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自由基与细胞凋亡

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生物化学与生物物理进展 1996年第1期23卷 12-16页

作者：惠宏襄赵小宁金明王成济莫简第四军医大学生物化学教研室第四军医大学化学教研室

细胞凋亡是指细胞在生理和病理情况下的一种死亡模式，广泛涉及到肿瘤、衰老和退行性病变等一系列疾病．最近有实验表明自由基与细胞凋亡有密切的关系．

关键词：细胞凋亡自由基病理化学

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盘状结构域受体2胞外区的可溶性表达、纯化和功能鉴定

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第6期33卷 647-652页

作者：王吉村刘新平聂晓燕吴国强张文红沈岚药立波第四军医大学生物化学与分子生物学教研室

盘状结构域受体 2 (discoidindomainreceptor 2 ,DDR2 )是一种与肿瘤细胞转移相关的蛋白酪氨酸激酶 ,其配体为纤维性胶原 ,胶原对DDR2的活化上调细胞中基质金属蛋白酶 1(MMP 1)的表达。为研究DDR2在类风湿性关节炎 (rheumatoidarthritis... 详细信息

盘状结构域受体 2 (discoidindomainreceptor 2 ,DDR2 )是一种与肿瘤细胞转移相关的蛋白酪氨酸激酶 ,其配体为纤维性胶原 ,胶原对DDR2的活化上调细胞中基质金属蛋白酶 1(MMP 1)的表达。为研究DDR2在类风湿性关节炎 (rheumatoidarthritis ,RA)软骨破坏和肿瘤转移中的作用 ,尝试了在大肠杆菌中表达一段DDR2胞外区(命名DB) ,并进行了可溶性部分的纯化和功能鉴定 ,以备将来用作DDR2的特异性阻断剂。获得了一株表达GST DB融合蛋白的大肠杆菌克隆 ;其表达的蛋白质中可溶性部分约占全部融合蛋白的 13% ;经GST融合蛋白特异性亲和珠纯化后 ,获得了纯度约 86 .1%的可溶性GST DB融合蛋白 ;竞争结合抑制实验显示 ,GST DB具有阻断II型胶原和细胞表面天然DDR2受体结合的功能 ;细胞实验表明 ,GST DB有抑制II型胶原刺激下的类风湿性关节炎滑膜细胞和NIH 3T3细胞分泌MMP 1的作用。以上结果提示 ,表达的融合蛋白GST DB具有抑制天然DDR2功能的作用 ;DDR2在滑膜细胞和NIH 3T3细胞中介导II型胶原刺激下的MMP 1的分泌。

关键词：盘状结构域受体2 胞外区表达阻断剂基质金属蛋白酶1

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增加bax基因表达促进紫杉醇诱导的食管癌细胞凋亡

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2000年第4期32卷 356-358页

作者：彭玮丹张杰惠宏襄许彦鸣朱峰杨安钢王成济第四军医大学生物化学教研室!西安710032

为促进紫杉醇诱导的食管癌细胞凋亡 ,探索克服耐药、提高紫杉醇疗效的新途径 ,构建了bax基因可诱导的真核表达载体 ,并用荧光素酶基因系统测定了金属硫蛋白启动子在食管癌细胞中的诱导表达及控制能力。将bax基因转入食管癌细胞Eca10 9... 详细信息

为促进紫杉醇诱导的食管癌细胞凋亡 ,探索克服耐药、提高紫杉醇疗效的新途径 ,构建了bax基因可诱导的真核表达载体 ,并用荧光素酶基因系统测定了金属硫蛋白启动子在食管癌细胞中的诱导表达及控制能力。将bax基因转入食管癌细胞Eca10 9中 ,用免疫细胞化学方法测定了Bax蛋白表达 ,并以TUNEL、DNA梯带、流式细胞术等方法分析了转染bax对紫杉醇的诱导细胞凋亡的促进作用。结果表明 ,140 μmol/LZnSO4 诱导 12h以上为最佳诱导条件 ,在此诱导条件下得到一株Bax高表达细胞株X10 97# ,在同一紫杉醇作用条件下凋亡率升高并对紫杉醇敏感度提高。提示Bax在紫杉醇诱导的细胞凋亡中起着重要作用 ,作为小分子辅助药物提高紫杉醇疗效具有很好前景

关键词： bax基因细胞凋亡紫杉醇诱导

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重组人凋亡诱导因子基因的构建、表达及其对HeLa细胞的促凋亡作用

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生物化学与生物物理进展 2002年第6期29卷 915-921页

作者：于翠娟孟艳玲桂俊豪赵晶金明王智王成济杨安钢第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710033

凋亡诱导因子(apoptosis-inducing fctor,AIF)定位于细胞的线粒体膜间隙.当凋亡信号刺激时,AIF分子从线粒体释放到胞浆,然后转位到细胞核内,引起染色体核周边凝集和DNA呈大片段断裂(～50kb).用RT-PCR法分段克隆得到人全长AIF基因,经改... 详细信息

凋亡诱导因子(apoptosis-inducing fctor,AIF)定位于细胞的线粒体膜间隙.当凋亡信号刺激时,AIF分子从线粒体释放到胞浆,然后转位到细胞核内,引起染色体核周边凝集和DNA呈大片段断裂(～50kb).用RT-PCR法分段克隆得到人全长AIF基因,经改造截去其N端线粒体定位信号编码序列,代之以不同长度的绿脓杆菌外毒素(PE)转膜结构域序列.把这些重组基因克隆人pIRES2-EGFP真核表达载体,脂质体法转染Hela细胞,通过荧光显微镜观察、共聚焦显微镜观察、电镜观察等方法检测了多种重组人AIF基因的表达及其对细胞生长的影响.证明了重组人AIF基因的表达可引起HeLa细胞死亡,为肿瘤的杀伤提供了新的策略.

关键词： AlF 细胞凋亡融合蛋白 HeLa细胞

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Ndrg2基因表达对胃癌细胞增殖调控及其机理的研究

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生物化学与生物物理进展 2003年第1期30卷 116-121页

作者：刘新平邓艳春韩炯李剑王吉村李莹药立波第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710032

为研究Ndrg2基因在人类肿瘤发生发展中的作用,以不表达Ndrg2基因的胃癌细胞系HGC-27和表达Ndrg2基因的胃癌细胞系SGC-7901作为对比材料,以Ndrg2基因转染HGC-27胃癌细胞系,以及用Ndrg2的反义寡核苷酸封闭SGC-7901胃癌细胞系中Ndrg2基因... 详细信息

为研究Ndrg2基因在人类肿瘤发生发展中的作用,以不表达Ndrg2基因的胃癌细胞系HGC-27和表达Ndrg2基因的胃癌细胞系SGC-7901作为对比材料,以Ndrg2基因转染HGC-27胃癌细胞系,以及用Ndrg2的反义寡核苷酸封闭SGC-7901胃癌细胞系中Ndrg2基因的表达.发现Ndrg2可以抑制HGC-27胃癌细胞的软琼脂集落形成,有一定诱导细胞凋亡的作用,对细胞周期蛋白E的表达有明显下调作用.当封闭了SGC-7901胃癌细胞中Ndrg2基因表达的软琼脂集落形成受到抑制,流式细胞仪检测发现此时的SGC-7901细胞周期被阻滞在G1期,细胞周期蛋白D1和E表达下调.Ndrg2基因对两种肿瘤细胞中的细胞外信号调节激酶(ERK)和P38的表达也有不同的影响.

关键词： Ndrg2基因反义寡核苷酸肿瘤细胞周期蛋白

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酪氨酸激酶受体Eph亚族的研究进展

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生物化学与生物物理进展 1999年第1期26卷 15-19页

作者：张晓光药立波苏成芝第四军医大学生物化学及分子生物学教研室

酪氨酸激酶受体（ＲＴＫ）参与细胞生长、分化、胚胎发育及细胞内信号传递等过程，具有相当重要的生理功能．目前已发现５０多种ＲＴＫ基因分属于１４种亚族，Ｅｐｈ亚族是其中最大的家族，由１４个基因组成，一些基因主要在脑的发育中... 详细信息

酪氨酸激酶受体（ＲＴＫ）参与细胞生长、分化、胚胎发育及细胞内信号传递等过程，具有相当重要的生理功能．目前已发现５０多种ＲＴＫ基因分属于１４种亚族，Ｅｐｈ亚族是其中最大的家族，由１４个基因组成，一些基因主要在脑的发育中表达，另一些则在各种组织中广泛表达．最近该亚族胞外配体的发现为深入研究其生理功能打下基础．综述了Ｅｐｈ亚族成员的来源、表达及其配体的研究概况．

关键词：酪氨酸激酶受体 Eph亚族配体

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大肠杆菌基因组中存在Era亲和蛋白的基因

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生物化学与生物物理进展 1997年第6期24卷 559-560页

作者：陈南春陈苏民高磊郝晓萌高辉金晶马小峰第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710032

构建了一个大肠杆菌基因组DNAλZAP表达文库 ,以Dig标记的Era为探针 ,从 4× 1 0 4 噬斑中筛选到一个与探针呈特异结合的噬斑 ,说明大肠杆菌基因组中确有Era亲和蛋白基因存在 .将该噬菌体中插段DNA前 80 0bp的测序结果与 1 996年底... 详细信息

构建了一个大肠杆菌基因组DNAλZAP表达文库 ,以Dig标记的Era为探针 ,从 4× 1 0 4 噬斑中筛选到一个与探针呈特异结合的噬斑 ,说明大肠杆菌基因组中确有Era亲和蛋白基因存在 .将该噬菌体中插段DNA前 80 0bp的测序结果与 1 996年底完成的大肠杆菌基因组全序列作同源性比较 ,发现该插段序列位于大肠杆菌基因组的第 2 67section .

关键词：大肠杆菌基因组表达型文库 Era结合蛋白

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筛选差异表达基因和蛋白质的方法进展

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生物化学与生物物理进展 2001年第1期28卷 33-36页

作者：王吉村药立波赵忠良第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710032

分离和鉴定差异表达基因和蛋白质不仅有助于发现基因和蛋白质的功能 ,更有助于揭示某些疾病的发生机理 .目前筛选差异表达基因的方法主要有差异显示PCR方法 (differentialdisplayRT PCR ,DDRT PCR)、消减杂交法 (subtractivehybridizati... 详细信息

分离和鉴定差异表达基因和蛋白质不仅有助于发现基因和蛋白质的功能 ,更有助于揭示某些疾病的发生机理 .目前筛选差异表达基因的方法主要有差异显示PCR方法 (differentialdisplayRT PCR ,DDRT PCR)、消减杂交法 (subtractivehybridization ,SH )、基因芯片技术 (DNAchiptechnique)和基因表达的系统分析 (serialanalysisofgeneexpression ,SAGE)等 ,其中消减杂交法中又先后建立了代表性差异分析技术 (representationaldifferenceanalysis ,RDA)、抑制消减杂交法 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)和获得全长基因的消减杂交法 (full length gene obtainablesubtractivehybridization) .筛选差异表达蛋白质的方法主要有双向电泳技术(two dimentionalgelelectrophoresis)和噬菌体全套抗体库技术 (phagedisplayantibodyrepertoirelibrarytechnique) .这些方法各有特点 ,各有利弊 ,研究者可根据自己的需要选择适合于自己的方法 .

关键词：筛选差异表达基因差异表达蛋白质

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蛋白凝胶基质的制备与基质内的血管生成反应

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生物化学与生物物理进展 2000年第5期27卷 520-523页

作者：李福洋药立波杨静华第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710032

利用肝素亲和层析从血清中提取玻璃粘连蛋白 (vitronectin) ,以硫酸铵沉淀法从血浆中粗提含纤维蛋白原的复合蛋白质组分 ,向血浆蛋白、胎牛血清和DMEM组成的复合成分中加入凝血酶 ,制成蛋白质凝胶 .观察血管内皮细胞在此基质上或在基质... 详细信息

利用肝素亲和层析从血清中提取玻璃粘连蛋白 (vitronectin) ,以硫酸铵沉淀法从血浆中粗提含纤维蛋白原的复合蛋白质组分 ,向血浆蛋白、胎牛血清和DMEM组成的复合成分中加入凝血酶 ,制成蛋白质凝胶 .观察血管内皮细胞在此基质上或在基质中的生长及在碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)的诱导下形成的血管样结构 .结果表明血管内皮细胞可粘附在此凝胶基质表面正常生长 ,在bFGF的诱导下 ,内皮细胞向胶内迁移、生长并形成管状结构 ,多个管状结构连接。

关键词：血管生成蛋白凝胶基质血管内皮细胞制备

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T7启动子作用下抗人TNF-α单链抗体的表达

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生物化学与生物物理进展 1999年第5期26卷 502-503页

作者：陈萍邓健蓓陈梅红韩骅药立波苏成芝第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710032

基因工程技术构建的抗人ＴＮＦα单链抗体克隆入表达载体ｐＥＴ１５ｂＥｔａｇ中，在Ｔ７启动子的作用下，经０１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导，在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中获得高效表达，其表达量占菌体总蛋白的３８％... 详细信息

基因工程技术构建的抗人ＴＮＦα单链抗体克隆入表达载体ｐＥＴ１５ｂＥｔａｇ中，在Ｔ７启动子的作用下，经０１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导，在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中获得高效表达，其表达量占菌体总蛋白的３８％．表达产物大部分以包涵体形式存在，而一小部分以有活性的可溶性形式出现于细菌的外周质中．这部分可溶性的表达产物占菌体总蛋白的６％，

关键词：人肿瘤坏死因子_α 单链抗体高效表达

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