目的建立一套较完备的eGFP基因标记细胞体内研究方法。方法(1)生产病毒:以磷酸钙沉淀法将携带eGFP的逆转录病毒质粒导入Phoenix-E包装细胞,收集36~72h的病毒上清。以批量快速病毒测定法(LaSRT)测定每批上清液中的病毒滴度。(2)感染靶细胞及克隆挑选:以2300rpm×30min,32℃离心感染P388细胞(美国IEC公司,IEC Thermo Centra GP8R),12h后更换为10%NBS的DMEM培养液,培养12h后再重复感染一次,48h后以荧光倒置显微镜和流式细胞仪(BD公司,FACS Cabilum)检测eGFP细胞比例。于96孔板中有限稀释法挑选eGFP单克隆P388-eGFP。(3)比较基因转染前后
暂无评论