检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术 2018年第3期28卷 223-229,261页

作者：陆翮高子昭康健许艳慧宁唤唤柏银兰第四军医大学基础医学院微生物学教研室陕西西安710032 第四军医大学学员旅陕西西安710032

[目的]表达、纯化小鼠Prune蛋白DHH结构域(m-Prune D),并制备多克隆抗体。[方法]生物信息学方法分析m-Prune D氨基酸序列;PCR扩增目的基因m-Prune D,克隆入原核表达载体p ET28a(+);IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE和Western Blot鉴定蛋... 详细信息

[目的]表达、纯化小鼠Prune蛋白DHH结构域(m-Prune D),并制备多克隆抗体。[方法]生物信息学方法分析m-Prune D氨基酸序列;PCR扩增目的基因m-Prune D,克隆入原核表达载体p ET28a(+);IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE和Western Blot鉴定蛋白表达,亲和层析法纯化蛋白;用纯化的重组m-Prune D免疫小鼠制备多克隆抗体;Western Blot检测多克隆抗体特异性。[结果]PCR成功扩增m-Prune D基因,双酶切及测序结果表明成功构建m-Prune D原核表达载体,SDS-PAGE和Western Blot鉴定表明成功表达约25 k Da的重组蛋白。纯化蛋白免疫小鼠后抗体滴度最高可达1∶25 600,所制备的多克隆抗体可特异性识别原核和真核细胞中DHH结构域蛋白。[结论]在***中成功表达小鼠Prune蛋白DHH结构域,制备了多克隆抗体血清,可用于Prune蛋白生物学功能的进一步研究。

关键词： DHH结构域 Prune蛋白原核表达多克隆抗体

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表达森林脑炎病毒NS5蛋白的转基因小鼠模型构建与鉴定

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中华医院感染学杂志 2017年第1期27卷 70-74页

作者：乔卿华吕欣姚敏党品香徐志凯鄂玲玲尹文汪爱勤第四军医大学基础医学部微生物学教研室陕西西安710032 解放军第152医院检验科河南平顶山467000 解放军总医院口腔医学研究所北京100853 第四军医大学西京医院输血科陕西西安710032 解放军总医院院办北京100853

目的建立能够表达森林脑炎病毒NS5蛋白的转基因小鼠模型,为评价TBEV感染时RdRp酶的活性提供研究平台。方法将线性化的***-EF1α-NS5-IRES-eGFP质粒显微注射入FVB/N小鼠受精卵雄原核,移入假孕母鼠输卵管内,构建并筛选转基因首建鼠;首建... 详细信息

目的建立能够表达森林脑炎病毒NS5蛋白的转基因小鼠模型,为评价TBEV感染时RdRp酶的活性提供研究平台。方法将线性化的***-EF1α-NS5-IRES-eGFP质粒显微注射入FVB/N小鼠受精卵雄原核,移入假孕母鼠输卵管内,构建并筛选转基因首建鼠;首建鼠传代并筛选出遗传性状稳定的纯合子转基因小鼠;检测TBEV NS5基因的表达。结果成功筛选出5只转基因首建鼠并传代至F5代,PCR、RT-PCR及Western blot检测结果表明,转基因小鼠成功表达了TBEV NS5基因。结论成功构建了表达森林脑炎病毒NS5蛋白的转基因小鼠模型。

关键词：森林脑炎病毒 NS5蛋白 RNA依赖的RNA聚合酶

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一株抗JEV单抗可变区的计算机建模及其与JEVE蛋白的分子对接

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中国病原生物学杂志 2015年第4期10卷 289-292页

作者：寇甜甜杨滨王媛丁天兵第四军医大学基础医学院微生物学教研室陕西西安710032 第四军医大学生物医学工程学院医学电子工程教研室

目的利用计算机建模获得单克隆抗体2F2可变区三维结构,再与日本脑炎病毒(JEV)E蛋白进行模拟分子对接,了解JEV E蛋白上与2F2作用的关键氨基酸位点,为阐明2F2的中和作用机制奠定基础。方法利用BLASTP软件在蛋白质数据库(PDB)中搜索2F2同... 详细信息

目的利用计算机建模获得单克隆抗体2F2可变区三维结构,再与日本脑炎病毒(JEV)E蛋白进行模拟分子对接,了解JEV E蛋白上与2F2作用的关键氨基酸位点,为阐明2F2的中和作用机制奠定基础。方法利用BLASTP软件在蛋白质数据库(PDB)中搜索2F2同源蛋白。以同源蛋白为模板,用Modeller软件对2F2可变区主链、侧链进行建模,组装出完整的2F2可变区三维结构模型并进行一系列分子动力学优化,得到能量最低的单抗可变区三维结构。最后利用Discovery Studio软件模拟2F2可变区与JEV E蛋白的分子对接。结果获得2F2可变区三维结构模型。模拟分子对接结果显示JEV E蛋白上与2F2可变区相互接触、作用的氨基酸位点有9个,即Ⅰ区的13位谷氨酸、16位丝氨酸、37位天冬氨酸和300位苏氨酸,Ⅲ区的336位赖氨酸、347位天冬氨酸、354位亮氨酸、387位精氨酸和388位甘氨酸残基。其中Ⅰ区13位谷氨酸、16位丝氨酸和37位天冬氨酸可能是中和表位必需的氨基酸。Ⅲ区的387位精氨酸和388位甘氨酸位于优势中和抗原表位区域,336位赖氨酸与已报道的337位中和表位非常接近。结论通过计算机建模确定JEV E蛋白上有9个与单克隆抗体2F2作用的主要氨基酸位点,为利用E蛋白突变体阐明2F2单抗的中和机制提供了依据。

关键词：日本脑炎病毒 E蛋白单克隆抗体可变区计算机建模分子对接

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HCVNS3-5B转基因小鼠模型的构建

HCVNS3-5B转基因小鼠模型的构建

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中华医学会2015年医学病毒学大会

作者：赵海卫吕欣雷迎峰姚敏乔卿华韩佩君张芳琳徐志凯尹文第四军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：构建表达HCV NS3-5B 蛋白的转基因小鼠模型。方法：显微注射线性化pIRES2-EGFP-NS3-5B 载体到小鼠受精卵，制备并传代筛选HCV NS3-5B 转基因小鼠;通过血清ALT、AST 检测和肝脏HE 染色对6 周龄转基因小鼠进行肝功能评价。

关键词：丙型肝炎病毒复制复合体动物模型

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HCV NS3-5B转基因小鼠模型的构建

HCV NS3-5B转基因小鼠模型的构建

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第六届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛

作者：赵海卫吕欣雷迎峰姚敏乔卿华韩佩君张芳琳徐志凯尹文第四军医大学基础医学部微生物学教研室

目的构建表达HCVNS3-5B蛋白的转基因小鼠模型。方法显微注射线性化pIRES2-EGFP-NS3-5B载体到小鼠受精卵,制备并传代筛选HCV NS3-5B转基因小鼠;通过血清ALT、AST检测和肝脏HE染色对6周龄转基因小鼠进行肝功能评价。结果 PCR、RT-PCR和Wes... 详细信息

目的构建表达HCVNS3-5B蛋白的转基因小鼠模型。方法显微注射线性化pIRES2-EGFP-NS3-5B载体到小鼠受精卵,制备并传代筛选HCV NS3-5B转基因小鼠;通过血清ALT、AST检测和肝脏HE染色对6周龄转基因小鼠进行肝功能评价。结果 PCR、RT-PCR和Western-Blot结果表明HCV NS3-5B转基因小鼠构建成功;6周龄部分转基因小鼠血清ALT和AST值升高,但无统计学意义,肝组织形态无改变。结论成功构建了HCV NS3-5B转基因小鼠模型,为进一步在体研究HCV复制复合体建立了平台。

关键词：丙型肝炎病毒复制复合体动物模型

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丙型肝炎病毒NS3-5B转基因小鼠模型的构建

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生物技术通讯 2015年第5期26卷 627-631页

作者：赵海卫韩佩君姚敏吕欣雷迎峰杨敬乔卿华翁代慧党品香尹文第四军医大学基础医学部微生物学教研室陕西西安710032 第四军医大学西京医院输血科陕西西安710032

目的:构建表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3-5B蛋白的转基因小鼠模型。方法:显微注射线性化p IRES2-EGFP-NS3-5B载体到小鼠受精卵,制备并传代筛选HCV NS3-5B转基因小鼠;通过血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)检测和肝脏HE染色,对6周龄转基... 详细信息

目的:构建表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3-5B蛋白的转基因小鼠模型。方法:显微注射线性化p IRES2-EGFP-NS3-5B载体到小鼠受精卵,制备并传代筛选HCV NS3-5B转基因小鼠;通过血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)检测和肝脏HE染色,对6周龄转基因小鼠进行肝功能评价。结果:PCR、RT-PCR和Western印迹结果表明HCV NS3-5B转基因小鼠构建成功;6周龄部分转基因小鼠血清ALT和AST值升高,但差别无统计学意义,肝组织形态无改变。结论:构建了HCV NS3-5B转基因小鼠模型,为进一步在体研究HCV复制复合体建立了平台。

关键词：丙型肝炎病毒 NS3-5B蛋白复制复合体转基因小鼠模型

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CRISPR-Cas系统在细菌生理中的作用

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生物技术通讯 2015年第5期26卷 733-736页

作者：陶欢高俊柏银兰第四军医大学药学院陕西西安710032 第四军医大学基础医学院微生物学教研室陕西西安710032

规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)及相关基因(cas)组成了CRISPR-Cas系统,该系统存在于约90%的古细菌和40%的细菌基因组内,使细菌对外源基因的入侵具有获得性免疫作用。我们简要介绍细菌CRISPR-Cas系统的结构和作用机制,并对其在细菌毒... 详细信息

规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)及相关基因(cas)组成了CRISPR-Cas系统,该系统存在于约90%的古细菌和40%的细菌基因组内,使细菌对外源基因的入侵具有获得性免疫作用。我们简要介绍细菌CRISPR-Cas系统的结构和作用机制,并对其在细菌毒力、耐药性传递、生物膜形成等生理中的作用进行综述。

关键词：细菌 CRISPR 细菌生理

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表达丙型肝炎病毒核心蛋白的人肝癌稳定转染细胞株的建立与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第11期30卷 1137-1141页

作者：乔卿华吕欣雷迎峰杨敬姚敏韩佩君党品香赵海卫翁代慧尹文第四军医大学基础医学部微生物学教研室陕西西安710032 中国人民解放军第152医院检验科河南平顶山467000

目的建立能表达丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV core)的人肝癌细胞SMMC-7721的稳定转染细胞株。方法构建含目的基因HCV core的重组质粒,转染HEK293T细胞,包装获得含ZsGreen和HCV core基因的慢病毒后,感染SMMC-7721人肝癌细胞,采用实时荧光定... 详细信息

目的建立能表达丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV core)的人肝癌细胞SMMC-7721的稳定转染细胞株。方法构建含目的基因HCV core的重组质粒,转染HEK293T细胞,包装获得含ZsGreen和HCV core基因的慢病毒后,感染SMMC-7721人肝癌细胞,采用实时荧光定量PCR检测HCV core mRNA表达,采用免疫荧光细胞化学染色和Western blot法检测HCV core蛋白表达,筛选稳定表达HCV core的细胞株。结果质粒酶切和序列测定证实重组载体构建正确;慢病毒包装48 h后可见清晰ZsGreen表达,感染SMMC-7721细胞后筛选获得稳定转染的细胞株,实时荧光定量PCR检测到HCV core mRNA,免疫荧光细胞化学染色和Western blot法均检测出HCV core蛋白表达。结论成功构建了表达HCV core蛋白的SMMC-7721人肝癌细胞的稳定转染细胞株。

关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白肝癌细胞株慢病毒稳定表达

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microRNA-93过表达促进A172脑胶质瘤细胞增殖并抑制其凋亡

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第4期30卷 342-345,350页

作者：杨帆王微袁璐周春辉席文锦魏铭郑国旭杨安钢张剑宁王涛第四军医大学西京医院神经外科陕西西安710032 第四军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032 第四军医大学西安交通大学医学部微生物与免疫学系陕西西安710061 第四军医大学海军总医院神经外科北京100037 第四军医大学西京医院泌尿外科

目的探讨微小RNA-93(miR-93)对胶质瘤细胞A172增殖和凋亡的影响,观察miR-93对胶质瘤生物学行为的影响。方法通过荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测2例正常人脑组织、10例胶质瘤样本和5种胶质瘤细胞系中miR-93的表达;利用人工合成miR-93 mimi... 详细信息

目的探讨微小RNA-93(miR-93)对胶质瘤细胞A172增殖和凋亡的影响,观察miR-93对胶质瘤生物学行为的影响。方法通过荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测2例正常人脑组织、10例胶质瘤样本和5种胶质瘤细胞系中miR-93的表达;利用人工合成miR-93 mimic瞬时转染脑胶质瘤A172细胞,qRT-PCR检测细胞中miR-93的表达水平;采用MTT比色法检测A172细胞增殖情况;流式细胞术检测A172细胞周期与凋亡。结果胶质瘤样本及胶质瘤细胞系中miR-93的表达量较瘤旁与正常胶质细胞系高,miR-93 mimic上调了A172细胞中miR-93的表达水平,促进了A172细胞的增殖能力。miR-93转染细胞后,进入S期细胞显著增加,而G1期细胞则明显减少,同时A172细胞的凋亡数量减少。结论 miR-93在胶质瘤样本及胶质瘤细胞系中高表达,过表达miR-93有效促进了A172细胞的增殖,S期细胞增加G1期减少、细胞凋亡降低,提示miR-93可能成为胶质瘤诊断和治疗的新靶点。

关键词：微小RNA-93 胶质瘤细胞增殖细胞凋亡

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microRNA-122与丙型肝炎病毒复制和肝细胞癌的相关研究进展

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生物技术通讯 2014年第2期25卷 276-278页

作者：王珂汪爱勤尹文第四军医大学基础医学院微生物学教研室陕西西安710032

microRNA-122(miR-122)是一种肝脏特异性微小RNA,与丙型肝炎病毒(HCV)的复制和感染及肝细胞癌(HCC)的发生密切相关。近年来,科研人员关于miR-122的研究已取得了较大进展。在此,我们就miR-122与HCV复制和HCC的相关关系等方面的研究进展... 详细信息

microRNA-122(miR-122)是一种肝脏特异性微小RNA,与丙型肝炎病毒(HCV)的复制和感染及肝细胞癌(HCC)的发生密切相关。近年来,科研人员关于miR-122的研究已取得了较大进展。在此,我们就miR-122与HCV复制和HCC的相关关系等方面的研究进展做简要综述。

关键词： microRNA-122 丙型肝炎病毒肝细胞癌

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