检索结果-内蒙古大学图书馆

中华医学杂志 2003年第3期83卷 204-207页

作者：张友磊傅志仁张军王元和沈茜第二军医大学附属长征医院普外科上海200003 第二军医大学附属长海医院中心实验室

目的　探讨乙酰肝素酶 (HPSE)反义寡脱氧核苷酸对人乳腺癌细胞株MDA435侵袭力的抑制作用。方法　设计合成互补于HPSEmRNA起始密码区的硫代反义寡脱氧核苷酸AS ODN及相应的无义对照寡脱氧核苷酸NS ODN ,以阳离子脂质体Lipofectin包埋后转... 详细信息

目的　探讨乙酰肝素酶 (HPSE)反义寡脱氧核苷酸对人乳腺癌细胞株MDA435侵袭力的抑制作用。方法　设计合成互补于HPSEmRNA起始密码区的硫代反义寡脱氧核苷酸AS ODN及相应的无义对照寡脱氧核苷酸NS ODN ,以阳离子脂质体Lipofectin包埋后转染MDA435细胞 ,以逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测转染后HPSEmRNA表达的变化 ,以Western印迹检测HPSE蛋白表达的变化 ,以定量Matrigel侵袭实验检测MDA435细胞侵袭力的变化。结果　与正常对照组、脂质体对照组和NS ODN相应浓度组相比 ,AS ODN各浓度组对HPSEmRNA和蛋白的表达及细胞侵袭力均有明显抑制作用 (P <0 0 1) ,其抑制效应在不同浓度组间差别显著 (P <0 0 1)。AS ODN在终浓度为 0 1μmol/L、0 2 μmol/L和 0 4μmol/L时对MDA435细胞的侵袭力抑制率分别为 34 0 %、5 7 8%和 79 7%。结论　HPSE反义寡脱氧核苷酸通过下调HPSEmRNA和蛋白的表达可显著抑制人乳腺癌细胞株MDA435的侵袭力 ,并呈剂量依赖性。

关键词：乙酰肝素酶反义寡核苷酸乳腺癌细胞株 MDA435 侵袭力抑制作用

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不同化疗耐药性卵巢癌细胞侵袭转移特性的比较

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第二军医大学学报 2011年第2期32卷 117-122页

作者：王丹陈超惠宁第二军医大学长海医院妇产科上海200433 第二军医大学长海医院中心实验室上海200433

目的观察不同化疗耐药性卵巢癌细胞的侵袭转移特性,并探讨其可能机制。方法体外建立卵巢癌不同梯度顺铂(DDP)耐药细胞系模型(OVCAR-3/DDP-1、OVCAR-3/DDP-2、OVCAR-3/DDP-3);MTT法、流式细胞仪、Transwell小室观察亲本细胞和耐药细胞的... 详细信息

目的观察不同化疗耐药性卵巢癌细胞的侵袭转移特性,并探讨其可能机制。方法体外建立卵巢癌不同梯度顺铂(DDP)耐药细胞系模型(OVCAR-3/DDP-1、OVCAR-3/DDP-2、OVCAR-3/DDP-3);MTT法、流式细胞仪、Transwell小室观察亲本细胞和耐药细胞的增殖、细胞周期分布、细胞侵袭和迁移等生物学特性的变化;ELISA法测定细胞培养上清液中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的浓度。结果成功建立不同梯度顺铂耐药细胞系模型,OVCAR-3/DDP-1、DDP-2、DDP-3细胞的耐药指数依次为3.87、8.39、13.42。耐药细胞均较亲本细胞增殖缓慢,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,其中OVCAR-3/DDP-2、DDP-3与亲本细胞比较差异有统计学意义(P<0.05)。与亲本细胞相比,耐药细胞伴随其耐药性的增加,侵袭转移能力逐渐增强,其中OVCAR-3/DDP-2、DDP-3与亲本细胞相比差异有统计学意义(P<0.05)。细胞上清液中MMP-2/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1的比值随顺铂耐药性的增加而逐渐上升,耐药细胞与亲本细胞相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论对顺铂耐药性的产生和增加可促进卵巢癌细胞的侵袭和转移,可能部分与耐药细胞MMP-2/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1比值上调有关。

关键词：卵巢肿瘤顺铂肿瘤抗药性肿瘤侵袭肿瘤转移基质金属蛋白酶

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分泌型ICOS-mIg重组融合蛋白定量检测方法的建立和应用

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第5期21卷 646-649页

作者：王健沈茜第二军医大学长海医院中心实验室上海200433

目的: 建立双抗体夹心ELISA法,定量检测重组可诱导共刺激分子(ICOS)-mIg融合蛋白的分泌型表达,并对其灵敏度、特异性及线性检测范围进行评价.方法: 用分子生物学技术制备重组ICOS-mIg融合蛋白.以羊抗小鼠IgG 为包被抗体,HRP标记的马抗小... 详细信息

目的: 建立双抗体夹心ELISA法,定量检测重组可诱导共刺激分子(ICOS)-mIg融合蛋白的分泌型表达,并对其灵敏度、特异性及线性检测范围进行评价.方法: 用分子生物学技术制备重组ICOS-mIg融合蛋白.以羊抗小鼠IgG 为包被抗体,HRP标记的马抗小鼠IgG为检测抗体,通过配对试验、方阵滴定试验及绘制mIgG浓度与A450值的标准曲线,建立定量检测重组ICOS-mIg融合蛋白的双抗体夹心ELISA法.结果: 建立了双抗体夹心ELISA法,检测的线性范围为7.8～500 μg/L,标准曲线的回归方程为: y=-0.7864+1.1635 log(x),R2=0.9911,P<0.0001.应用该方法可快速检测哺乳动物细胞表达的重组ICOS-mIg融合蛋白的分泌量.结论:建立了一种可快速定量检测重组ICOS-mIg融合蛋白分泌表达的双抗体夹心ELISA法.该法灵敏、准确、快速、实用性好,对优化ICOS-mIg融合蛋白表达细胞的筛选和大规模制备具有重要价值.

关键词：重组融合蛋白 ELISA 可诱导共刺激分子免疫球蛋白恒定片段

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腺病毒介导反义CⅡTA基因对实验性自身免疫性心肌炎的治疗

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第1期25卷 56-61页

作者：蔡刚张军刘莉沈茜第二军医大学附属长海医院中心实验室上海200433

目的　研究反义CⅡTA基因对心肌肌凝蛋白诱导的实验性自身免疫性心肌炎 (experi mentalautoimmunemyocarditis,EAM)的治疗作用。方法　以携带反义CⅡTA基因的腺病毒载体对肌凝蛋白免疫后的小鼠进行静脉注射 ,同时设立空载病毒组与单纯... 详细信息

目的　研究反义CⅡTA基因对心肌肌凝蛋白诱导的实验性自身免疫性心肌炎 (experi mentalautoimmunemyocarditis,EAM)的治疗作用。方法　以携带反义CⅡTA基因的腺病毒载体对肌凝蛋白免疫后的小鼠进行静脉注射 ,同时设立空载病毒组与单纯免疫组作为对照 ,以多种手段观察反义CⅡTA基因对EAM的治疗效果。结果　治疗组与两对照组相比 ,心肌病理损伤程度减轻 ;血浆抗心肌肌凝蛋白抗体滴度及cTnⅠ浓度明显下降 (P <0 .0 5 ) ,流式细胞术检测外周血与脾脏T细胞I Ad表达量明显下降 (P <0 .0 5 )。结论　反义CⅡTA基因对心肌肌凝蛋白诱导的EAM具有较好的治疗作用。

关键词： CⅡTA 反义基因实验性自身免疫性心肌肌凝蛋白治疗心肌炎表达量腺病毒载体

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慢性哮喘肺组织组蛋白去乙酰化酶活性降低对气道平滑肌细胞表型转变的影响

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第二军医大学学报 2010年第9期31卷 937-941页

作者：胥武剑宁允叶洪伟峻邵艳蔡在龙李强第二军医大学长海医院呼吸内科上海200433 第二军医大学长海医院中心实验室上海200433

目的探讨慢性哮喘病理生理过程中肺组织组蛋白去乙酰化酶(HDAC)活性变化趋势及其对气道平滑肌细胞表型及生物学性状的影响。方法构建慢性哮喘小鼠模型,检测肺组织HDAC活性。以HDAC抑制剂曲古霉素A(TSA)刺激体外培养的大鼠气管平滑肌及... 详细信息

目的探讨慢性哮喘病理生理过程中肺组织组蛋白去乙酰化酶(HDAC)活性变化趋势及其对气道平滑肌细胞表型及生物学性状的影响。方法构建慢性哮喘小鼠模型,检测肺组织HDAC活性。以HDAC抑制剂曲古霉素A(TSA)刺激体外培养的大鼠气管平滑肌及人原代支气管平滑肌细胞,采用蛋白质印迹、MTT、Transwell及三维凝胶收缩等方法检测抑制HDAC活性对气道平滑肌细胞表型转变的影响及其相应的细胞增殖、迁移、收缩能力的变化。结果慢性哮喘组小鼠肺组织HDAC活性为(0.371±0.054)μmol/(L·μg),较正常对照组的(0.603±0.034)μmol/(L·μg)显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。TSA(0.5μmol/L)作用后12～24h,体外培养的大鼠气管平滑肌环及人支气管平滑肌细胞的α-sm-actin、SM22-α表达明显增加,作用后24h及48h支气管平滑肌细胞数目分别为(1.719±0.044)×104及(1.808±0.009)×104个,明显低于空白对照组的(1.911±0.048)×104及(2.537±0.01)×104个(P<0.05)。血小板源性生长因子(PDGF)诱导的支气管平滑肌细胞迁移数也在TSA作用后显著降低(88±7.632vs52±7.5,P<0.05)。此外,TSA作用24h后的三维凝胶收缩率[(9.885±7.084)%]较空白对照组[(44.844±3.808)%]及PDGF组[(41.315±7.943)%]明显降低(P<0.05)。结论慢性哮喘小鼠肺部HDAC的活性下降,可能与气道平滑肌细胞向"收缩型"转变有关,但HDAC活性下降并不增加细胞的收缩能力。

关键词：哮喘平滑肌细胞组蛋白脱乙酰基酶类曲古霉素A

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pcDNA3.1-Annexin A1真核表达载体对结直肠癌细胞迁移、侵袭的影响

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第二军医大学学报 2010年第3期31卷 264-268页

作者：杨晓群葛慧娟汪佳祺余宏宇何金刘惠敏蔡在龙第二军医大学长征医院病理科上海200003 第二军医大学长海医院中心实验室上海200433

目的探讨Annexin A1对结直肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法构建重组质粒pcDNA3.1-AnnexinA1,转染至结直肠癌细胞株SW480中,G418筛选稳定表达株,实时荧光定量PCR、蛋白质印迹检测转染前后Annexin A1mR-NA及蛋白表达;以空载体转染组... 详细信息

目的探讨Annexin A1对结直肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法构建重组质粒pcDNA3.1-AnnexinA1,转染至结直肠癌细胞株SW480中,G418筛选稳定表达株,实时荧光定量PCR、蛋白质印迹检测转染前后Annexin A1mR-NA及蛋白表达;以空载体转染组及未转染SW480细胞作为对照,通过划痕修复实验和Transwell细胞侵袭实验对转染前后细胞的迁移和侵袭能力进行比较观察和分析。结果成功构建重组质粒pcDNA3.1-Annexin A1载体;实时荧光定量PCR和蛋白质印迹检测结果均显示,重组体pcDNA3.1-Annexin A1稳定转染细胞株中Annexin A1mRNA及蛋白表达均明显高于空载体转染及未转染组细胞(P<0.01),而后两者间比较差异无统计学意义(P>0.05);重组体pcDNA3.1-Annexin A1转染组SW480细胞的迁移率(0.415±0.002)明显高于空载体转染组(0.267±0.003)及未转染组细胞(0.271±0.002),差异具有统计学意义(P<0.05),而后两者间差异无统计学意义(P>0.05);与空载体转染组(162.80±12.07)及未转染组(164.25±9.50)相比,重组体pcDNA3.1-Annexin A1转染组穿膜细胞数(221.75±12.07)增多,差异具有统计学意义(P<0.05).结论人Annexin A1基因表达上调能提高结直肠癌细胞迁移和侵袭能力。

关键词：结直肠肿瘤 Annexin A基因真核表达载体划痕修复 Transwell侵袭实验结直肠癌转染细胞侵袭能力细胞迁移实时荧光定量

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构建cRNA作为标准曲线的实时RT-PCR检测方法

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临床检验杂志 2004年第3期22卷 172-174页

作者：蔡刚李闻捷丁健华付传刚沈茜第二军医大学附属长海医院中心实验室上海200433 第二军医大学附属长海医院普外科上海200433

目的　建立一种新的基于LightCyclerTM技术 ,并通过构建cRNA标准曲线来对目的基因进行定量实时RT -PCR的检测方法。方法　以T7RNA聚合酶体外转录合成带有目的片段的cRNA作为标准品 ,并与样本同时进行反转录和PCR扩增 ,用此方法来检测目... 详细信息

目的　建立一种新的基于LightCyclerTM技术 ,并通过构建cRNA标准曲线来对目的基因进行定量实时RT -PCR的检测方法。方法　以T7RNA聚合酶体外转录合成带有目的片段的cRNA作为标准品 ,并与样本同时进行反转录和PCR扩增 ,用此方法来检测目的基因在结直肠组织中的表达。结果　采用cRNA标准品制作的标准曲线具有较好的线性关系 (r>0 .99) ,而且在每次实验中都能取得较好的扩增效率 ,CEA与GAPDH的扩增效率分别大于 88.7%和 87.4 %。结论　此方法能较为准确的对组织中的目的基因表达进行定量检测。

关键词： cRNA 标准曲线实时RT-PCR检测 mRNA定量

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实验性心肌炎心肌组织与全血离子的变化

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第二军医大学学报 1994年第4期15卷 370-371页

作者：卞金陵沈茜方超萍奚建华第二军医大学长海医院儿科第二军医大学长海医院免疫室第二军医大学中心实验室

实验性心肌炎心肌组织与全血离子的变化卞金陵，沈茜，方超萍，奚建华近年来血清Ｃａ＋＋、Ｍｇ＋＋、Ｋ＋、Ｎａ＋含量的变化在心血管疾病中的作用已有报道。但关于心肌与全血离子含量相关性的研究迄今未见报道。鉴于病毒性心肌炎发病... 详细信息

实验性心肌炎心肌组织与全血离子的变化卞金陵，沈茜，方超萍，奚建华近年来血清Ｃａ＋＋、Ｍｇ＋＋、Ｋ＋、Ｎａ＋含量的变化在心血管疾病中的作用已有报道。但关于心肌与全血离子含量相关性的研究迄今未见报道。鉴于病毒性心肌炎发病有增多趋势，且诊断主要根据临床表现...

关键词：心肌炎心肌离子钙代谢

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人抑癌基因PTEN对前列腺癌细胞系生物学行为的影响

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中华泌尿外科杂志 2004年第2期25卷 84-87页

作者：孙颖浩邱镇许传亮钱松溪王元天沈茜李云唐楠第二军医大学附属长海医院泌尿外科上海200433 第二军医大学附属长海医院中心实验室上海200433

目的　探讨外源性人抑癌基因PTEN表达对前列腺癌细胞系LNCaP、DU 14 5细胞增殖和侵袭转移能力的影响。　方法　利用携带人PTEN基因的可调控性腺病毒 (Ad PTEN ) ,体外转染人前列腺癌细胞系LNCaP、DU 14 5,RT PCR、Westernblot检测目的... 详细信息

目的　探讨外源性人抑癌基因PTEN表达对前列腺癌细胞系LNCaP、DU 14 5细胞增殖和侵袭转移能力的影响。　方法　利用携带人PTEN基因的可调控性腺病毒 (Ad PTEN ) ,体外转染人前列腺癌细胞系LNCaP、DU 14 5,RT PCR、Westernblot检测目的基因不同水平的表达 ,通过细胞生长试验、流式细胞仪分析技术以及Boyden小室法检测LNCaP、DU 14 5转染前后细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞体外侵袭力的变化。　结果　转染Ad PTEN后LNCaP、DU 14 5细胞的PTEN表达由阴性转为阳性 ,转染后对LNCaP、DU 14 5细胞生长有抑制作用 ,阻滞于G0 ～G1期 ,早期细胞凋亡率增加 ,LNCaP细胞 (6.89± 0 .51) % ;DU14 5细胞 (5.44± 1.13 ) % ,与对照组相比差异有显著性 ,Boyden小室法检测转染后体外侵袭力受到明显抑制。　结论　重组腺病毒介导的人PTEN基因在体外对前列腺癌细胞系LNCaP、DU 14 5的细胞增殖和体外侵袭力有明显抑制作用。

关键词：抑癌基因 PTEN 前列腺癌生物学行为癌细胞系

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可调控性人PTEN基因重组腺病毒的构建与表达

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中华实验外科杂志 2003年第5期20卷 453-455页

作者：邱镇孙颖浩许传亮沈茜钱松溪李云第二军医大学附属长海医院泌尿外科上海200433 第二军医大学附属长海医院中心实验室上海200433

目的　体外构建和表达可调控性人抑癌基因PTEN重组腺病毒。方法　将人PTEN基因全长cDNA约 1.4kb经过穿梭载体 ,与可调控性腺病毒载体骨架连接 ,得到重组人PTEN基因腺病毒 (Ad PTEN) ,酶切与聚合酶链反应 (PCR)鉴定后 ,在HEK2 93细胞包... 详细信息

目的　体外构建和表达可调控性人抑癌基因PTEN重组腺病毒。方法　将人PTEN基因全长cDNA约 1.4kb经过穿梭载体 ,与可调控性腺病毒载体骨架连接 ,得到重组人PTEN基因腺病毒 (Ad PTEN) ,酶切与聚合酶链反应 (PCR)鉴定后 ,在HEK2 93细胞包装、扩增 ,空斑试验测定病毒滴度 ,逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)、Westernblot法分别在mRNA、蛋白水平检测PTEN的表达。Ad X TRE βgal病毒作为对照。结果　构建的Ad PTEN病毒滴度为 1.8× 10 7pfu/ml ,转染前列腺癌细胞株PC 3后RT PCR扩增出特异条带 ( 4 62bp) ,Westernblot检测PTEN蛋白 ( 60×10 3 )有高表达 ,对照病毒转染后未测到PTEN的表达。结论　用体外连接法成功地构建了可调控性人抑癌基因PTEN重组腺病毒载体 ,并得到了正确、特异的表达。

关键词：前列腺癌 PTEN 基因表达腺病毒载体

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