检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 1994年第1期34卷 37-44页

作者：夏东翔汪美先第四军医大学微生物学教研室

证实了甘氨酸与L-异亮氨酸对大肠杆菌表达邻苯二酚2,3-双加氧酶(CatO_2ase)的促进作用和甘氨酸促使该酶分泌至胞外培养基中的作用.产酶量高低和分泌量多少与培养基种类、甘氨酸和L-异亮氨酸的浓度以及培养时间等因素有关.在甘氨酸存在... 详细信息

证实了甘氨酸与L-异亮氨酸对大肠杆菌表达邻苯二酚2,3-双加氧酶(CatO_2ase)的促进作用和甘氨酸促使该酶分泌至胞外培养基中的作用.产酶量高低和分泌量多少与培养基种类、甘氨酸和L-异亮氨酸的浓度以及培养时间等因素有关.在甘氨酸存在的情况下,胞壁对溶菌酶的敏感性有所增加,超微形态似有变化,还存在其他物质的伴随分泌,故甘氨酸可能是引起细胞壁结构的改变而导致邻苯二酚2,3-双加氧酶等胞内容物被动分泌至胞外.

关键词：甘氨酸异亮氨酸大肠杆菌酚酶

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天花粉蛋白的聚乙二醇定点修饰及其性质的初步研究

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高等学校化学学报 2009年第8期30卷 1586-1591页

作者：安群星雷迎峰杨敬黎志东穆士杰徐志凯第四军医大学西京医院输血科西安710032 第四军医大学微生物学教研室西安710033

用聚乙二醇(PEG)定点修饰天花粉蛋白(TCS),并比较了修饰前后TCS的生物活性、免疫原性及药代动力学等诸多性质.选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点KR173-174进行定点突变,并将所构建的突变体TCSKR173-174CG在大肠杆菌中表达及纯化.通过... 详细信息

用聚乙二醇(PEG)定点修饰天花粉蛋白(TCS),并比较了修饰前后TCS的生物活性、免疫原性及药代动力学等诸多性质.选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点KR173-174进行定点突变,并将所构建的突变体TCSKR173-174CG在大肠杆菌中表达及纯化.通过该突变体第173位引入的半胱氨酸残基进行PEG定点修饰.通过比较研究,分析所构建的PEG修饰型TCS的DNA酶活性、致核糖体失活活性、免疫原性、急性毒性以及药代动力学性质,研究结果表明,所构建的突变型TCS(mTCS)的活性与野生型TCS(wTCS)活性几乎相当,而免疫原性已显著降低.PEG修饰型TCS虽有活性下降,但其免疫原性、急性毒性以及药代动力学性质得到显著提升.表明通过基因工程及化学修饰方法改造TCS是可行的,所构建的突变型及PEG修饰型TCS值得进一步研究.

关键词：天花粉蛋白聚乙二醇定点修饰免疫原性药代动力学人类免疫缺陷病毒

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细胞内表达CCR5Delta32蛋白对HIV-1感染抑制作用的研究

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生物化学与生物物理进展 2009年第9期36卷 1141-1145页

作者：安群星雷迎峰杨静张献清易静陈蕤穆士杰第四军医大学西京医院输血科西安710032 第四军医大学微生物学教研室西安710033

人CCR5Delta32突变个体能有效抵制HIV-1感染,主要是由于该个体淋巴细胞内表达的CCR5Delta32突变蛋白能通过反式显性失活效应(TDN)抑制细胞表面HIV-1辅受体CCR5和CXCR4的产生.通过构建CCR5Delta32慢病毒载体,体外转染人外周血单个核细胞(... 详细信息

人CCR5Delta32突变个体能有效抵制HIV-1感染,主要是由于该个体淋巴细胞内表达的CCR5Delta32突变蛋白能通过反式显性失活效应(TDN)抑制细胞表面HIV-1辅受体CCR5和CXCR4的产生.通过构建CCR5Delta32慢病毒载体,体外转染人外周血单个核细胞(PBMCs),研究细胞内表达CCR5Delta32蛋白对HIV-1感染的抑制作用.结果表明,表达CCR5Delta32蛋白的人PBMCs对HIV-1R5、X4及R5X4毒株感染均具有显著的抑制作用.这些工作为后续的AIDS基因治疗研究奠定了基础.

关键词： CCR5Delta32 外周血单个核细胞人类免疫缺陷病毒辅受体

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结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B-ESAT6的融合表达及纯化

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中华结核和呼吸杂志 2004年第2期27卷 89-92页

作者：师长宏范雄林徐志凯李元柏银兰薛莹第四军医大学基础部微生物学教研室西安710033

目的　融合表达结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B ESAT6 ,为结核病的预防提供有效亚单位疫苗。方法　设计含不同酶切位点的Ag85B和ESAT6引物 ,采用聚合酶链反应 (polymerasechainreaction ,PCR)的方法从结核分枝杆菌毒株H3 7Rv DNA中分别扩增... 详细信息

目的　融合表达结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B ESAT6 ,为结核病的预防提供有效亚单位疫苗。方法　设计含不同酶切位点的Ag85B和ESAT6引物 ,采用聚合酶链反应 (polymerasechainreaction ,PCR)的方法从结核分枝杆菌毒株H3 7Rv DNA中分别扩增出相应大小的DNA片段 ,将片段分别与PGEM T easy载体连接测序。将测序正确的Ag85B和ESAT6按照不同的酶切位点克隆入PPROEXHT表达载体 ,挑选出阳性克隆 ,将诱导的表达产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)分析 ,同时与含6个组氨酸 (histidine 6×his)的单克隆抗体 (monoclonalantibody ,mAb)进行固定化蛋白质免疫学测定(Western blot) ,将用含Ni+鳌合剂的Ni NTA亲合柱纯化的表达产物免疫小鼠 ,用结核分枝杆菌培养上清滤液蛋白 (culturefiltrateproteins ,CFP)作为抗原 ,酶联免疫吸附试验 (enzyme linkedimmunosorbentassay ,ELISA)测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度。结果　PCR获得的Ag85B和ESAT6序列与基因文库 (GenBank)报道的完全一致。两者在大肠杆菌DH5α株中融合表达的产物约为 370 0 0 ,与预计大小相吻合。Western blot结果显示 ,在相对分子量约 370 0 0处有表达产物与 6×hismAb特异性结合带。表达产物为包涵体 ,通过Ni NTA纯化系统 ,可得到纯化的目的蛋白。

关键词：结核分枝杆菌 Ag85B-ESAT6 融合表达纯化结核病预防

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分枝杆菌胞壁融合表达Ag85B-ESAT-6穿梭质粒的构建

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中华结核和呼吸杂志 2004年第4期27卷 249-252页

作者：师长宏范雄林史皆然徐志凯李元柏银兰薛莹第四军医大学基础部微生物学教研室西安710033

目的　构建E coli BCG(BacilleCalmette Guerin)穿梭载体 ,在母牛分枝杆菌细胞壁融合表达结核分枝杆菌 (MTB)的分泌蛋白Ag85B ESAT 6。方法　用聚合酶链反应 (PCR)从MTB毒株H3 7Rv基因中扩增出结核分枝杆菌 190 0 0抗原 ( 19 ss)胞壁... 详细信息

目的　构建E coli BCG(BacilleCalmette Guerin)穿梭载体 ,在母牛分枝杆菌细胞壁融合表达结核分枝杆菌 (MTB)的分泌蛋白Ag85B ESAT 6。方法　用聚合酶链反应 (PCR)从MTB毒株H3 7Rv基因中扩增出结核分枝杆菌 190 0 0抗原 ( 19 ss)胞壁区及其上游调控元件基因 ,克隆入E coli BCG穿梭载体 pOLYG中 ,构建表达蛋白能嵌入细胞壁中的E coli BCG穿梭载体。用间接免疫荧光染色法观察该载体携带所构建的结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B和ESAT 6基因在母牛分枝杆菌宿主中的融合表达。结果　经测序证实所克隆的 19 ss基因序列正确 ,所构建的E coli BCG穿梭载体 (pCW )能完成在大肠杆菌和母牛分枝杆菌细胞之间的穿梭 ,经免疫荧光检查外源基因Ag85B ESAT 6可融合表达于分枝杆菌宿主表面。结论　本方法可成功构建能够在分枝杆菌胞壁融合表达MTB分泌蛋白Ag85B ESAT 6的E coli

关键词：结核分枝杆菌细菌抗原 DNA疫苗基因融合

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分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组卡介苗菌株的筛选

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中华结核和呼吸杂志 2005年第4期28卷 254-257页

作者：师长宏徐志凯朱德生李元柏银兰薛莹第四军医大学基础部微生物学教研室西安710033

目的筛选获得分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组卡介苗(BCG)菌株。方法采用多聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌毒株H37Rv中扩增出热休克蛋白60(Hsp60)基因及其信号肽序列αss,将测序正确的hsp60和αss基因分别克隆入大肠杆菌(***.... 详细信息

目的筛选获得分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组卡介苗(BCG)菌株。方法采用多聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌毒株H37Rv中扩增出热休克蛋白60(Hsp60)基因及其信号肽序列αss,将测序正确的hsp60和αss基因分别克隆入大肠杆菌(***.)BCG穿梭载体pOLYG中,构建分枝杆菌分泌表达载体pDE22,按相应的酶切位点将ag85b和esat6按照不同的连接方式联合克隆入pDE22载体,分别命名为pDE22Ag85B ESAT6和pDE22ESAT6Ag85B,将纯化的重组质粒电穿入BCG,经潮霉素抗性筛选和PCR的方法鉴定出含目的基因的重组BCG阳性克隆。收集重组BCG的培养上清液,经浓缩和透析后,进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和固相化蛋白质免疫学测定(Western blot法)分析。结果两株重组BCG菌株的培养上清液分泌表达相对分子质量约37000的蛋白,且分别可与抗Ag85B和抗ESAT6蛋白免疫小鼠的血清有相应的结合条带。结论分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组BCG菌株构建成功,有望为结核病的预防提供有效的疫苗。

关键词： Ag85B 融合蛋白十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳重组卡介苗 Western-blot法菌株聚合酶链反应(PCR) 卡介苗(BCG) 重组BCG ESAT6蛋白培养上清液结核分枝杆菌分泌表达载体相对分子质量信号肽序列热休克蛋白 H37Rv

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单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒血凝素抗原的初步研究

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免疫学杂志 1989年第4期 213-220页

作者：汪力亚汪美先王海涛姜绍谆第四军医大学微生物学教研室西安第四军医大学微生物学教研室

用蔗糖-丙酮法从HFRS病毒陈栋感染的乳小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,将此粗制血凝素通过抗HFRS病毒血凝素McAb 3G与Sepharose 4B偶联的免疫吸附柱,获得初步纯化的HFRS病毒血凝素抗原,经鉴定具有较高的血凝滴度和较好的免疫原性。用SDS-P... 详细信息

用蔗糖-丙酮法从HFRS病毒陈栋感染的乳小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,将此粗制血凝素通过抗HFRS病毒血凝素McAb 3G与Sepharose 4B偶联的免疫吸附柱,获得初步纯化的HFRS病毒血凝素抗原,经鉴定具有较高的血凝滴度和较好的免疫原性。用SDS-PAGE和Wes-tern-blot技木分析该纯化的血凝素抗原,并与同法纯化的正常鼠脑抗原比较,证明该特异性血凝素抗原分子量为5×10~4道尔顿。用2株抗HFRS病毒以及10株抗HFRS病毒血凝素McAb,以ELISA阻断试验分析纯化50K血凝素,结果有10株McAb可阻断McAb3 G与其结合,其抗原决定簇之间有部分相同或重叠,提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一结构蛋白上。以上结果表明,该50k血凝素蛋白特性及结构均较复杂,尚待进一步研究。

关键词：肾综合征出血热病毒单克隆抗体亲和层析血凝素抗原

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青岛地区不同职业人群中生殖器单纯疱疹病毒感染情况的流…

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中华流行病学杂志 1993年第5期14卷 262-265页

作者：权力敏秦克锋 266011 第四军医大学微生物学教研室

在青岛地区对随机抽查的１１个不同职业及两个特殊人群（妊娠、宫颈癌）中１１４８份生殖器分泌物，应用单克隆抗体双夹心法酶联免疫吸附试验（ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ），分型检测标本中单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）抗原，总阳性一率为２２．... 详细信息

在青岛地区对随机抽查的１１个不同职业及两个特殊人群（妊娠、宫颈癌）中１１４８份生殖器分泌物，应用单克隆抗体双夹心法酶联免疫吸附试验（ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ），分型检测标本中单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）抗原，总阳性一率为２２．６％，其中ＨＳＶ－１占２０．０％。在不同性别中，男性标本中ＨＳＶ抗原阳性率２４．２％，女性为２１．５％，两者无显著性差异。特殊职业，反途贩运司标本中，ＨＳＶ抗原阳性率为４８．０％。

关键词：生殖器抱疹单克隆抗体流行病学

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日本脑炎病毒受体74×10^3分子的分离与初步鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第4期29卷 307-311页

作者：任君萍雷迎峰张伟杨敬马文煜第四军医大学微生物学教研室西安 710032

目的分离和初步鉴定日本脑炎病毒（JEV）易感细胞C6／36和Vero细胞上受体分子。方法应用免疫共沉淀（Co-IP）技术，从C6／36和Vero细胞分离与JEV结合的受体分子，做质谱分析鉴定和Western blot检测。用激光共聚焦技术（LSCM）观察候选... 详细信息

目的分离和初步鉴定日本脑炎病毒（JEV）易感细胞C6／36和Vero细胞上受体分子。方法应用免疫共沉淀（Co-IP）技术，从C6／36和Vero细胞分离与JEV结合的受体分子，做质谱分析鉴定和Western blot检测。用激光共聚焦技术（LSCM）观察候选受体分子在细胞膜上的定位及与JEV结合的情况。结果经过Co-IP反应，从C6／36、Vero细胞上分离出多个与JEV结合的分子条带。质谱分析首次鉴定出一个蛋白，即C6／36细胞上与JEV结合的相对分子质量（Mr）为74×10^3分子，为HSC70蛋白。进一步用抗HSC70抗体做Western blot，检测到从C6／36和Vero细胞膜上Co-IP分离出的74×10^3蛋白。LSCM观察到JEV吸附在C6／36细胞膜上时，HSC70蛋白与JEV共定位。结论C6／36细胞上肘，为74×10^3的HSC70可能是JEV的受体分子。

关键词：日本脑炎病毒病毒受体免疫共沉淀 C6/36细胞 Vero细胞

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丙肝病毒NS5B-EGFP融合蛋白真核表达载体的构建及稳定转染HepG_2细胞系的建立

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中华实验和临床病毒学杂志 2005年第1期19卷 49-51页

作者：雷迎峰薛小平尹文吕欣杨敬第四军医大学微生物学教研室西安710032

目的　构建可表达丙型肝炎病毒 (HCV)NS5B EGFP融合蛋白的真核表达载体 ;获得重组质粒稳定转染的HepG2 细胞系。方法　利用PCR技术从HCV基因组中扩增出ns5b基因片段 ,XhoⅠ KpnⅠ双酶切后连接到经同样酶切的pEGFP N3真核表达载体 ,转化... 详细信息

目的　构建可表达丙型肝炎病毒 (HCV)NS5B EGFP融合蛋白的真核表达载体 ;获得重组质粒稳定转染的HepG2 细胞系。方法　利用PCR技术从HCV基因组中扩增出ns5b基因片段 ,XhoⅠ KpnⅠ双酶切后连接到经同样酶切的pEGFP N3真核表达载体 ,转化TG1菌株感受态细胞 ,获得阳性重组质粒pEGFPN3 ns5b。将阳性克隆用脂质体法转染HepG2 细胞 ,经持续G4 18压力选择和有限稀释法克隆化获得稳定转染的细胞系。结果　成功构建了真核表达载体pEGFPN3 ns5b ;建立了其重组质粒稳定转染的HepG2 细胞系。结论　重组质粒稳定转染的HepG2 细胞系可表达NS5B EGFP融合蛋白 ;该HepG2

关键词： HepG2细胞稳定转染真核表达载体 EGFP 重组质粒融合蛋白丙肝病毒阳性克隆 b基因感受态细胞

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