检索结果-内蒙古大学图书馆

中华医院感染学杂志 2017年第1期27卷 70-74页

作者：乔卿华吕欣姚敏党品香徐志凯鄂玲玲尹文汪爱勤第四军医大学基础医学部微生物学教研室陕西西安710032 解放军第152医院检验科河南平顶山467000 解放军总医院口腔医学研究所北京100853 第四军医大学西京医院输血科陕西西安710032 解放军总医院院办北京100853

目的建立能够表达森林脑炎病毒NS5蛋白的转基因小鼠模型,为评价TBEV感染时RdRp酶的活性提供研究平台。方法将线性化的***-EF1α-NS5-IRES-eGFP质粒显微注射入FVB/N小鼠受精卵雄原核,移入假孕母鼠输卵管内,构建并筛选转基因首建鼠;首建... 详细信息

目的建立能够表达森林脑炎病毒NS5蛋白的转基因小鼠模型,为评价TBEV感染时RdRp酶的活性提供研究平台。方法将线性化的***-EF1α-NS5-IRES-eGFP质粒显微注射入FVB/N小鼠受精卵雄原核,移入假孕母鼠输卵管内,构建并筛选转基因首建鼠;首建鼠传代并筛选出遗传性状稳定的纯合子转基因小鼠;检测TBEV NS5基因的表达。结果成功筛选出5只转基因首建鼠并传代至F5代,PCR、RT-PCR及Western blot检测结果表明,转基因小鼠成功表达了TBEV NS5基因。结论成功构建了表达森林脑炎病毒NS5蛋白的转基因小鼠模型。

关键词：森林脑炎病毒 NS5蛋白 RNA依赖的RNA聚合酶

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HCVNS3-5B转基因小鼠模型的构建

HCVNS3-5B转基因小鼠模型的构建

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中华医学会2015年医学病毒学大会

作者：赵海卫吕欣雷迎峰姚敏乔卿华韩佩君张芳琳徐志凯尹文第四军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：构建表达HCV NS3-5B 蛋白的转基因小鼠模型。方法：显微注射线性化pIRES2-EGFP-NS3-5B 载体到小鼠受精卵，制备并传代筛选HCV NS3-5B 转基因小鼠;通过血清ALT、AST 检测和肝脏HE 染色对6 周龄转基因小鼠进行肝功能评价。

关键词：丙型肝炎病毒复制复合体动物模型

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HCV NS3-5B转基因小鼠模型的构建

HCV NS3-5B转基因小鼠模型的构建

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第六届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛

作者：赵海卫吕欣雷迎峰姚敏乔卿华韩佩君张芳琳徐志凯尹文第四军医大学基础医学部微生物学教研室

目的构建表达HCVNS3-5B蛋白的转基因小鼠模型。方法显微注射线性化pIRES2-EGFP-NS3-5B载体到小鼠受精卵,制备并传代筛选HCV NS3-5B转基因小鼠;通过血清ALT、AST检测和肝脏HE染色对6周龄转基因小鼠进行肝功能评价。结果 PCR、RT-PCR和Wes... 详细信息

目的构建表达HCVNS3-5B蛋白的转基因小鼠模型。方法显微注射线性化pIRES2-EGFP-NS3-5B载体到小鼠受精卵,制备并传代筛选HCV NS3-5B转基因小鼠;通过血清ALT、AST检测和肝脏HE染色对6周龄转基因小鼠进行肝功能评价。结果 PCR、RT-PCR和Western-Blot结果表明HCV NS3-5B转基因小鼠构建成功;6周龄部分转基因小鼠血清ALT和AST值升高,但无统计学意义,肝组织形态无改变。结论成功构建了HCV NS3-5B转基因小鼠模型,为进一步在体研究HCV复制复合体建立了平台。

关键词：丙型肝炎病毒复制复合体动物模型

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丙型肝炎病毒NS3-5B转基因小鼠模型的构建

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生物技术通讯 2015年第5期26卷 627-631页

作者：赵海卫韩佩君姚敏吕欣雷迎峰杨敬乔卿华翁代慧党品香尹文第四军医大学基础医学部微生物学教研室陕西西安710032 第四军医大学西京医院输血科陕西西安710032

目的:构建表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3-5B蛋白的转基因小鼠模型。方法:显微注射线性化p IRES2-EGFP-NS3-5B载体到小鼠受精卵,制备并传代筛选HCV NS3-5B转基因小鼠;通过血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)检测和肝脏HE染色,对6周龄转基... 详细信息

目的:构建表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3-5B蛋白的转基因小鼠模型。方法:显微注射线性化p IRES2-EGFP-NS3-5B载体到小鼠受精卵,制备并传代筛选HCV NS3-5B转基因小鼠;通过血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)检测和肝脏HE染色,对6周龄转基因小鼠进行肝功能评价。结果:PCR、RT-PCR和Western印迹结果表明HCV NS3-5B转基因小鼠构建成功;6周龄部分转基因小鼠血清ALT和AST值升高,但差别无统计学意义,肝组织形态无改变。结论:构建了HCV NS3-5B转基因小鼠模型,为进一步在体研究HCV复制复合体建立了平台。

关键词：丙型肝炎病毒 NS3-5B蛋白复制复合体转基因小鼠模型

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表达丙型肝炎病毒核心蛋白的人肝癌稳定转染细胞株的建立与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第11期30卷 1137-1141页

作者：乔卿华吕欣雷迎峰杨敬姚敏韩佩君党品香赵海卫翁代慧尹文第四军医大学基础医学部微生物学教研室陕西西安710032 中国人民解放军第152医院检验科河南平顶山467000

目的建立能表达丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV core)的人肝癌细胞SMMC-7721的稳定转染细胞株。方法构建含目的基因HCV core的重组质粒,转染HEK293T细胞,包装获得含ZsGreen和HCV core基因的慢病毒后,感染SMMC-7721人肝癌细胞,采用实时荧光定... 详细信息

目的建立能表达丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV core)的人肝癌细胞SMMC-7721的稳定转染细胞株。方法构建含目的基因HCV core的重组质粒,转染HEK293T细胞,包装获得含ZsGreen和HCV core基因的慢病毒后,感染SMMC-7721人肝癌细胞,采用实时荧光定量PCR检测HCV core mRNA表达,采用免疫荧光细胞化学染色和Western blot法检测HCV core蛋白表达,筛选稳定表达HCV core的细胞株。结果质粒酶切和序列测定证实重组载体构建正确;慢病毒包装48 h后可见清晰ZsGreen表达,感染SMMC-7721细胞后筛选获得稳定转染的细胞株,实时荧光定量PCR检测到HCV core mRNA,免疫荧光细胞化学染色和Western blot法均检测出HCV core蛋白表达。结论成功构建了表达HCV core蛋白的SMMC-7721人肝癌细胞的稳定转染细胞株。

关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白肝癌细胞株慢病毒稳定表达

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结核分枝杆菌持续感染小鼠模型的建立及其免疫特征

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微生物与感染 2014年第2期9卷 71-76页

作者：许承明康健王丽梅韩文东孙志平丁悦娜瞿涤柏银兰徐志凯第四军医大学微生物学与病原生物学教研室西安710032 上海复旦大学三级生物安全防护实验室上海200032 复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

为建立小鼠结核分枝杆菌持续感染模型并研究其免疫应答特征,选取雌性C57BL/6小鼠,经尾静脉感染结核分枝杆菌H37Rv株,并以异烟肼和利福平联合治疗。分别于感染后4、8、12周处死小鼠,用平板法计数肺和脾荷菌数,酶联免疫吸附试验(ELISA)检... 详细信息

为建立小鼠结核分枝杆菌持续感染模型并研究其免疫应答特征,选取雌性C57BL/6小鼠,经尾静脉感染结核分枝杆菌H37Rv株,并以异烟肼和利福平联合治疗。分别于感染后4、8、12周处死小鼠,用平板法计数肺和脾荷菌数,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中特异性抗体水平及亚类,流式细胞术检测CD4+脾淋巴细胞经结核分枝杆菌抗原——纯化蛋白衍生物(PPD)刺激后分泌细胞因子的细胞比例。结果显示,感染4周后小鼠肺和脾荷菌数lg CFU分别达3.67±0.25和3.54±0.24,至少持续8周;药物治疗可有效降低脏器荷菌数。感染12周后,感染组血清中抗结核分枝杆菌特异性抗体水平显著升高(P<0.01),且以IgG1为主;治疗组总IgG抗体水平显著低于感染组(P<0.01),且IgG2a相对较高(P<0.05)。感染组CD4+脾淋巴细胞中γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素2(IL-2)分泌细胞比例显著增加(P<0.01和P<0.001),而IL-4分泌细胞比例显著降低(P<0.01);治疗组IL-2和IL-4分泌细胞比例显著低于正常组(P<0.05和P<0.01)。本研究建立的小鼠结核分枝杆菌持续感染模型有望用于结核病治疗性疫苗和药物的研发及筛选。

关键词：结核分枝杆菌持续感染小鼠模型

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丙型肝炎病毒(HCV)非结构区NS3-5B蛋白的真核表达载体构建及其在BHK-21细胞中的表达

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科学技术与工程 2013年第36期21卷 10794-10797,10805页

作者：韩佩君雷迎峰吕欣杨敬姚敏乔卿华党品香尹文第四军医大学基础医学部微生物学与病原生物学教研室西安710032

通过PCR方法扩增出HCV NS3-5b全长基因序列,克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,构建重组质粒pIRES2-EGFP-NS3-5b。利用脂质体将该质粒转染至BHK-21细胞,通过荧光成像和Western Blot检测NS3-5b基因的表达。结果显示成功构建了真核表达载体... 详细信息

通过PCR方法扩增出HCV NS3-5b全长基因序列,克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,构建重组质粒pIRES2-EGFP-NS3-5b。利用脂质体将该质粒转染至BHK-21细胞,通过荧光成像和Western Blot检测NS3-5b基因的表达。结果显示成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-NS3-5b,并且NS3/4A蛋白和NS5B蛋白得到特异性表达,为下一步建立HCV RdRp活性的细胞评价系统和动物模型评价系统奠定了实验和理论基础。

关键词：丙型肝炎病毒(hepatitis e virus HCV) NS3-5B蛋白真核表达

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麦胚系统真核表达小鼠伯氏疟原虫TIP样蛋白的实验研究

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热带医学杂志 2013年第11期13卷 1309-1311,1337页

作者：王军沈燕李英辉刘学武黄豫晓梁姣刘文文赵亚第四军医大学基础医学院微生物学与病原生物学教研室陕西西安710032 第四军医大学航空航天医学系学员五队陕西西安710032

目的体外真核表达小鼠伯氏疟原虫TIP样蛋白(PbTIP)胞外域重组蛋白。方法合成PbTIP胞外域DNA片段,克隆入真核表达载体pEU-E01-His-TEV-MCS,采用CFS真核无细胞蛋白表达系统(麦胚系统),在体外表达可溶性PbTIP胞外域重组蛋白,SDS-PAGE凝胶... 详细信息

目的体外真核表达小鼠伯氏疟原虫TIP样蛋白(PbTIP)胞外域重组蛋白。方法合成PbTIP胞外域DNA片段,克隆入真核表达载体pEU-E01-His-TEV-MCS,采用CFS真核无细胞蛋白表达系统(麦胚系统),在体外表达可溶性PbTIP胞外域重组蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳和Western-blot检测并鉴定目的蛋白表达情况。结果获得了可溶性表达的PbTIP胞外域重组蛋白,分子量约70 000 Mr,与预期相符,目的蛋白浓度约为0.1 mg/ml。结论采用麦胚系统在体外获得了较高浓度的可溶性PbTIP胞外域重组蛋白,不但为后续的PbTIP胞外域功能研究打下了良好的基础,也为众多疟原虫未知蛋白的功能研究提供了新的方法。

关键词：伯氏疟原虫 T细胞免疫调节蛋白真核表达麦胚系统

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Tet-on和Cre/loxP系统双重调控表达丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶三转基因小鼠的建立

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生物技术通讯 2012年第3期23卷 342-346页

作者：兰海云孙梦宁马玉赵亚吕欣杨敬雷迎峰姚敏黄小军张建敏康健尹文第四军医大学基础医学部医学微生物学与病原生物学教研室陕西西安710032 第四军医大学基础医学部中心实验室陕西西安710032

目的:建立Tet-On调控系统和Cre/loxP基因剔除系统双重调控表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶三转基因小鼠。方法:选择适龄并经鉴定的在Tet-on系统调控下肝脏特异性表达Cre重组酶的双转基因小鼠Lap/LC-1与在Tet-on系统调控下肝脏... 详细信息

目的:建立Tet-On调控系统和Cre/loxP基因剔除系统双重调控表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶三转基因小鼠。方法:选择适龄并经鉴定的在Tet-on系统调控下肝脏特异性表达Cre重组酶的双转基因小鼠Lap/LC-1与在Tet-on系统调控下肝脏特异性表达萤光素酶(Luc)的双转基因小鼠Lap/NS3/4A交配,子代小鼠经PCR检测、筛选基因组中NS3/4A、Lap、LC-1等3个转基因片段均阳性的小鼠。三阳性的NS3/4A/Lap/LC-1小鼠经多西环素(Dox)诱导1周后,以在体生物发光成像系统(BLI)检测报告基因Luc的表达,免疫组化检测小鼠体内Cre重组酶、HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的表达状况。结果:NS3/4A/Lap/LC-1小鼠经Dox诱导后,BLI结果显示仅在小鼠肝脏部位有强烈的发光信号,表明这些小鼠肝细胞内报告基因Luc特异高效表达;免疫组化结果证实Cre重组酶、NS3/4A蛋白酶仅在经诱导后的小鼠肝细胞中特异性表达。结论:建立了Tet-On调控系统和Cre/loxP基因剔除系统双重调控下表达HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的三转基因小鼠模型,为进一步研究HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶在HCV感染后与宿主相互作用的机制,以及抗NS3/4A丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂的筛选奠定了基础。

关键词：丙型肝炎病毒 NS3/4A丝氨酸蛋白酶三转基因小鼠

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双重调控表达HCVNS3/4A丝氨酸蛋白酶三转基因小鼠的建立

双重调控表达HCVNS3/4A丝氨酸蛋白酶三转基因小鼠的建立

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中国微生物学会2012感染与免疫学术研讨会

作者：兰海云孙梦宁马玉赵亚吕欣杨敬雷迎峰尹文第四军医大学基础医学部医学微生物学教研室陕西西安710032 第四军医大学基础医学部中心实验室陕西西安710032

目的建立Tet-On调控系统和Cre/LoxP基因剔除系统双重调控表达HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶三转基因小鼠。方法选择适龄并经鉴定的由Tet-on系统调控下肝脏特异性表达Cre重组酶的双转基因小鼠Lap/LC-1与由Tet-on系统调控下肝脏特异性表达荧... 详细信息

目的建立Tet-On调控系统和Cre/LoxP基因剔除系统双重调控表达HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶三转基因小鼠。方法选择适龄并经鉴定的由Tet-on系统调控下肝脏特异性表达Cre重组酶的双转基因小鼠Lap/LC-1与由Tet-on系统调控下肝脏特异性表达荧光素酶(Luc)的双转基因小鼠Lap/NS3/4A交配,子代小鼠经PCR法检测、筛选基因组中NS3/4A、Lap、LC-1三个转基因片段均阳性的小鼠。三阳性的NS3/4A/Lap/LC-I小鼠经盐酸强力霉素(Doxycycline,Dox)诱导一周后,以在体生物发光成像系统(In vivo bioluminescent imaging,BLI)检测报告基因荧光素酶的的表达。免疫组化检测小鼠体内Cre重组酶、NS3/4A丝氨酸蛋白酶的表达状况。结果 NS3/4A/Lap/LC-1小鼠经Dox诱导后,BLI结果显示,仅在小鼠肝脏部位检测到强烈的发光信号,表明这些小鼠肝细胞内报告基因Luc特异高效表达。免疫组化结果证实Cre重组酶、NS3/4A蛋白酶仅在经诱导后后的小鼠肝细胞特异性表达。结论建立了Tet-On调控系统和Cre/LoxP基因剔除系统双重调控下表达HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的三转基因小鼠模型,为进一步研究HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶在HCV感染后与宿主相互作用的机制及抗NS3/4A丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂的筛选奠定基础。

关键词： HCV NS3/4A蛋白酶三转基因小鼠

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