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第四届全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：王文王锦红缪晓辉 Mark A Feitelson 戚中田第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海200433 上海长征医院感染科上海200003 Department of Biology College of Science and TechnologyTemple UniversityPhiladelphiaPA 19122Unit

目的：建立用合成多肽抗原检测原发性肝癌血清标志物的ELISA方法，并进行初步应用。方法：利用已经筛选到的5种与乙型肝炎病毒X抗原(HBx)诱导肝癌相关的细胞蛋白URG4、URG7、URG11、S15a和Suil，作为原发性肝癌的筛查和早期诊断的... 详细信息

目的：建立用合成多肽抗原检测原发性肝癌血清标志物的ELISA方法，并进行初步应用。方法：利用已经筛选到的5种与乙型肝炎病毒X抗原(HBx)诱导肝癌相关的细胞蛋白URG4、URG7、URG11、S15a和Suil，作为原发性肝癌的筛查和早期诊断的血清标志物，根据上述5种蛋白的序列合成多肽(L4A/L4B、L7B、L11-1/L11-3/L11-4、L12A/L12B和SuilA/SuilB)，作为检测抗原，建立检测上述标志物抗体的间接ELISA方法，并进行敏感性、特异性、精密性评价及临床应用。结果：以合成多肽为包被抗原的间接ELlSA检测方法，敏感性为93.5％、特异性为97.9％、试验内和试验间变异系数分别为3.8％～5.6％和7.4％～10.3％;检测161份肝癌、肝硬化及乙型肝炎患者血清样本中，1种指标以上阳性检出率分别为90.4％、92.6％和61.7％，2种指标以上阳性检出率分别为78.6％、70.6％和48.3％;39份正常献血员血清中，1种指标以上阳性检出率为12.2％，2种指标以上阳性率为6.3％。结论：所建立的检测原发性肝癌血清标志物的ELISA方法，可用于原发性肝癌高危人群的筛选和小肝癌的早期诊断，可作为目前的AFP和MRI诊断方法的有益补充。

关键词：原发性肝癌免疫学检验血清抗体多肽抗原

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乙型肝炎病毒X基因转染人肝癌细胞株双向凝胶电泳图谱分析

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中华传染病杂志 2008年第8期26卷 452-457页

作者：李卫华缪晓辉戚中田朱诗应赵克开第二军医大学附属长征医院感染科上海200003 第二军医大学微生物教研室

目的研究转染HBVX基因的人肝癌细胞株中蛋白质表达谱的改变，为筛查在HBV相关性肝细胞癌发生中发挥重要作用的关键蛋白质分子奠定基础。方法利用分子生物学方法建立稳定表达HBVX蛋白（HBx）的肝癌细胞株HepG2-HBx，同时设空载体pcDNA3... 详细信息

目的研究转染HBVX基因的人肝癌细胞株中蛋白质表达谱的改变，为筛查在HBV相关性肝细胞癌发生中发挥重要作用的关键蛋白质分子奠定基础。方法利用分子生物学方法建立稳定表达HBVX蛋白（HBx）的肝癌细胞株HepG2-HBx，同时设空载体pcDNA3转染细胞HepG2-pcDNA3及HBV全基因转染的人肝癌细胞株HepG2．2．15为对照。PCR法扩增Neo基因检测质粒DNA片段的插入，免疫印迹法检测HBx蛋白的表达。利用固相pH梯度双向凝胶电泳分离3种肝癌细胞株HepG2-pcDNA3、HepG2-HBx和HepG2．2．15的总蛋白，用图像分析软件比较、分析、识别细胞间的差异表达蛋白质。统计学分析采用t检验。结果获得分辨率高、重复性好的3种细胞的双向电泳（2-DE）图谱。软件分析表明，HepG2-pcDNA3、HepG2-HBx和HepG2．2．15细胞的2-DE凝胶可识别蛋白点分别为（2095±137）、（2188±105）和（2109±20）个。比较HepG2-pcDNA3与HepG2-HBx细胞的2-DE图谱发现37个差异显著的蛋白点，其中21个在HepG2-HBx表达上调，16个下调，6个表达量差异在5倍以上（t一0．027，P〈o．05）；HepG2．2．15与HepG2-HBx细胞相比，有38个差异显著的蛋白点，其中35个在HepG2-HBx细胞中上调，3个下调，14个表达量差异在5倍以上（t=0．031，P〈0．05）。结论HBx基因转染引起人肝癌细胞株蛋白质表达谱的变化，可能与感染的肝细胞发生恶性转化的分子生物学机制有关。

关键词：癌,肝细胞肝炎病毒,乙型基因,病毒蛋白质类电泳,凝胶,双向转染

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颈动脉粥样硬化斑块CD40、MMP9的表达及意义

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第二军医大学学报 2008年第9期29卷 1065-1068页

作者：王静华丁素菊邓本强吴涛陈欢张生生焦炳华第二军医大学长海医院神经内科上海200433 第二军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:观察CD40及基质金属蛋白酶-9(MMP9)在人颈动脉粥样硬化斑块中的表达,探讨CD40在斑块稳定性中的作用及可能机制。方法:将因颈动脉粥样硬化狭窄(>70%)行颈动脉内膜切除术的28例手术标本分为有临床卒中事件组(n=15)和无临床卒中事... 详细信息

目的:观察CD40及基质金属蛋白酶-9(MMP9)在人颈动脉粥样硬化斑块中的表达,探讨CD40在斑块稳定性中的作用及可能机制。方法:将因颈动脉粥样硬化狭窄(>70%)行颈动脉内膜切除术的28例手术标本分为有临床卒中事件组(n=15)和无临床卒中事件组(n=13),另设尸检无动脉粥样硬化的正常颈动脉(n=8)作为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测各组斑块中CD40和MMP9 mRNA水平,Western印迹检测各组CD40和MMP9蛋白表达水平,并对CD40与MMP9基因的表达作相关性分析。结果:无临床卒中事件组和有临床卒中事件组的CD40、MMP9基因的表达较正常对照组明显增高(P<0.01),有临床卒中事件组明显高于无临床卒中事件组(P<0.01),CD40与MMP9 mRNA表达有正的直线相关关系(r=0.964,P<0.01)。正常颈动脉中MMP9和CD40蛋白基本不表达;颈动脉粥样硬化斑块中MMP9和CD40蛋白表达较正常颈动脉明显增高;有卒中事件组颈动脉斑块MMP9和CD40蛋白表达高于无卒中事件组。结论:颈动脉粥样硬化斑块中CD40、MMP9表达增高,可能与斑块的稳定性密切相关。

关键词： CD40抗原基质金属蛋白酶9 颈动脉疾病动脉硬化斑块稳定性

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HIV-1 HXB2株蛋白酶的原核表达、纯化及其Gag蛋白CAP2NC的切割活性分析

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第二军医大学学报 2008年第4期29卷 365-370页

作者：陈铭潘欣贾建安何俊蒋少华陈璐姚静娟陈秋莉曹洁潘卫第二军医大学基础部微生物学教研室上海200433 安徽医科大学病理学教研室合肥230032 第二军医大学长征医院感染科上海200003

目的:原核表达、纯化HIV-1型HXB2株蛋白酶(protease,PR),用于对HIV-1 Gag P2/NC蛋白酶切割位点序列随机突变的噬菌体展示文库的切割筛选及构建新的蛋白酶抑制剂(protease inhibitor,PI)类药物体外筛选模型。方法:根据HIV-1 HXB2株PR DN... 详细信息

目的:原核表达、纯化HIV-1型HXB2株蛋白酶(protease,PR),用于对HIV-1 Gag P2/NC蛋白酶切割位点序列随机突变的噬菌体展示文库的切割筛选及构建新的蛋白酶抑制剂(protease inhibitor,PI)类药物体外筛选模型。方法:根据HIV-1 HXB2株PR DNA序列设计引物,在PR序列上游添加自切割位点MGTVSFNF 8个氨基酸编码获得PR107 DNA编码序列,将PR107 DNA克隆至原核表达载体pET-32a,序列测定后转化大肠杆菌BL21 DE3进行诱导表达。表达产物经用Ni-NTA亲和柱纯化,经复性后,进行靶蛋白CAP2NC切割试验,SDS-PAGE检测切割结果。结果:成功合成了使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1 PRl07的DNA编码序列,序列测定显示其编码氨基酸序列与原始序列完全一致;成功构建了HIV-1 PR原核表达质粒pETa2a—PR107,转化大肠杆菌BL21 DE3经IPTG诱导后,表达出相对分子质量为30 000的HIV-1 PR融合蛋白,纯化的目的蛋白浓度为2.54 mg/ml;纯化蛋白经复性后具有对底物蛋白CAP2NC的切割活性,该作用能被PI药物抑制。结论:成功构建大肠杆菌偏好密码子带自切割位点的HIV-1 PR原核表达载体pET32a—PR107,在大肠杆菌中表达,经纯化复性获得了具有切割活性的HIV-1 PR融合蛋白。

关键词： HIV 蛋白酶基因表达切割

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抗震救灾部队官兵皮肤病发病率及其影响因素分析

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第二军医大学学报 2008年第7期29卷 741-743页

作者：张迁常文军朱诗应阮芳铭曹广文第二军医大学长海医院感染科上海200433 第二军医大学卫生勤务学系流行病学教研室上海200433 第二军医大学基础部微生物学教研室上海200433 第二军医大学海军医学系军队卫生教研室上海200433

目的:调查汶川映秀镇抗震救灾部队官兵皮肤病的发病情况,分析其影响因素,并对营区内杀虫措施效果进行评价。方法:2008年6月15日至6月20日,以映秀镇的两支抗震救灾部队为研究对象,回顾性调查部队官兵在震后1个月内的皮肤病发病情况、帐... 详细信息

目的:调查汶川映秀镇抗震救灾部队官兵皮肤病的发病情况,分析其影响因素,并对营区内杀虫措施效果进行评价。方法:2008年6月15日至6月20日,以映秀镇的两支抗震救灾部队为研究对象,回顾性调查部队官兵在震后1个月内的皮肤病发病情况、帐篷卫生条件和杀虫措施实施情况等内容,采用χ2检验确定差异显著性。结果:映秀镇抗震救灾部队官兵在震后1个月的皮肤病发病率为42.20%,其中虫咬性皮炎和毛囊炎的构成比分别为82.05%和15.38%;震后1、2、4周的皮肤病发病率水平明显高于震前水平(P<0.05),震后4周发病率的升高与在山上过夜相关;采用2.5%溴氰菊酯等杀虫剂对帐篷内外环境进行杀虫,皮肤病发病率由震后2周的26.61%降低至震后3周的0.92%(P<0.05)。结论:抗震救灾部队官兵在震后皮肤病的发病率明显升高,震后恶劣的卫生环境、蚊虫叮咬是官兵皮肤病的主要因素,定期杀虫能有效降低皮肤病的发病率。

关键词：地震皮肤疾病发病率虫咬和虫螫

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桥脑内侧网状结构,值得重视的麻醉靶位

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第二军医大学学报 2008年第3期29卷 334-336页

作者：王嘉锋李文献王雪琦第二军医大学基础部神经生物学教研室上海200433 第二军医大学长海医院麻醉科上海200433

桥脑内侧网状结构是脑干网状结构的重要组成部分之一,近年来受到麻醉医师的广泛关注,因为该部位不仅与意识状态密切相关,与镇痛、肌松及自主神经反射抑制也有一定关联,而这些正是麻醉医师所关注的麻醉效应。有关桥脑内侧网状结构的深入... 详细信息

桥脑内侧网状结构是脑干网状结构的重要组成部分之一,近年来受到麻醉医师的广泛关注,因为该部位不仅与意识状态密切相关,与镇痛、肌松及自主神经反射抑制也有一定关联,而这些正是麻醉医师所关注的麻醉效应。有关桥脑内侧网状结构的深入研究,可能对全身麻醉作用机制的探索提供有力依据,同时可能使其成为有效的麻醉靶位,从而在提供充分的麻醉效应的同时减少麻醉并发症的发生。

关键词：桥脑内侧网状结构胆碱能神经元全身麻醉

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葛根素对子宫内膜RL95-2细胞P450芳香化酶表达的调控作用(英文)

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中西医结合学报 2008年第10期6卷 1017-1023页

作者：李燕巍蔡在龙沈慰杨生生俞超芹第二军医大学长海医院中医科上海200433 第二军医大学长海医院实验中心上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:探讨葛根素对子宫内膜RL95-2细胞P450芳香化酶(aromatase P450,P450arom)表达的影响及其对RL95-2细胞P450arom基因表达的调控作用。方法:将梯度稀释的葛根素在不同时间点加入RL95-2细胞中,分别采用实时聚合酶链反应(real-time poly... 详细信息

目的:探讨葛根素对子宫内膜RL95-2细胞P450芳香化酶(aromatase P450,P450arom)表达的影响及其对RL95-2细胞P450arom基因表达的调控作用。方法:将梯度稀释的葛根素在不同时间点加入RL95-2细胞中,分别采用实时聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测药物对RL95-2细胞P450arom mRNA表达水平的影响。以人类基因组DNA为模板扩增人P450arom组织特异性启动子2(PⅡ)转录起始位点上游序列。PCR产物定向克隆到报告基因载体pGL3-Basic中,构建人P450aromPⅡ系列报告基因质粒,并经限制性内切酶消化鉴定和基因测序证实。瞬时转染系列重组质粒至RL95-2细胞,加入葛根素刺激,分析相关转录因子,利用RT-PCR及Western blotting方法检测相关转录因子在葛根素作用下mRNA及蛋白表达的变化。结果:与溶剂对照组比较,低浓度葛根素会抑制P450arom mRNA表达(P<0.01),抑制作用在6、12 h较显著(P<0.01)。经酶切鉴定、基因测序、转录因子分析及启动子活性测定,成功构建了人P450aromPⅡ系列重组质粒(-1 017,-763,-543,-234^+8 bp)。瞬时转染系列质粒至细胞中,于12 h后加入葛根素(10-7mol/L)刺激,又12 h后检测荧光蛋白水平。结果表明,-763^-543 bp间的活性被抑制(P<0.05),通过转录因子分析找到了-410/-401 bp的AP-1(c-jun/c-fos)。利用RT-PCR、Western blotting及荧光素酶活性检测发现葛根素(10-7mol/L)对AP-1(c-jun/c-fos)的抑制作用平行于对P450arom的作用。结论:低浓度葛根素对子宫内膜RL95-2细胞P450芳香化酶基因表达的抑制作用很可能是受上游调控转录因子AP-1(c-jun/c-fos)的影响。

关键词：葛根素芳香化酶P450 子宫内膜异位症

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伯氏疟原虫氯喹抗性株感染ICR小鼠脾脏树突状细胞成熟和B细胞活化

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2008年第1期26卷 1-5页

作者：陈克强朱淮民倪灿荣宋关鸿上海交通大学农业与生物学院动物科学系上海201101 第二军医大学基础医学部病原生物学教研室上海200433 第二军医大学长海医院病理科上海200433

目的研究伯氏疟原虫氯喹抗性株(RC株)和氯喹敏感株(N株)感染鼠脾脏B细胞活化与树突状细胞(DC)的关系。方法分别用感染N株或RC株疟原虫的红细胞(iRBC)腹腔接种感染ICR小鼠(1×106个iRBC/只)。当小鼠原虫血症N株达50%～80%、RC株达61... 详细信息

目的研究伯氏疟原虫氯喹抗性株(RC株)和氯喹敏感株(N株)感染鼠脾脏B细胞活化与树突状细胞(DC)的关系。方法分别用感染N株或RC株疟原虫的红细胞(iRBC)腹腔接种感染ICR小鼠(1×106个iRBC/只)。当小鼠原虫血症N株达50%～80%、RC株达61.7%～68.4%时,断颈处死取脾脏。常规方法制作石蜡切片,HE染色或免疫组织化学染色,进行组织学观察。制作超薄切片,透射电镜观察脾脏细胞的变化。制作冰冻切片进行免疫荧光观察。流式细胞仪分析比较B细胞和DC变化。结果RC株感染小鼠脾脏白髓增生明显,抗B细胞的特异性表面分子CD45R/B220和CD19抗体同时表达阳性的B细胞在脾细胞中的百分比增加,中、小淋巴细胞数量增多,在红髓内浆母细胞与成熟的浆细胞数量增多。而N株感染小鼠脾小体则以大、小淋巴细胞为主,生发中心不明显,红髓可见大量的含疟原虫的红细胞、小淋巴细胞,而浆母细胞和其他发育期浆细胞则少见。RC株感染小鼠脾脏内白细胞分化抗原11c(CD11c)阳性的DC数量明显增多,尤其动脉周围淋巴鞘T细胞区。并且这些DC表面主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)类分子表达明显升高,表明主要是成熟的DC增多。DC外形不规则,胞质丰富,电子密度高,含发达的高尔基复合体和吞噬泡样结构。结论RC株感染小鼠脾脏成熟的DC明显增加,从而诱导B细胞的活化增殖。

关键词：伯氏疟原虫氯喹抗性脾脏 B细胞树突状细胞小鼠

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叔丁醇治疗SD大鼠硒性白内障的疗效观察

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第二军医大学学报 2008年第9期29卷 1056-1059页

作者：李静薛炼张军黄才国李闻捷第二军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室上海200433 济南军区总医院实验诊断科济南250031 第二军医大学长海医院中心实验室上海200433

目的:探讨叔丁醇外用滴眼液对SD大鼠硒性白内障模型(模拟老年性白内障)的治疗作用。方法:建立SD大鼠硒性白内障模型,并将实验大鼠右眼作为药物干预组,左眼作为对照组;用自行配制的叔丁醇外用滴眼液(浓度分别为25、50、75mmol/L)按时滴... 详细信息

目的:探讨叔丁醇外用滴眼液对SD大鼠硒性白内障模型(模拟老年性白内障)的治疗作用。方法:建立SD大鼠硒性白内障模型,并将实验大鼠右眼作为药物干预组,左眼作为对照组;用自行配制的叔丁醇外用滴眼液(浓度分别为25、50、75mmol/L)按时滴眼(1滴/次,3～5次/d);每日进行肉眼观察,并于用药后第5日及第10日用裂隙灯显微镜观察大鼠双眼晶状体核性病变,每日用游标卡尺(最小刻度值0.02mm)测量大鼠双眼晶状体核性斑块最大直径的改变。另选未建模的SD大鼠,用100mmol/L的叔丁醇滴眼液滴眼(1滴/次,3～5次/d),观察药物有无毒性及其他不良反应。结果:硒性白内障大鼠用药眼晶状体核性混浊斑块直径小于对照眼(P<0.01);用药眼核性混浊斑块混浊程度低于对照眼;叔丁醇滴眼液毒性低,刺激性小。结论:叔丁醇滴眼液对SD大鼠硒性白内障有一定的治疗作用。

关键词：叔丁醇烷基化作用亚硒酸钠白内障

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丙型肝炎病毒高变区1模拟表位的交叉反应性分析

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病毒学报 2008年第4期24卷 249-254页

作者：杨苗赵平边中启任艳丽龚育平戚中田第二军医大学微生物学教研室全军医学微生物学重点实验室上海市医学生物防护重点实验室上海200433 成都军区昆明总医院感染病中心昆明650032

研究丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)高变区1(Hypervariable region 1,HVR1)抗原表位的交叉反应性,获取高反应性的抗原表位。设计并合成5种HVR1模拟表位基因,构建编码HVR1模拟表位的表达载体,表达并纯化表位蛋白。ELISA法检测表位... 详细信息

研究丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)高变区1(Hypervariable region 1,HVR1)抗原表位的交叉反应性,获取高反应性的抗原表位。设计并合成5种HVR1模拟表位基因,构建编码HVR1模拟表位的表达载体,表达并纯化表位蛋白。ELISA法检测表位蛋白与35份HCV抗体阳性血清的交叉反应性。包装HCV假病毒(HCVpseudotype particles,HCVpp),评价表位蛋白免疫BALB/c鼠血清在假病毒感染Huh7.5细胞中的作用。结果表明,表达纯化的5种表位蛋白(P1、P2、P5、P6、P8)均可与HCV抗体阳性血清反应,阳性反应率分别为54.3%(P1)、62.9%(P2)、80%(P5)、68.6%(P6)、54.3%(P8)。表位蛋白P6、P8免疫BALB/c鼠血清对HCV假病毒感染Huh7.5细胞具明显的抑制作用。结果提示,选取的HVR1模拟表位在HCV感染免疫与疫苗研制中可能具有潜在的价值。

关键词：丙型肝炎病毒高变区1 模拟表位交叉反应性

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