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中华口腔医学杂志 2024年第7期59卷 681-689页

作者：杨建花何小宁刘治王文哲李蓓第四军医大学口腔医院口腔组织病理学教研室、口颌系统重建与再生全国重点实验室、国家口腔疾病临床医学研究中心、陕西省口腔疾病国际联合研究中心西安710032 第四军医大学口腔医院口腔正畸科、口颌系统重建与再生全国重点实验室、国家口腔疾病临床医学研究中心、陕西省口腔疾病临床医学研究中心西安710032

目的探究甲氨蝶呤载药囊泡对小鼠实验性牙周炎的治疗作用。方法分离人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)的细胞外囊泡(EVs)。构建甲氨蝶呤(MTX)载药囊泡(MTX-EVs)并通过扫描电镜及动态光散射仪(DLS)对构建的载药囊泡进行形态大小分析,通过蛋白... 详细信息

目的探究甲氨蝶呤载药囊泡对小鼠实验性牙周炎的治疗作用。方法分离人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)的细胞外囊泡(EVs)。构建甲氨蝶呤(MTX)载药囊泡(MTX-EVs)并通过扫描电镜及动态光散射仪(DLS)对构建的载药囊泡进行形态大小分析,通过蛋白质印迹法对其表面特异性蛋白进行鉴定。选取4~5周C57BL/6J雄性小鼠,其中通过盲抓法随机抽取8只不做处理,正常饲养作为对照组(由第四军医大学实验动物中心提供),其余小鼠利用脂多糖(LPS)(2 g/L,5μl)牙周局部注射诱导小鼠牙周炎模型,间隔1天注射1次,诱导2周。将成功诱导牙周炎模型小鼠通过盲抓法随机分为4组,每组8只。分别为LPS组、LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组。牙周局部治疗2周后,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测牙龈组织炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的质量浓度。通过显微CT(micro-CT)、HE染色评估对照组、LPS组、LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组小鼠的牙槽骨吸收情况。流式细胞仪分析牙龈组织中γ干扰素(IFN-γ)阳性细胞的占比。结果扫描电镜结果显示EVs和MTX-EVs呈圆形或椭圆形,DLS粒径分析证明EVs粒径在200 nm左右,MTX-EVs粒径在300 nm左右。ELISA结果显示,对照组、LPS组、LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组IL-1β质量浓度分别为(28.86±2.76)、(51.50±2.04)、(35.26±2.40)、(45.49±2.04)、(35.77±3.49)ng/L;LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组IL-1β质量浓度均显著低于LPS组(均P<0.05);LPS+MTX-EVs组IL-1β质量浓度显著低于LPS+EVs组(P<0.05)。对照组、LPS组、LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组IL-6质量浓度分别为(125.44±4.12)、(221.64±10.59)、(178.16±16.90)、(181.09±18.22)、(170.15±9.04)ng/L;LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组IL-6质量浓度均显著低于LPS组(均P<0.05);LPS+MTX-EVs组IL-6质量浓度显著低于LPS+EVs组和LPS+MTX组(均P<0.05)。对照组、LPS组、LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组TNF-α质量浓度分别为(320.27±38.68)、(479.62±40.94)、(342.18±25.89)、(415.88±12.01)、(325.75±30.83)ng/L;LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组TNF-α质量浓度均显著低于LPS组(均P<0.05);LPS+MTX-EVs组TNF-α质量浓度显著低于LPS+EVs组及LPS+MTX组(均P<0.05)。micro-CT扫描结果显示,对照组、LPS组、LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组小鼠右上颌第一磨牙第一牙根处釉质子骨质界到牙槽嵴顶的距离分别为(0.11±0.03)、(0.28±0.02)、(0.23±0.03)、(0.20±0.04)、(0.18±0.03)mm,与LPS组相比,LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组骨吸收均得到不同程度的抑制,差异均有统计学意义(均P<0.05),其中LPS+MTX-EVs组与LPS+MTX组及LPS+EVs组相比,骨吸收抑制效果最好,且差异均有统计学意义(均P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,LPS组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组IFNγ阳性细胞占比分别为(11.77±1.02)%、(6.87±0.65)%及(4.15±0.92)%,LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组中IFN-γ阳性细胞占比均显著低于LPS组(均P<0.05),LPS+MTX-EVs组中IFN-γ阳性细胞占比显著低于LPS+EVs组(P<0.05)。结论MTX-EVs可有效改善牙周炎模型小鼠牙周局部炎症环境,减少小鼠牙槽骨骨吸收。

关键词：牙周炎细胞外囊泡甲氨蝶呤载药囊泡牙槽骨质丢失促炎因子

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基于单细胞测序分析颌骨和长骨间充质干细胞特性差异

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中华口腔医学杂志 2024年第3期59卷 247-254页

作者：王浩周泽楷隋秉东金钫周峻郑晨曦第四军医大学口腔医院口腔组织病理学教研室、口颌系统重建与再生全国重点实验室、国家口腔疾病临床医学研究中心、陕西省口腔疾病国际联合研究中心西安710032 第四军医大学基础医学院西安710032 第四军医大学口腔医院口腔正畸科、口颌系统重建与再生全国重点实验室、国家口腔疾病临床医学研究中心、陕西省口腔疾病临床医学研究中心西安710032

目的研究颌骨和长骨全骨髓细胞组成并比较下颌骨来源间充质干细胞(M-MSC)与股骨来源间充质干细胞(F-MSC)异质性,探讨不同谱系来源骨间充质干细胞(MSC)的功能特性差异。方法对文献中下颌骨与股骨全骨髓单细胞RNA测序(scRNA-seq)数据集,使... 详细信息

目的研究颌骨和长骨全骨髓细胞组成并比较下颌骨来源间充质干细胞(M-MSC)与股骨来源间充质干细胞(F-MSC)异质性,探讨不同谱系来源骨间充质干细胞(MSC)的功能特性差异。方法对文献中下颌骨与股骨全骨髓单细胞RNA测序(scRNA-seq)数据集,使用R语言的Seurat包进行数据处理,参考既往文献报道标记基因对亚群进行细胞注释。计算M-MSC与F-MSC的差异表达基因,并对MSC与其他亚群间的相互作用进行细胞通讯分析。分别对上下调差异基因进行基因本体功能注释(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,并对M-MSC和F-MSC的所有基因进行基因集富集分析(GSEA)。结果scRNA-seq分析显示下颌骨与股骨骨髓细胞组成相同,但特定细胞亚群所占比例存在差异。差异基因计算显示M-MSC和F-MSC间存在显著差异基因。细胞通讯分析显示M-MSC和F-MSC与骨髓其他细胞亚群相互作用的配受体对数存在差异。进一步GO、KEGG、GSEA分析显示相比于F-MSC,M-MSC具有更高的细胞外基质生成潜能,但对骨髓其他细胞,尤其是免疫细胞的调控能力较低。结论M-MSC和F-MSC在基因表达模式与上调信号通路上存在较大差异,这些差异可能与颌骨和长骨发育来源以及功能特性不同密切相关。

关键词：干细胞骨髓间充质干细胞单细胞RNA测序下颌骨股骨

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Piezo 1/PI3K/AKT轴介导巨噬细胞力学响应促进颅骨再生

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牙体牙髓牙周病学杂志 2024年第11期29卷 629-636页

作者：陶地豪程佳宇杨建花何小宁李蓓口颌系统重建与再生全国重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心陕西省口腔疾病国际联合研究中心第四军医大学口腔组织病理学教研室陕西西安710032

目的:研究细胞外基质(ECM)黏弹性力学微环境调控巨噬细胞(Mφ)功能促进颅骨再生的机制。方法:采用海藻酸盐-钙盐离子交联体系构建快松弛(Fast)及慢松弛(Slow)两种黏弹性水凝胶,将体内分离的骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)在水凝胶上培养后植... 详细信息

目的:研究细胞外基质(ECM)黏弹性力学微环境调控巨噬细胞(Mφ)功能促进颅骨再生的机制。方法:采用海藻酸盐-钙盐离子交联体系构建快松弛(Fast)及慢松弛(Slow)两种黏弹性水凝胶,将体内分离的骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)在水凝胶上培养后植入小鼠颅骨缺损,通过Micro-CT和组织学染色评估颅骨再生效果。RT-qPCR筛选介导细胞感知ECM力学变化的力学敏感离子通道,并使用其特异性激动剂和抑制剂进一步验证。而后将两组水凝胶上培养的Mφ进行转录组测序(RNA-seq),进一步探究离子通道感知ECM黏弹性力学变化调控Mφ的分子机制。结果:Fast、Slow两种水凝胶具有一致的压缩模量,且生物相容性良好。Fast水凝胶-Mφ复合体的植入成功实现了颅骨缺损的有效修复与再生。RT-qPCR的结果显示,Piezo 1离子通道在两组Mφ中高表达,且Fast组的表达量明显低于Slow组。当Piezo 1被GsMTx-4抑制或被Yoda1激动后,Mφ的炎症相关作用随之发生相应的变化。RNA-seq结果显示,KEGG通路富集以及GSEA富集分析提示PI3K/AKT信号通路在Fast组明显上调。当Piezo1被抑制或激动后,PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达量随之发生相应的变化。结论:Piezo 1/PI3K/AKT轴介导巨噬细胞力学响应促进颅骨再生,为临床骨缺损的治疗提供新策略。

关键词： Piezo 1 巨噬细胞颅骨再生 PI3K/AKT

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骨血管及其微环境调控造血和骨稳态的研究进展

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口腔医学 2023年第8期43卷 736-741页

作者：田炯义陈芊凝陈骥郑晨曦口颌系统重建与再生全国重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心陕西省口腔疾病国际联合研究中心第四军医大学口腔医院组织病理学教研室陕西西安710032 口颌系统重建与再生全国重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心陕西省口腔生物工程技术研究中心第四军医大学口腔医院种植科陕西西安710032 第四军医大学基础医学院陕西西安710032

造血和骨稳态维持是骨内重要的生理过程,受多种因素调控,其被破坏将导致造血功能障碍、骨质疏松等多种疾病。血管在骨中广泛分布,除了作为运送氧气、营养物质和废物的管道外,还在骨内多种生理病理过程中发挥重要作用。近年来研究发现,... 详细信息

造血和骨稳态维持是骨内重要的生理过程,受多种因素调控,其被破坏将导致造血功能障碍、骨质疏松等多种疾病。血管在骨中广泛分布,除了作为运送氧气、营养物质和废物的管道外,还在骨内多种生理病理过程中发挥重要作用。近年来研究发现,骨血管具有不同亚型,其分布和性质各不相同,并形成了特异的血管微环境。骨血管微环境由内皮细胞在内的多种细胞及其分泌的信号分子组成,通过多种方式参与调控骨髓造血和骨稳态维持。本文对骨血管的分布和分型、骨血管微环境的组成以及骨血管及其微环境对造血和骨稳态的调控进行综述,以期加深对骨血管及其微环境的认识,为相关疾病的治疗提供新的思路。

关键词：骨血管 H型血管骨血管微环境造血骨稳态

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CD80抗体修饰的MTX载药囊泡靶向CD80+巨噬细胞缓解慢性炎症性疾病

CD80抗体修饰的MTX载药囊泡靶向CD80+巨噬细胞缓解慢性炎症性疾病

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中华口腔医学会口腔生物医学专业委员会第14次口腔生物医学学术年会中华口腔医学会口腔病理学专业委员会第18次口腔病理学术年会

作者：杨建花张瀚丹王文哲尹琪琪何小宁陶地豪王晗哲刘文豪王一名董智伟陈鑫李蓓第四军医大学口腔组织病理学教研室口颌系统重建与再生全国重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心陕西省口腔疾病国际联合研究中心西安交通大学化学工程与技术学院高分子化学工程研究所陕西省能源化工过程强化重点实验室西安交通大学口腔医学院口腔颌面外科

目的:先天性免疫细胞和适应性免疫细胞之间的异常相互作用可以破坏组织稳态,从而导致慢性炎症性疾病,如类风湿关节炎（RA）和牙周炎（PD）。巨噬细胞作为初始免疫应答的重要组成部分,通过分泌TGF-β促进Treg细胞的生成,诱导免疫耐受,在... 详细信息

目的:先天性免疫细胞和适应性免疫细胞之间的异常相互作用可以破坏组织稳态,从而导致慢性炎症性疾病,如类风湿关节炎（RA）和牙周炎（PD）。巨噬细胞作为初始免疫应答的重要组成部分,通过分泌TGF-β促进Treg细胞的生成,诱导免疫耐受,在调节炎症中发挥关键作用。然而,目前还没有明确的治疗方法来重塑先天性免疫细胞和适应性免疫细胞之间的组织稳态。因此我们通过构建工程化的EVs（anti-CD80-MTX-EVs）,靶向CD80巨噬细胞进行细胞内MTX递送,通过上调TGF-β的表达,在精准调控CD80巨噬细胞抗炎转化的同时促进Treg细胞生成从而缓解慢性炎症性疾病。

关键词： MTX 工程化慢性炎症性疾病巨噬细胞

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