检索结果-内蒙古大学图书馆

中国实用口腔科杂志 2016年第12期9卷 714-718页

作者：伍美玲刘安琪郭晓贺李蓓金岩轩昆军事口腔医学国家重点实验室、第四军医大学口腔医学院儿童口腔科陕西西安710032 第四军医大学口腔医院组织工程研发中心陕西西安710032

目的检测和分析冻干牙的机械性能以及生物相容性,探讨其作为牙再生支架材料的可行性。方法临床收集单根的多生牙及正畸拔除牙,通过牙体预备、脱脂、去蛋白、深冷冻、冷冻干燥、消毒灭菌等过程制备冻干牙;首先利用扫描电镜观察其表面形... 详细信息

目的检测和分析冻干牙的机械性能以及生物相容性,探讨其作为牙再生支架材料的可行性。方法临床收集单根的多生牙及正畸拔除牙,通过牙体预备、脱脂、去蛋白、深冷冻、冷冻干燥、消毒灭菌等过程制备冻干牙;首先利用扫描电镜观察其表面形态和微观结构,显微硬度测试其机械性能;进而将人乳牙牙髓干细胞(SHED)和冻干牙片进行复合培养,电镜观察细胞形态变化,Hoechst染色后观察SHED细胞数目的变化,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测冻干牙对SHED增殖活性的影响。结果经过冻干处理的牙根表面及髓腔清洁,并保持完整的牙齿微观结构;冻干牙的显微硬度和正常对照牙无显著差别;冻干牙片表面SHED黏附生长情况要优于正常牙片,此外活细胞数量与正常对照在培养18h时差异有统计学意义(P<0.05);而冻干牙对SHED增殖活性的影响低于与正常对照。结论制备的冻干牙不仅保持原有的形态结构和机械性能,并且与具有良好的生物相容性,是一种理想的牙再生支架材料。

关键词：冻干牙乳牙牙髓干细胞生物学性能

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炎症微环境通过低表达MORF激活UPR影响PDLSCs功能的机制研究

炎症微环境通过低表达MORF激活UPR影响PDLSCs功能的机制研究

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2016国际口腔及颅颌前沿研究研讨会暨全国口腔生物医学年会

作者：薛芃郭斌王勤涛金岩中国人民解放军总医院口腔医学中心第四军医大学口腔医院口腔牙周科陕西省重点实验室军事口腔医学国家重点实验室第四军医大学口腔医院组织工程中心军事口腔医学国家重点实验室

目的:从炎症来源的牙周组织中提取的牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)较正常牙周组织中干细胞呈现恶化的成骨分化能力。有研究表明牙周炎中未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)相关基因表达上调,证明... 详细信息

目的:从炎症来源的牙周组织中提取的牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)较正常牙周组织中干细胞呈现恶化的成骨分化能力。有研究表明牙周炎中未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)相关基因表达上调,证明牙周炎和内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ER stress)相关联。同时,组蛋白乙酰化与基因转录具有密切联系。慢性牙周炎能否引起ER stress的持续性激活,以及激活的ER stress对PDLSCs成骨分化产生何种影响至今没有明确报道。因此,本研究的目的是为了探讨慢性牙周炎症对ER stress持续性激活,对PDLSCs成骨分化的影响,以及探讨炎症微环境是否可以通过内质网应激在转录水平或者转录后水平层次上稳定调控PDLSCs的功能。研究方法:1、从正常和炎症来源的牙齿表面牙周膜组织中获得PDLSCs。使用透射电镜和实时定量PCR观察PDLSCs中内质网应激持续表达情况。2、使用实时定量PCR、蛋白质免疫印迹法以及茜素红染色法观察炎性因子短期和长期诱导PDLSCs产生内质网应激以及引起成骨分化异常的现象。3、使用实时定量PCR、蛋白质免疫印迹法以及茜素红染色法观察使用si RNA分别干扰UPR的三条通路后对PDLSCs成骨分化异常的影响;使用大鼠牙周炎模型验证。4、使用实时定量PCR筛选在两种来源PDLSCs中表达有差异的组蛋白乙酰转移酶,观察筛选出的酶对PDLSCs中内质网应激和UPR激活的可能作用。实验结果:1、炎症来源的PDLSCs中ER stress和UPR相关基因持续性激活。2、使用炎症因子模拟炎症微环境,短期炎症微环境对UPR表达起到一过性变化,长期炎症微环境可以持续性激活UPR同时降低PDLSCs成骨分化能力。3、UPR中三条通路在炎症微环境影响下均被激活,但是只有PERK通路在引起P-PDLSCs成骨分化异常中起到重要作用。4、乙酰转移酶家族中MORF在炎症来源PDLSCs中持续低表达,同时与UPR中PERK基因的启动子序列结合,通过转录抑制作用影响PERK启动子的转录活性。结论:1、首次发现内质网应激/UPR在P-PDLSCs表达激活且可以降低P-PDLSCs成骨分化功能。2、首次发现短期和长期炎症微环境对UPR的激活存在差异,长期炎症微环境通过低表达MORF持续激活内质网应激。3、首次发现UPR三条通路中的PERK通路对P-PDLSCs成骨分化能力异常起到重要作用。4、本研究结果总结如下图所示:炎症微环境通过降低MORF激活UPR影响PDLSCs功能

关键词：内质网应激非折叠蛋白反应炎症牙周膜干细胞成骨分化乙酰转移酶6B

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脱落乳牙牙髓干细胞聚合体再生牙髓实验研究

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中国实用口腔科杂志 2016年第12期9卷 719-724页

作者：张宇郭皓何小宁轩昆李蓓军事口腔医学国家重点实验室第四军医大学口腔医学院组织工程研发中心陕西西安710032 兰州军区西安军职以上退休干部休养所陕西西安710061

目的利用动物实验模型证明使用小型猪脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from minipig exfoliated deciduous teeth,SPED)聚合体进行原位牙髓再生的可行性。方法分离和培养SPED,检测和分析其细胞生物学行为,进而诱导制备SPED聚合体;建立年... 详细信息

目的利用动物实验模型证明使用小型猪脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from minipig exfoliated deciduous teeth,SPED)聚合体进行原位牙髓再生的可行性。方法分离和培养SPED,检测和分析其细胞生物学行为,进而诱导制备SPED聚合体;建立年轻恒牙牙髓坏死的小型猪动物模型,设置SPED聚合体再生组和传统根尖诱导成形治疗组;术后4个月进行常规组织学取材,利用HE、免疫荧光染色等方法观察牙髓再生和牙根尖形成情况。结果 SPED聚合体再生组受试牙齿组织学HE染色检测发现,牙根继续发育并形成正常的根尖形态,此外全长根管内可见类牙髓结构的再生组织,免疫荧光染色可见组织中CGRP、TRPV1、TRPM8表达阳性细胞的规则分布;而传统根尖诱导成形治疗组受试牙齿仅在根管内形成不规则的钙化组织,未见牙髓组织形成。结论 SPED聚合体在小型猪体内可以实现牙髓再生,同时再生牙髓具有正常组织学形态,而且具有牙本质形成和诱导根尖形成的生理功能。

关键词：人脱落乳牙牙髓干细胞细胞聚合体牙髓再生

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大鼠牙周膜干细胞分离、培养及应用的研究进展

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口腔生物医学 2016年第1期7卷 54-56页

作者：刘努李萌赵盼刘琪遵义医学院附属口腔医院牙周科贵州遵义563003 第四军医大学口腔医院组织工程研究中心军事口腔医学国家重点实验室陕西西安710032

大鼠牙周膜干细胞的分离、培养方法与人牙周膜干细胞有着不同之处,分离、培养大鼠牙周膜干细胞存在磨牙小、牙周膜组织来源少以及拔牙困难等难点。然而,在基础研究中,大鼠牙周炎模型的建立应用广泛,分离、培养大鼠牙周膜干细胞用以探讨... 详细信息

大鼠牙周膜干细胞的分离、培养方法与人牙周膜干细胞有着不同之处,分离、培养大鼠牙周膜干细胞存在磨牙小、牙周膜组织来源少以及拔牙困难等难点。然而,在基础研究中,大鼠牙周炎模型的建立应用广泛,分离、培养大鼠牙周膜干细胞用以探讨牙周炎致病机制,明确机体内环境改变是否通过影响牙周膜干细胞的生物学性能导致牙周组织破坏严重与修复困难具有重要作用;另一方面,大鼠牙周膜干细胞分离、培养方法建立后,可以尝试从干细胞水平为治疗牙周病与促进牙周组织再生提供可靠的理论依据。因此,综述分离、培养大鼠牙周膜干细胞的可行方法有着十分重要的意义,有十分可观的应用前景。

关键词：牙周膜干细胞牙周炎大鼠

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BMP-7诱导成牙本质细胞相关蛋白在DPSCs中的研究

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实用口腔医学杂志 2015年第6期31卷 753-756页

作者：马娟朱瑞乔史小蕾徐辉金岩金磊南方医科大学金陵医院.南京军区南京总医院口腔科 210002 南京大学医学院附属金陵医院.南京军区南京总医院口腔科第四军医大学口腔医学院组织工程中心.军事口腔医学国家重点实验室

目的:检测成牙本质细胞相关功能性蛋白(DSPP、DMP-1、ALP)在BMP-7诱导前后的牙髓干细胞(dental pulp stenl cells,DPSCs)中的表达。方法:采用电镜观察、CCK8和细胞免疫化学染色的方法,观察经100 ng/ml BMP-7诱导后的DPSCs细胞形态、增... 详细信息

目的:检测成牙本质细胞相关功能性蛋白(DSPP、DMP-1、ALP)在BMP-7诱导前后的牙髓干细胞(dental pulp stenl cells,DPSCs)中的表达。方法:采用电镜观察、CCK8和细胞免疫化学染色的方法,观察经100 ng/ml BMP-7诱导后的DPSCs细胞形态、增殖和向成牙本质细胞方向分化的情况。结果:经BMP-7诱导的DPSCs形态无明显变化;BMP-7诱导后第7天细胞增殖比对照组减慢。DPSCs不表达或低表达DSPP、DMP-1和ALP经BMP-7诱导后,DSPP、DMP-1和ALP呈阳性表达。结论:DPSCs经BMP-7诱导后可以向成牙本质细胞方向分化。

关键词：牙本质涎磷蛋白牙本质基质蛋白碱性磷酸酶 BMP-7 DPSCs

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静压力对人牙周膜干细胞骨向分化能力的影响

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牙体牙髓牙周病学杂志 2015年第3期25卷 137-141,165页

作者：马小杰刘文佳杨振华申琳李彦浇金钫第四军医大学口腔医院军事口腔医学国家重点实验室正畸科陕西西安710032 第四军医大学口腔医院军事口腔医学国家重点实验室组织工程中心陕西西安710032

目的:观察静压力对人牙周膜干细胞(h PDLSCs)骨向分化能力的影响。方法:体外培养h PDLSCs,并将其随机分为4个组;置于压力加载装置内分别给予0(对照组)、20、100、200 k Pa的静压力刺激,连续加压6 h后分别采用Quantitative RT-PCR和Weste... 详细信息

目的:观察静压力对人牙周膜干细胞(h PDLSCs)骨向分化能力的影响。方法:体外培养h PDLSCs,并将其随机分为4个组;置于压力加载装置内分别给予0(对照组)、20、100、200 k Pa的静压力刺激,连续加压6 h后分别采用Quantitative RT-PCR和Western-blots法检测h PDLSCs的破骨细胞核因子KB受体活化因子配基(RANKL)及骨保护因子(OPG)的表达。结果:与对照组相比,当压力值为20 k Pa时,RANKL mRNA和蛋白的表达量变化不明显(P>0.05),但OPG的表达量明显升高(P<0.05),RANKL/OPG的比值明显降低(P<0.05);当压力值为100 k Pa时,RANKL mRNA和蛋白的表达量明显升高(P<0.05),但OPG的表达量降低(P<0.05),RANKL/OPG的比值明显升高(P<0.05);当压力值为200 k Pa时,RANKL、OPG mRNA和蛋白的表达量均明显降低(P<0.05),其中以RANKL下降的程度更加明显,RANKL/OPG的比值明显降低(P<0.05)。结论:持续的静压力作用可使h PDLSCs表达OPG和RANKL的水平发生明显变化,并具有力值依赖性。

关键词：静压力人牙周膜干细胞(hPDLSCs) RANKL/OPG

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Malassez上皮剩余对炎症牙周膜干细胞成骨能力的影响

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牙体牙髓牙周病学杂志 2015年第4期25卷 201-205页

作者：李彦浇刘文佳杨振华申琳马小杰金钫第四军医大学口腔医院军事口腔医学国家重点实验室正畸科陕西西安710032 第四军医大学口腔医院军事口腔医学国家重点实验室组织工程中心陕西西安710032

目的:研究人体组织Malassez上皮剩余对炎症组织来源的牙周膜干细胞成骨能力的影响。方法:分别从牙周炎患者及健康者的牙周组织中获得牙周膜细胞,并分别采用低密度法筛选纯化出炎症牙周膜干细胞;差速消化法获得Malassez上皮剩余。用流式... 详细信息

目的:研究人体组织Malassez上皮剩余对炎症组织来源的牙周膜干细胞成骨能力的影响。方法:分别从牙周炎患者及健康者的牙周组织中获得牙周膜细胞,并分别采用低密度法筛选纯化出炎症牙周膜干细胞;差速消化法获得Malassez上皮剩余。用流式细胞术对炎症牙周膜干细胞进行表型鉴定,相差显微镜观察Malassez上皮剩余形态,用transwell小室构建Malassez上皮剩余与炎症牙周膜干细胞的共培养体系。然后取小室的下层炎症牙周膜干细胞,用RT-PCR技术检测ALP和Runx-2 mRNA表达水平;ALP染色及茜素红染色观察其成骨分化能力的变化。结果:成功获得了炎症牙周膜干细胞和Malassez上皮剩余,并顺利构建共培养体系;经成骨诱导后,与Malassez上皮剩余共培养的炎症牙周膜干细胞与单独培养组相比,成骨相关基因ALP、Runx-2 mRNA水平均明显上调(P<0.05),ALP染色加深,形成的矿化结节也明显增多。结论:将炎症牙周膜干细胞与Malassez上皮剩余共培养后可使其成骨分化能力增强。

关键词：炎症牙周膜干细胞 Malassez上皮剩余共培养

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miR-21调控人骨髓间充质干细胞成骨分化的研究

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牙体牙髓牙周病学杂志 2015年第8期25卷 465-471页

作者：杨楠周威王光丁寅金岩解放军第309医院口腔科解放军91551部队门诊部军事口腔医学国家重点实验室陕西省口腔医学重点实验室第四军医大学口腔医院正畸科军事口腔医学国家重点实验室陕西省口腔医学重点实验室第四军医大学口腔医院组织工程中心

目的:观察miR-21在人骨髓间充质干细胞(h BMMSCs)成骨分化过程中的表达。方法:通过转染使h BMMSCs过表达或抑制miR-21后,分别采用ALP染色、茜素红染色观察各组ALP活性和钙化结节的表达形成量;并采用Real time RT-PCR、Western blot检测... 详细信息

目的:观察miR-21在人骨髓间充质干细胞(h BMMSCs)成骨分化过程中的表达。方法:通过转染使h BMMSCs过表达或抑制miR-21后,分别采用ALP染色、茜素红染色观察各组ALP活性和钙化结节的表达形成量;并采用Real time RT-PCR、Western blot检测各组成骨相关基因Runxz、osterixmRNA及其蛋白的表达水平,以观察miR-21对h BMMSCs体外成骨分化的调控作用。将表达不同水平miR-21的各组h BMMSCs与HA/TCP复合后植入裸鼠皮下,8周后取材,采用HE染色和Masson三色染色观测各组类骨质的形成量。结果:miR-21在h BMMSCs成骨过程中表达量较对照组明显升高(P<0.05)。过表达miR-21能促进h BMMSCs体外成骨分化及体内的异位成骨能力;而抑制miR-21则能降低h BMMSCs体外成骨分化及体内的异位成骨能力。结论:miR-21可外调控h BMMSCs成骨分化,在骨形成过程发挥作用。

关键词： miR-21 骨髓间充质干细胞(h BMMSCs) 成骨分化

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TNF-α通过NF-κB信号通路对人牙周膜干细胞成骨分化调控作用的研究

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口腔生物医学 2015年第3期6卷 124-128页

作者：陈小燕丁寅金岩浙江大学医学院附属口腔医院正畸科浙江杭州310006 第四军医大学口腔医院正畸科军事口腔医学国家重点实验室陕西西安710032 第四军医大学口腔医院组织工程研究中心军事口腔医学国家重点实验室陕西西安710032

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)通过激活核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路调控其对人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)成骨分化的影响。方法:通过组织块法体外分离培养健康牙周膜来源的PDLSCs;在h PDLSCs的正常培养液、成骨诱导培养液中分别加入10 ng/m L的TNF-α,通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和茜素红染色定量检测其成骨分化功能的改变,采用实时定量RT-PCR和Western bolt检测成骨相关基因的表达和NF-κB信号通路相关因子表达差异。将NF-κB信号通路抑制剂BAY 11-7082加入含有TNF-α的h PDLSCs成骨诱导培养液中,检测h PDLSCs生物学特性改变。结果:在一定浓度TNF-α刺激下,h PDLSCs的成骨分化能力减弱;同时,TNF-α能激活NF-κB信号通路,从而抑制h PDLSCs的成骨分化作用,而BAY 11-7082能逆转其抑制成骨作用。结论:炎症因子TNF-α能通过调控NF-κB信号通路调节h PDLSCs的成骨分化作用。

关键词：牙周膜干细胞肿瘤坏死因子-α 核转录因子-κB信号通路成骨分化

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体外传代对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响

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口腔生物医学 2015年第3期6卷 143-149页

作者：苏晓霞廖立金岩周洪西安交通大学医学院附属口腔医院正畸科陕西西安710004 第四军医大学口腔医院组织工程研究中心军事口腔医学国家重点实验室陕西西安710032

目的:观察人脐带间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cells,h UCMSCs)体外长期传代扩增后形态表型、增殖及分化特性的变化。方法:分别以双酶消化及组织块法分离培养h UCMSCs;细胞传至18代(P18),观察细胞形态... 详细信息

目的:观察人脐带间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cells,h UCMSCs)体外长期传代扩增后形态表型、增殖及分化特性的变化。方法:分别以双酶消化及组织块法分离培养h UCMSCs;细胞传至18代(P18),观察细胞形态、生长曲线、克隆形成、细胞周期、干细胞表型、多向分化能力的变化,全面评测连续传代对h UCMSCs生物学特性的影响。结果:双酶消化结合组织块法可高效分离获得大量h UCMSCs,细胞稳定传代并保持间充质干细胞特性;早期细胞多呈长梭形或纺锤形,至P18时呈多角不定型且细胞体积变大,胞浆增加明显。传代至P18后,h UCMSCs的群体倍增时间增加至60 h以上,绝大多数细胞处于G0/G1期,且成纤维细胞集落形成单位(colony-forming unit-fibroblast,CFU-F)形成降低,克隆集落减小。h UCMSCs可表达且不因持续传代丢失间充质干细胞标记,但仅早期传代细胞表达多能干细胞标记Oct-4及SSEA-4。特异性染色及相关基因表达检测提示P18 h UCMSCs的成脂肪、成软骨及成骨诱导分化能力较早期传代细胞减弱。结论:h UCMSCs是具备高增殖活性和多向分化特性的间充质干细胞群,体外长期传代扩增的h UCMSCs呈现一定的复制性衰老趋势,但不会丢失干性,可稳定表达间充质干细胞特异性表面标记并保持分化活性。

关键词：人脐带间充质干细胞体外传代增殖分化

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