检索结果-内蒙古大学图书馆

中国组织工程研究与临床康复 2008年第37期12卷 7302-7305页

作者：卢斌吴鸿蔡在龙邹大进解放军第二军医大学长海医院内分泌科上海市200433 解放军第二军医大学长海医院中心实验室上海市200433

背景:研究者们早已发现蛋白酪氨酸磷酸酶1B(protein tyrosine phosphatase,PTP1B)可负性调节胰岛素信号转导,但目前制约PTP1B功能研究的重要环节是缺乏有效的工具。目的:拟构建PTP1B基因靶向RNA干扰重组腺病毒。设计、时间及地点:体外... 详细信息

背景:研究者们早已发现蛋白酪氨酸磷酸酶1B(protein tyrosine phosphatase,PTP1B)可负性调节胰岛素信号转导,但目前制约PTP1B功能研究的重要环节是缺乏有效的工具。目的:拟构建PTP1B基因靶向RNA干扰重组腺病毒。设计、时间及地点:体外细胞学基因转染实验,于2007-05/12在解放军第二军医大学长海医院中心实验室完成。材料:293细胞由中科院上海细胞研究所提供,真核表达质粒psiRNA-PTP1B由上海吉凯生物公司合成,AdEasy-1菌、穿梭载体pAdTrack、大肠杆菌DH5α由本室保存,重组腺病毒PCR鉴定引物由上海生工生物公司设计合成。方法:由生物公司合成针对大鼠PTP1B mRNA的特异性siRNA真核表达质粒psiRNA-PTP1B,双酶切得到siRNA-PTP1B表达片段,插入pAdTrack载体上,获得转移质粒pAdTrack-siRNA-PTP1B。后者经线性化后,转化含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183进行同源重组,PacⅠ酶切鉴定,筛选出正确重组腺病毒质粒pAdEasy-siRNA-PTP1B,酶切线性化后转染293细胞包装成重组病毒颗粒。通过反复感染扩增病毒,采用氯化铯密度梯度离心法纯化重组腺病毒。主要观察指标:荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,鉴定重组腺病毒穿梭载体及重组腺病毒是否构建成功。结果:PacⅠ酶切鉴定证实重组腺病毒质粒pAd-siRNA-PTP1B构建成功,转染293细胞后有绿色荧光蛋白表达。PCR鉴定表明重组腺病毒中含有siRNA-PTP1B片断,成功构建了携带PTP1B干扰RNA的重组腺病毒Ad-siRNA-PTP1B,293细胞扩增纯化后,获得约3.6×109efu/mL滴度的重组腺病毒。结论:应用AdEasy-1系统可以高效快速制备表达PTP1B干扰RNA的重组腺病毒。

关键词：蛋白酪氨酸磷酸酶1B RNA干扰腺病毒

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二硫苏糖醇对大鼠硒性白内障的抑制作用

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第二军医大学学报 2007年第12期28卷 1320-1323页

作者：彭亚军耿宇张军谢伯林李静李闻捷第二军医大学长海医院眼科上海200433 成都军区昆明总医院眼科昆明650032 长海医院中心实验室

目的:探讨自行配制的二硫苏糖醇(DTT)滴眼液对SD大鼠硒性白内障(模拟老年性白内障)的抑制作用。方法:对出生后12d的SD乳鼠(约25g)行皮下注射Na_2SeO_3(0.2ml/次,隔天注射1次,共计3次,累计剂量约210μg),注射开始后6d,将发生硒性白内障... 详细信息

目的:探讨自行配制的二硫苏糖醇(DTT)滴眼液对SD大鼠硒性白内障(模拟老年性白内障)的抑制作用。方法:对出生后12d的SD乳鼠(约25g)行皮下注射Na_2SeO_3(0.2ml/次,隔天注射1次,共计3次,累计剂量约210μg),注射开始后6d,将发生硒性白内障大鼠左眼设为对照组,右眼作药物干预组,滴眼4次/d(分别滴入生理盐水及25mmol/L的DTT),每次1滴,持续用药3周;定时对大鼠双眼散瞳作裂隙灯检查,以游标尺测量大鼠眼晶状体核性斑块最大直径变化。另取硒性白内障乳鼠分别设为DTT(n=89)、吡诺克辛(PDE,n=22)及吡诺克辛钠(PSED,n=24)干预组及生理盐水对照组(n=45),分别使用25mmol/LDTT、日本产吡诺克辛滴眼液、国产吡诺克辛钠滴眼液。滴眼4次/d(同组乳鼠左、右眼滴相同的药物或生理盐水),每次每只眼1滴(约40μl),持续用药3周。定时散瞳后,用裂隙灯检查大鼠双眼皮质病变、混浊程度。结果:(1)DTT滴眼液可以明显抑制白内障大鼠晶状体核性混浊斑块的发展;(2)DTT滴眼液可以有效降低白内障大鼠晶状体伴发皮质混浊的发生率;(3)DTT滴眼液抗硒性白内障晶状体混浊的效果优于其他临床常用的抗老年性白内障药物PDE和PSED。结论:DTT滴眼液对SD大鼠硒性白内障具有良好的抑制作用。

关键词：二硫苏糖醇白内障硒老年入

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S(yp) Y279和Y304介导了BcrAbl与Grb2等蛋白的结合

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1999年第4期31卷 450-452页

作者：朱奎刘小萍叶芳耘东方肝胆外科研究所肿瘤免疫与基因治疗中心!上海200433 第二军医大学长海医院实验诊断科/中心实验室

利用体外定点突变技术获得ＳｙｐＹ２７９Ｆ、Ｙ３０４Ｆ和Ｙ５４６Ｆ突变的ｃＤＮＡ，将这些突变体和野生型Ｓｙｐ分别构建入ｐＸＭ真核表达载体，转入Ｋ５６２细胞。经Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹证明，各转染Ｋ５６２细胞中都有Ｓｙ... 详细信息

利用体外定点突变技术获得ＳｙｐＹ２７９Ｆ、Ｙ３０４Ｆ和Ｙ５４６Ｆ突变的ｃＤＮＡ，将这些突变体和野生型Ｓｙｐ分别构建入ｐＸＭ真核表达载体，转入Ｋ５６２细胞。经Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹证明，各转染Ｋ５６２细胞中都有Ｓｙｐ蛋白的表达。免疫沉淀与免疫印迹结果发现ＷＴ、Ｙ２７９Ｆ、Ｙ３０４Ｆ和Ｙ５４６Ｆ等４种Ｓｙｐ在胞内均能直接与ＢｃｒＡｂｌ结合。体外结合实验结果表明Ｙ３０４Ｆ突变导致了Ｓｙｐ不能与Ｓｈｃ结合，Ｙ２７９Ｆ突变则导致了Ｓｙｐ不能与Ｇｒｂ２结合。结论是：作为“接头蛋白”，Ｓｙｐ可以介导ＢｃｒＡｂｌ与Ｓｈｃ和Ｇｒｂ２之间的结合；Ｇｒｂ２结合在Ｓｙｐ的Ｙ２７９上，Ｓｈｃ则结合在Ｓｙｐ的Ｙ３０４上

关键词： Bcr Abl激酶 Syp 信号传导

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养阴抗毒散对X射线辐射损伤小鼠巨噬细胞免疫活性的防护作用

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中华放射医学与防护杂志 2003年第1期23卷 41-42页

作者：张盈华殷缨侯军峰史恒军第四军医大学第二附属医院中心实验室西安710038 第四军医大学第二附属医院中医科西安710038

已有研究表明~[1]，电离辐射可对白细胞与红细胞免疫功能造成严重损伤，养阴抗毒散作为一种纯中药剂，对此种损伤有明确的保护作用。笔者在临床上用来减轻肿瘤患者放疗后的副反应，并取得了肯定的疗效。本研究旨在观察养阴抗毒（YKP）对... 详细信息

已有研究表明~[1]，电离辐射可对白细胞与红细胞免疫功能造成严重损伤，养阴抗毒散作为一种纯中药剂，对此种损伤有明确的保护作用。笔者在临床上用来减轻肿瘤患者放疗后的副反应，并取得了肯定的疗效。本研究旨在观察养阴抗毒（YKP）对X射线照射小鼠的巨吞细胞免疫活性的防护作用，为基础研究与临床提供实验依据。

关键词：养阴抗毒散 X射线辐射损伤巨噬细胞免疫活性防护作用中药动物实验

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二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌肝细胞超微结构及葡萄糖—6—磷酸酶细胞化学的观察

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第二军医大学学报 1991年第2期12卷 139-142页

作者：颜永碧夏愿耀叶煦亭丛文铭吴孟超张秀忠第二军医大学训练部中心实验室 200433 长海医院肝胆外科研究所 200433

二乙基亚硝胺诱发实验性肝癌过程中,用电镜观察肝结节内肝细胞及G-6-Pase的改变,结果显示:(1)肝细胞问的连接较正常为少,部分区域的细胞连接消失,细胞问隙增宽。(2)部分肝细胞核有凹陷,核仁肿大,胞质内线粒体嵴变短而少,粗面内质网膜上... 详细信息

二乙基亚硝胺诱发实验性肝癌过程中,用电镜观察肝结节内肝细胞及G-6-Pase的改变,结果显示:(1)肝细胞问的连接较正常为少,部分区域的细胞连接消失,细胞问隙增宽。(2)部分肝细胞核有凹陷,核仁肿大,胞质内线粒体嵴变短而少,粗面内质网膜上核糖体脱落,糖原颗粒减少。(3)少数细胞的细胞核增大,胞质内游离核糖体丰富,各细胞器不发达。(4)诱癌第8周,肝细胞内G-6-Pase呈阳性反应,12周后为阴性。这些特点可认为是肝细胞去分化的主要指示。

关键词：肝肿瘤肝细胞细胞化学超微结构

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流式细胞仪在医学检验中的应用

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中华医学检验杂志 1997年第4期20卷 203-204页

作者：张盈华第四军医大学第二附属医院中心实验室

流式细胞仪在医学检验中的应用张盈华流式细胞仪（ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ＦＣＭ）是单克隆抗体技术、激光技术、电子计算机技术等学科高度发展、综合的结晶，ＦＣＭ的应用标志着医学生物学研究进入了细胞和分子水平，为微观认识... 详细信息

流式细胞仪在医学检验中的应用张盈华流式细胞仪（ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ＦＣＭ）是单克隆抗体技术、激光技术、电子计算机技术等学科高度发展、综合的结晶，ＦＣＭ的应用标志着医学生物学研究进入了细胞和分子水平，为微观认识细胞提供了精密、准确的方法和仪器。...

关键词：医学检验流式细胞仪临床应用

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改良固相免疫酶法快速测定前列腺酸性磷酸酶

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中华医学检验杂志 1991年第6期14卷 326-328页

作者：严家定染国栋第四军医大学第二附属医院中心实验室

我们介绍一种前列腺酸性磷酸酶固相免疫酶试验，应用抗前列腺酸性磷酸酶单克隆抗体（PAP－McAb)包被固相塑料微珠，然后加入待测血清，标准血清和控制血清，抗原一抗体反应仅需10分钟，由于本法采用a－萘粉酸酯作为前列腺酸性磷酸酶（PA... 详细信息

我们介绍一种前列腺酸性磷酸酶固相免疫酶试验，应用抗前列腺酸性磷酸酶单克隆抗体（PAP－McAb)包被固相塑料微珠，然后加入待测血清，标准血清和控制血清，抗原一抗体反应仅需10分钟，由于本法采用a－萘粉酸酯作为前列腺酸性磷酸酶（PAP）的底物，与固红B盐显色剂蓝色反应，提高了光电比色的敏感度，固此本法测定速度快，敏感度高，特异性好，结果，吸光度线性范围完，因此本法测定速度快，敏感度高，特异性好，结果准确，吸光度线性范围宽，PAP浓度在0－100ug/L范围内呈线性关系，其灵敏度超过了放射免疫分析法，组内变异系数CV＜5．5％，组间变异系数CV＜4％，操作简便易行，与免疫酶法比较，具有所需样品量少，只需50ul血清，灵敏度高，反应迅速等优点，达到了快速诊断的目的，其相关系数r=0.99(n=31).

关键词：前列腺肿瘤单克隆抗体固相免疫酶法前列腺酸性磷酸酶

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积雪草挥发油成分分析及其抗抑郁作用研究

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第二军医大学学报 1998年第2期19卷 186-187页

作者：秦路平丁如贤张卫东郑水庆管阳太胡耀铭第二军医大学药学院生药学教研室第二军医大学药学院天然药物化学教研室第二军医大学长海医院神经内科复旦大学中心实验室

积雪草挥发油成分分析及其抗抑郁作用研究秦路平丁如贤张卫东△郑水庆管阳太▲胡耀铭□积雪草为伞形科植物积雪草［Ｃｅｎｔｅｌａａｓｉａｔｉｃａ（Ｌ．）Ｕｒ－ｂａｎ］的干燥全草，首载于《神农本草经》，具清热利湿、解毒消肿之功... 详细信息

积雪草挥发油成分分析及其抗抑郁作用研究秦路平丁如贤张卫东△郑水庆管阳太▲胡耀铭□积雪草为伞形科植物积雪草［Ｃｅｎｔｅｌａａｓｉａｔｉｃａ（Ｌ．）Ｕｒ－ｂａｎ］的干燥全草，首载于《神农本草经》，具清热利湿、解毒消肿之功效，用于湿热黄疸、痈肿疮毒、跌打损...

关键词：积雪草挥发油成分 GC-MS 抗抑郁作用

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氟烷、七氟醚肝毒性与肝细胞钙平衡

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第二军医大学学报 1997年第1期18卷 1-5页

作者：俞卫锋冯伟华俞凤珍魏尧梅郑唯强沙继宏第二军医大学东方肝胆外科医院麻醉科 200433 第二军医大学基础医学部生物化学教研室第二军医大学长海医院烧伤科第二军医大学基础医学部病理解剖学教研室第二军医大学基础医学部中心实验室

目的:研究卤代类吸入麻醉药肝毒性与肝细胞钙平衡的关系。方法：应用酶诱导缺氧大鼠模型、Ca(2＋)细胞化学定位法、EDX电镜微量元素分析、离体大鼠肝细胞及肝脏微粒体Ca(2＋)摄取及释放、肝脏显微病理的体视学分析及肝脏超微病理的电子... 详细信息

目的:研究卤代类吸入麻醉药肝毒性与肝细胞钙平衡的关系。方法：应用酶诱导缺氧大鼠模型、Ca(2＋)细胞化学定位法、EDX电镜微量元素分析、离体大鼠肝细胞及肝脏微粒体Ca(2＋)摄取及释放、肝脏显微病理的体视学分析及肝脏超微病理的电子计算机图像处理等技术，从生化及形态学角度探讨肝脏细胞钙平衡的改变在氟烷性肝炎发生发展中的重要作用，并与七氟醚进行对比研究，观察其与氟烷的异同。结果：在酶诱导缺氧条件下，吸入氟烷可造成明显的肝损害，而同样情况下吸入七氟醚则无明显肝损害。氟烷可致肝细胞胞浆及线粒体钙负荷增加。结论：提示肝细胞Ca(2＋)平衡的改变在氟烷性肝炎的发生发展中起着重要作用。七氟醚对肝细胞钙平衡影响较小．亦无明显肝毒性。

关键词：麻醉药氟烷七氟醚肝毒性钙平衡

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小鼠肺微血管内皮细胞磁珠分选法分离和原代培养

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中国组织工程研究与临床康复 2010年第50期14卷 9366-9369页

作者：孙振朕蔡在龙朱科明邓小明解放军第二军医大学长海医院麻醉科上海市200433 解放军第二军医大学长海医院中心实验室上海市200433

背景:肺组织的功能依赖于肺微血管内皮细胞的活性,因此肺微血管内皮细胞是相关研究的重要细胞模型,但目前国内多采用的组织块贴壁法培养所得的肺微血管内皮细胞常有其他细胞混杂。目的:建立一种有效分离、培养、扩增小鼠肺微血管内皮细... 详细信息

背景:肺组织的功能依赖于肺微血管内皮细胞的活性,因此肺微血管内皮细胞是相关研究的重要细胞模型,但目前国内多采用的组织块贴壁法培养所得的肺微血管内皮细胞常有其他细胞混杂。目的:建立一种有效分离、培养、扩增小鼠肺微血管内皮细胞的方法。方法:采用酶消化、免疫磁珠二次分选法分离纯化小鼠肺微血管内皮细胞,贴壁培养法体外扩增,CCK-8法测定细胞的生长情况,相差显微镜观察培养细胞的形态,透射电子显微镜观察细胞的超微结构,流式细胞仪对其表型进行鉴定。结果与结论:培养所得小鼠肺微血管内皮细胞具有典型的铺路石样形态学特征,含有大量内皮细胞特有的杆状细胞器Weibel-Palade小体,较稳定地表达内皮细胞特异性表面标记CD105,不表达淋巴管内皮细胞特异性表面标记血管内皮生长因子受体3。说明免疫磁珠二次分选法可成功分离纯化小鼠肺微血管内皮细胞,体外培养所获细胞纯度高、自我更新能力强,并保留了包括构成、表面抗原表达等特性。

关键词：免疫磁珠分离小鼠肺微血管内皮细胞细胞培养

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