检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病杂志 2003年第1期19卷 34-36页

作者：张芳琳徐志凯闫岩薛小平吴兴安罗雯刘勇白文涛赵茜王海涛第四军医大学微生物学教研室西安710032

目的　将汉滩病毒核蛋白 (NP)主要抗原位点活性片段与囊膜糖蛋白G2进行融合原核表达及鉴定 ,为该融合蛋白的真核表达及汉滩病毒基因工程疫苗研究打基础。方法　构建了汉滩病毒 76 - 118株M基因G2 片段与S基因 5’端70 0bp片段的嵌合片... 详细信息

目的　将汉滩病毒核蛋白 (NP)主要抗原位点活性片段与囊膜糖蛋白G2进行融合原核表达及鉴定 ,为该融合蛋白的真核表达及汉滩病毒基因工程疫苗研究打基础。方法　构建了汉滩病毒 76 - 118株M基因G2 片段与S基因 5’端70 0bp片段的嵌合片段原核表达载体pGEX - 4T1-G2 S0 7,诱导表达相应的融合蛋白 ,用Westernblotting和ELISA方法进行鉴定。结果　酶切结果显示成功构建了原核表达载体 pGEX - 4T1-G2 S0 7。IPTG诱导表达 4h后 ,Westernblotting显示诱导出分子量约 10 0kD的含GST的融合蛋白 (GST -G2 N0 7)。ELISA结果表明该融合蛋白与抗汉坦病毒NP特异性McAb有较高的结合活性 (P/N值为 0 71/ 0 0 7) ,与抗汉滩病毒糖蛋白特异性McAb也有较弱的结合活性 (P/N值为 0 2 1/ 0 0 8)。结论　S、M基因拼接方式是成功的 ,能够表达出有活性的汉滩病毒G2 糖蛋白与NP片段的融合蛋白。

关键词：汉滩病毒核蛋白糖蛋白嵌合片段原核表达

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辅受体突变导致HIV感染抑制的机理研究

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细胞与分子免疫学杂志 2002年第6期18卷 602-603页

作者：黎志东徐志凯陈峥第四军医大学基础部微生物学教研室陕西西安710032

目的　研究抗HIV感染者淋巴细胞HIV 1辅受体突变的情况 ,阐明其感染抑制的分子机理。方法　设计特定的引物 ,用PCR方法检测健康人、HIV感染者和抗HIV感染者的基因组DNA中HIV辅受体 (CCR5 )是否突变。结果　抗HIV感染者发生CCR5△ 32纯... 详细信息

目的　研究抗HIV感染者淋巴细胞HIV 1辅受体突变的情况 ,阐明其感染抑制的分子机理。方法　设计特定的引物 ,用PCR方法检测健康人、HIV感染者和抗HIV感染者的基因组DNA中HIV辅受体 (CCR5 )是否突变。结果　抗HIV感染者发生CCR5△ 32纯合子突变 ,健康人及HIV感染者CCR5基因未发生突变。讨论　发现了我国本土人群存在CCR5△ 32纯合子突变 ,此突变可能为抗HIV感染保护机制。

关键词：辅受体突变 HIV 感染抑制分子机理艾滋病

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HCV NS3蛋白单克隆抗体的制备及其识别区域的分析

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免疫学杂志 2006年第4期22卷 402-405页

作者：杨敬薛小平尹文雷迎峰吕欣韦三华胡兴斌孙梦宁徐志凯第四军医大学微生物学教研室西安710032

目的制备针对丙型肝炎病毒(HCV)非结构区NS3全长蛋白的单克隆抗体(MAb),并分析获得的单抗识别表位所在区域,为建立以NS3蛋白为靶位的抗HCV研究提供抗体工具。方法用原核表达的HCV非结构区NS3全长蛋白作为免疫原,采用小鼠腹股沟皮下NC膜... 详细信息

目的制备针对丙型肝炎病毒(HCV)非结构区NS3全长蛋白的单克隆抗体(MAb),并分析获得的单抗识别表位所在区域,为建立以NS3蛋白为靶位的抗HCV研究提供抗体工具。方法用原核表达的HCV非结构区NS3全长蛋白作为免疫原,采用小鼠腹股沟皮下NC膜包埋法免疫小鼠,按常规杂交瘤细胞的制备方法,经细胞融合、克隆化制备抗NS3蛋白的MAb。用间接免疫荧光法和Westernblot鉴定其特异性。分别构建NS3丝氨酸蛋白酶(NS3蛋白的N末端13)编码基因的真核表达质粒pcDNA3.1()ns3p、NS3解旋酶(NS3蛋白的C末端23)编码基因的真核表达质粒pcDNA3.1()ns3h,将其瞬时转染COS7细胞后,以获得的单克隆抗体作为一抗,通过免疫荧光分析获得单抗识别表位所在的区域。结果获得了2株抗NS3蛋白的单克隆抗体,这2株MAbs均特异识别NS3蛋白,并确定了它们的结合区域。结论获得了针对NS3蛋白的单克隆抗体,并对其单抗识别表位所在的区域进行了分析,为下一步进行以NS3蛋白为靶位的抗HCV研究奠定了良好的基础。

关键词：丙型肝炎病毒非结构区NS3蛋白单克隆抗体丝氨酸蛋白酶解旋酶

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汉滩病毒M、S基因部分片段在大肠杆菌中的融合表达

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细胞与分子免疫学杂志 2001年第2期17卷 115-117页

作者：罗雯徐志凯阎岩吴兴安张芳琳刘勇赵茜白文涛王海涛第四军医大学基础部微生物学教研室陕西西安710032

目的在大肠杆菌中融合表达含主要抗原位点的汉滩病毒囊膜糖蛋白G1与NP片段。方法将汉滩病毒76118株M基因编码G1的片段与S基因编码区5′端约0.7kb的片段连接,克隆入pGEX4T2,构建嵌合基因原核表达载体pGEX4T2G1S0.7,并在大肠杆菌... 详细信息

目的在大肠杆菌中融合表达含主要抗原位点的汉滩病毒囊膜糖蛋白G1与NP片段。方法将汉滩病毒76118株M基因编码G1的片段与S基因编码区5′端约0.7kb的片段连接,克隆入pGEX4T2,构建嵌合基因原核表达载体pGEX4T2G1S0.7,并在大肠杆菌XL1Blue中,诱导GSTG1S0.7融合蛋白的表达。表达产物用ELISA和Westernblot进行鉴定。结果成功地构建了嵌合原核表达载体pGEX4T2G1S0.7。经IPTG诱导后,ELISA活性测定结果表明,该融合蛋白可与抗汉滩病毒NP及糖蛋白的mAb特异性结合。Westernblot结果显示,诱导出相对分子质量Mr大于1×105的G1S0.7与GST的融合蛋白。结论获得具有特异性结合活性的融合蛋白GSTG1S0.7,为汉滩病毒基因工程疫苗的研制奠定了基础。

关键词：汉滩病毒原核表达融合蛋白大肠杆菌

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结核分枝杆菌esat6-cfp10融合基因稳定表达细胞系的建立

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中国人兽共患病杂志 2005年第10期21卷 892-894页

作者：张海薛莹姜泓高雪师长宏柏银兰王丽梅徐志凯第四军医大学微生物学教研室西安710032

目的筛选并建立稳定表达结核分枝杆菌esat6-cfp10融合基因的P815细胞株,为结核杆菌DNA疫苗的效果评价提供体外细胞感染模型。方法以BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切pGEM610获得esat6-cfp10融合基因,克隆入真核表达载体pCDNA3.1(+),重组质粒酶切鉴... 详细信息

目的筛选并建立稳定表达结核分枝杆菌esat6-cfp10融合基因的P815细胞株,为结核杆菌DNA疫苗的效果评价提供体外细胞感染模型。方法以BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切pGEM610获得esat6-cfp10融合基因,克隆入真核表达载体pCDNA3.1(+),重组质粒酶切鉴定正确后以阳离子聚合物转染P815细胞,多轮筛选过后分别以RT-PCR方法检测mRNA表达和间接免疫荧光技术检测目的蛋白的表达。结果构建了重组质粒pCDNA610,RT-PCR结果证明esat6-cfp10融合基因已稳定整合在转染P815细胞染色体上,间接免疫荧光检测后表达有ESAT6-CFP10蛋白的阳性细胞着染。结论获得了稳定表达结核分枝杆菌esat6-cfp10融合基因的P815细胞株,为今后在小鼠体内检测结核杆菌DNA疫苗激发的CTL反应奠定了基础。

关键词：分枝杆菌结核 esat6 cfp10 稳定表达

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汉滩病毒核蛋白部分片段与囊膜糖蛋白G1在昆虫细胞中的融合表达

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中国人兽共患病杂志 2002年第5期18卷 5-8,F004页

作者：罗雯徐志凯阎岩吴兴安张芳琳刘勇白文涛王海涛第四军医大学微生物学教研室西安710032

目的　应用Bac -to -Bac杆状病毒表达系统融合表达汉滩病毒囊膜糖蛋白G1与核蛋白部分片段。方法　构建含有汉滩病毒G1S0 7嵌合基因的杆状病毒表达载体 pFBD -G1S0 7,转化DH10Bac致敏菌 ,利用其含有的细菌Tn7转座系统将嵌合基因重组至... 详细信息

目的　应用Bac -to -Bac杆状病毒表达系统融合表达汉滩病毒囊膜糖蛋白G1与核蛋白部分片段。方法　构建含有汉滩病毒G1S0 7嵌合基因的杆状病毒表达载体 pFBD -G1S0 7,转化DH10Bac致敏菌 ,利用其含有的细菌Tn7转座系统将嵌合基因重组至穿梭质粒Bacmid上 ,快速筛选出含有G1S0 7嵌合基因的重组杆状病毒 ,在昆虫细胞中表达该融合蛋白 ,利用间接免疫荧光、ELISA和免疫印迹对表达产物进行检测。结果　构建的含G1S0 7嵌合基因之重组杆状病毒可在昆虫细胞中表达出融合蛋白 ,该蛋白可被抗汉滩病毒核蛋白及糖蛋白G1特异性单抗所识别 ,表达产物主要集中在细胞内。结论　在昆虫细胞中表达出具有生物学活性的G1S0 7融合蛋白。

关键词：核蛋白部分片段囊膜糖蛋白G1 汉滩病毒杆状病毒昆虫细胞融合表达肾综合征出血热 HFRS 免疫学

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结核分枝杆菌HSP65与IL-2融合蛋白的表达和纯化

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中国人兽共患病学报 2006年第9期22卷 801-804页

作者：王丽梅师长宏张海薛莹柏银兰高辉徐志凯第四军医大学微生物学教研室西安710032

目的获得融合表达的结核分枝杆菌热休克蛋白65与人白细胞介素2的重组蛋白,为进一步研究其对结核疫苗的作用奠定基础。方法用PCR的方法分别从H37Rv DNA和质粒pGEM-Teasy-IL-2中扩增目的基因片段hsp65和IL-2,将各目的片段克隆至pMD18-T载... 详细信息

目的获得融合表达的结核分枝杆菌热休克蛋白65与人白细胞介素2的重组蛋白,为进一步研究其对结核疫苗的作用奠定基础。方法用PCR的方法分别从H37Rv DNA和质粒pGEM-Teasy-IL-2中扩增目的基因片段hsp65和IL-2,将各目的片段克隆至pMD18-T载体中进行测序,将测序正确的目的基因片段分别经EcoRI和ClaI,ClaI和HindⅢ双酶切后亚克隆至原核表达载体pPro-EX HTa,转化大肠杆菌DH5α,挑选阳性克隆,经IPTG诱导后进行融合表达,并通过镍柱对融合蛋白进行纯化。结果PCR法扩增获得的各目的基因片段与GenBank报道的一致。构建的融合蛋白原核表达载体在大肠杆菌中表达后,经SDS-PAGE和Western-blot分析,在Mr 78000处有特异性的蛋白表达条带。用镍柱进行亲和层析纯化后得到了高纯度的HSP65-IL-2融合蛋白。结论成功的构建了结核分枝杆菌HSP65与人IL-2的融合表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达,有望为结核的预防提供有效的疫苗。

关键词：结核分枝杆菌热休克蛋白65 白细胞介素2 表达纯化

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抗汉滩病毒双链抗体重组杆状病毒在昆虫细胞中的表达

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免疫学杂志 2005年第2期21卷 84-87页

作者：胡刚徐志凯张芳琳吴兴安阎岩白文涛于澜王海涛第四军医大学微生物学教研室西安710032

目的　应用Bac to Bac杆状病毒表达系统构建具有抗汉滩病毒(HTNV)G2 糖蛋白(GP)鼠源性mAb 3G1与抗HTNV核蛋白(NP)鼠源性mAb 1A8嵌合基因的重组杆状病毒,在昆虫细胞中表达抗HTNV双链抗体并对表达产物进行初步鉴定。方法　构建含有嵌合基... 详细信息

目的　应用Bac to Bac杆状病毒表达系统构建具有抗汉滩病毒(HTNV)G2 糖蛋白(GP)鼠源性mAb 3G1与抗HTNV核蛋白(NP)鼠源性mAb 1A8嵌合基因的重组杆状病毒,在昆虫细胞中表达抗HTNV双链抗体并对表达产物进行初步鉴定。方法　构建含有嵌合基因的杆状病毒表达载体ScFv pFBD ScFv’,转化DH10Bac致敏菌,利用其含有的细菌Tn7转座系统将嵌合基因重组至穿梭质粒Bacmid上,快速筛选出含有抗HTNV双链抗体嵌合基因的重组杆状病毒,在昆虫细胞中进行表达,并利用间接免疫荧光试验检测表达产物。结果　构建了含抗HTNV双链抗体嵌合基因之重组杆状病毒,并在昆虫细胞中表达出特异性抗体,该抗体能被兔抗人Cκ抗体所识别并可与HTNVNP和GP特异性结合。结论　成功地在昆虫细胞中表达出抗HTNV双链抗体,且该抗体具有与HTNVNP抗原和GP抗原结合的活性。

关键词：单链抗体双链抗体汉滩病毒杆状病毒昆虫细胞

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启发式等三种教学方法在医学微生物学教学中的应用

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微生物学通报 2015年第1期42卷 218-222页

作者：黎志东徐志凯第四军医大学基础部微生物学教研室陕西西安710032

医学微生物学具有内容多、重点多、知识点分散的特点。为提高课堂教学质量,综合运用启发式、案例式及PBL(Problem-based learning)三种教学方法,强化学生对基本知识、基本概念和重点内容的掌握,激发学生的学习兴趣和创新精神,提高学生... 详细信息

医学微生物学具有内容多、重点多、知识点分散的特点。为提高课堂教学质量,综合运用启发式、案例式及PBL(Problem-based learning)三种教学方法,强化学生对基本知识、基本概念和重点内容的掌握,激发学生的学习兴趣和创新精神,提高学生发现问题、分析问题和解决问题的能力。

关键词：微生物学教学方法教学质量

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乙型脑炎的流行病学与临床

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中国人兽共患病杂志 2003年第3期19卷 111-112,43页

作者：吴玉水宋建华马文煜第四军医大学微生物学教研室西安710032

流行性乙型脑炎(简称乙脑)为最常见的病毒性脑炎,由日本脑炎病毒(JEV)引起.乙型脑炎的命名最初是用于区别昏睡性脑炎,即甲型脑炎(后者现已非常少见).

关键词：乙型脑炎流行病学临床地理分布诊断治疗

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