PCR法对重组腺病毒进行鉴定。结果:构建完成hENDO-sVEGI融合基因重组腺病毒载体,融合基因包括IL_3信号肽、hENDO全长基因、弹性蛋白连接肽序列和sVEGI基因,总长度约1114bp,经酶切鉴定、序列分析证实克隆序列、插入方向和读码框架均正确,可包装出携带融合基因的重组腺病毒,用TCID_(50)法测定粗制重组腺病毒滴度为2×10^(11) TCID_(50)/L。结论:成功构建了hENDO-sVEGI融合基因,连接肽序列使两蛋白空间构象不受影响,IL_3信号肽保证蛋白可被分泌至胞外,完成携带融合基因的重组腺病毒的包装与鉴定,为进一步开展肿瘤基因治疗研究奠定了基础。

关键词：内皮抑素可溶性血管内皮细胞生长抑制因子融合基因重组腺病毒包装鉴定基因治疗肿瘤

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乙型肝炎病毒表面—核心融合抗原和白细胞介素—12共表达DNA疫苗的免疫原性

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中华肝脏病杂志 2003年第7期11卷 443-443页

作者：柯金山赵平吴淑梅戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433 第二军医大学长海医院实验诊断科

乙型肝炎病毒(HBV)特异性细胞免疫应答对急性HBV感染的恢复起关键作用,其中HBV表面抗原和核心抗原均是重要的靶抗原.曾构建HBV表面-核心融合抗原DNA疫苗,可有效诱导小鼠细胞和体液免疫应答,为进一步增强该DNA疫苗诱导细胞免疫应答,在该... 详细信息

乙型肝炎病毒(HBV)特异性细胞免疫应答对急性HBV感染的恢复起关键作用,其中HBV表面抗原和核心抗原均是重要的靶抗原.曾构建HBV表面-核心融合抗原DNA疫苗,可有效诱导小鼠细胞和体液免疫应答,为进一步增强该DNA疫苗诱导细胞免疫应答,在该疫苗分子中增加了小鼠白细胞介素-12(IL-12)基因,观察IL-12对其免疫应答的影响.

关键词：乙型肝炎病毒 HBV 表面-核心融合抗原白细胞介素-12 DNA疫苗免疫原性基因表达

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内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒对荷胃癌裸鼠的治疗

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世界华人消化杂志 2003年第9期11卷 1282-1285页

作者：潘欣李喆张珉王泳潘卫戚中田中国人民解放军第二军医大学微生物学教研室上海市200433 中国人民解放军第二军医大学附属长海医院普通外科上海市200433 中国人民解放军第二军医大学附属长海医院眼科上海市200433

目的:研究重组腺病毒携带hENDO-VEGI_(151)融合基因治疗胃癌的可行性。方法:分别用 500 μL滴度为 1×10^(12)TCID_(50)/L的粗制重组腺病毒AdCA13—hENDO—VEGI_(151)或AdLacZ皮下注射治疗荷胃癌裸鼠,隔天1次,共注射10次。最后一次... 详细信息

目的:研究重组腺病毒携带hENDO-VEGI_(151)融合基因治疗胃癌的可行性。方法:分别用 500 μL滴度为 1×10^(12)TCID_(50)/L的粗制重组腺病毒AdCA13—hENDO—VEGI_(151)或AdLacZ皮下注射治疗荷胃癌裸鼠,隔天1次,共注射10次。最后一次注射24h后处死动物,检测肿瘤体积、抑瘤率、目的基因的表达、增生细胞核抗原指数(PCNA LI)、肿瘤细胞凋亡指数(AI)、肿瘤微血管密度(MVD)。结果:注射AdCA13-hENDO-VEGI_(151)的治疗组肿瘤体积为328±156mm^3,注射AdLacZ的对照组肿瘤体积为2356±1 140 mm^3,差异显著(F=12.42,P=0.0125),抑瘤率为86.1％;重组腺病毒携带的目的基因均能在荷胃癌裸鼠肿瘤组织中表达;治疗组PCNA LI为 0.13± 0.09％,对照组为 1.40 ± 0.53％,差异显著(F=22.30,P=0.0033);治疗组AI为5.09 ± 0.25％,对照组AI为0.61±0.67％,差异显著(F=155.13,P=0.0 001);治疗组MVD为0.06±0.03％,对照组MVD为 1.09 ± 0.76％,差异明显(F=7.38,P=0.0348)。结论:重组腺病毒携带的融合基因能在荷胃癌裸鼠体内表达出有生物学活性的融合蛋白,并表现出一定的抑瘤效果。

关键词：胃癌基因治疗动物实验 hENDO—VEGI151 重组腺病毒内皮抑素血管内皮细胞抑制因子新生血管

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内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒对新生血管的抑制效应

内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒对新生血管的抑制效应

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第五次全国医学分子微生物学学术研讨会

作者：潘欣王泳张珉赵平潘卫戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433 第二军医大学附属长海医院眼科上海200433

本文为了探讨两分子融合后的生物学功能,以重组腺病毒为载体介导融合基因在体内外表达。结果提示:重组腺病毒Ad-hENDO-VEGI151能够表达有生物学活性的融合蛋白,并发挥特异性的新生血管抑制作用。

关键词：内皮抑素重组腺病毒新生血管抑制效应

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乙型肝炎病毒表面-核心融合抗原和白细胞介素-12共表达DNA疫苗的免疫原性

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肿瘤研究与临床 2003年第7期 443-443页

目的探讨针型胸腔镜活检术在晚期肺癌病理学诊断和分期中的临床应用价值.方法对经胸部螺旋CT和磁共振(MRI)检查临床诊断为Ⅲa～Ⅳ期肺癌,行痰、胸液细胞学和纤维支气管镜等检查,未能获得病理诊断的94例患者,施行针型胸腔镜肺内原发病灶... 详细信息

目的探讨针型胸腔镜活检术在晚期肺癌病理学诊断和分期中的临床应用价值.方法对经胸部螺旋CT和磁共振(MRI)检查临床诊断为Ⅲa～Ⅳ期肺癌,行痰、胸液细胞学和纤维支气管镜等检查,未能获得病理诊断的94例患者,施行针型胸腔镜肺内原发病灶、纵隔淋巴结、肺内和胸壁转移病灶组织活检术.结果 94例患者中89例经针型胸腔镜取得病理学标本,成功率为95%;术后病理均诊断为肺癌,其中腺癌47例,鳞癌23例,腺鳞癌12例,小细胞肺癌7例.经胸腔镜活检病理检查后,15例(17%)肺癌患者病理分期得到更正;4例发生气胸,11例出现轻度皮下气肿,2例出现少量咯血;89例患者术后8～18个月均获随访并行螺旋CT检查,无胸壁针道的肺癌种植性转移.结论对常规检查方法不能明确病理诊断和病理分期的晚期肺癌患者,针型胸腔镜活检术可作为一种有效的确诊手段.

关键词：肝炎病毒,乙型疫苗,DNA 白细胞介素-12

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