检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2003年第2期30卷 272-277页

作者：贾林涛张立红于翠娟纪宗玲曹云新王成济杨安钢第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室西安710032 第四军医大学基础部免疫学教研室西安710032

通过稳定转染人宫颈癌HeLa细胞,建立了野生型caspase-3(wt-casp3),大小亚基序列颠倒的重组caspase-3 (r-casp3),和N端融合绿脓杆菌外毒素(PE)转膜肽段的嵌合重组caspase-3 (cr-casp3)的诱导表达细胞系.蜕皮素诱导后细胞中检测到目的基... 详细信息

通过稳定转染人宫颈癌HeLa细胞,建立了野生型caspase-3(wt-casp3),大小亚基序列颠倒的重组caspase-3 (r-casp3),和N端融合绿脓杆菌外毒素(PE)转膜肽段的嵌合重组caspase-3 (cr-casp3)的诱导表达细胞系.蜕皮素诱导后细胞中检测到目的基因的表达,MTT检测和细胞计数结果表明,r-casp3和cr-casp3诱导表达后有效地导致HeLa细胞死亡,通过测定细胞中caspase-3活性,以及细胞周期检测、DNA梯状电泳条带检测(DNA ladder)、电镜观察等证实r-casp3和cr-casp3诱导表达后细胞发生了凋亡,且二者的促凋亡活性相当,而wt-casp3诱导表达细胞并未出现上述效应.结果表明,与野生型caspase-3活化需要上游分子的切割不同,重组caspase-3具有自发的促凋亡活性,而N端PE肽段的融合不影响这种活性,因此PE转膜结构域和重组caspase-3有望参与构建能转膜进入细胞内部,并杀伤细胞的新型肿瘤治疗分子.

关键词： Caspase-3 绿脓杆菌外毒素细胞凋亡肿瘤

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一种新的抑癌候选基因——NDR2在人类正常组织及相应肿瘤中的表达

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生物化学与生物物理进展 2002年第2期29卷 223-227页

作者：李剑刘新平林树新邓艳春孟庆军张文红李树钧聂晓燕药立波第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室西安710032 第四军医大学基础部病理生理学教研室西安710032

为观察NDR2基因在人类正常组织及相应肿瘤组织中的表达分布特点,收集人脑与胶质瘤、肺与肺癌、胃与胃癌、结肠与结肠癌组织标本,分别进行组织石蜡切片和总RNA提取 ,应用免疫组化方法和RT-PCR技术检测NDR2蛋白质及mRNA表达水平,并通过DN... 详细信息

为观察NDR2基因在人类正常组织及相应肿瘤组织中的表达分布特点,收集人脑与胶质瘤、肺与肺癌、胃与胃癌、结肠与结肠癌组织标本,分别进行组织石蜡切片和总RNA提取 ,应用免疫组化方法和RT-PCR技术检测NDR2蛋白质及mRNA表达水平,并通过DNA测序验证P CR产物的正确性.免疫组化结果表明,在上述各组织均有NDR2蛋白不同程度的表达.RT-PC R结果显示,在人脑和胶质瘤组织、肺与肺癌组织、胃与胃癌组织、结肠与结肠癌组织中均有NDR2 mRNA表达,其表达水平以脑组织为最高.NDR2 mRNA在正常脑和肺组织的表达水平分别显著高于胶质瘤与肺癌组织,而结肠与结肠癌组织,胃与胃癌组织NDR2 mRNA表达水平则无显著差别.以上结果表明,NDR2基因可能广泛表达于人体正常组织内,而在胶质瘤与肺癌中的表达较相应正常组织减低,提示该基因可能与神经系统及呼吸系统肿瘤的发生发展有关 ,为进一步探讨该基因功能提供了线索.

关键词： NDR2 肿瘤免疫组织化学 mRNA表达 RT-PCR

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抗HER2单链抗体融合凋亡蛋白对SKOV3细胞的靶向杀伤

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第2期19卷 160-162页

作者：张立红贾林涛鲍炜于翠娟赵晶金明王成济杨安钢第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032

目的:探讨分泌表达的抗HER2单链抗体与重构型人caspase-3融合蛋白对HER2抗原阳性肿瘤细胞的靶向杀伤作用. 方法:将重构型人cas pase-3基因亚克隆入pCMV-e23scFv-PEII-PEIII的相应位点,构建重组真核表达载体p CMV-e23scFv-PEII-revcasp3... 详细信息

目的:探讨分泌表达的抗HER2单链抗体与重构型人caspase-3融合蛋白对HER2抗原阳性肿瘤细胞的靶向杀伤作用. 方法:将重构型人cas pase-3基因亚克隆入pCMV-e23scFv-PEII-PEIII的相应位点,构建重组真核表达载体p CMV-e23scFv-PEII-revcasp3,并转染人T淋巴瘤细胞系Jurkat,筛选并建系.用EL ISA检测培养上清中融合蛋白的分泌表达.通过共培养实验观察含有该融合蛋白的培养上清对人卵巢癌细胞SKOV3生长的抑制作用.结果:融合蛋白基因可在Jurkat细胞中,分泌表达并杀伤SKOV3细胞. 结论:分泌表达的抗erbB2单链抗体与重构型人caspase 3融合蛋白能够靶向诱导SKOV3细胞死亡.

关键词：重构型人caspase 3 HER2抗原分泌表达靶向杀伤作用

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抗人HBsAg单链抗体基因的构建及其在COS-7细胞中的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第2期19卷 163-167页

作者：温伟红赵晶于翠娟许彦鸣金明王成济杨安钢第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032

目的:构建抗人HBsAg单链抗体基因,并分析其在COS-7细胞中的表达.方法:以从噬菌体抗体库中筛选的抗HBsAg的Fab抗体基因为模板,分别扩增其轻、重链可变区(VL、VH)基因,通过重组PCR方法将轻、重链可变区基因用连接肽(Gly 4Ser)3的编码序列... 详细信息

目的:构建抗人HBsAg单链抗体基因,并分析其在COS-7细胞中的表达.方法:以从噬菌体抗体库中筛选的抗HBsAg的Fab抗体基因为模板,分别扩增其轻、重链可变区(VL、VH)基因,通过重组PCR方法将轻、重链可变区基因用连接肽(Gly 4Ser)3的编码序列连接,并引入前导肽编码序列,构建具有L-VH-Linker-VL结构的单链抗体基因.将所构建的单链抗体基因克隆入绿色荧光蛋白(GFP)融合表达载体pEGFP-N3,并转染COS-7细胞进行表达.结果:经测序表明,前导肽、连接肽、VL 及VH的序列正确.酶切鉴定证实,成功地构建了GFP基因融合表达载体.瞬时转染COS-7细胞后,通过荧光显微镜观察证实有ScFv融合蛋白的表达.转染细胞的培养上清浓缩后,进行 SDS-PAGE及Western blot 分析,可检出ScFv融合蛋白的分泌性表达.培养上清的间接ELISA 检测证实,所表达的单链抗体具有与HBsAg结合的特异性.结论:成功地构建了抗人HBsAg 单链抗体基因,并可在COS-7细胞中分泌性表达.

关键词：单链抗体表达乙型肝炎 HBsAg

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靶向hTERT RNA干涉促进人宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第4期21卷 524-526页

作者：赵英任君琳张瑞马龙洋鲍炜王成济杨安钢第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 第四军医大学基础部免疫学教研室陕西西安710032 第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032第四军医大学基础部免疫学教研室陕西西安710032

目的:利用RNA干涉技术抑制肿瘤细胞端粒酶表达,探讨其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用。方法:将成功构建的针对hTERT的siRNA(smallinterferencingRNA)表达载体转染HeLa细胞,通过透射电镜、免疫印迹和流式细胞术(FCM)等方法检测人宫颈癌HeLa细... 详细信息

目的:利用RNA干涉技术抑制肿瘤细胞端粒酶表达,探讨其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用。方法:将成功构建的针对hTERT的siRNA(smallinterferencingRNA)表达载体转染HeLa细胞,通过透射电镜、免疫印迹和流式细胞术(FCM)等方法检测人宫颈癌HeLa细胞的凋亡情况。结果:构建的siRNA表达载体可以诱导HeLa细胞发生凋亡。结论:针对人端粒酶逆转录酶的siRNA表达载体稳定转染HeLa细胞,可诱导HeLa细胞发生凋亡。

关键词： RNA干涉人端粒酶逆转录酶凋亡 HeLa细胞

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不同选择剪接形式的小鼠Era在大肠杆菌中的表达及纯化

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第3期21卷 280-283页

作者：董轲陈苏民纪宗玲郑玉陈南春第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032

目的:对不同剪接形式的小鼠era基因(mera)进行克隆、原核表达,并进行纯化,检测抗人Era蛋白抗体对于两种剪接形式鼠Era蛋白的特异性,为以后鼠Era蛋白的研究奠定基础。方法:采用两种剪接形式era基因的MBP融合表达载体(pMAL-meraW,pMAL-mer... 详细信息

目的:对不同剪接形式的小鼠era基因(mera)进行克隆、原核表达,并进行纯化,检测抗人Era蛋白抗体对于两种剪接形式鼠Era蛋白的特异性,为以后鼠Era蛋白的研究奠定基础。方法:采用两种剪接形式era基因的MBP融合表达载体(pMAL-meraW,pMAL-meraS),在大肠杆菌中进行表达,对其进行纯化,并应用Westernblot鉴定了抗人Era蛋白抗体的特异性。结果:原核表达的MBP-mEraW、MBP-mEraS融合蛋白经过薄层扫描后发现其分别占菌体总蛋白的17%、19%;纯化后的融合蛋白纯度为67%和61%;用抗人Era蛋白抗体进行Westernblot发现抗体特异性较好,适合两种剪接形式的鼠Era蛋白的检测。结论:利用原核系统高效表达了不同剪切形式的鼠era基因,并检测了兔抗人Era蛋白抗体对不同剪接形式鼠Era蛋白的特异性,为以后对鼠era基因的研究奠定了基础。

关键词：小鼠era基因基因表达选择剪接形式

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Sirt2基因的克隆及其在HEK293中的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第11期25卷 970-972页

作者：王涛王伟徐清关路媛张斌第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032

目的:克隆大鼠Sirt2基因,构建其真核表达载体并在HEK293细胞中表达。方法:利用RT-PCR从大鼠脑组织总RNA中扩增出包含Sirt2编码区的cDNA片段,产物纯化后T-A克隆连接至pMD20-T载体。以此为模板,将该基因编码区克隆入真核表达载体pcDNA3.1m... 详细信息

目的:克隆大鼠Sirt2基因,构建其真核表达载体并在HEK293细胞中表达。方法:利用RT-PCR从大鼠脑组织总RNA中扩增出包含Sirt2编码区的cDNA片段,产物纯化后T-A克隆连接至pMD20-T载体。以此为模板,将该基因编码区克隆入真核表达载体pcDNA3.1myc-his(-)中,转染HEK293细胞检测其表达。结果:测序证实所克隆的Sirt2编码区cDNA正确地插入pcDNA3.1myc-his(-)中,经免疫荧光检测证实其在HEK293细胞中得到表达。结论:成功克隆了大鼠Sirt2 cDNA,构建了其真核表达载体,并在HEK293细胞中得到有效表达,为进一步研究大鼠Sirt2的功能奠定了基础。

关键词： Sirt2 真核表达克隆 cDNA

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人骨形成蛋白2A与小鼠成骨细胞表面特异性结合的研究

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生物工程学报 1996年第S1期12卷 157-161页

作者：刘新平陈苏民陈南春高磊赵忠良第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室

作者证实在大肠杆菌中表达的人骨形成蛋白２Ａ（ｈＢＭＰ２Ａ）Ｃ端肽段具有骨诱导活性，再利用噬菌体呈现载体克隆并表达了ｈＢＭＰ２ＡｃＤＮＡ３’端５６７个核苷酸，表面呈现有人ＢＭＰ２ＡＣ端肽段的噬菌体与小鼠成骨细胞系（Ｍ... 详细信息

作者证实在大肠杆菌中表达的人骨形成蛋白２Ａ（ｈＢＭＰ２Ａ）Ｃ端肽段具有骨诱导活性，再利用噬菌体呈现载体克隆并表达了ｈＢＭＰ２ＡｃＤＮＡ３’端５６７个核苷酸，表面呈现有人ＢＭＰ２ＡＣ端肽段的噬菌体与小鼠成骨细胞系（ＭＣ３Ｔ３）能够特异地结合，用抗Ｍ１３噬菌体抗体进行ＥＬＩＳＡ实验呈阳性反应，同时用３ＨＴｄＲ参入重组ＢＭＰ２Ａ噬菌体时放射性计数比对照组高近１０倍，推测小鼠成骨细胞表面存在有人ＢＭＰ２Ａ受体。

关键词：人BMP2A 噬菌体呈现 ELISA 3HTdR参入受体

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RNA干涉的最新研究进展

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中国生物化学与分子生物学报 2003年第4期19卷 411-417页

作者：吴元明陈苏民第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室西安710032

RNA干涉 (RNAi)是将双链RNA(dsRNA)导入细胞引起特异基因mRNA降解的一种细胞反应过程 .它是转录后基因沉默 (PTGS)的一种 .RNAi在生物界中广泛存在 .RNAi发生过程主要分为 3个阶段 :起始阶段 ,扩增阶段 ,效应阶段 .RNAi在维持基因组稳... 详细信息

RNA干涉 (RNAi)是将双链RNA(dsRNA)导入细胞引起特异基因mRNA降解的一种细胞反应过程 .它是转录后基因沉默 (PTGS)的一种 .RNAi在生物界中广泛存在 .RNAi发生过程主要分为 3个阶段 :起始阶段 ,扩增阶段 ,效应阶段 .RNAi在维持基因组稳定、保护基因组免受外源核酸侵入、基因表达调控等方面发挥重要生物学作用 .RNAi作为基因沉默的一个工具 ,已被广泛用于基因功能研究、基因治疗和新药研究与开发等方面 .

关键词： RNA干涉基因功能转录后基因沉默基因治疗

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一种用少量标本快速构建老年性白内障消减cDNA文库的方法

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生物化学与生物物理进展 2002年第6期29卷 952-954页

作者：刘燕周健刘新平药立波王吉村苏景宽惠延年第四军医大学西京医院眼科西安710032 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710032 第四军医大学唐都医院医教部西安710032

为从少量标本中获得含较多大片段的、高质量的老年性白内障消减cDNA文库 ,利用磁珠分离、生物素标记的改良消减杂交法获得差异cDNA ,利用选择性PCR法扩增其中大片段差异cDNA ,从而成功构建老年性白内障消减cDNA文库 .在文库中随机挑取的... 详细信息

为从少量标本中获得含较多大片段的、高质量的老年性白内障消减cDNA文库 ,利用磁珠分离、生物素标记的改良消减杂交法获得差异cDNA ,利用选择性PCR法扩增其中大片段差异cDNA ,从而成功构建老年性白内障消减cDNA文库 .在文库中随机挑取的 2 2个克隆中 ,10 0 0bp以上的片段有 7个 ,占 31 8% ,75 0bp以上有 15个 ,占 6 8 2 % .所得cDNA片段较大 ,可以满足下一步研究需要 .

关键词：少量标本快速构建老年性白内障消减cDNA文库改良消减杂交法选择性PCR法

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