检索结果-内蒙古大学图书馆

热带医学杂志 2007年第9期7卷 850-852,862页

作者：武文斌邵圣文于建国戚中田第二军医大学微生物学教研室解放军88医院肝病研究所泰安271000

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)F蛋白对细胞p21基因转录、表达的影响。方法PCR扩增HCV 1b来源的F基因,克隆至pcDNA3.1真核表达载体。F基因质粒转染HepG2细胞,48h后抽提细胞总RNA和总蛋白,实时定量PCR及Western blot检测p21基因表达变化。结... 详细信息

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)F蛋白对细胞p21基因转录、表达的影响。方法PCR扩增HCV 1b来源的F基因,克隆至pcDNA3.1真核表达载体。F基因质粒转染HepG2细胞,48h后抽提细胞总RNA和总蛋白,实时定量PCR及Western blot检测p21基因表达变化。结果HCV F蛋白在HepG2细胞内瞬时表达,相对于空载体对照(目标基因表达量为1),HCV F基因质粒转染细胞的p21转录水平为3.2,蛋白表达水平为1.4。结论HCVF蛋白增加p21转录和表达,其生物学效应值得进一步研究。

关键词：丙型肝炎病毒 F蛋白 p21

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

siRNA抑制survivin的表达诱导人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的研究

引用

同济大学学报（医学版） 2007年第2期28卷 14-18页

作者：王建军刘彧王宏卫廖小玲朱诗应李怀芳同济大学附属同济医院妇产科上海200065 第二军医大学微生物学教研室上海200433

目的筛选能有效抑制survivin基因表达的小干扰RNA(siRNA),探讨survivin基因抑制对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响。方法设计3段survivin siRNA靶位点,用PCR扩增siRNA表达框,与survivin-绿色荧光蛋白融合基因表达质粒共转染293T细胞,再构... 详细信息

目的筛选能有效抑制survivin基因表达的小干扰RNA(siRNA),探讨survivin基因抑制对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响。方法设计3段survivin siRNA靶位点,用PCR扩增siRNA表达框,与survivin-绿色荧光蛋白融合基因表达质粒共转染293T细胞,再构建有效siRNA的表达载体,转染卵巢癌SKOV-3细胞,分析sur-vivin基因的表达及细胞凋亡情况。结果筛选出了1段能高效抑制survivin表达的siRNA,能显著下调SKOV-3细胞内的survivin表达,并导致SKOV-3细胞凋亡。结论利用RNA干扰能有效抑制survivin基因表达并诱导人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡,为进一步的靶向survivin分子的体内抗肿瘤研究奠定了基础。

关键词： survivin RNA干扰卵巢肿癌细胞凋亡

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

大鼠老化进程中晶状体蛋白水溶性向水不溶性的转变

引用

国际眼科杂志 2007年第1期7卷 46-48页

作者：黄才国张军李闻捷毛积芳第二军医大学生物化学及分子生物学教研室中国上海市200433 第二军医大学长海医院中心实验室中国上海市200433

目的:研究大鼠老化进程中晶状体蛋白由水溶性向水不溶性的转变特性,探讨对老年性白内障形成的可能作用。方法:采用双向电泳法,分析SD大鼠在老化进程中不同阶段(出生后1,8d;2,8wk;8mo;1.5a)晶状体蛋白α,β,γ由水溶性向水不溶性的时相... 详细信息

目的:研究大鼠老化进程中晶状体蛋白由水溶性向水不溶性的转变特性,探讨对老年性白内障形成的可能作用。方法:采用双向电泳法,分析SD大鼠在老化进程中不同阶段(出生后1,8d;2,8wk;8mo;1.5a)晶状体蛋白α,β,γ由水溶性向水不溶性的时相性转变特性。结果:各年龄组大鼠晶状体蛋白水溶性及水不溶性成分的双向电泳图谱模式有较大相似性。结构蛋白αA2,αB2,βB2随老化进程,其水溶性成分均呈升高趋势;水不溶性成分中αA2,βB2含量亦随年龄增长而升高,αB2在大鼠出生8mo后呈明显升高。晶状体蛋白自出生后8wk起,即发生明显的翻译后修饰(蛋白斑点增加),尤其伴侣蛋白αA2,αB2,同时也是结构蛋白)随老化其修饰成分增加十分明显,在水不溶性成分图谱中表现更为突出。出生后8wk前,βB2晶状体蛋白无论在水溶性或水不溶性成分中含量均极少;发育渐趋成熟该蛋白含量快速增加;出生8mo后成为晶状体蛋白中的主要成分,1.5a起成为含量最高的成分。结论:在大鼠老化进程中,不同晶状体蛋白其水溶性及水不溶性成分的变化趋势呈现不同特性。同种晶状体蛋白在不同年龄段存在量和/或质的变化。大鼠成长过程中晶状体蛋白变性显见于出生后8wk,其程度随老化而加重。

关键词：大鼠老化晶状体蛋白水溶性水不溶性转变

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

HCV F蛋白体外自组装以及在HCV感染者肝组织中的分布研究

引用

中华实验和临床感染病杂志（电子版） 2007年第3期1卷 138-139页

作者：邵圣文于建国武文斌赵平戚中田湖州大学医学院微生物学教研室浙江湖州313000 解放军第88医院肝病研究所第二军医大学微生物学教研室

目的探讨HCV F（frameshift）蛋白是否能自组装为病毒样颗粒以及F蛋白是否存在于HCV患者肝组织中。方法将0．5—1g／L大肠埃希菌重组表达的F蛋白与0．006g／L tRNA混合，于100μl组装缓冲液中进行反应，取组装产物进行1：10稀释，2％醋... 详细信息

目的探讨HCV F（frameshift）蛋白是否能自组装为病毒样颗粒以及F蛋白是否存在于HCV患者肝组织中。方法将0．5—1g／L大肠埃希菌重组表达的F蛋白与0．006g／L tRNA混合，于100μl组装缓冲液中进行反应，取组装产物进行1：10稀释，2％醋酸铀复染后电镜观察是否形成病毒样颗粒。HCV感染者肝组织中F蛋白的检测采用免疫组织化学法。结果1g／L F蛋白与tRNA混合（167：1）后，可形成直径35nm的病毒样颗粒。在20例HCV感染者的肝穿刺组织标本中，有2例患者的肝细胞胞浆中可检测到F蛋白。结论F蛋白在体外可以形成病毒样颗粒，在部分HCV感染者的肝组织中存在F蛋白，F蛋白在HCV的生活周期中可能有重要功能。

关键词：丙型肝炎病毒 F蛋白病毒样颗粒肝活检标本

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

丙型肝炎病毒F蛋白磷酸化位点突变与细胞内分布

引用

微生物与感染 2007年第2期2卷 78-82页

作者：邵圣文于建国武文斌赵平丁惠戚中田第二军医大学微生物学教研室军队医学微生物学重点实验室上海200433 解放军第八十八医院济南军区肝病研究所

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)F蛋白磷酸化位点突变对其在细胞内分布位置及功能的影响。方法应用NetPhos2.0Server软件预测F蛋白的磷酸化位点,据此设计重叠引物,利用引物之间相互延伸获得突变型HCVf基因,该基因第13、14、114、121和124位... 详细信息

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)F蛋白磷酸化位点突变对其在细胞内分布位置及功能的影响。方法应用NetPhos2.0Server软件预测F蛋白的磷酸化位点,据此设计重叠引物,利用引物之间相互延伸获得突变型HCVf基因,该基因第13、14、114、121和124位密码子由野生型f基因的TCT突变为GAT,对应氨基酸由丝氨酸(S)突变为天冬氨酸(D)。将突变型f基因及野生型f基因定向克隆至pEGFP-N1,得到pEGFP-mf和pEGFP-f重组子。采用脂质体法将重组子转染HepG2细胞,再用激光共聚焦显微镜观察突变型F蛋白以及野生型F蛋白在细胞内的分布情况,拍照并进行半定量分析。结果在HepG2细胞中,突变型F蛋白主要分布在细胞核内(90%),细胞质内有少量分布(10%),平均荧光强度分别为63.70±3.20和7.06±0.34,两者差异有统计学意义(P<0.001,t=99.2);野生型F蛋白主要分布在细胞质内(94.9%),细胞核内有少量分布(5.1%),平均荧光强度分别为83.34±4.07和4.48±0.22,两者差异有统计学意义(P<0.001,t=106.5)。结论HCVF蛋白在细胞内存在磷酸化和非磷酸化2种形式,其功能也不同。细胞质内以磷酸化F蛋白为主,非磷酸化F蛋白主要位于细胞核内。磷酸化F蛋白可能参与HCV复制调节,非磷酸化F蛋白可能影响细胞核内基因转录。

关键词：丙型肝炎病毒 F蛋白磷酸化

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

腺病毒介导的PTEN cDNA对子宫内膜癌细胞凋亡的影响

引用

中华妇产科杂志 2006年第8期41卷 549-553页

作者：杨培丽刘玉环崔英蔡在龙毛积芳第二军医大学长海医院妇产科第二军医大学长海医院基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的研究外源性PTEN cDNA的表达对子宫内膜癌细胞凋亡的影响。方法用细菌内同源重组法构建含野生型抑癌基因PTEN cDNA的复制缺陷型腺病毒Ad-PTEN,蛋白印迹法鉴定转染Ad-PTEN后,子宫内膜癌细胞系RL95-2细胞中PTEN蛋白的表达。将RL95-2细... 详细信息

目的研究外源性PTEN cDNA的表达对子宫内膜癌细胞凋亡的影响。方法用细菌内同源重组法构建含野生型抑癌基因PTEN cDNA的复制缺陷型腺病毒Ad-PTEN,蛋白印迹法鉴定转染Ad-PTEN后,子宫内膜癌细胞系RL95-2细胞中PTEN蛋白的表达。将RL95-2细胞随机分成3组: (1)空白对照组:仅用培养基而不加腺病毒;(2)Ad-CMV组:转染复制缺陷型空载体腺病毒Ad-CMV; (3)Ad-PTEN组:转染复制缺陷型腺病毒Ad-PTEN,前两组均为对照组。采用细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)外翻检测、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)测定及染色体DNA片段化检测这3种方法,从不同角度检测PTEN蛋白的表达对RL95-2细胞凋亡的影响。结果经Ad-PTEN介导的PTEN cDNA能够在RL95-2细胞中持续有效地表达。Ad-PTEN组转染后24、48、72、96 h,RL95-2细胞中细胞膜PS外翻细胞分别占(6．09±1．01)％、(9．98±2．17)％、(11．74±2．65)％、(27．69±8．67)％,各个时间点分别与两个对照组比较,差异均有统计学意义(P<0．05);RL95-2细胞中活化caspase-3细胞分别占(2．6±0．5)％、(18．0±4．4)％、(21．8±5．1)％、(33．7±9．9)％,各个时间点分别与两个对照组比较,差异均有统计学意义(P<0．05)。Ad-PTEN转染后48 h,RL95-2细胞中出现特异性的染色体DNA梯状条带。结论腺病毒介导的PTEN cDNA能够有效地在RL95-2细胞中表达,并诱导其凋亡,为子宫内膜癌的基因治疗提供了理论基础。

关键词：磷酸单酯水解酶类肿瘤抑制蛋白质类腺病毒科子宫内膜肿瘤细胞凋亡

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

α-黑素细胞刺激素在自体移植皮片中的mRNA表达及意义

引用

中国修复重建外科杂志 2006年第5期20卷 491-494页

作者：薛春雨邢新李蠡李军辉蒋平第二军医大学长海医院整形外科上海200433 生物化学与分子生物学教研室

目的初步探索α-黑素细胞刺激素(α-melanocyte-stimulatinghormone,α-MSH)在自体移植皮片过度色素沉着中的作用。方法标本取自颈部自体中厚移植皮片术后1年,局部需再次矫正的18例患者。在切取颈部自体中厚移植皮片同时于每例移植皮片... 详细信息

目的初步探索α-黑素细胞刺激素(α-melanocyte-stimulatinghormone,α-MSH)在自体移植皮片过度色素沉着中的作用。方法标本取自颈部自体中厚移植皮片术后1年,局部需再次矫正的18例患者。在切取颈部自体中厚移植皮片同时于每例移植皮片受区及原供区腹部周围分别切取正常皮肤作对照,切取范围1.0cm×0.5cm。分别利用RT-PCR、银染-丽春红染色法计算自体中厚移植皮片、原供区及受区周围自体正常对照皮肤中α-MSHmRNA电泳条带及表皮的灰度值,测定各组中α-MSHmRNA的半定量表达及黑色素的含量。结果α-MSH在自体中厚移植皮片中的mRNA表达明显高于自体正常对照皮肤,差异有统计学意义(P<0.01);自体中厚移植皮片表皮中黑色素含量较自体正常对照皮肤表皮中的黑色素含量明显增多,差异亦有统计学意义(P<0.01);且表皮中黑色素的含量与α-MSH的mRNA表达量呈正相关。结论α-MSH在自体中厚移植皮片中的表达较在自体正常对照皮肤中显著增高,致皮片中黑色素含量升高,在自体移植皮片过度色素沉着中起重要调控作用。

关键词： α-黑素细胞刺激素自体移植皮片黑色素过度色素沉着

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

核糖核酸干扰抑制生存素表达诱导小鼠结肠癌细胞凋亡

引用

中华实验外科杂志 2006年第7期23卷 792-794页

作者：李喆赵平王建军盛援廖小玲戚中田第二军医大学长海医院普通外科上海200433 第二军医大学长海医院基础部微生物学教研室上海200433 华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科

目的筛选强效抑制生存素Survivin基因表达的小干扰核糖核酸(siRNA),探讨Sur- vivin基因抑制对小鼠结肠癌细胞凋亡的影响。方法根据siRNA的设计规则和Survivin序列,设计3段侯选siRNA,聚合酶链反应(PCR)法制备表达框；将siRNA表达框与Surv... 详细信息

目的筛选强效抑制生存素Survivin基因表达的小干扰核糖核酸(siRNA),探讨Sur- vivin基因抑制对小鼠结肠癌细胞凋亡的影响。方法根据siRNA的设计规则和Survivin序列,设计3段侯选siRNA,聚合酶链反应(PCR)法制备表达框；将siRNA表达框与Survivin-绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因表达质粒(pSurvivin-EGFP)共转染293T细胞,24～48 h后根据荧光强度筛选强效siRNA；再制备其表达质粒转染小鼠结肠癌CT26细胞,应用实时荧光定量(FQ)-聚合酶链反应和蛋白印迹(Western blot)法分析Survivin基因的表达；DNA末端标记(TUNEL)法和流式细胞仪(FCM)Annexin V/丙化碘锭(PI)双染色法检测细胞凋亡。结果筛选出1段高效抑制Survivin表达的siRNA,可使CT26细胞内Survivin mRNA拷贝数明显减少,抑制率为86．9%；蛋白表达水平亦显著降低；TUNEL检测显示转染48 h后RNA干扰组和对照组凋亡细胞数分别为(60．13±5．71)个和(5．47±0．63)个,两组差异有统计学意义(P＜0．01)；FCM检测转染后1、2、3、4 d凋亡细胞比率分别为2．1%、4．9%、11．7%和32．6%,对照组4个时间点凋亡率均低于1．5%,两组差异有统计学意义(P＜0．01)。结论siRNA能有效抑制小鼠结肠癌CT26细胞内Survivin基因表达并诱导结肠癌细胞凋亡。

关键词： Survivin RNA干扰结肠癌脱噬作用

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

刺鼠信号蛋白对自体移植皮片中黑素细胞功能的影响

引用

第二军医大学学报 2006年第9期27卷 969-972页

作者：薛春雨邢新李蠡张敬德蒋平龚志锦第二军医大学长海医院整形外科上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 长海医院病理科

目的:通过检测刺鼠信号蛋白对自体移植皮片中黑素细胞功能的影响,进一步认识自体移植皮片过度色素沉着的原因。方法:建立过度色素沉着的自体移植皮片动物模型,皮片下分别注射刺鼠信号蛋白和生理盐水(对照组)。利用RT-PCR方法检测刺鼠信... 详细信息

目的:通过检测刺鼠信号蛋白对自体移植皮片中黑素细胞功能的影响,进一步认识自体移植皮片过度色素沉着的原因。方法:建立过度色素沉着的自体移植皮片动物模型,皮片下分别注射刺鼠信号蛋白和生理盐水(对照组)。利用RT-PCR方法检测刺鼠信号蛋白作用后自体移植皮片(n=12)黑素细胞中酪氨酸酶mRNA的表达,银染-丽春红染色后检测皮片中黑色素的含量,并与对照组(n=13)及正常豚鼠皮肤(n=5)相比较。结果:经刺鼠信号蛋白作用后,皮片中酪氨酸酶mRNA表达和黑素含量均明显减少,与对照组皮片和正常豚鼠皮肤相比其差异具有显著性意义(P<0.01)。结论:刺鼠信号蛋白在自体移植皮片中,能竞争性拮抗α-黑素细胞刺激素的黑素合成作用,使皮片着色能力降低。进一步证明了皮片移植后表皮细胞中α-黑素细胞刺激素的表达上调是皮片呈过度色素沉着的重要原因。

关键词：刺鼠信号蛋白 α-黑素细胞刺激素酪氨酸酶皮肤移植色素沉着过多

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

重组人内皮抑素与血管内皮生长抑制因子融合基因对角膜新生血管内皮细胞的协同作用

引用

中国临床康复 2006年第33期10卷 85-88页

作者：王泳柳林潘欣解放军广州军区广州总医院眼科广东省广州市510010 解放军第二军医大学长海医院眼科上海市200433 解放军第二军医大学微生物教研室上海市200433

目的:观察内源性血管抑制因子内皮抑素与血管内皮生长抑制因子融合基因对新生血管内皮细胞增殖的协同抑制作用,分析其作用特异性。方法:实验于2002-06/2003-06在解放军第二军医大学微生物实验室完成。常规分子生物学构建携带融合基因内... 详细信息

目的:观察内源性血管抑制因子内皮抑素与血管内皮生长抑制因子融合基因对新生血管内皮细胞增殖的协同抑制作用,分析其作用特异性。方法:实验于2002-06/2003-06在解放军第二军医大学微生物实验室完成。常规分子生物学构建携带融合基因内皮抑素-血管内皮生长因子的重组腺病毒,酶切法、聚合酶链反应法鉴定重组腺病毒-内皮抑素-血管内皮生长因子的正确性,半数细胞感染剂量法测定重组腺病毒滴度。以磷酸盐缓冲液、重组腺病毒-β-半乳糖苷酶和重组腺病毒-血管内皮生长因子151为对照组,病毒滴度均为感染复数(MOI)=20,体外感染人静脉内皮细胞ECV304与小鼠成纤维细胞L9294h,72h后应用反转录-聚合酶链反应和Western印迹法分别检测融合基因细胞内的转录及表达情况;于病毒感染后第1,2,3,4,5和7天,结晶紫染色法检测活细胞数,用570/630nm吸光度(A)值表示,绘制并比较ECV304和L929转基因细胞的生长曲线,观察其作用并分析其作用特异性。结果:①聚合酶链反应法证实成功构建了融合基因重组腺病毒-内皮抑素-血管内皮生长因子,半数细胞感染剂量法测得病毒滴度为2×108pfu/mL。②各组ECV304细胞结晶紫染色检测结果比较:除感染第1天重组腺病毒-血管内皮生长因子151感染组外(P>0.05),其余感染各时相重组腺病毒-血管内皮生长因子151感染组、重组腺病毒-β-半乳糖苷酶感染组及磷酸盐缓冲液组ECV304细胞A值均显著高于重组腺病毒-内皮抑素-血管内皮生长因子感染组(P<0.01)。③各组L929细胞结晶紫染色检测结果比较:重组腺病毒-内皮抑素-血管内皮生长因子感染组、重组腺病毒-β-半乳糖苷酶感染组及磷酸盐缓冲液组L929细胞的A值两两比较,差异均无显著性意义(P>0.05)。结论:重组腺病毒-内皮抑素-血管内皮生长因子在体外能有效表达具有生物学活性的融合基因产物,对静脉内皮细胞的增殖具特异性抑制作用,且较单基因产物的抑制作用更强,可用于治疗角膜新生血管的进一步体内实验。

关键词：基因疗法角膜新生血管化内皮抑素类内皮,血管生长抑制物基因融合

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：