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基因-病毒治疗系统CNHK300-murine endostatin治疗肝癌的实验研究

中华医学杂志 2004年第11期84卷 943-948页

作者：李根丛聂明明杨甲梅苏长青孙立臣钱炎珍 Jonathan Sham 方国恩吴孟超钱其军第二军医大学附属东方肝胆外科医院病毒和基因治疗实验室上海200438 第二军医大学附属长海医院普外科第二军医大学附属东方肝胆外科医院肝胆外科上海200438 香港大学临床肿瘤系

目的　探讨一种新的基因病毒治疗系统CNHK30 0 murineendostatin(简称CNHK30 0 mE)对肝癌的治疗作用。方法　利用基因重组技术构建一种用人端粒酶逆转录酶 (hTERT)启动子控制腺病毒E1A基因表达并携带内皮抑素基因的基因病毒治疗系... 详细信息

目的　探讨一种新的基因病毒治疗系统CNHK30 0 murineendostatin(简称CNHK30 0 mE)对肝癌的治疗作用。方法　利用基因重组技术构建一种用人端粒酶逆转录酶 (hTERT)启动子控制腺病毒E1A基因表达并携带内皮抑素基因的基因病毒治疗系统 ;通过 5 0 %组织培养感染剂量 (TCID5 0 )方法和细胞活性检测法四氮唑盐比色试验 (MTT法 )观察CNHK30 0 mE在 2种肝癌细胞株 (HepGII及Hep3B)及 1株正常的成纤维细胞株 (MRC 5 )中的病毒增殖能力和对细胞的杀灭能力 ;通过肝癌SMMC772 1细胞裸鼠皮下移植瘤模型观察该病毒对肝癌生长和对肿瘤血管生成的抑制作用 ;利用Western印迹法和酶联免疫吸附实验 (ELISA)法检测内皮抑素基因在体内和体外的表达。结果分别感染肝癌细胞株和正常细胞株 96h后病毒的增殖倍数相差 32 96倍 ,其达到半数杀伤量 (ED50 )时的感染复数 (MOI)值相差 2 5倍 ,差异有显著意义 ,且两者均明显优于ONYX 0 15 ;CNHK30 0 mE能明显抑制肝癌皮下移植瘤内血管的生成 ,对肿瘤生长的抑制作用与携带同一治疗基因的非增殖型腺病毒和不携带治疗基因的增殖型腺病毒ONYX 0 15相比均增强 (P均 <0 0 1) ;其所介导的内皮抑素基因在体内和体外的表达量均与携带该基因的非增殖型腺病毒载体相比均增高 (P <0 0

关键词：基因-病毒治疗系统 CNHK300-murine endostatin 肝癌端粒酶逆转录酶 hTERT 内皮抑素

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肿瘤干细胞研究新进展

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中国肿瘤临床 2006年第24期33卷 1428-1431页

作者：田志强（综述）吴孟超（审校）卫立辛（审校）王展宏（校对）上海第二军医大学东方肝胆外科医院肿瘤免疫与基因治疗实验室上海市200433 不详

恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病。肿瘤的转移与复发是治疗所面临的两大难题,但其机制还不清楚。肿瘤干细胞理论对此提出新的解释,其认为肿瘤中存在一小群具有自我更新和不定潜能的肿瘤细胞,可能是肿瘤转移和复发的根源。目前为止,研... 详细信息

恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病。肿瘤的转移与复发是治疗所面临的两大难题,但其机制还不清楚。肿瘤干细胞理论对此提出新的解释,其认为肿瘤中存在一小群具有自我更新和不定潜能的肿瘤细胞,可能是肿瘤转移和复发的根源。目前为止,研究人员已经在白血病、多发性骨髓瘤、乳腺癌、中枢神经系统肿瘤、肺癌分离并鉴定出了肿瘤干细胞,在胃癌和肝癌中也发现了肿瘤干细胞存在的证据。肿瘤干细胞学说的提出与证实使人类对肿瘤的转移、复发有了新的认识,必将对肿瘤转移、复发的治疗及预防产生重大影响。

关键词：肿瘤干细胞进展自我更新

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IFN-γ和TNF-α诱导的骨髓间充质干细胞的免疫抑制作用及环孢素A对其的影响

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中华器官移植杂志 2010年第4期31卷 238-241页

作者：唐礼功井莹莹谢森陈琪李志雄韩志鹏蒋国成刘燕广州军区武汉总医院泌外科武汉430070 第二军医大学附属东方肝胆外科医院肿瘤免疫实验室

目的观察γ干扰素（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的骨髓问充质干细胞（MSC）的免疫抑制作用及环孢素A（CsA）对其的影响.方法取Balb/c小鼠骨髓,分离、培养、纯化及扩增MSC,分别以IFN-γ、TNF-α和IFN-γ＋TNF-α（终浓度均... 详细信息

目的观察γ干扰素（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的骨髓问充质干细胞（MSC）的免疫抑制作用及环孢素A（CsA）对其的影响.方法取Balb/c小鼠骨髓,分离、培养、纯化及扩增MSC,分别以IFN-γ、TNF-α和IFN-γ＋TNF-α（终浓度均为20 ng/ml）预处理MSC 12 h,然后与Balb/c小鼠脾细胞共培养,脾细胞以刀豆蛋白A激活72 h.混合细胞培养实验分8组进行：（1）脾细胞组;（2）MSC组,MSC＋脾细胞;（3）IFN-γ处理组,IFN-γ预处理的MSC＋脾细胞;（4）TNF-α处理组,TNF-α预处理的MSC＋脾细胞;（5）联合处理组,IFN-γ与TNF-α联合预处理的MSC＋脾细胞;（6）CsA组,CsA＋脾细胞;（7）CsA联合预处理组：IFN-γ与TNF-α联合预处理的MSC＋CsA＋脾细胞;（8）1400W组,IFN-γ与TNF-α联合预处理的MSC＋脾细胞＋1400W[诱导型-氧化氮合酶（iNOS）抑制剂].各组脾细胞数量均为5000个,MSC与脾细胞按1：10混合,CsA浓度为10μg/ml.培养72 h后,以四甲基偶氮唑盐法检测脾细胞增殖情况,同时以碘化丙啶和Annexin-V凋亡双染试剂盒检测脾细胞的凋亡情况;以实时聚合酶链反应法检测经炎症因子处理的MSC的iNOS mRNA表达情况,观察CsA对MSC的iNOS mRNA表达的影响.结果 MSC组、IFN-γ处理组和TNF-α处理组的MSC对脾细胞的增殖无明显抑制作用（P〉0.05）,而联合处理组的脾细胞增殖明显受到抑制,CsA组的脾细胞增殖同样受到抑制,但IFN-γ与TNF-α联合预处理MSC产生的这种免疫抑制作用却可以被CsA所抑制（CsA联合预处理组,P〈0.05）.联合处理组、CsA组和CsA联合预处理组的脾细胞凋亡率明显高于脾细胞组、MSC组、IFN-γ处理组和TNF-α处理组（P〈0.05）,而联合处理组和CsA组的脾细胞凋亡率又明显高于csA联合预处理组（P〈0.05）.野生型MSC、分别以IFN-γ或TNF-α单独刺激的MSC均不表达iNOS mRNA,而以IFN-γ和TNF-a联合处理的MSC则高表达iNOS mRNA,但这种高表达可被CsA所抑制（P〈0.05）.1400W组的脾细胞增殖受到明显抑制（P〈0.05）.结论 IFN-γ和TNF-α联合预处理的MSC在体外可抑制脾细胞的增殖,促进脾细胞凋亡,CsA可抑制该种MSC的这一作用,其机制可能与CsA下调lFN-7和TNF-α联合预处理的MSC的iNOS表达有关.

关键词：间质干细胞干扰素Ⅱ型肿瘤坏死因子α 免疫抑制法环孢菌素

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S(yp) Y279和Y304介导了BcrAbl与Grb2等蛋白的结合

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1999年第4期31卷 450-452页

作者：朱奎刘小萍叶芳耘东方肝胆外科研究所肿瘤免疫与基因治疗中心!上海200433 第二军医大学长海医院实验诊断科/中心实验室

利用体外定点突变技术获得ＳｙｐＹ２７９Ｆ、Ｙ３０４Ｆ和Ｙ５４６Ｆ突变的ｃＤＮＡ，将这些突变体和野生型Ｓｙｐ分别构建入ｐＸＭ真核表达载体，转入Ｋ５６２细胞。经Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹证明，各转染Ｋ５６２细胞中都有Ｓｙ... 详细信息

利用体外定点突变技术获得ＳｙｐＹ２７９Ｆ、Ｙ３０４Ｆ和Ｙ５４６Ｆ突变的ｃＤＮＡ，将这些突变体和野生型Ｓｙｐ分别构建入ｐＸＭ真核表达载体，转入Ｋ５６２细胞。经Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹证明，各转染Ｋ５６２细胞中都有Ｓｙｐ蛋白的表达。免疫沉淀与免疫印迹结果发现ＷＴ、Ｙ２７９Ｆ、Ｙ３０４Ｆ和Ｙ５４６Ｆ等４种Ｓｙｐ在胞内均能直接与ＢｃｒＡｂｌ结合。体外结合实验结果表明Ｙ３０４Ｆ突变导致了Ｓｙｐ不能与Ｓｈｃ结合，Ｙ２７９Ｆ突变则导致了Ｓｙｐ不能与Ｇｒｂ２结合。结论是：作为“接头蛋白”，Ｓｙｐ可以介导ＢｃｒＡｂｌ与Ｓｈｃ和Ｇｒｂ２之间的结合；Ｇｒｂ２结合在Ｓｙｐ的Ｙ２７９上，Ｓｈｃ则结合在Ｓｙｐ的Ｙ３０４上

关键词： Bcr Abl激酶 Syp 信号传导

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IL-24诱导肿瘤细胞凋亡的信号转导通路

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肿瘤 2006年第11期26卷 1051-1054页

作者：张小峰施乐华殷正丰第二军医大学附属东方肝胆外科医院分子肿瘤实验室上海200438

应用增生活跃和诱导终末分化的人类HO-1黑素瘤细胞产生的cDNA文库进行减数杂交,获得了一组黑素瘤分化相关基因,其中mda-7/IL-24被证明具有抑制黑素瘤增生和促进终末分化的能力。IL-24基因作为目前被发现的唯一的既抑制肿瘤细胞生长、转... 详细信息

应用增生活跃和诱导终末分化的人类HO-1黑素瘤细胞产生的cDNA文库进行减数杂交,获得了一组黑素瘤分化相关基因,其中mda-7/IL-24被证明具有抑制黑素瘤增生和促进终末分化的能力。IL-24基因作为目前被发现的唯一的既抑制肿瘤细胞生长、转移和血管形成,并诱导肿瘤细胞凋亡,又刺激表达次级细胞因子免疫调理而日益受到关注。正常表达的IL- 24通过配体-受体介导的JAK/STAT通路在免疫应答的调控中起着重要作用。过表达IL-24通过内部的(线粒体介导或内质网应激)和外部的(死亡受体介导)通路诱导肿瘤细胞的凋亡,并有抑制肿瘤细胞侵袭转移和抗血管发生的作用。

关键词：肿瘤白细胞介素24 细胞凋亡信号转导

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胰腺癌肝转移与循环肿瘤细胞上皮-间质转化表型的关系

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肿瘤 2015年第8期35卷 874-882页

作者：祝鹏刘慧颖姚骏柴云笙徐楷孙延平胡志前王伟军第二军医大学附属长征医院普通外科上海200003 第二军医大学附属东方肝胆外科医院分子肿瘤实验室上海200438

目的 :研究循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)的上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)表型和胰腺癌肝转移的关系。方法 :收集2010年1月—2013年12月第二军医大学附属长征医院普外科收治、术前影像学检查未... 详细信息

目的 :研究循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)的上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)表型和胰腺癌肝转移的关系。方法 :收集2010年1月—2013年12月第二军医大学附属长征医院普外科收治、术前影像学检查未发现肝转移且术后病理确诊为胰腺癌的患者,术后随访1年,根据随访期内有无肝转移将患者分为肝转移组和无肝转移组,每组随机选择50例患者。所有患者在术前均采集外周血样本,同时收集10名健康志愿者的外周血作为对照;然后采用免疫磁珠法富集并分离外周血标本中的CTCs,并用氨甲酰磷酸合成酶1(carbamoyl-phosphate synthetase 1,CPS1)抗体的免疫荧光法对CTCs进行鉴定。采用免疫荧光法检测各组患者外周血标本中EMT标志物Snail和Vimentin的表达情况,单因素和多因素分析这些标志物和胰腺癌肝转移的关系。结果 :10名健康志愿者的外周血标本中,CPS1、Snail和Vimentin均无表达;在50例胰腺癌肝转移组患者的外周血标本中,Snail阳性表达41例(82%),Vimentin阳性表达36例(72%);在50例胰腺癌无肝转移组患者的外周血标本中,Snail阳性表达10例(20%),Vimentin阳性表达6例(12%)。肝转移组的Snail和Vimentin阳性表达率均明显高于无肝转移组(χ2=38.455,P<0.01;χ2=36.946,P<0.01)。肝转移组中Snail和Vimentin的表达水平之间存在正相关性(r=0.657,P<0.01)。单因素分析显示,术前糖类抗原19-9(carbohydrate antigen 19-9,CA19-9)水平>37 k U/L、肿瘤直径≥4 cm、胰头肿瘤、血管浸润、Snail表达阳性和Vimentin表达阳性均与胰腺癌肝转移相关(P值均<0.05);多因素分析显示,术前CA19-9>37 k U/L(β=3.411,P<0.01)、Snail表达阳性(β=2.882,P<0.01)和Vimentin表达阳性(β=3.361,P<0.01)是胰腺癌肝转移的独立危险因素。结论 :胰腺癌患者外周血标本中CTCs-EMT表型标志物Snail和Vimentin的表达与其发生肝转移有密切关系。

关键词：胰腺肿瘤肿瘤转移肝肿瘤循环细胞 Vimentin Snail 上皮-间质转化

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IFN-γ和TNF-α诱导间充质干细胞促进结肠癌细胞的化疗抵抗

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第二军医大学学报 2016年第1期37卷 40-45页

作者：李蓉盛丹丹赵雪井莹莹张黎韩志鹏第二军医大学东方肝胆外科医院肿瘤免疫与基因治疗实验室上海200438 第二军医大学长海医院药学部上海200433 上海交通大学医学院附属仁济医院中心实验室上海200127

目的观察炎症因子干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对结肠癌细胞化疗抵抗的影响及机制。方法应用炎症因子IFN-γ和TNF-α联合处理MSCs... 详细信息

目的观察炎症因子干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对结肠癌细胞化疗抵抗的影响及机制。方法应用炎症因子IFN-γ和TNF-α联合处理MSCs,收集条件培养上清,并将其作用于人结肠癌细胞系HCT116及HT29细胞,同时分别给予化疗药物顺铂和5-氟尿嘧啶处理。显微镜下观察各组细胞形态变化,MTT法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况,RT-PCR检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2表达情况。结果经化疗药物处理,与未经条件培养上清培养的细胞比较,经条件培养上清培养的细胞形态学改变更轻微,细胞增殖率增高(P<0.05)、凋亡率降低(P<0.05),Bcl-2 mRNA表达水平上调、Bax mRNA表达水平下调。结论经炎症因子IFN-γ和TNF-α诱导的MSCs能够促进结肠癌细胞化疗抵抗能力。

关键词：干扰素γ 肿瘤坏死因子α 间质干细胞结肠肿瘤肿瘤抗药性

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以Survivin为靶标的肿瘤治疗策略

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第二军医大学学报 2016年第3期37卷 342-348页

作者：殷海森赵新颖苏长青福建医科大学附属第一医院福州350005 第二军医大学东方肝胆外科医院分子肿瘤实验室上海200438

Survivin是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)家族的新成员,参与调控细胞重要的生理病理过程,具有抑制细胞凋亡、促进细胞增殖和肿瘤间质血管形成等作用。Survivin在正常终末分化组织中几乎检测不到,而在大多数肿瘤组... 详细信息

Survivin是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)家族的新成员,参与调控细胞重要的生理病理过程,具有抑制细胞凋亡、促进细胞增殖和肿瘤间质血管形成等作用。Survivin在正常终末分化组织中几乎检测不到,而在大多数肿瘤组织中高表达,其异常高表达与肿瘤的化疗耐药、肿瘤复发以及患者生存率密切相关。由于在肿瘤发生和发展中起重要作用,Survivin成为肿瘤基因诊治的理想靶点。本文将就Survivin分子功能、Survivin与肿瘤的关系以及与Survivin相关的肿瘤治疗策略作一综述。

关键词： survivin 启动子肿瘤细胞凋亡自噬靶向治疗

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高效毛细管电泳法测定甘草酸注射液中甘草酸含量

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中国现代应用药学 2001年第6期18卷 457-459页

作者：施军霞罗明卫立辛贺平李琳芳郭亚军第二军医大学东方肝胆外科医院肿瘤免疫和基因治疗中心上海200438 上海市东方肝胆外科医院三楼实验室上海200438

目的 :建立一种测定甘草酸注射液中甘草酸含量的高效毛细管电泳法。方法 :10 mmol.L- 1 磷酸缓冲液 (p H 7.0 )中含12 .5 mm ol.L- 1十二烷基硫酸钠 (SDS)为电泳电解质 ,电压 30 k V,检测波长 2 5 4 nm,毛细管有效长度 5 0 cm,管径 5 0 ... 详细信息

目的 :建立一种测定甘草酸注射液中甘草酸含量的高效毛细管电泳法。方法 :10 mmol.L- 1 磷酸缓冲液 (p H 7.0 )中含12 .5 mm ol.L- 1十二烷基硫酸钠 (SDS)为电泳电解质 ,电压 30 k V,检测波长 2 5 4 nm,毛细管有效长度 5 0 cm,管径 5 0 μm。氨茶碱为内标。结果 :甘草酸与氨茶碱的迁移时间分别为 4 .8和 2 .8m in。甘草酸浓度为 6 2 .5～ 10 0 0 mg.L- 1时 ,其浓度与峰面积呈良好线性关系 ,相关系数 (r)为 0 .9997。日内、日间变异系数均小于 5 .0 %。结论 :该方法简单、快速、灵敏 ,重现性良好。

关键词：高效毛细管电泳法甘草酸甘草酸注射液药物含量测定肝病

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曲格列酮体外对肝癌细胞HepG2生长及β-catenin信号通路的影响

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第二军医大学学报 2008年第1期29卷 11-14页

作者：周彦明温莹浩康晓燕钱海华李殿启杨甲梅李滨殷正丰福建医科大学附属厦门第一医院肝胆胰血管外科厦门361003 第二军医大学东方肝胆外科医院分子肿瘤实验室上海200438

目的:观察过氧化物酶体增长因子活化受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)γ激动剂---曲格列酮体外对肝癌细胞生长及β-catenin信号通路的影响,初步探讨其可能的抗肝癌机制。方法:体外培养肝癌细胞HepG2,以MTT法测定... 详细信息

目的:观察过氧化物酶体增长因子活化受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)γ激动剂---曲格列酮体外对肝癌细胞生长及β-catenin信号通路的影响,初步探讨其可能的抗肝癌机制。方法:体外培养肝癌细胞HepG2,以MTT法测定不同浓度曲格列酮(5、10、20、40、80、100μmol/L)作用120h后细胞存活率,并与正常培养细胞(对照组)作比较;应用流式细胞仪分析曲格列酮(10μmol/L)处理组及对照组HepG2细胞周期;免疫细胞化学法观察曲格列酮(10μmol/L)处理组及对照组HepG2细胞β-catenin的亚细胞定位;Western印迹法检测各自cyclin D1和c-myc蛋白的表达。结果:5、10、20、40、80、100μmol/L曲格列酮作用120h后,HepG2细胞存活率分别为(96.8±1.2)%、(53.4±1.2)%、(42.3±1.2)%、(31.4±1.0)%、(13.6±0.8)%和(9.6±0.7)%,组间有统计学差异(P<0.05)。与对照组相比,10μmol/L曲格列酮处理组细胞G0/G1期细胞比例增加[(67.6±0.5)%vs(56.3±1.5)%,P<0.01],而S期细胞比例减少[(20.6±0.5)%vs(25±1.0)%,P<0.01)]。对照组细胞β-catenin亚细胞定位于细胞核,而曲格列酮处理组定位于细胞质;Western印迹结果表明曲格列酮处理组细胞c-myc和cyclin D1蛋白表达低于对照组。结论:曲格列酮体外能抑制肝癌细胞生长,且随着浓度的增加,其抑制作用逐渐增强;其抑制作用可能与调控β-catenin信号通路,调节相关靶蛋白表达有关。

关键词：过氧化物酶体增长因子活化受体曲格列酮肝肿瘤 β-catenin

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