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多重PCR同时检测粪便中的志贺菌、侵袭性大肠埃希菌和O－1群霍乱弧菌的致病基因

解放军医学杂志 1996年第4期21卷 249-251页

作者：任少堂秦一中凌代文晏碧君汪伟业俞守义第二军医大学长海医院第一军医大学流行病学教研室

本研究建立一种快速标本处理和多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）诊断方法，在一次ＰＣＲ反应中同时扩增志贺菌、侵袭性大肠埃希菌的侵袭性质粒（ｉａｌ）基因和Ｏ－１群霍乱弧菌的霍乱毒素Ａ亚单位（ｃｔｘＡ）基因。扩增产物经电泳，出现与... 详细信息

本研究建立一种快速标本处理和多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）诊断方法，在一次ＰＣＲ反应中同时扩增志贺菌、侵袭性大肠埃希菌的侵袭性质粒（ｉａｌ）基因和Ｏ－１群霍乱弧菌的霍乱毒素Ａ亚单位（ｃｔｘＡ）基因。扩增产物经电泳，出现与已知阳性对照细菌条带大小一致的条带即判断为该标本阳性。对一组经常规培养生化鉴定法诊断为霍乱的２６份腹泻病人粪便标本检测后，ＰＣＲ法有２４例检测到ｃｔｘＡ基因，ＰＣＲ阴性的２例为非Ｏ－１群；对另一组５６例粪标本亦进行了检测。本方法具有简便、快速、特异、经济和不须培养等特点，宜于临床应用。

关键词：腹泻细菌聚合酶链反应

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小鼠Alb　e／p序列与肝癌细胞核蛋白之间的相互作用

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海军军医大学学报 1996年第4期17卷 354-357页

作者：杨文国曹广文高军吴宗娣谢苏庆崔龙潘欣杜平戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院普通外科第二军医大学长海医院消化内科

目的：研究肝癌组织特异性基因治疗的机理。方法：从小鼠肝细胞、肝癌细胞和黑色素瘤细胞中分别提取核蛋白组分和胞浆蛋白，分别与小鼠白蛋白增强子／启动子（Ａｌｂｅ／ｐ）、白蛋白增强子（Ａｌｂｅ）和白蛋白启动子（Ａｌｂｐ）结合... 详细信息

目的：研究肝癌组织特异性基因治疗的机理。方法：从小鼠肝细胞、肝癌细胞和黑色素瘤细胞中分别提取核蛋白组分和胞浆蛋白，分别与小鼠白蛋白增强子／启动子（Ａｌｂｅ／ｐ）、白蛋白增强子（Ａｌｂｅ）和白蛋白启动子（Ａｌｂｐ）结合。结果：Ｂａｎｄ－Ｓｈｉｆｔ试验和竞争试验发现某些肝癌细胞核蛋白组分能与Ａｌｂｅ／ｐ特异结合，其中与Ａｌｂｅ和Ａｌｂｐ特异结合的核蛋白在不同的组分中，而肝癌细胞胞浆蛋白和黑色素瘤细胞核蛋白不能与Ａｌｂｅ／ｐ结合。结论：提示肝癌细胞核中能与Ａｌｂｅ和Ａｌｂｐ作用的核蛋白是应用Ａｌｂｅ／ｐ调控目的基因于肝癌细胞中特异表达的基础。

关键词：肝肿瘤核蛋白白蛋白增强子启动子

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肝癌细胞核蛋白对白蛋白增强子／启动子序列的体外转录调控作用

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第二军医大学学报 1996年第4期17卷 350-353页

作者：曹广文高军谢苏庆杨文国崔龙潘欣杜平戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院消化内科第二军医大学长海医院普通外科

目的：研究肝癌细胞核蛋白调控白蛋白＂持家基因＂转录调控序列对目的基因转录的作用。方法：分别从小鼠肝癌细胞、肝细胞和黑色素瘤细胞中提取核蛋白组分，用于体外启动白蛋白增强子／启动子的转录作用。结果：发现某些肝癌细胞和肝细... 详细信息

目的：研究肝癌细胞核蛋白调控白蛋白＂持家基因＂转录调控序列对目的基因转录的作用。方法：分别从小鼠肝癌细胞、肝细胞和黑色素瘤细胞中提取核蛋白组分，用于体外启动白蛋白增强子／启动子的转录作用。结果：发现某些肝癌细胞和肝细胞核蛋白组分具有明显的转录作用，而细胞浆蛋白和其他肿瘤核蛋白组分没有转录作用，将同一肝癌细胞某些核蛋白组分合并可使转录活性增强。结论：本研究在基因转录调控水平部分解释了应用白蛋白增强子／启动子调控目的基因于肝癌细胞中特异表达的机理。

关键词：肝肿瘤核蛋白转录分析白蛋白增强子启动子

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IL－2和TNF特异性基因治疗后肝癌组织病理及免疫组化分析

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第二军医大学学报 1996年第6期17卷 509-512页

作者：曹广文余永伟沈茜杜平杨文国孔宪涛戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院病理诊断科第二军医大学长海医院实验诊断科第二军医大学长征医院临床免疫中心

目的：探讨ＴＮＦ和ＩＬ－２基因治疗后实验性肝癌瘤体内细胞水平的改变。方法：应用病理检查和免疫组化分析对ＩＬ－２和ＴＮＦ转基因治疗后的实验性肝癌病理改变及免疫细胞浸润进行分析。结果：发现受白蛋白增强子／启动子转录调控的... 详细信息

目的：探讨ＴＮＦ和ＩＬ－２基因治疗后实验性肝癌瘤体内细胞水平的改变。方法：应用病理检查和免疫组化分析对ＩＬ－２和ＴＮＦ转基因治疗后的实验性肝癌病理改变及免疫细胞浸润进行分析。结果：发现受白蛋白增强子／启动子转录调控的ＩＬ－２和ＴＮＦ基因在原位感染实验性肝癌可使肝癌逐渐缩小。ＴＮＦ基因可使肝癌组织内广泛出血坏死，Ｍａｃ－１＋炎细胞浸润为主；ＩＬ－２基因可使肝癌组织内大片坏死，Ｌｙｔ２＋炎细胞浸润，两组治疗后期均出现明显的纤维化。结论：ＩＬ－２或ＴＮＦ肝癌特异性原位基因治疗介导免疫抗肿瘤反应，但机理有所不同。

关键词：肝肿瘤基因治疗肿瘤坏死因子白细胞介素2

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人胰腺癌组织p53蛋白表达及其临床生物学意义

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中华消化杂志 1996年第S1期16卷 114-115页

作者：李淑德许国铭倪灿荣李兆申张洪富第二军医大学长海医院上海市200433 第二军医大学病理解剖学教研室

胰腺癌发生发展的分子生物学机制仍不清楚。近年来,抑癌基因p53在肿瘤发生发展中的作用是肿瘤基础研究中的热点。本研究采用免疫组化法,观察p53蛋白在胰腺癌、慢性胰腺炎、正常胰腺组织中表达的异同,旨在探讨p53基因改变与胰腺癌临床生... 详细信息

胰腺癌发生发展的分子生物学机制仍不清楚。近年来,抑癌基因p53在肿瘤发生发展中的作用是肿瘤基础研究中的热点。本研究采用免疫组化法,观察p53蛋白在胰腺癌、慢性胰腺炎、正常胰腺组织中表达的异同,旨在探讨p53基因改变与胰腺癌临床生物学行为之间的关系。

关键词： p53蛋白表达胰腺癌慢性胰腺炎临床生物学意义正常胰腺组织人胰腺癌组织临床生物学行为癌基因组织学分级

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含CD基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建

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第二军医大学学报 1996年第3期17卷 289-291页

作者：崔龙曹广文王元和屠岳孟荣贵高军仇小芳吴宗娣谢苏庆第二军医大学长海医院普外科第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长征医院普外科

含ＣＤ基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建崔龙，曹广文，王元和，屠岳，孟荣贵，高军，仇小芳，吴宗娣，谢苏庆关键词大肠癌；胞嘧啶脱氨酶基因；逆转录病毒载体；癌胚抗原；转录调控序列胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）是真菌及某些大肠... 详细信息

含ＣＤ基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建崔龙，曹广文，王元和，屠岳，孟荣贵，高军，仇小芳，吴宗娣，谢苏庆关键词大肠癌；胞嘧啶脱氨酶基因；逆转录病毒载体；癌胚抗原；转录调控序列胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）是真菌及某些大肠杆菌等ＤＮＡ嘧啶补救合成途径中的关...

关键词：大肠肿瘤 CD基因逆转录病毒载体病毒载体

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含HSV－tk基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建

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第二军医大学学报 1996年第3期17卷 216-218页

作者：崔龙曹广文王元和屠岳孟荣贵高军仇小芳吴宗娣第二军医大学长海医院普通外科第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长征医院普通外科

目的：为使自杀基因在大肠癌细胞中特异性表达，以达到靶向基因治疗的目的，首先构建以ＣＥＡ基因转录调控序列驱动的重组逆转录病毒载体。方法：将目的基因片段ＨＳＶ－ｔｋ定向克隆入ｐＵＣ１１８质粒载体中，以相应的内切酶取出合适... 详细信息

目的：为使自杀基因在大肠癌细胞中特异性表达，以达到靶向基因治疗的目的，首先构建以ＣＥＡ基因转录调控序列驱动的重组逆转录病毒载体。方法：将目的基因片段ＨＳＶ－ｔｋ定向克隆入ｐＵＣ１１８质粒载体中，以相应的内切酶取出合适的酶切片段后，与来自ｐＣＥＡ４２４／２ＣＡＴ质粒的ＣＥＡ５＇转录调控序列相连接，克隆入逆转录病毒载体中。结果：经鉴定及筛选，构建成重组逆转录病毒载体Ｇ１ＣＥＡｔｋＮａ。结论：Ｇ１ＣＥＡｔｋＮａ的成功构建，为进一步研究大肠癌组织特异性基因治疗奠定了基础。

关键词：单纯疱疹病毒大肠肿瘤逆转录病毒病毒载体

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携带HSV－tk基因的人肝癌特异性逆转录病毒载体的构建

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第二军医大学学报 1996年第2期17卷 101-104页

作者：高军曹广文戚中田仇小芳吴宗娣杜平杨文国崔龙第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院普通外科

构建携带单纯疱疹病毒ｔｋ基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的人肝癌特异性逆转录病毒载体。方法和结果：切除逆转录病毒载体ｐＭＮＳＭ内部的ＳＶ４０启动子使之成为ｐＭＮＭ；从真核表达载体ｐＢＰＧＫ－ｔｋ质粒中游离带有磷酸甘油酸激酶基因（... 详细信息

构建携带单纯疱疹病毒ｔｋ基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的人肝癌特异性逆转录病毒载体。方法和结果：切除逆转录病毒载体ｐＭＮＳＭ内部的ＳＶ４０启动子使之成为ｐＭＮＭ；从真核表达载体ｐＢＰＧＫ－ｔｋ质粒中游离带有磷酸甘油酸激酶基因（ｐｇｋ）启动子调控的ＨＳＶ－ｔｋ片段，克隆到ｐＭＮＭ的ＰＬ位点上，构建成普通型ＰＭＮｐ－ｔｋ逆转录病毒载体；从ｐＧＥＭ．７Ｚ－ＡＦＰｅ质粒中游离人甲胎蛋白基因增强子核心序列，克隆到ｐＭＮｐ－ｔｋ的ｐｇｋ启动子上游，构建成人肝癌特异型ｐＭＮＡＰ－ｔｋ逆转录病毒载体。结论：该载体对肝癌特异性前药转换基因治疗有重要意义。

关键词：肝肿瘤基因治疗逆转录病毒载体 HSV-tk

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逆转录病毒介导的人肝癌特异性HSV－tk／ACV的体外抗肝癌作用

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第二军医大学学报 1996年第6期17卷 505-508页

作者：高军曹广文戚中田吴宗娣杜平仇小芳崔龙杨文国第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院普通外科

目的：建立肝癌特异性前药转换基因治疗的方法。方法和结果：构建携带单纯疮疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的人肝癌特异性逆转录病毒载体，经过ＰＡ３１７细胞包装及病毒滴度测定后，感染肝癌ＨｅｐＧ２和ＳＭＭＣ７７２１细胞，... 详细信息

目的：建立肝癌特异性前药转换基因治疗的方法。方法和结果：构建携带单纯疮疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的人肝癌特异性逆转录病毒载体，经过ＰＡ３１７细胞包装及病毒滴度测定后，感染肝癌ＨｅｐＧ２和ＳＭＭＣ７７２１细胞，用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法证明ＨＳＶ－ｔｋ基因在ＡＦＰ高分泌的ＨｅｐＧ２细胞中得到特异转录，以阿昔洛韦（ＡＣＶ）为前药攻击转基因的肝癌细胞显示对ＨｅｐＧ２有相对选择性杀伤作用。结论：该ＡＦＰｅ／ＨＳＶ－ｔｋ／前药转换疗法为肝癌特异性基因治疗提供了有价值的资料。

关键词：肝肿瘤胸苷激酶甲胎蛋白增强子基因治疗

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原发性肝癌患者外周血CD44v　mRNA检测的临床意义

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第二军医大学学报 1996年第3期17卷 226-228页

作者：刘鹏飞吴孟超陈汉钱光相傅继梁第二军医大学长海医院肝胆外科研究所第二军医大学基础医学部生物学教研室

目的：检测原发性肝癌患者外周静脉血中游离肿瘤细胞表达的ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ，探讨其能否反映肿瘤的侵袭转移潜能。方法：应用敏感的ＲＴ－ＰＣＲ方法，通过合理的ＰＣＲ引物的设计，检测了１５例原发性肝癌患者术晨的外周静脉血中Ｃ... 详细信息

目的：检测原发性肝癌患者外周静脉血中游离肿瘤细胞表达的ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ，探讨其能否反映肿瘤的侵袭转移潜能。方法：应用敏感的ＲＴ－ＰＣＲ方法，通过合理的ＰＣＲ引物的设计，检测了１５例原发性肝癌患者术晨的外周静脉血中ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ，结果：从６例患者外周静脉血中选择性地检测出了游离肿瘤细胞表达的ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ．结论：外周静脉血中游离肿瘤细胞表达的ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ可能从一个侧面反映了肿瘤的侵袭转移潜能，此法有可能作为恶性肿瘤监测及诊断的辅助手段。

关键词：肝肿瘤原发性 CD44 肿瘤转移 mRNA 外周血

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