检索结果-内蒙古大学图书馆

中国现代医学杂志 2008年第9期18卷 1248-1250,1253页

作者：王平忠王九平王雅格陈延平徐哲白雪帆第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心陕西西安710038

目的了解肾综合征出血热(HFRS)患者不同病期和病型IL-8、IP-10和RANTES的水平变化及意义,为HFRS的发病机制研究提供资料。方法用酶联免疫(ELISA)方法定量测定35例HFRS患者和10例健康对照血清IL-8、IP-10和RANTES水平,ELISA仪读取结果,SP... 详细信息

目的了解肾综合征出血热(HFRS)患者不同病期和病型IL-8、IP-10和RANTES的水平变化及意义,为HFRS的发病机制研究提供资料。方法用酶联免疫(ELISA)方法定量测定35例HFRS患者和10例健康对照血清IL-8、IP-10和RANTES水平,ELISA仪读取结果,SPSS10.0统计学分析软件处理数据。结果不同病期的HFRS患者,IL-8、IP-10和RANTES的含量除恢复期外,其余各期均显著高于健康对照(P<0.05),其中以低血压期和少尿期最高。不同病型的HFRS患者,随病情加重,IL-8、IP-10和RANTES的含量亦相应增高,特别在重型和危重型患者3种趋化因子持续较高水平。各病型IL-8、IP-10和RANTES含量均显著高于健康对照(P<0.05)。结论检测HFRS患者血清趋化因子含量,对了解患者的病情进展、疾病严重程度以及机体的免疫状态和发病机制有一定意义。

关键词：肾综合征出血热汉坦病毒 IL-8 IP-10 RANTES

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Toll样受体4 siRNA表达载体的构建及其在体外对RAW264.7细胞TLR4的抑制效果

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第四军医大学学报 2007年第24期28卷 2209-2213页

作者：徐哲黄长形李羽王平忠任广立张岩刘清泉贾战生聂青和孙永涛白雪帆第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心陕西西安710038

目的:构建针对小鼠Toll样受体4(TLR4)的小干扰RNA(siRNA)表达载体,体外评价对RAW264.7细胞TLR4mRNA及蛋白水平的抑制效果;观察对TNF-α,MIP-2水平及p38-MAPK,ERK1/2磷酸化水平的影响.方法:根据siRNA设计原则并经BLAST比对,设计合成7条si... 详细信息

目的:构建针对小鼠Toll样受体4(TLR4)的小干扰RNA(siRNA)表达载体,体外评价对RAW264.7细胞TLR4mRNA及蛋白水平的抑制效果;观察对TNF-α,MIP-2水平及p38-MAPK,ERK1/2磷酸化水平的影响.方法:根据siRNA设计原则并经BLAST比对,设计合成7条siRNA双链复合体,体外退火后在T4连接酶作用下连接入重组载体pSilen-cerTM4.1-CMV neo plasmid,连接产物转化JMl09感受态细胞,筛选阳性克隆并提取重组体,行HindⅢ及BamHⅠ双酶切,酶切产物经聚丙稀酰胺凝胶电泳确定插入片段,测序鉴定;RT-PCR检测TLR4mRNA水平变化,间接免疫荧光及Western Blot检测TLR4蛋白水平变化;用LPS刺激转染细胞,观察TNF-α及MIP-2水平的变化,Western Blot检测p38-MAPK及ERK1/2磷酸化水平的变化.结果:双酶切及测序证实重组载体构建成功;体外实验表明,RAW264.7细胞中TLR4mRNA及蛋白水平均降低;TLR4siRNA抑制LPS对TNF-α及MIP-2表达的上调作用,LPS对p38-MAPK及ERK1/2的活化作用亦被TLR4siRNA下调.结论:TLR4siRNA表达载体在体外可下调RAW264.7细胞的TLR4表达,抑制丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路,对LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α及MIP-2的分泌有抑制作用,TLR4siRNA可望作为调控LPS信号通路的一个有效工具.

关键词： Toll样受体4 RNA 小分子干扰脂多糖类巨噬细胞

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用Gateway技术克隆并表达汉滩病毒G1蛋白ITAM样基序

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第四军医大学学报 2007年第15期28卷 1345-1348页

作者：牟丹蕾姜泓王英鹏李光玉潘蕾李新红王临旭张岩黄长形白雪帆第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心陕西西安710038

目的:克隆并表达汉滩病毒(HTNV)囊膜糖蛋白(G1)胞质区尾段ITAM样基序及其突变体.方法:采用RT-PCR方法,扩增HTNVG1蛋白ITAM样基序及其中2个保守酪氨酸残基突变基序编码基因,应用Gateway技术将目的基因克隆至pDESTTM15表达载体,在BL21-AI... 详细信息

目的:克隆并表达汉滩病毒(HTNV)囊膜糖蛋白(G1)胞质区尾段ITAM样基序及其突变体.方法:采用RT-PCR方法,扩增HTNVG1蛋白ITAM样基序及其中2个保守酪氨酸残基突变基序编码基因,应用Gateway技术将目的基因克隆至pDESTTM15表达载体,在BL21-AI中经L-阿拉伯糖诱导表达,免疫印迹确证融合蛋白的表达.结果:成功地构建了2个含汉滩病毒G1胞质区尾段ITAM样基序编码序列表达载体pDEST-ITAM-L,pDEST-ITAM和1个含保守酪氨酸残基突变的G1ITAM样基序编码序列表达载体pDEST-ITAM-YY-FF(Y615F,Y628F),并在大肠埃希杆菌中得到高效表达,免疫印迹证实目的蛋白与GST融合表达.结论:获得了3种与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合的G1ITAM样基序及其突变基序的重组蛋白,为进一步探讨HTNVG1蛋白ITAM样基序在HFRS免疫信号传递中的作用奠定了基础.

关键词：汉坦病毒囊膜糖蛋白类免疫受体酪氨酸活化基序

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RANTES-K慢病毒载体的构建及其慢病毒的产生和鉴定

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第四军医大学学报 2009年第3期30卷 247-250页

作者：孙利张颖黄长形张久聪连建奇张野魏欣孙永涛白雪帆第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心陕西西安710038

目的:构建含CC细胞内趋化因子(CC-intrakine,RANTES-K)基因的慢病毒载体,为研究I型人免疫缺陷病毒(HIV-1)感染的基因治疗奠定基础.方法:应用PCR技术,扩增目的基因片段RANTES-K,纯化后的PCR产物定向连接入pLenti6/V5-D-TOPO(载体,构建慢... 详细信息

目的:构建含CC细胞内趋化因子(CC-intrakine,RANTES-K)基因的慢病毒载体,为研究I型人免疫缺陷病毒(HIV-1)感染的基因治疗奠定基础.方法:应用PCR技术,扩增目的基因片段RANTES-K,纯化后的PCR产物定向连接入pLenti6/V5-D-TOPO(载体,构建慢病毒载体pLenti6/V5-R-K,并在293FT细胞中建立慢病毒株,最后转染HeLa细胞观察RANTES蛋白的表达.结果:成功构建了慢病毒载体pLenti6/V5-R-K,并证实RANTES蛋白可在人宫颈癌HeLa细胞系内表达.结论:慢病毒载体可介导CC-intrakine(RANTES-K)基因高效稳定转染HeLa细胞,可用于抗HIV-1感染的基因治疗.

关键词： HIV-1 趋化因子受体细胞内趋化因子慢病毒载体基因治疗

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HFRS患者汉滩病毒特异性CTL克隆靶细胞的建立及意义

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第四军医大学学报 2004年第7期25卷 637-640页

作者：王平忠白雪帆张颖黄长形李光玉第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心陕西西安710038

目的 :建立肾综合征出血热 (HFRS)患者汉滩病毒(HTNV)核衣壳蛋白 (NP)特异性CTL克隆的靶细胞 .方法 :采用Ficoll密度梯度离心法分离HFRS患者外周血单个核细胞(PBMC) ,并用EB病毒 (EBV)转化B淋巴细胞 ,建立B淋巴母细胞样细胞系 (B LCL) ... 详细信息

目的 :建立肾综合征出血热 (HFRS)患者汉滩病毒(HTNV)核衣壳蛋白 (NP)特异性CTL克隆的靶细胞 .方法 :采用Ficoll密度梯度离心法分离HFRS患者外周血单个核细胞(PBMC) ,并用EB病毒 (EBV)转化B淋巴细胞 ,建立B淋巴母细胞样细胞系 (B LCL) .然后 ,用含HTNVS基因的重组痘苗病毒 (rVV)转染B LCL ,间接免疫荧光 (IFA)检测NP的表达 ,并用HTNV特异性T细胞克隆对转染rVV的B LCL进行细胞毒杀伤实验 .结果 :B淋巴细胞经EBV感染 4wk左右 ,可形成B LCL .HTNV S基因在B LCL中能有效表达NP ,且能被HTNV特异性T细胞克隆识别 .结论 :成功建立了HFRS患者永生化B LCL .含HTNVS的基因重组痘苗病毒转染的B

关键词：肾综合征出血热汉坦病毒 CTL克隆 B淋巴母细胞样细胞系

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微载体黏附培养SD大鼠肝细胞的生物学特性

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第四军医大学学报 2004年第5期25卷 435-438页

作者：徐哲白雪帆滕光菊黄长形李羽第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心陕西西安710038

目的 :探讨微载体黏附培养SD大鼠肝细胞的生物学特性 .方法 :对胶原酶消化法分离获取的SD大鼠肝细胞行微载体黏附培养 ,在倒置显微镜及扫描电镜下观察肝细胞形态变化 ,采用CL 80 0全自动生化分析仪检测不同时间培养上清中白蛋白、乳酸... 详细信息

目的 :探讨微载体黏附培养SD大鼠肝细胞的生物学特性 .方法 :对胶原酶消化法分离获取的SD大鼠肝细胞行微载体黏附培养 ,在倒置显微镜及扫描电镜下观察肝细胞形态变化 ,采用CL 80 0全自动生化分析仪检测不同时间培养上清中白蛋白、乳酸脱氢酶 (LDH)和尿素的含量 .结果 :微载体黏附培养肝细胞的正常形态及白蛋白、尿素合成功能可维持 1wk以上 ,LDH漏出量、白蛋白及尿素水平 1wk内呈波动性变化 ,在培养第 3日白蛋白及尿素水平最高、LDH漏出量最低 .结论 :微载体培养可提供高活性、高密度生长的肝细胞 ,可望为肝细胞移植、生物型人工肝提供较理想的细胞材料 ;微载体培养肝细胞在培养第 3日功能最佳 ,可能为应用于肝细胞移植。

关键词：肝细胞培养微载体生物学特性

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治疗性克隆——面临的机遇与挑战

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第四军医大学学报 2005年第21期26卷 1921-1923页

作者：贾战生白雪帆第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心陕西西安710038

1 治疗性克隆概述治疗性克隆（therapeutic cloning）是体细胞核移植技术和最新的人胚胎干细胞技术结合的产物,将成为人类医疗历史上革命性的技术. 该技术首先应用患者体细胞,如皮肤细胞、骨髓间充质干细胞,作为核供体,移植入去核的人... 详细信息

1 治疗性克隆概述治疗性克隆（therapeutic cloning）是体细胞核移植技术和最新的人胚胎干细胞技术结合的产物,将成为人类医疗历史上革命性的技术. 该技术首先应用患者体细胞,如皮肤细胞、骨髓间充质干细胞,作为核供体,移植入去核的人卵母细胞,获得克隆胚胎;然后从克隆胚胎分离建立胚胎干细胞系;并将这些胚胎干细胞在一定条件下,诱导分化成所需要的各种类型的细胞用于治疗目的。[第一段]

关键词：治疗性克隆细胞核移植胚胎干细胞

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胞外体认识之新进展

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医学与哲学 2005年第12X期26卷 63-65页

作者：牟丹蕾白雪帆第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心陕西西安710038

胞外体是由多种细胞分泌的一种膜性小囊泡，参与多种生理及病理生理过程。近年研究发现，由抗原提呈细胞分泌的胞外体富集MHCⅠ/Ⅱ类分子、协同刺激分子、热休克蛋白70～90等多种生物活性分子于一身，在体内外免疫调节中起关键作用。就... 详细信息

胞外体是由多种细胞分泌的一种膜性小囊泡，参与多种生理及病理生理过程。近年研究发现，由抗原提呈细胞分泌的胞外体富集MHCⅠ/Ⅱ类分子、协同刺激分子、热休克蛋白70～90等多种生物活性分子于一身，在体内外免疫调节中起关键作用。就胞外体的基本特征及其作为一种新型的亚细胞疫苗在抗肿瘤和抗病毒免疫中的应用前景予以综述。

关键词：胞外体免疫治疗抗原呈递细胞树突状细胞

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不同缺失突变的丙型肝炎病毒核心蛋白基因在大肠杆菌中的表达

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第四军医大学学报 2006年第11期27卷 1018-1020页

作者：沈才飞白雪帆牟丹蕾黄长形第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心陕西西安710038

目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)全长及3种不同缺失突变的核心蛋白基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达.方法:用PCR方法扩增基因型为1b型的HCV核心蛋白的全长及3种不同缺失突变的基因片段,对应氨基酸分别为C573:1-191aa,C510:1-59aa+81-1... 详细信息

目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)全长及3种不同缺失突变的核心蛋白基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达.方法:用PCR方法扩增基因型为1b型的HCV核心蛋白的全长及3种不同缺失突变的基因片段,对应氨基酸分别为C573:1-191aa,C510:1-59aa+81-191aa,C507:1-169aa,C444:1-59aa+81-169aa.将其克隆到高效表达载体pRSETA中构成重组质粒(pRSETAC573,pRSETAC510,pRSETAC507,pRSETAC444),转化大肠杆菌BL21(DE3)***诱导表达6×His融合蛋白,表达产物经SDSPAGE及Westernblot检测和鉴定.结果:经酶切鉴定及测序证实全长及3种不同缺失突变的核心蛋白基因的原核表达载体构建正确.经SDSPAGE及Westernblot显示在Mr约为21×103,19×103,19×103,16.5×103处出现融合表达条带.融合蛋白的表达量约占菌体蛋白总量的20%.结论:全长及3种不同缺失突变的丙型肝炎病毒核心蛋白基因均在大肠杆菌中得到有效表达.

关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白突变原核表达

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艾滋病并发口腔白色念珠菌病和带状疱疹1例

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第四军医大学学报 2005年第21期26卷 2014-2015页

作者：张颖谢玉梅黄长形孙永涛第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心陕西西安710038

1 临床资料患者,女,65岁,山西运城人,于1 a前开始出现口腔糜烂,糜烂面有白色斑片,可擦除,伴口咽疼痛. 因1985-01/1995-01在当地多次卖血（单采血浆）,疑为人类免疫缺陷病毒（HIV）感染而行HIV 抗体检测,初筛试验为强阳性. 为求进一步诊... 详细信息

1 临床资料患者,女,65岁,山西运城人,于1 a前开始出现口腔糜烂,糜烂面有白色斑片,可擦除,伴口咽疼痛. 因1985-01/1995-01在当地多次卖血（单采血浆）,疑为人类免疫缺陷病毒（HIV）感染而行HIV 抗体检测,初筛试验为强阳性. 为求进一步诊治收入唐都医院全军感染病诊疗中心. 体格检查：T 36.4℃,P 120次/min,BP 12.5/7 kPa,消瘦,口腔内壁和舌面大面积糜烂,颊黏膜、舌背黏膜及咽后壁可见白色伪膜,边界尚清楚,擦去可见充血创面,触痛明显.

关键词：艾滋病白色念珠菌病带状疱疹

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