检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2009年第8期29卷 714-715页

作者：乐爱平陈志辉童一民邵圣文南昌大学第一附属医院输血科 330006 第二军医大学长海医院感染科第二军医大学微生物学教研室湖州师范学院医学院创新实验室

丙型肝炎病毒（HCV）感染是肝硬化、肝癌的高危险因素，目前尚无HCV疫苗上市。HCV包膜E2蛋白能诱导机体产生中和抗体，是重要的候选疫苗成分。E2蛋白氨基末端由27个氨基酸残基组成的高变区1（hypervariable region1，HVR1）含有多个线... 详细信息

丙型肝炎病毒（HCV）感染是肝硬化、肝癌的高危险因素，目前尚无HCV疫苗上市。HCV包膜E2蛋白能诱导机体产生中和抗体，是重要的候选疫苗成分。E2蛋白氨基末端由27个氨基酸残基组成的高变区1（hypervariable region1，HVR1）含有多个线性中和抗体表位，变异频率极高，增加了HCV疫苗研制的难度。近年发现，除了HVR1含有中和抗体表位外，E2蛋白还存在其他的保守空间构象和线性中和抗体表位心。本研究构建了羧基端截短的含有HVR1和缺失HVR1的E2蛋白真核表达质粒，以之免疫小鼠，分析HVR1在E2蛋白诱导的小鼠体液免疫应答中的作用。

关键词：体液免疫应答丙型肝炎病毒 E2蛋白 HVR1 HCV疫苗氨基酸残基抗体表位真核表达质粒

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截短的丙型肝炎病毒核心蛋白基因和绿色荧光蛋白基因在Sf9细胞中的融合表达

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临床检验杂志 2009年第4期27卷 267-269页

作者：沈剑平朱诗应安庆市第一人民医院检验科安徽安庆246000 第二军医大学微生物教研室上海200433

目的构建含截短的HCV核心蛋白基因和绿色荧光蛋白基因的重组杆状病毒表达载体,探讨其在Sf9细胞中的表达和抗原性。方法用PCR法扩增截短的HCV核心蛋白基因片段(Ct)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因,将其插入转座子载体pFastBac1,构建成重... 详细信息

目的构建含截短的HCV核心蛋白基因和绿色荧光蛋白基因的重组杆状病毒表达载体,探讨其在Sf9细胞中的表达和抗原性。方法用PCR法扩增截短的HCV核心蛋白基因片段(Ct)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因,将其插入转座子载体pFastBac1,构建成重组表达载体pFastCt-EGFP,转化大肠埃希菌DH10Bac,获得重组杆状病毒穿梭质粒BacmidCt-EGFP,转染昆虫Sf 9细胞。结果SDS-PAGE和western blot鉴定表明成功表达了分子量约40 000的融合蛋白。以ELISA法检测发现该融合蛋白能与28份抗HCV抗体阳性血清中的15份发生反应,阳性率为53.6%。结论该融合蛋白在昆虫Sf 9细胞中成功表达并具有一定的抗原性。

关键词：丙型肝炎病毒截短的核心蛋白绿色荧光蛋白昆虫Sf9细胞

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人翼状胬肉组织HMG-CoA还原酶和LDL受体基因的表达

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国际眼科杂志 2009年第2期9卷 284-285页

作者：喻谦柳林王永志成都医学院第一附属医院眼科中国四川省成都市610050 上海第二军医大学第一附属医院眼科中国上海市200433 上海第二军医大学微生物教研室中国上海市200433

目的:研究LDL-R基因和HMG-CoA-R基因在翼状胬肉组织中的表达。方法:随机选取原发性和复发性翼状胬肉组织各10例,正常结膜组织10眼。实时荧光定量PCR技术分析结膜中HMG-CoA-R和LDL-R的相对mRNA含量。结果:原发性和复发性翼状胬肉中的HMG-... 详细信息

目的:研究LDL-R基因和HMG-CoA-R基因在翼状胬肉组织中的表达。方法:随机选取原发性和复发性翼状胬肉组织各10例,正常结膜组织10眼。实时荧光定量PCR技术分析结膜中HMG-CoA-R和LDL-R的相对mRNA含量。结果:原发性和复发性翼状胬肉中的HMG-CoA-R及LDL-R的mRNA水平均明显高于正常球结膜组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:HMG-CoA-R和LDL-R基因可能参与翼状胬肉的发病过程。

关键词：翼状胬肉低密度脂蛋白受体羟甲基戊二酰辅酶A还原酶实时荧光定量逆转录聚合酶链反应基因表达

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丙型肝炎患者血清中HCV交叉中和抗体的检测

丙型肝炎患者血清中HCV交叉中和抗体的检测

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第十次全国生物制品学术会议

作者：陈志辉童一民赵平戚中田第二军医大学长海医院感染科，上海 200433 第二军医大学微生物学教研室，上海 200433

目的：分析HCV感染者血清中是否存在交叉反应性中和抗体。方法：以分泌表达HCV包膜E2蛋白真核表达质粒转染的293T细胞培养上清液中的HCV E2蛋白作为检测抗原，建立检测HCV E2抗体的ELISA方法，检测32份HCV抗体阳性的慢性丙肝患者血... 详细信息

目的：分析HCV感染者血清中是否存在交叉反应性中和抗体。方法：以分泌表达HCV包膜E2蛋白真核表达质粒转染的293T细胞培养上清液中的HCV E2蛋白作为检测抗原，建立检测HCV E2抗体的ELISA方法，检测32份HCV抗体阳性的慢性丙肝患者血清，然后用免疫荧光分析血清与HCV全长包膜蛋白表达质粒转染的293T细胞的结合反应，再用5株HCV假病毒(HCVpp)及两株细胞培养产生的HCV(HCVcc)为模型分析血清的病毒中和活性。结果：32份HCV抗体阳性血清中，26份血清可检测出E2抗体，阳性率81.3％。其中HCV RNA阳性的12份血清均为E2抗体阳性，E2抗体水平与HCV RNA水平呈负相关。HCV E2抗体阳性血清对5株HCVpp以及两株HCVcc的感染性均有不同程度的中和作用，中和活性与E2抗体水平相平行。结论：HCV感染可诱导保护性体液免疫应答，丙肝患者血清中存在交叉中和抗体，提示开发能诱导广泛交叉中和抗体的丙肝疫苗具有可行性。

关键词：丙型肝炎病毒丙型肝炎中和抗体真核表达质粒转染

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合成多肽抗原检测原发性肝癌血清标志物ELISA方法的建立及应用

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中国生物制品学杂志 2009年第4期22卷 399-401页

作者：王文王锦红缪晓辉 Mark A Feitelson 戚中田第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海200433 上海长征医院感染科上海200003 Department of Biology College of Science and TechnologyTemple University

目的建立用合成多肽抗原检测原发性肝癌血清标志物的ELISA方法,并进行初步应用。方法利用筛选的5种与乙型肝炎病毒X抗原(HBx)诱导肝癌相关的细胞蛋白URG4、URG7、URG11、S15a和Sui1,作为原发性肝癌的筛查和早期诊断的血清标志物,根据上... 详细信息

目的建立用合成多肽抗原检测原发性肝癌血清标志物的ELISA方法,并进行初步应用。方法利用筛选的5种与乙型肝炎病毒X抗原(HBx)诱导肝癌相关的细胞蛋白URG4、URG7、URG11、S15a和Sui1,作为原发性肝癌的筛查和早期诊断的血清标志物,根据上述蛋白的序列合成多肽(L4A/L4B、L7B、L11-1/L11-3/L11-4、L12A/L12B和Sui1A/Sui1B),作为检测抗原,建立检测相应抗体的间接ELISA法,并进行敏感性、特异性、精密性评价及临床应用。结果所建立的间接ELISA法敏感性为93.8%,特异性为97.9%,试验内和试验间变异系数分别为3.8%～5.6%和7.4%～10.3%;检测161份肝癌、肝硬化及乙型肝炎患者血清样本中,1种指标以上阳性检出率分别为90.4%、92.6%和61.7%,2种指标以上阳性检出率分别为78.6%、70.6%和48.3%;39份正常献血员血清中,1种指标以上阳性检出率为12.2%,2种指标以上阳性检出率为6.3%。结论所建立的ELISA法可作为目前的AFP和核磁共振诊断方法的有益补充,用于原发性肝癌高危人群的筛选和小肝癌的早期诊断。

关键词：肝癌乙型肝炎病毒X抗原多肽血清标志物 ELISA

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肌肉游离移植后MAFbx的表达及与肌肉功能关系的观察

肌肉游离移植后MAFbx的表达及与肌肉功能关系的观察

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第六届中国美容与整形医师大会;第七届东方国际美容外科会议;第97届日本美容外科学会大会

作者：刘安堂于大志江华张盈帆陈欢任安经方超平蔡在龙第二军医大学长征医院整形外科第二军医大学生物化学与分子生物学教研室第二军医大学生理学教研室第二军医大学长海医院中心实验室

目的观察肌肉移植后一种泛素连接酶MAFbx mRNA和蛋白表达的变化以及肌肉萎缩和肌肉功能的动态恢复情况,并探讨三者之间的关系。方法建立大鼠股薄肌原位游离移植的模型,以自身为对照,应用实时定量PCR、蛋白质印迹分析、电生理等方法,观察... 详细信息

目的观察肌肉移植后一种泛素连接酶MAFbx mRNA和蛋白表达的变化以及肌肉萎缩和肌肉功能的动态恢复情况,并探讨三者之间的关系。方法建立大鼠股薄肌原位游离移植的模型,以自身为对照,应用实时定量PCR、蛋白质印迹分析、电生理等方法,观察MAFbx表达、肌肉萎缩和肌肉功能,统计学分析三者之间相关性。结果肌肉移植术后,肌纤维横截面积、肌肉湿重维持率、肌肉最大单收缩力和肌肉强直收缩力维持率均先降低后增加,术后晚期时仍低于对照组水平(P<0.05)。肌肉移植后MAFbx mRNA和蛋白在术后3周时达到最高后逐渐降低,最高达正常对照侧的7倍和2.5倍,术后晚期时仍持续低水平高表达,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论肌肉移植后MAFbx的持续高表达,可能是肌肉萎缩引起肌肉功能降低的一个联系点。MAFbx将能作为骨骼肌萎缩早期的标记物,或者作为药物干预的潜在靶点用于治疗肌肉萎缩。

关键词：肌肉移植泛素蛋白连接酶肌肉湿重肌肉收缩能力

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HIV-1 vif基因的RNA干扰体外研究

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复旦学报（医学版） 2009年第1期36卷 32-36页

作者：江雪艳卢洪洲陈秋丽潘卫张云智沈银忠上海市复旦大学附属公共卫生临床中心感染科上海201508 复旦大学附属华山医院传染科上海200040 复旦大学上海医学院内科学系上海200032 第二军医大学微生物教研室上海200433

目的利用RNAi技术对HIV-1 vif基因的转录后水平进行下调,达到抑制vif蛋白表达的目的,为新的抗HIV治疗和预防研究提供理论基础。方法通过体外转录法合成siRNA,与转接有vif基因的表达质粒共同转染HEK293T细胞,荧光显微镜下观察干扰效果,... 详细信息

目的利用RNAi技术对HIV-1 vif基因的转录后水平进行下调,达到抑制vif蛋白表达的目的,为新的抗HIV治疗和预防研究提供理论基础。方法通过体外转录法合成siRNA,与转接有vif基因的表达质粒共同转染HEK293T细胞,荧光显微镜下观察干扰效果,并利用Real-time PCR和Western blot对HIV-1 vif分别从转录和表达水平进行验证。结果将pEGFP-N1-vif重组载体转染HEK 293T细胞后,结果显示vif蛋白可以在细胞中高水平表达;针对vif设计的3段特异的siRNA可以有效且特异地降低vif蛋白的表达。结论RNAi技术可以下调HIV-1蛋白的表达,此技术可以作为一项新的治疗和预防HIV-1的方法用于进一步的研究。

关键词：人类免疫缺陷病毒(HIV) vif基因 vif蛋白 RNAi siRNA 人胚肾293T细胞 pEGFP—N1质粒

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HIV-1／HCV合并感染者中HCV基因亚型流行情况调查

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中华流行病学杂志 2009年第7期30卷 663-667页

作者：刘静杨洋宫菊丽张子宁张旻王亚男姜拥军戚中田潘启超钟平尚红中国医科大学附属第一医院卫生部艾滋病免疫学重点实验室沈阳110001 解放军第二军医大学微生物教研室上海市预防医学研究院艾滋病病毒免疫研究室

目的了解中国部分地区HIV-1和HCV合并感染人群中HCV基因亚型的流行、分布及其与HIV-1感染疾病进展的关系。方法对186份获自河南、云南、新疆、吉林和辽宁省HW-1／HCV合并感染人群标本（HCV病毒载量〉1000cop／ml），用反转录巢式聚合酶... 详细信息

目的了解中国部分地区HIV-1和HCV合并感染人群中HCV基因亚型的流行、分布及其与HIV-1感染疾病进展的关系。方法对186份获自河南、云南、新疆、吉林和辽宁省HW-1／HCV合并感染人群标本（HCV病毒载量〉1000cop／ml），用反转录巢式聚合酶链反应方法扩增血浆HCV核心基因区并进行基因亚型分型，同时检测HIV-1和HCV载量以及CD4＋T细胞计数。结果（1）HCV不同基因亚型比例分别为1a（1．7％）、1b（39．9％）、2a（17．9％）、3a（10．4％）、3b（15．6％）、6a（1．2％）、6n（6．4％）和6型未鉴定亚型（7．5％）。HCV2a和1b主要流行于河南省既往有偿献血浆人员中；3a和3b亚型主要流行于新疆和云南静脉注射吸毒者（IDU）中；HCV6型主要流行于云南吸毒人员中。（2）1b亚型的HCVRNA水平显著高于非1b亚型，但在HIV-1载量和CD4＋T细胞数方面差异无统计学意义。2a亚型的HIV-IRNA和HCVRNA水平显著低于非2a亚型。结论HW-1／HCV合并感染人群中HCV基因亚型的流行和分布与流行地区和感染途径有关。新的HCV6型亚型病毒株已经在合并感染的IDU人群中流行。尚未发现HCV基因亚型与HIV感染疾病进展之间的关系。

关键词：丙型肝炎病毒人免疫缺陷病毒合并感染基因亚型

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丙型肝炎病毒包膜E2蛋白DNA疫苗主要诱导HVR1中和抗体

丙型肝炎病毒包膜E2蛋白DNA疫苗主要诱导HVR1中和抗体

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中国医师协会输血分会2009年第三届输血学术年会

作者：乐爱平陈志辉童一民邵圣文南昌大学第一附属医院输血科南昌330006 第二军医大学长海医院感染科上海200433 第二军医大学微生物学教研室上海200433 湖州师范学院医学院创新实验室湖州313000

目的：探讨HCV包膜E2蛋白DNA疫苗诱导小鼠产生中和抗体的可行性。方法：构建HCV包膜蛋白截除疏水性羧基末端的表达质粒pcDNA3-1-1b661以及同时截除疏水性羧基末端和高变区1(HVR1)的表达质粒pcDNA3.1-1b661△，转染293T细胞，以Weste... 详细信息

目的：探讨HCV包膜E2蛋白DNA疫苗诱导小鼠产生中和抗体的可行性。方法：构建HCV包膜蛋白截除疏水性羧基末端的表达质粒pcDNA3-1-1b661以及同时截除疏水性羧基末端和高变区1(HVR1)的表达质粒pcDNA3.1-1b661△，转染293T细胞，以Western blot和ELISA检测细胞内和培养上清中的HCVE2蛋白，将2种表达质粒以及空载体分别肌注免疫BALB/c小鼠，检测小鼠血清的E2及HVR1抗体，以HCV假病毒模型分析小鼠血清的中和活性。结果：2种E2表达质粒均能有效表达HCV E2蛋白，缺失HVR1不影响E2蛋白的表达和分泌。两种质粒免疫均可有效诱导小鼠的体液免疫应答，但pcDNA3.1-1b661免疫血清对HCV假病毒颗粒(HCVpp)的中和活性明显高于pcDNA3.1-1b661△免疫血清。pcDNA3.1-1b661免疫血清中的HVR1抗体量仅占总E2抗体的一小部分，却是中和抗体的重要成分。结论：表达E2蛋白的DNA疫苗能有效诱导HCV中和抗体的产生，HVR1不仅是重要的中和抗体表位，而且能增强E2蛋白其他抗原表位的抗体应答。

关键词：丙型肝炎病毒 HCV包膜E2蛋白 DNA疫苗中和抗体诱导表达

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超声联合Sono Vue介导siRNA survivin转染HepG2细胞的实验研究

超声联合Sono Vue介导siRNA survivin转染HepG2细胞的实验研究

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第二届长三角超声医学论坛暨2009年浙江省超声医学学术年会

作者：郑颖赵奕文王文平赵平上海市徐汇区中心医院超声室上海复旦大学附属中山医院超声科上海第二军医大学微生物教研室

目的探讨超声联合超声造影剂转染小干扰RNA基因片段至体外培养细胞的可行性。方法首先构建survivin与EGFP融合基因表达载体。根据人survivin的基因序列及siRNA的基本设计原则,设计3段survivin siRNA靶位点,用两步PCR法扩增siRNA表达框... 详细信息

目的探讨超声联合超声造影剂转染小干扰RNA基因片段至体外培养细胞的可行性。方法首先构建survivin与EGFP融合基因表达载体。根据人survivin的基因序列及siRNA的基本设计原则,设计3段survivin siRNA靶位点,用两步PCR法扩增siRNA表达框。将质粒psurvivin-EGFP与siRNA表达框共转染293T细胞,筛选出最有效的survivin siRNA。将筛选得到的有效siRNA表达框用Taqase处理20分

关键词： survivin Sono Vue HepG2 siRNA survivin

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