检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2006年第5期33卷 473-478页

作者：徐小洁张虎明李丁韩锋产张文红郭慧芳温冬青罗进阎小君康磊第四军医大学基因技术诊断研究所肿瘤生物学国家重点实验室西安710032

基于多肽设计合成技术建立了一个快速、高通量、自动化的多聚抗原肽微阵列分析平台.选取人巨细胞病毒(HCMV)的包膜糖蛋白B和被膜碱性磷酸蛋白PP150,幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)尿素酶(Ure)β亚基为靶蛋白,分析筛选出优势线性表... 详细信息

基于多肽设计合成技术建立了一个快速、高通量、自动化的多聚抗原肽微阵列分析平台.选取人巨细胞病毒(HCMV)的包膜糖蛋白B和被膜碱性磷酸蛋白PP150,幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)尿素酶(Ure)β亚基为靶蛋白,分析筛选出优势线性表位序列,Fmoc法固相合成上述线形表位的多聚抗原肽(MAPs),高效液相色谱仪(HPLC)纯化后,用机器人点样仪按一定的矩阵排列形式点印至硝酸纤维素膜上,2%的小牛血清封闭,塑料壳体封装制备成MAPs微阵列成品.随机抽样经质控血清鉴定后用于随机人群血清试验并与ELISA检测结果进行比较.筛选、合成并鉴定出4条MAPs.用该MAPs微阵列检测的Hp和HCMV阳性及阴性质控血清结果均与质控血清情况相符,120份随机血清检测结果与用重组抗原和病原微生物裂解物抗原包被的ELISA法检测结果相比具有较好的一致性,Ure-1、Ure-2和PP150三种MAPs的灵敏度和特异性均大于90%.MAPs微阵列片间质控试验结果变异系数小于7%,示重复性良好.MAPs微阵列是一种快速、高通量、自动化的分析平台,该平台在预防性疫苗的开发和蛋白质组学的研究中具有较大的前景.

关键词：多聚抗原肽多肽合成微阵列

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UreB蛋白B细胞抗原表位快速筛选与鉴定

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生物化学与生物物理进展 2006年第1期33卷 83-86页

作者：郭慧芳张文红温冬青韩锋产张虎明罗进阎小君第四军医大学全军基因诊断技术研究所国家肿瘤生物学重点实验室西安710032

以幽门螺旋杆菌(Helicobacterpylori,Hp)主要抗原蛋白尿素酶B(ureaseB,UreB)为靶蛋白,建立一种新的B细胞抗原表位筛选与鉴定方法.运用Fmoc固相肽合成法合成11条HpUreB蛋白的单表位抗原肽片段,在其氨基端标记FITC荧光素,应用荧光偏振方法... 详细信息

以幽门螺旋杆菌(Helicobacterpylori,Hp)主要抗原蛋白尿素酶B(ureaseB,UreB)为靶蛋白,建立一种新的B细胞抗原表位筛选与鉴定方法.运用Fmoc固相肽合成法合成11条HpUreB蛋白的单表位抗原肽片段,在其氨基端标记FITC荧光素,应用荧光偏振方法(fluorescencepolarization,FP)快速鉴定这些肽片段的抗原性,并通过FP法在大规模样品中快速筛选相应抗体滴度高、分布人群广的优势抗原表位肽.结果表明,合成的11条UreB蛋白线性抗原肽中,10条具有较强的抗原性,其中No.2、No.5和No.11抗原肽相应的特异性抗体在感染Hp的人群中分布较广,抗体滴度较高,为UreB的优势抗原表位肽.对抗原表位进行多参数综合分析与设计,通过FP技术快速鉴定抗原肽,并筛选优势抗原表位肽,对于疾病的抗原表位谱研究具有重要的意义,同时在疾病的诊断、分型及治疗中具有重要的应用前景.

关键词：抗原表位尿素酶B 抗原性鉴定筛选荧光偏振

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荧光偏振技术分析全血XPD基因单核苷酸多态性的研究

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分析化学 2010年第4期38卷 585-588页

作者：李丁张菊颜真张贺龙郭宴海刘文超李小惠李宏伟第四军医大学国家肿瘤生物学重点实验室药学系全军基因芯片重点实验室全军基因诊断技术研究所第四军医大学唐都医院肿瘤科第四军医大学西京医院肿瘤科

将荧光偏振与非对称基因扩增技术联用,建立了可用于检测全血XPD基因单核苷酸多态性的新方法。用不等量(1∶5)的XPD基因上、下游引物对含单核苷酸多态性位点的目的片段进行非对称扩增,再用两种单核苷酸多态性序列特异的荧光标记探针对扩... 详细信息

将荧光偏振与非对称基因扩增技术联用,建立了可用于检测全血XPD基因单核苷酸多态性的新方法。用不等量(1∶5)的XPD基因上、下游引物对含单核苷酸多态性位点的目的片段进行非对称扩增,再用两种单核苷酸多态性序列特异的荧光标记探针对扩增产物进行检测。由于扩增得到的单链片段能够与各自不同的荧光标记探针特异结合,使荧光标记分子的分子量增加,偏振值(FP)增高。通过检测增高的FP值,可确定目的片段单核苷酸多态性。采用本方法对98例全血的XPD基因第751位密码子进行了单核苷酸多态性分析,并与传统的荧光偏振检测方法进行了比较,取得满意结果。

关键词：单核苷酸多态性 XPD基因荧光偏振检测

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转录因子JunB在肝癌细胞中的表达、定位及其转录作用研究

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第1期26卷 5-8页

作者：王磊张瑞孟艳玲余桂戎王涛赵晶杨安钢第四军医大学肿瘤生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 第四军医大学肿瘤生物学国家重点实验室免疫学教研室陕西西安710032

目的:构建表达转录因子JunB的真核表达质粒,观察外源JunB分子在细胞中的表达、亚细胞定位及其对下游分子的转录调控作用。方法:采用PCR方法从人源肝cDNA文库中扩增JunB基因片段,克隆入T载体进行测序鉴定。而后将测序正确的基因片段分别... 详细信息

目的:构建表达转录因子JunB的真核表达质粒,观察外源JunB分子在细胞中的表达、亚细胞定位及其对下游分子的转录调控作用。方法:采用PCR方法从人源肝cDNA文库中扩增JunB基因片段,克隆入T载体进行测序鉴定。而后将测序正确的基因片段分别亚克隆入pcDNA3.1(-)和pEGFP-C3真核表达载体中,获得重组载体pcDNA-JunB和pEGFP-JunB。采用脂质体瞬时转染法分别将pEGFP-JunB和pcDNA-JunB导入肝癌细胞HepG2中,用Westernblot法观察外源JunB在肝癌细胞中的表达;用荧光显微镜观察其在细胞内的定位;用双荧光素酶报告基因检测法观察JunB对下游靶分子VEGF的转录调控作用。结果:分别构建表达转录因子JunB和增强型绿色荧光蛋白融合JunB分子的重组表达质粒,并经KpnI/BamHI双酶切鉴定正确。将重组表达质粒转染HepG2细胞后,经免疫印迹法和荧光显微镜检测,可见外源导入的JunB分子在细胞中成功表达并特异性定位定位于细胞核内。荧光素酶报告系统检测显示:JunB对VEGF分子在转录水平具有明显的激活作用。结论:成功构建了增强型绿色荧光蛋白基因和转录因子JunB基因融合表达的重组质粒。在肝癌细胞中观察到外源瞬时表达的JunB定位于细胞核中,提示其可能发挥转录因子的活性。报告基因结果显示其对肿瘤血管生成密切相关的分子VEGF发挥转录激活的作用,提示JunB分子有可能成为抑制肝癌血管生成的新靶点。

关键词： JunB 转录调控肝癌细胞 VEGF

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肝细胞膜特异性单克隆抗体mh7的制备和筛选

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中华肝脏病杂志 2010年第7期18卷 533-536页

作者：崔丽娜王敬博乔丽娟王学昌周新民韩英第四军医大学西京消化病医院肿瘤生物学重点实验室西安710032

目的制备和筛选在肝细胞膜特异性分布的单克隆抗体,并观察其与肝脏疾病的关系. 方法采用蔗糖与Percoll细胞分离液联合的密度梯度离心方法分离大鼠肝细胞膜膜小体,将提取的膜小体免疫BALB/c小鼠,利用单克隆抗体杂交瘤技术制备单克隆抗体... 详细信息

目的制备和筛选在肝细胞膜特异性分布的单克隆抗体,并观察其与肝脏疾病的关系. 方法采用蔗糖与Percoll细胞分离液联合的密度梯度离心方法分离大鼠肝细胞膜膜小体,将提取的膜小体免疫BALB/c小鼠,利用单克隆抗体杂交瘤技术制备单克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验及免疫组织化学方法检测抗体的效价及筛选在肝细胞膜特异性分布的单克隆抗体,利用免疫沉淀方法初步鉴定mh7抗原.选取四氯化碳损伤鼠模型及糖尿病模型鼠肝脏标本观察mh7抗原在病理状态下的表达变化并分析其病理意义. 结果应用蔗糖密度梯度离心方法成功提取到了大鼠肝细胞膜膜小体,免疫BALB/c小鼠后,制备了一批单克隆抗体.免疫组织化学结果显示,单克隆抗体mh7能特异性分布于肝细胞膜,同时在骨骼肌微血管内皮细胞亦有少量分布.免疫荧光及电镜结果亦显示mh7单克隆抗体特异性分布于肝细胞膜,从而证实mh7抗原为肝细胞膜特异性蛋白.mh7抗原相对分子质量约为200 000,且其抗原在四氯化碳损伤鼠肝细胞脂肪变性显著的区域表达明显低于其在正常区域的表达,在糖尿病模型鼠肝脏中的表达呈明显的区带分布. 结论我们获得了一株抗原表达在肝细胞膜,相对分子质量为200 000的特异性单克隆抗体,且该单克隆抗体的抗原仅在肝细胞膜及骨骼肌血管内皮细胞表达,并可能与肝脏疾病的发生密切相关.

关键词：肝细胞抗体,单克隆内皮细胞膜小体

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小鼠肝脏RNA编辑酶ADAR1 4种剪切体:克隆、表达及功能分析

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生物化学与生物物理进展 2006年第7期33卷 635-640页

作者：张德新赵澎涛赵青川罗晓星聂勇战苏映军杨静华 R.RABINOVICI 樊代明第四军医大学全军消化疾病研究所肿瘤生物学国家重点实验室西安710032 第四军医大学普通外科学系西安710032 第四军医大学药理学系西安710032 Department of Surgery Yale School of MedicineNew HavenConnecticutUSA

RNA编辑是DNA转录为RNA后遗传信息发生改变的一种方式.A-to-IRNA编辑酶ADAR1(adenosinedeaminasethatactsonRNA1)具有将pre-mRNA中特定的腺嘌呤核苷转变为次黄嘌呤核苷的功能.通过RT-PCR技术从小鼠肝脏组织中克隆了小鼠A-to-IRNA编辑酶ADAR1的4种剪切体,采用荧光示踪技术研究其在细胞内定位,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建了ADAR1重组杆状病毒并在sf9昆虫细胞内将其进行了表达,最后对表达产物进行了活性鉴定.结果发现,小鼠ADAR1在小鼠肝脏组织中主要以4种剪切方式存在,分别命名为ADAR1-La\Lb和ADAR1-Sa\Sb.这4种ADAR1剪切体在细胞内分布有着明显的区别,ADAR1-La\Lb主要分布于胞浆,而ADAR1-Sa\Sb主要分布于细胞核及核仁.Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达的4种ADAR1剪切体蛋白的双链RNA编辑活性明显不同,提示各个ADAR1剪切体的底物识别和特异性RNA编辑功能可能有所不同.ADAR1剪切体的克隆和表达以及它们在细胞内定位和编辑活性的差异的发现为进一步研究其结构和功能的关系及寻找它们的新底物奠定了基础.

关键词： RNA编辑杆状病毒重组蛋白 ADAR1

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T淋巴细胞亚群与慢性乙型肝炎的关系

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中华肝脏病杂志 2012年第1期20卷 75-77页

作者：郑林华时永全韩英第四军医大学西京医院消化病医院肿瘤生物学国家重点实验室西安710032

慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者的外周血及肝组织内T淋巴细胞亚群组成发生了数量和质量上的改变，导致了细胞免疫的功能损伤，感染慢性化。深入探讨各种T淋巴细胞在HBV感染中的功能及变化，将为理解乙型肝炎巨陛化机制及临床治疗提供新... 详细信息

慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者的外周血及肝组织内T淋巴细胞亚群组成发生了数量和质量上的改变，导致了细胞免疫的功能损伤，感染慢性化。深入探讨各种T淋巴细胞在HBV感染中的功能及变化，将为理解乙型肝炎巨陛化机制及临床治疗提供新的思路和方向。

关键词：肝炎乙型慢性 T淋巴细胞亚群免疫治疗

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原发性硬化性胆管炎的临床诊治进展

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中华肝脏病杂志 2010年第5期18卷 329-331页

作者：韩英时永全第四军医大学匿京消化病医院、肿瘤生物学国家重点实验室西安710032

原发性硬化性胆管炎（primary sclerosing cholangitis,PSC）是一种以胆管的进行性炎症、纤维化和多发性狭窄为主要病理特征的慢性胆汁淤积性肝病,病变通常累及肝内胆管和肝外胆管.部分患者具备典型的淤胆表现和PSC病理学特征,但胆道造... 详细信息

原发性硬化性胆管炎（primary sclerosing cholangitis,PSC）是一种以胆管的进行性炎症、纤维化和多发性狭窄为主要病理特征的慢性胆汁淤积性肝病,病变通常累及肝内胆管和肝外胆管.部分患者具备典型的淤胆表现和PSC病理学特征,但胆道造影显示胆管正常,被定义为小胆管PSC.大部分PSC患者最终将演变为终末期肝病,约10%～30%的患者还可并发胆管癌.PSC的发病机制尚未阐明,可能与自身免疫功能紊乱、基因易感性以及胆管上皮细胞功能紊乱有关.

关键词：原发性硬化性胆管炎诊断治疗

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慢性肾脏病患者血清人附睾蛋白4与疾病进展的关系

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肾脏病与透析肾移植杂志 2016年第2期25卷 128-133页

作者：杨晓霞柏明刘丽敏张磊张玉明孙世仁第四军医大学第一附属医院肾内科西安710032 第四军医大学国家肿瘤生物学重点实验室

目的:探讨人附睾蛋白4(HE4)在慢性肾脏病(CKD)患者血清中的表达水平及其与CKD进展的关系。方法:前瞻性收集了112例CKD患者的临床资料及血清标本,用酶联免疫吸附(ELISA)法对血清HE4水平进行检测。结果:CKD组血清HE4明显高于正常对照组[(8... 详细信息

目的:探讨人附睾蛋白4(HE4)在慢性肾脏病(CKD)患者血清中的表达水平及其与CKD进展的关系。方法:前瞻性收集了112例CKD患者的临床资料及血清标本,用酶联免疫吸附(ELISA)法对血清HE4水平进行检测。结果:CKD组血清HE4明显高于正常对照组[(82.42±46.29)pmol/L vs(29.85±15.18)pmol/L,P<0.001]。CKD各分期之间血清HE4的表达水平有显著差异(P<0.01),但在各病因之间血清HE4水平差异无统计学意义(P>0.05)。HE4表达水平与估算的肾小球滤过率(e GFR)呈负相关(r=-0.712,P<0.001),与患者年龄、肌酐、尿素氮、胱抑素C及肾间质纤维化的比例呈正相关(r=0.377,r=0.476,r=0.561,r=0.612,r=0.487,P<0.01)。生存曲线分析表明循环中较高水平的HE4与较低的肾脏存活率相关。多因素分析可知,血清HE4水平为CKD独立的预后因子(HR=1.032,P=0.001)。结论:血清中高表达的HE4与CKD患者的肾脏不良预后相关,表明HE4可能是CKD进展的一个血清生物学标志物。

关键词：慢性肾脏病人附睾蛋白4 血清预后

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重组腺病毒介导的转录因子Runx3在神经胶质瘤细胞中的表达及其亚细胞定位

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第10期25卷 866-869页

作者：白文栋张瑞孟艳玲曹云新王涛赵晶杨安钢第四军医大学国家肿瘤生物重点实验室第四军医大学免疫学教研室陕西西安710032 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032

目的:制备含有融合Flag标签的Runx3基因的复制缺陷型重组腺病毒,感染神经胶质细胞瘤U251,观察外源Runx3在细胞中的表达及亚细胞定位。方法:用PCR的方法扩增Runx3基因,并将Flag标签蛋白的编码基因与RUNX3基因进行融合,构建腺病毒穿梭载体... 详细信息

目的:制备含有融合Flag标签的Runx3基因的复制缺陷型重组腺病毒,感染神经胶质细胞瘤U251,观察外源Runx3在细胞中的表达及亚细胞定位。方法:用PCR的方法扩增Runx3基因,并将Flag标签蛋白的编码基因与RUNX3基因进行融合,构建腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV-Runx3,经KpnI/XhoI双酶切鉴定并测序。利用电转化方法将经PmeI线性化的pShuttle-CMV-Runx3穿梭载体导入BJ5183重组细菌,获取重组腺病毒质粒Ad-Runx3,再将经PacI线性化的Ad-Runx3重组病毒骨架质粒转染293A包装细胞,包装并扩增病毒。利用该病毒感染神经胶质细胞瘤U251,用免疫印迹法观察外源Runx3在细胞中的表达,用间接免疫荧光法观察其在细胞内的定位。结果:构建并包装表达Runx3蛋白的重组腺病毒,用重组腺病毒感染U251细胞后,经免疫印迹和间接免疫荧光法检测,可见外源导入的Runx3蛋白在细胞核内的特异性定位。结论:成功制备了含有融合Flag标签的转录因子Runx3基因的重组腺病毒,感染U251细胞,在细胞中观察到该分子表达后定位于细胞核中,为研究Runx3在神经胶质瘤发生中的作用奠定了实验基础。

关键词： Runx3 腺病毒恶性脑胶质瘤细胞

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