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乙型肝炎疫苗联合B7-H1蛋白疫苗对HBV转基因小鼠抗HBsAg免疫应答的影响

细胞与分子免疫学杂志 2012年第2期28卷 113-116页

作者：苏雯静张野刘博连建奇黄长形白雪帆第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心

目的:研究B7-H1蛋白疫苗对HBV转基因小鼠免疫应答的影响,探索治疗慢性乙型肝炎的新方法。方法:用不同剂量的乙型肝炎疫苗和B7-H1蛋白疫苗联合免疫HBV转基因小鼠,应用ELISA法检测转基因小鼠在不同时间点血清抗B7-H1抗体滴度,同时在免疫后... 详细信息

目的:研究B7-H1蛋白疫苗对HBV转基因小鼠免疫应答的影响,探索治疗慢性乙型肝炎的新方法。方法:用不同剂量的乙型肝炎疫苗和B7-H1蛋白疫苗联合免疫HBV转基因小鼠,应用ELISA法检测转基因小鼠在不同时间点血清抗B7-H1抗体滴度,同时在免疫后第14周末处死小鼠取脾细胞,检测不同的免疫方法对小鼠脾细胞产生HBsAg特异性Th1类细胞因子(IFN-γ及IL-2)、对HBsAg特异性分泌IFN-γT细胞数量及对小鼠淋巴细胞增殖的影响。结果:成功完成小鼠的免疫计划,5周起血清中即能测到B7-H1抗体,同一时间点各组之间的抗体滴度值并无明显差异。加B7-H1蛋白免疫各组与相同剂量单用HBsAg蛋白免疫各组相比:IL-2均明显减低(P<0.05),分泌IFN-γT的T细胞数量下降,但脾淋巴细胞分泌IFN-γ的水平各组间无明显差异;MTT法测定的淋巴细胞增殖能力各组间也无明显变化。结论:B7-H1蛋白疫苗可诱导HBV转基因小鼠产生明显的抗B7-H1抗体应答,但不能增强抗HBsAg的免疫应答。较小剂量的HBsAg即可引起HBV转基因小鼠Th1类细胞因子(IFN-γ及IL-2)的分泌以及淋巴细胞增殖。

关键词：乙型肝炎病毒转基因小鼠细胞因子程序性死亡因子1受体1 淋巴细胞增殖

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胞外体——免疫治疗中的“特洛伊木马”

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生理科学进展 2005年第2期36卷 113-118页

作者：牟丹蕾贾战生白雪帆第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心西安710038

胞外体是源于多种真核细胞的多泡体,通过后者与质膜融合释放到细胞外的一种膜性小囊泡,在多种生理过程中发挥作用。近年研究发现,由抗原提呈细胞分泌的胞外体富集MHCI/II类分子、协同刺激分子、热休克蛋白70和热休克蛋白90等多种生物活... 详细信息

胞外体是源于多种真核细胞的多泡体,通过后者与质膜融合释放到细胞外的一种膜性小囊泡,在多种生理过程中发挥作用。近年研究发现,由抗原提呈细胞分泌的胞外体富集MHCI/II类分子、协同刺激分子、热休克蛋白70和热休克蛋白90等多种生物活性分子于一身,像“特洛伊木马”一样,在体内外免疫调节中起关键作用。本文就胞外体的基本特征、生产纯化方法及其作为一种新型的亚细胞疫苗在抗肿瘤和抗病毒免疫中的应用前景予以综述。

关键词：胞外体免疫治疗抗原呈递细胞疫苗树突状细胞

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体外培养的嵌合体丙型肝炎病毒感染Huh7．5细胞的透射电镜观察

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第6期29卷 568-573页

作者：马南魏欣张野王平忠连建奇贾战生第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心西安710038

目的通过透射电子显微镜技术观察体外培养的嵌合体丙型肝炎病毒（HCV）感染Huh7．5细胞后胞内病毒颗粒的形态学特征及细胞内部超微结构的变化。方法将含有全长HCV嵌合基因组的质粒pFL-J6／JFH体外转录为HCVRNA，电穿孔转染至Huh7．5细... 详细信息

目的通过透射电子显微镜技术观察体外培养的嵌合体丙型肝炎病毒（HCV）感染Huh7．5细胞后胞内病毒颗粒的形态学特征及细胞内部超微结构的变化。方法将含有全长HCV嵌合基因组的质粒pFL-J6／JFH体外转录为HCVRNA，电穿孔转染至Huh7．5细胞，实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）测定培养上清中病毒数量；间接免疫荧光检测病毒蛋白的表达；收取转染后细胞培养上清感染原始Huh7．5细胞，制作超薄细胞切片，透射电子显微镜技术观察被感染细胞中病毒颗粒的形态学特征及细胞超微结构的变化。结果qRT-PCR显示不同时间点收取的转染后细胞培养上清中含有高水平的病毒量；间接免疫荧光显示病毒NSSA非结构蛋白高表达；透射电子显微镜观察到被感染的Huh7．5细胞内含有大量有包膜或无包膜的病毒样颗粒，细胞质内部分膜性细胞器增生，出现黄病毒科病毒感染后特征性结构及某种未知结构等。结论体外培养的嵌合体HCV具有HCV颗粒的形态学特征，并能够有效感染人源性肝细胞Huh7．5。

关键词：丙型肝炎病毒体外转录透射电子显微镜

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HFRS患者汉滩病毒核蛋白特异性T细胞克隆及其靶细胞的建立

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第8期24卷 600-605页

作者：王平忠白雪帆张颖黄长形第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心西安710038

目的　建立肾综合征出血热 (HFRS)患者汉滩病毒 (HTNV)核衣壳蛋白 (NP)特异性CTL克隆 ,为HTNVNPT细胞表位鉴定及HFRS患者T细胞免疫功能研究奠定基础。方法　采用Fi coll密度梯度离心法分离HFRS患者外周血单个核细胞 (PBMC) ,用灭活HTNV... 详细信息

目的　建立肾综合征出血热 (HFRS)患者汉滩病毒 (HTNV)核衣壳蛋白 (NP)特异性CTL克隆 ,为HTNVNPT细胞表位鉴定及HFRS患者T细胞免疫功能研究奠定基础。方法　采用Fi coll密度梯度离心法分离HFRS患者外周血单个核细胞 (PBMC) ,用灭活HTNV和IL 2体外刺激 ,有限稀释法建立T细胞克隆 ,流式细胞术鉴定克隆表型。并用EB病毒 (EBV)转化B淋巴细胞 ,建立B淋巴母细胞样细胞系 (B LCL) ,以含HTNVS基因的重组痘苗病毒感染B LCL作靶细胞 ,以CTL克隆作效应细胞进行细胞毒杀伤试验 ,测定T细胞克隆的抗原特异性。结果　T细胞克隆能特异性识别表达NP的B LCL。在 5名患者中 ,3名有较高的杀伤率 ,并自 2名患者建立了 5株HTNV特异性CTL克隆 ,其表型为CD8+ 均大于 6 0 %。结论　成功建立了HFRS患者HTNVNP特异性CTL克隆及其靶细胞。NP是HFRS患者HTNV特异性CTL应答的主要靶抗原之一。

关键词： HFRS 汉滩病毒核蛋白特异性T细胞克隆靶细胞 EBV 肾综合征出血热

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慢性HBV感染者外周血CD4^＋CD25^high调节性T细胞初步分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第10期28卷 885-890页

作者：刘清泉洪沙徐哲王进王平忠黄长形第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心西安710038

目的分析不同临床乙型肝炎病毒（HBV）慢性感染者外周血中CD4^＋CD25^high调节性T细胞（Treg）的水平及其与各种临床指标的关系。方法采集35例不同临床表现成年慢性HBV感染者（HBsAb^＋组5例、非活动肝炎组8例、活动肝炎组12例、免疫耐... 详细信息

目的分析不同临床乙型肝炎病毒（HBV）慢性感染者外周血中CD4^＋CD25^high调节性T细胞（Treg）的水平及其与各种临床指标的关系。方法采集35例不同临床表现成年慢性HBV感染者（HBsAb^＋组5例、非活动肝炎组8例、活动肝炎组12例、免疫耐受期组10例）及12例健康成人外周血标本，流式细胞仪分析外周血中CD4^＋CD25^highTreg含量，ELISA法检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb，RT—PCR法检测HBVDNA载量，同时进行肝脏生化功能检测，并进行统计学分析。结果HBV慢性感染者[（12．35±6．48）个／ul；（1．82±0．87）％）]及健康成人外周血标本[（8．91±3．11）个／ul，（1．35±0．39）％]中CD4^＋CD25^highTreg绝对计数和其占CD4^＋T细胞百分含量差异均无统计学意义（P〉0．05）；分组分析发现，免疫耐受期组CD4^＋CD25^highTreg占CD4^＋T细胞百分含量高于HBsAb^＋组、活动肝炎组及健康对照组（P〈0．05）；免疫耐受期组CD4^＋CD25^highTrge绝对计数高于健康对照组（P〈0．05）；余各组间差异无统计学意义（P〉0．05）。分析CD4^＋CD25^highTreg含量与临床指标间相关性发现，CD4^＋CD25^highTreg占CD4^＋T细胞百分含量与丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平呈负相关（r=-0．418，P=0．038），与CD4／CD8比值呈正相关（r=0．344，P=0．021），与HBVDNA水平无相关性（r=0．118，P〉0．05）；CD4^＋CD25^highTreg绝对计数与CD4／CD8比值呈正相关（r=0．360，P=0．015），与ALT水平及HBVDNA水平无相关性（r=-0．211，r=0．060，P〉0．05）。结论CD4^＋CD25^highTreg在HBV慢性感染的免疫发病机制中可能发挥一定作用。

关键词：慢性HBV感染 CD4^+CD25^high调节性T细胞免疫耐受

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趋化因子RANTES和SDF-1细胞内共表达抑制HIV-1感染的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第1期24卷 64-66页

作者：白雪帆张颖王平忠孙永涛黄长形聂青和第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心西安710038

目的　观察HIV 1辅受体CCR5和CXCR4的配体在细胞内共表达抑制HIV 1感染的作用。方法　应用磷酸钙沉淀法共转染HIV 1辅受体及其配体的质粒 ,制成辅受体表型剔除的靶细胞 ,与转染HIV 1膜蛋白质粒的细胞混合 ,观察合胞体形成并记数 ;脂质... 详细信息

目的　观察HIV 1辅受体CCR5和CXCR4的配体在细胞内共表达抑制HIV 1感染的作用。方法　应用磷酸钙沉淀法共转染HIV 1辅受体及其配体的质粒 ,制成辅受体表型剔除的靶细胞 ,与转染HIV 1膜蛋白质粒的细胞混合 ,观察合胞体形成并记数 ;脂质体介导法将含有报告基因CAT而缺失HIV包膜蛋白的质粒与HIV包膜蛋白质粒共转染 2 93细胞 ,包装成具有一次感染活性的假病毒 ,感染转化pCMV R K S K、pCMV R K、pCMV S K或pCMV的PM 1细胞 ,采用同位素薄层层析分析法检测CAT活性。结果　pCMV R K S K转染可以显著抑制M及T嗜性HIV膜蛋白诱导的合胞体形成 ;CAT检测发现与pCMV转染组相比 ,当两种嗜性重组病毒感染pCMV R K S K转染组PM 1细胞时 ,仅检测到背景水平的CAT活性。结论　HIV 1辅受体CCR5 CXCR4表型剔除可以明显抑制M和T嗜性HIV

关键词： HIV-1 辅受体趋化因子融合表达载体合胞体报告基因磷酸钙沉淀法基因治疗

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丙氨酸氨基转移酶持续正常的慢性丙型肝炎病毒感染的研究进展

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中华肝脏病杂志 2005年第1期13卷 70-71页

作者：黄长形白雪帆第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心西安710038

丙型肝炎病毒(HCV)感染极易慢性化,研究表明,约有20%～30%的HCV慢性感染患者丙氨酸氨基转移酶(ALT)持续正常,临床症状缺失或非常轻微.所谓ALT持续性正常,即为在6个月内间断1个月以上复查3次,ALT均在正常范围以内.对于此类患者是否进行... 详细信息

丙型肝炎病毒(HCV)感染极易慢性化,研究表明,约有20%～30%的HCV慢性感染患者丙氨酸氨基转移酶(ALT)持续正常,临床症状缺失或非常轻微.所谓ALT持续性正常,即为在6个月内间断1个月以上复查3次,ALT均在正常范围以内.对于此类患者是否进行抗病毒治疗一直存在争议[1,3].现就ALT持续性正常HCV感染的自然病史、肝脏病理变化、病毒载量、免疫反应和抗病毒疗效的研究进展进行概述.

关键词：正常 ALT 丙氨酸氨基转移酶慢性丙型肝炎病毒感染 HCV 患者研究进展缺失变化持续性

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RANTES和MIP-1α基因对HIV-1核酸疫苗诱导免疫应答的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第8期24卷 662-665页

作者：王福祥孙永涛孙永年张颖王临旭张岩白雪帆黄长形第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心西安710038

目的　研究RANTES(活化T细胞调节的、正常T细胞表达和分泌的分子 )、MIP 1α(巨噬细胞炎症蛋白 1α)基因对HIV 1核酸疫苗诱导免疫应答的影响 ,以探求HIV 1核酸疫苗的新策略。方法　pCI neoGAG联合RANTES、MIP 1α基因或者pCI neoGAG单... 详细信息

目的　研究RANTES(活化T细胞调节的、正常T细胞表达和分泌的分子 )、MIP 1α(巨噬细胞炎症蛋白 1α)基因对HIV 1核酸疫苗诱导免疫应答的影响 ,以探求HIV 1核酸疫苗的新策略。方法　pCI neoGAG联合RANTES、MIP 1α基因或者pCI neoGAG单独免疫BALB c小鼠 ,采用ELISA检测免疫小鼠的特异性抗体和IFN γ水平 ,以MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖 ,用乳酸脱氢酶 (LDH)试验检测小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)的应答。结果　与pCI neoGAG免疫组比较 ,pCI neoGAG联合RANTES、MIP基因免疫组小鼠血清的抗HIV 1p2 4抗体滴度升高 ,IFN γ升高 ,小鼠的脾淋巴细胞增殖实验刺激指数 (SI)以及特异性CTL活性均高 ,差异都有显著性 (P <0 .0 1)。结论　RANTES、MIP 1α基因联合HIV 1核酸疫苗免疫小鼠 ,可能增强特异性TH1细胞和CTL反应 ,RANTES、MIP 1α基因对体液免疫有加强作用。因此 ,RANTES、MIP 1α基因对于HIV 1核酸疫苗是具有较好应用前景的免疫佐剂。

关键词： RANTES MIP-1α基因 HIV-1核酸疫苗免疫应答淋巴细胞

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汉滩病毒核衣壳蛋白C-端T细胞表位鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第5期24卷 393-396页

作者：王平忠白雪帆黄长形第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心西安710038

目的　鉴定汉滩病毒核衣壳蛋白 (HTNVNP)C 端T细胞表位 ,为肾综合征出血热(HFRS)发病机理、疫苗研制及抗病毒免疫反应研究奠定基础。方法　采用Ficoll密度梯度离心法分离HFRS恢复期患者外周血单个核细胞 (PBMC)。用IFN γELISPOT实验和... 详细信息

目的　鉴定汉滩病毒核衣壳蛋白 (HTNVNP)C 端T细胞表位 ,为肾综合征出血热(HFRS)发病机理、疫苗研制及抗病毒免疫反应研究奠定基础。方法　采用Ficoll密度梯度离心法分离HFRS恢复期患者外周血单个核细胞 (PBMC)。用IFN γELISPOT实验和T细胞增殖实验 ,测试 7名患者PBMC对 2 3条NPC 端合成多肽的T细胞应答。结果　IFN γELISPOT实验结果表明 ,2名供体(3、4 )可分别检测到对 5 1、70号 2条多肽特异性T细胞应答。在供体 3,70号肽特异性T细胞频率为4 5SFC 10 6 PBMC ;在供体 4 ,5 1号肽特异性T细胞频率为 82SFC 10 6 PBMC。T细胞增殖实验与ELISPOT结果基本一致 ,但 5 3号肽和 6 4号肽还可分别刺激供体 1和供体 4的T细胞增殖 ,而未能诱导IFN γ分泌。结论　 5 1号和 70号多肽可能是NPC 端较强的T细胞表位。

关键词：汉滩病毒核衣壳蛋白 T细胞表位肾综合征出血热 HFRS 免疫原性

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乙型肝炎病毒adr型C区突变调节人类白细胞抗原-I的表达

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中华肝脏病杂志 2007年第1期15卷 24-27页

作者：王九平王平忠李军潘蕾张颖李新红王临旭陈伟红第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心西安710038

目的研究HBVadr型C区突变对机体HLA—I表达的调节机制。方法构建HBVC区突变株L97、G87、V60的真核表达载体，转染HepG2细胞，检测转染细胞中HLA—I的表达以及抗原提呈相关基因LMP2、TAP1、tapasin的mRNA表达情况。结果各转染细胞株均能... 详细信息

目的研究HBVadr型C区突变对机体HLA—I表达的调节机制。方法构建HBVC区突变株L97、G87、V60的真核表达载体，转染HepG2细胞，检测转染细胞中HLA—I的表达以及抗原提呈相关基因LMP2、TAP1、tapasin的mRNA表达情况。结果各转染细胞株均能有效表达HBeAg，但表达量不同，野生株高于C区突变株；各转染细胞株均有HLA—I的表达，其中以L97突变株表达量最高ITAP1 mRNA表达上调，LMP2 mRNA及tapasin mRNA均未见明显表达。结论HBVC区突变株可降低HBeAg的表达，且均能维持甚至上调HLA—I的表达，TAP1 mRNA的表达上调可能是HLA—I表达增强的原因之一。

关键词：肝炎病毒乙型突变 HLA抗原

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