检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通讯 2011年第2期22卷 286-291页

作者：兰海云汪爱勤尹文第四军医大学基础医学部微生物学与病原生物学教研室陕西西安710032 第四军医大学基础医学部中心实验室陕西西安710032

在体生物发光成像技术采用萤光素酶基因标记细胞及DNA,利用灵敏的光学检测仪器,实时直观地监测活体小动物体内感染性疾病的发生发展、肿瘤的生长及转移及引发的免疫反应、特定基因的表达等诸多生物过程。通过对同一组实验对象在不同时... 详细信息

在体生物发光成像技术采用萤光素酶基因标记细胞及DNA,利用灵敏的光学检测仪器,实时直观地监测活体小动物体内感染性疾病的发生发展、肿瘤的生长及转移及引发的免疫反应、特定基因的表达等诸多生物过程。通过对同一组实验对象在不同时间点进行记录,跟踪同一观察目标(标记细胞、病原微生物或基因)的移动及变化,与传统的动物实验方法相比,在体生物发光成像得到的数据具有更高的可信度。近年来因其灵敏度较高、不涉及放射性物质、所得结果直观等优势,该技术已普遍应用于生物医学、药物开发等研究领域。

关键词：在体生物发光成像萤光素酶萤光素

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HCV NS3/4A介导的逃逸机体固有免疫研究进展

HCV NS3/4A介导的逃逸机体固有免疫研究进展

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第二次全国微生物学与免疫学青年学术论坛

作者：张建敏吕欣吴兴安张芳琳尹文第四军医大学基础医学部微生物学教研室陕西西安 710032 第四军医大学基础医学部中心实验室陕西西安 710032

丙型肝炎病毒(HCV)为单股正链RNA病毒，归类于黄病毒科、肝炎病毒属，有6个基因型。其中HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶不仅是HCV多聚蛋白前体加工成熟的关键酶，而且还通过调控干扰素调控因子(IRF)-3的表达水平，从而破坏细胞内固有免疫通路... 详细信息

丙型肝炎病毒(HCV)为单股正链RNA病毒，归类于黄病毒科、肝炎病毒属，有6个基因型。其中HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶不仅是HCV多聚蛋白前体加工成熟的关键酶，而且还通过调控干扰素调控因子(IRF)-3的表达水平，从而破坏细胞内固有免疫通路，使病毒能够逃避宿主的固有免疫反应，并形成长期的持续性感染。HCV感染引起机体抗病毒反应，细胞受体RIG-1和TLR3识别入侵病毒组分，进而引发较强的固有免疫反应，这一机制在增强机体自身免疫力、抵抗入侵病毒的过程中发挥了巨大的作用。因此，深入研究HCV NS3/4A蛋白酶介导的固有免疫逃逸的分子机制，对治疗慢性HCV感染和治疗性新药的开发有着积极的意义。

关键词：丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶免疫病理逃逸机体

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腺病毒介导的Her2基因RNAi载体的构建和鉴定

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现代生物医学进展 2008年第8期8卷 1409-1411,1408页

作者：高洋杨红闫岩刘艳丽张芳琳吴兴安辛晓燕第四军医大学西京医院妇产科西安710032 第四军医大学基础医学部微生物学教研室西安710032

目的：构建腺病毒介导的Her2基因RNAi载体。方法：构建含有Her2基因片断的siRNA质粒Her2-pSuppressor，通过特异性酶切将目的基因与穿梭载体pshuttle相连，再通过特异性酶切位点将目的片断与腺病毒DNA相连，并用PCR和酶切鉴定方法进行... 详细信息

目的：构建腺病毒介导的Her2基因RNAi载体。方法：构建含有Her2基因片断的siRNA质粒Her2-pSuppressor，通过特异性酶切将目的基因与穿梭载体pshuttle相连，再通过特异性酶切位点将目的片断与腺病毒DNA相连，并用PCR和酶切鉴定方法进行筛选和鉴定，获得重组腺病毒DNA。以PacⅠ酶切线性化后转染包装含有腺病毒E1的HEK293细胞。以软琼脂平板上的空斑数量计算重组腺病毒的的滴度.结果：XbaⅠ＋MluⅠ双酶切鉴定Her2a-RNAi/pShuttle和Her2b-RNAi/pshuttle阳性重组子获得304bp的目的片段，重组腺病毒载体Adeno-Her2a-RNAi和Adeno-Her2b-RNAi经PCR扩增出同样大小片断，经线性化后用脂质体法转染293细胞，观察到细胞病变效应。病毒滴度达1.2×10^8PFu/mL。结论：成功构建了Adeno-Her2-RNAi，为肿瘤的基因治疗奠定了良好的基础。

关键词： Her2 RNA干扰基因腺病毒重组

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Herceptin与卡铂联合应用对宫颈癌细胞的抑制及其机制

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中国肿瘤生物治疗杂志 2007年第1期14卷 47-52页

作者：王巍辛哓燕刘玉李璞媛丁烨第四军医大学西京医院妇产科西安710033 第四军医大学基础医学部微生物学教研室西安710032 北京武警总队第三医院北京100039

目的:探讨Herceptin(Her)对宫颈腺癌HeLa、鳞癌SiHa细胞的抑制差异,以及与卡铂(carboplatin,CBP)的协同作用及其机制。方法:以Her5、10、20、40、80μg/ml和CBP0.5、1、2、4、8μg/ml分别组成单药组和Her+CBP联合用药组[(10+1)、(20+2)、(40+4)μg/ml],另设不加药对照组,分别作用于HeLa和SiHa细胞。MTT法检测Her对HeLa、SiHa细胞增殖的抑制作用及与CBP的协同作用,透射电镜观察肿瘤细胞的超微结构改变,流式细胞术检测用药后的细胞凋亡率及细胞周期,RT-PCR法检测细胞用药后her-2/neu和rasmRNA的表达,Westernblotting和免疫组化方法检测HER-2/neu和Ras蛋白的表达。结果:Her能明显抑制宫颈癌细胞生长,与CBP联合具有协同作用或相加作用(P<0.05,P<0.01)。Her能诱导细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G1期;与CBP联合作用后凋亡率更高,使细胞周期进一步阻滞于G2期,同时降低S期比例。用药后her-2/neu和rasmRNA及其蛋白的表达也显著降低(P<0.05)。药物的抑制作用在宫颈腺癌Hela细胞中更明显些。结论:Her单药或与CBP联合应用能明显抑制宫颈癌HeLa、SiHa细胞生长,Her与CBP的协同作用与细胞周期的双重阻滞有关,且在腺癌HeLa细胞中更明显;Her通过抑制Ras/MAPK通路抑制宫颈癌细胞的增殖。

关键词： Herceptin her-2/neu ras 卡铂宫颈癌细胞

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结核分枝杆菌ESAT6-CFP10融合蛋白诱导的小鼠免疫应答及其保护力

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第4期22卷 443-446页

作者：张海师长宏薛莹柏银兰王丽梅徐志凯第四军医大学训练部实验动物研究中心陕西西安710032 第四军医大学基础医学部微生物学教研室陕西西安710032

目的:研究结核分枝杆菌(MTB)ESAT6-CFP10融合蛋白诱导的小鼠体液和细胞免疫应答以及对MTB感染小鼠的保护能力。方法:用预先转移到硝酸纤维素膜条的ES-AT6-CFP10融合蛋白采用皮下包埋的方法免疫小鼠。用MTB培养上清滤液蛋白(CFP)作为抗原... 详细信息

目的:研究结核分枝杆菌(MTB)ESAT6-CFP10融合蛋白诱导的小鼠体液和细胞免疫应答以及对MTB感染小鼠的保护能力。方法:用预先转移到硝酸纤维素膜条的ES-AT6-CFP10融合蛋白采用皮下包埋的方法免疫小鼠。用MTB培养上清滤液蛋白(CFP)作为抗原,用ELISA法测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度。末次免疫后,取部分免疫小鼠脾淋巴细胞,体外用ESAT6-CFP10融合蛋白刺激后,以MTT比色法检测淋巴细胞增殖反应,同时检测免疫小鼠IFN-γ和IL-2水平及脾细胞杀伤效应。另一部分免疫的BALB/c小鼠经尾静脉感染MTB毒株H37Rv,4周后计数脾脏中的细菌数。结果:ESAT6-CFP10融合蛋白免疫小鼠血清特异性抗体的滴度为1∶6400。淋巴细胞刺激增殖指数为1.90±0.15,明显高于生理盐水组(0.90±0.15);IFN-γ和IL-2的含量分别为1.792±19ng/L和0.211±11ng/L,显著高于生理盐水对照组,但不及BCG免疫组;同时融合蛋白诱导的脾细胞杀伤率为36%。与生理盐水免疫组(细菌负荷6.51±0.13)相比较,融和蛋白免疫的BALB/c小鼠,对攻击感染后MTB在脾脏中增殖有显著作用(细菌负荷为5.24±0.15,P<0.05),但与BCG免疫组相比脾脏中细菌负荷减少甚微。结论:ESAT6-CFP10融合蛋白可作为新型结核疫苗的候选组分。

关键词：结核分枝杆菌疫苗 ESAT6 CFP10 重组融合蛋白

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人细胞周期相关激酶(CCRK)启动子的分析和特征研究

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军事医学科学院院刊 2004年第5期28卷 437-441页

作者：贾向志林李家宓何明亮马文煜黄培堂孔祥复黄翠芬第四军医大学基础医学部微生物学教研室西安710032 香港大学分子生物学研究所军事医学科学院生物工程研究所北京100850

目的 :分析人CCRK基因启动子、启动子的核心序列及与其表达相关的转录因子。方法 :采用 5′ RACE技术鉴定人CCRK基因的转录起始点 ;对启动子区 3′端 3个截短片段 2 5 5bp(- 36 7/- 12 8) ,2 10bp(- 32 2 /- 12 8)和16 0bp(- 2 72 /- 12... 详细信息

目的 :分析人CCRK基因启动子、启动子的核心序列及与其表达相关的转录因子。方法 :采用 5′ RACE技术鉴定人CCRK基因的转录起始点 ;对启动子区 3′端 3个截短片段 2 5 5bp(- 36 7/- 12 8) ,2 10bp(- 32 2 /- 12 8)和16 0bp(- 2 72 /- 12 8)进行删除分析 ,双荧光素酶分析测出的最小活性片段作为核心启动子的上游位点。通过生物软件MatInspectorV2 .2分析核心启动子区域 ,寻找并推测重要的转录因子 ,并对其核心序列进行定点突变分析 ,再通过电泳迁移率 (EMSA)实验加以鉴定。结果 :采用 5′ RACE技术 ,得到的PCR产物直接测序 ,定位 - 2 4 2“T”为转录起始点 ;通过启动子 3′端小片段删除分析 ,2 5 5 ,2 10和 16 0bp均无活性 ,由此判断 3′端 2 5 5个核苷酸不存在核心启动子序列 ,并定位一段 74bp的区域为核心启动子 (- 4 4 1/- 36 7)区域。通过MatInspector软件分析 ,发现在这段核心启动子区域内有 3个重要的结合位点 :DeltaEF 1,NF κB和Sp1。对这 3个结合位点的核心序列进行定点突变后瞬时转染U373,经双荧光素酶分析发现DeltaEF 1的活性明显升高 ,NF κB没有变化 ,Sp1的活性降低但不太明显。进一步通过电泳迁移率 (EMSA)实验鉴定 ,DeltaEF 1和NF κB能与U373核蛋白形成特异性的DNA 蛋白质复合体。

关键词：神经胶质瘤细胞周期相关激酶启动子定点突变转录因子

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人细胞周期相关激酶启动子的克隆和初步分析

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生物技术通讯 2004年第3期15卷 222-225页

作者：贾向志林李家宓何明亮马文煜黄培堂孔祥复黄翠芬第四军医大学基础医学部微生物学教研室西安710032 香港大学分子生物研究所军事医学科学院生物工程研究所北京100850

克隆人的细胞周期相关激酶(CCRK)基因启动子,分析与其表达有关的转录调控因子。通过巢式PCR方法,从人的基因组总DNA中分离出CCRK基因5'端非翻译区大小为1072bp的片段。这段片段的3'端起始点在第一个外显子里第一个翻译密码子ATG... 详细信息

克隆人的细胞周期相关激酶(CCRK)基因启动子,分析与其表达有关的转录调控因子。通过巢式PCR方法,从人的基因组总DNA中分离出CCRK基因5'端非翻译区大小为1072bp的片段。这段片段的3'端起始点在第一个外显子里第一个翻译密码子ATG(+1)上游128bp处。以1072bp为模板,对启动子进行5'端删除分析,分别扩增951bp穴-1072/-128雪、564bp穴-692/-128雪、313bp穴-441/-128雪、127bp穴-239/-128雪的片段,与pGL3-Basic荧光素酶报告载体重组构建,人工加上克隆位点,5'端带有KpnI、3'端带有XhoI位点。瞬时转染恶性神经胶质瘤细胞株U373,通过双荧光素酶活性进行分析。对分离出的1072bp的片段进行测序,结果与GenBank(AccessionAF035013雪的序列比较,同源序列达到98%。双荧光素酶活性分析564bp片段有最强的活性,313bp片段为有活性的最小片段。本研究为进一步研究分析CCRK的核心启动子和与其相关的转录因子奠定基础。

关键词：人启动子细胞周期相关激酶 CCRK 克隆转录

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扩增鼠源性mAb和人源性抗体κ轻链基因中引物的作用

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细胞与分子免疫学杂志 2001年第5期17卷 477-478页

作者：白文涛阎岩徐志凯吴兴安王海涛尹文赵茜罗雯张芳琳第四军医大学基础医学部微生物学教研室陕西西安710032

目的比较扩增鼠源性mAb和人源性抗体Vκ基因中引物的作用。方法从5株抗HFRS病毒鼠源性mAb杂交瘤细胞系和人PBL中提取细胞总RNA。逆转录后,用不同的引物进行PCR扩增,克隆后测定核苷酸序列并比较不同引物的作用。结果5株mAb杂交瘤细胞的V... 详细信息

目的比较扩增鼠源性mAb和人源性抗体Vκ基因中引物的作用。方法从5株抗HFRS病毒鼠源性mAb杂交瘤细胞系和人PBL中提取细胞总RNA。逆转录后,用不同的引物进行PCR扩增,克隆后测定核苷酸序列并比较不同引物的作用。结果5株mAb杂交瘤细胞的Vκ基因及人源性抗体的Vκ基因,需采用不同的引物组合才可得到。结论5'端引物在PCR扩增抗体Vκ基因中起重要作用。

关键词： k轻链基因聚合酶链反应抗体引物

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动物细胞系的染色体组型与遗传变异率分析

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Acta Genetica Sinica 2001年第4期28卷 327-344,T001,T002页

作者：张德礼李六金夏耕田何旭玉高步先白晓鸿黄高升刘尚高阎隆飞方福德胡春雷王黎军姜焕宏冯阿曼张广民安社刚任远强郭建民胡淑贤樊军喜牛永利宋占军李迎樊胜军北京大学医学部免疫学系北京100083 北京军区联勤部卫生防疫队西安710032 第四军医大学动物保健品研制中心毒理学研究室西安710032 第四军医大学基础部病理学教研室西京医院病理科中国癌症研究基金会肿瘤研究所北京100094 中国农业大学动物医学院传染病微生物学教研室生物学院生物化学与分子生物学系农业生物技术国家重点实验室北京100005 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院实验动物研究所

在建立国内首家犬、猫、猴、鼠传代细胞库，即７种动物肾细胞系（Ｆ－８１、ＣＲＦＫ、ＭＤＣＫ、Ｖｅｒｏ、Ｖｅｒｏ－２、ＭＡ－１０４、ＢＨＫ－２１）的种子库和工作库的基础上，通过细胞染色体组型、Ｇ带核型、染色体数目变异率、... 详细信息

在建立国内首家犬、猫、猴、鼠传代细胞库，即７种动物肾细胞系（Ｆ－８１、ＣＲＦＫ、ＭＤＣＫ、Ｖｅｒｏ、Ｖｅｒｏ－２、ＭＡ－１０４、ＢＨＫ－２１）的种子库和工作库的基础上，通过细胞染色体组型、Ｇ带核型、染色体数目变异率、结构畸变率分析，了解７种细胞系传代培养不同代次的染色体变异情况。以相应的细胞株皮下接种裸鼠形成肿瘤实验、软琼脂细胞克隆形成率与植物凝集素作用下细胞凝集实验为对照，筛选出无致癌／致瘤性、符合细胞遗传学要求、无传染因子污染的细胞系（Ｆ－８１、ＣＲＦＫ、Ｖｅｒｏ、Ｖｅｒｏ－２）或极低致癌性的ＭＤＣＫ细胞系用于制苗，发现肿瘤细胞系高变异率株可在裸鼠体内快速选育成功。细胞系染色体遗传特征决定致瘤性质并具有种属特异性，得到一些１００％成瘤和１００％不成瘤的细胞株并探讨了与染色体组型的关系。对于肿瘤的发病机理及实验治疗，都是非常好的模型。一些细胞系不仅成瘤而且还可转移（致恶性横纹肌样瘤的ＢＨＫ－２１和Ｖｅｒｏ细胞株），其他致瘤细胞株只成瘤不转移或不明显转移。

关键词：动物肾细胞系人类子宫颈癌细胞系猪肾原代细胞染色体核型 G带核型遗传变异率数目变异结构畸变

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