检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病毒学 1992年第3期7卷 265-271页

作者：吉昌华苏成芝阎小君第四军医大学生物化学教研室西安710032

作者设计并合成了一对突变引物PGO1和PGO2,分别在两引物中设计了两个突变点,使突变后基因含有EcoRI、BamHI和ATG及TAA序列,以便于HlV-1gag基因序列的定向克隆和表达。用PCO1和PGO2作引物,采用PCR方法从HIV-1基因组DNA中扩增出一个长504b... 详细信息

作者设计并合成了一对突变引物PGO1和PGO2,分别在两引物中设计了两个突变点,使突变后基因含有EcoRI、BamHI和ATG及TAA序列,以便于HlV-1gag基因序列的定向克隆和表达。用PCO1和PGO2作引物,采用PCR方法从HIV-1基因组DNA中扩增出一个长504bp的DNA片段,用EcoRl和BamHI双酶切位点将此片段定向克隆入pUC19质粒。将克隆基因插入M13mp18进行DNA序列分析,结果表明,该基因序列及读框完全正确,且在其5′末端突变出EcoRI位点和ATG起始码,3′末端突变出TAA终业码和BamHI位点,从而为该基因的表达研究奠定了基础。

关键词：聚合酶链反应克隆免疫缺陷病毒

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肿瘤特异性抗原超家族新成员apr-1基因的克隆及亚细胞定位

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癌症 2005年第2期24卷 129-134页

作者：晏伟王文亮朱峰成胜权李擒龙王丽王成济第四军医大学西京医院病理科陕西西安710032 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032

背景与目的apr1是我们在凋亡的人早幼粒白血病细胞HL-60中克隆的一个人类新基因,初步研究表明它可能是一个凋亡相关基因(GenBank ID NM_014061)。为进一步了解该基因的功能背景,我们克隆了该基因并进行了生物信息学分析和亚细胞定位。... 详细信息

背景与目的apr1是我们在凋亡的人早幼粒白血病细胞HL-60中克隆的一个人类新基因,初步研究表明它可能是一个凋亡相关基因(GenBank ID NM_014061)。为进一步了解该基因的功能背景,我们克隆了该基因并进行了生物信息学分析和亚细胞定位。方法利用逆转录PCR方法克隆该基因的cDNA序列,测序后利用生物信息学方法进行了基因组定位、氨基酸保守结构域搜索、同源蛋白比较和基因进化树分析;并进行了该基因的亚细胞定位。结果apr.1定位于人染色体上的Xp11.22,有两个MAGE家族结构域,基因进化上同源于MAGE.D1和Necdin,基因表达产物定位于真核细胞的细胞核。结论apr.1属于MAGE家族的一个新分子,可能属于Ⅱ类MAGE基因。

关键词：凋亡 apr-1 MAGE 肿瘤

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骨形成蛋白诱导型真核载体的构建及其表达

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中国生物化学与分子生物学报 2003年第1期19卷 71-76页

作者：朱帮福卢兹凡陈苏民陈南春纪宗玲张斌柴玉波李毅第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710032

成骨分化相关基因骨钙素 (OC)等的启动子内均含有成骨特异性转录因子Cbfa1特异性作用元件 ,而骨形成蛋白 (bonemorphogeneticprotein ,BMP)的促成骨分化作用正是通过其首先引起Cbfa1的升高 ,而后Cbfa1激活这些基因的表达 ,最终出现成骨... 详细信息

成骨分化相关基因骨钙素 (OC)等的启动子内均含有成骨特异性转录因子Cbfa1特异性作用元件 ,而骨形成蛋白 (bonemorphogeneticprotein ,BMP)的促成骨分化作用正是通过其首先引起Cbfa1的升高 ,而后Cbfa1激活这些基因的表达 ,最终出现成骨分化表型 .为解决BMP没有理想的活性测定方法的问题 ,在RT PCR结果证实BMP 2可促进NIH3T3和C2C12细胞Cbfa1表达后 ,构建了串联6个Cbfa1作用元件的小鼠OC部分启动子 (6OCP)控制萤光素酶 (luciferase)报告基因的真核表达质粒 ,以期来放大BMP诱导报告基因表达的作用效果 .即通过细胞转染、rhBMP 2刺激后检测萤光素酶活性变化 ,从而间接定量测定rhBMP 2的生物学活性 .结果表明 ,pcDNA3 6OCP Luc转染细胞后其报告基因的基础活性较pcDNA3 Luc大为降低 ;而且在一定剂量范围内 ,转染细胞的萤光素酶活性 (荧光值 )随rhBMP 2剂量增加而升高 ,并呈线性正相关。

关键词：骨形成蛋白载体构建基因表达萤光素酶

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基于生物信息学的抑癌基因NDRG2相互作用蛋白预测及验证

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中国生物化学与分子生物学报 2013年第2期29卷 168-174页

作者：牛天水刘学武李霞茹懿王秦豪张璟第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710032

NDRG2(N-Myc downstream regulator gene 2)是NDRG家族成员之一.以往研究表明,该家族与细胞的增殖和分化有关.而该分子参与的细胞信号通路及调节机制尚未阐明.本研究利用保守蛋白间相互作用(interologs)的生物信息学方法预测NDRG2相互... 详细信息

NDRG2(N-Myc downstream regulator gene 2)是NDRG家族成员之一.以往研究表明,该家族与细胞的增殖和分化有关.而该分子参与的细胞信号通路及调节机制尚未阐明.本研究利用保守蛋白间相互作用(interologs)的生物信息学方法预测NDRG2相互作用分子,并通过免疫共沉淀(Co-IP)及His pull-down蛋白体外结合实验方法对预测结果进行验证.生物信息学软件预测和分析结果表明,细胞中存在多个可能与NDRG2发生相互作用分子.结合文献报道,从中选取了3个候选分子Gnb1、Rgs16及Rgs5进行分子生物学实验验证.Co-IP及His pull-down实验结果表明,3个候选分子中,Rgs5蛋白能够和NDRG2蛋白相互作用,而其它2个候选分子与NDRG2的相互作用未获得实验室方法的验证.研究结果表明,生物信息学分析与实验室验证相结合是一种高效省时的蛋白质相互作用研究策略.通过这种策略证实NDRG2可以与Rgs5蛋白相互作用,为后续NDRG2功能的研究提供了有效的线索.

关键词：生物信息学 NDRG2 蛋白质相互作用

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Restin与转录因子的相互作用

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中国科学（C辑） 2004年第5期34卷 459-464页

作者：吴有盛路凡齐颖新王瑞华张剑卢兹凡赵忠良第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710032

Restin 是从维甲酸诱导分化的白血病细胞中克隆的一种黑色素瘤相关抗原家族基因,对细胞增殖具有抑制作用.由于该基因定位于细胞核,且其同源基因Necdin(神经细胞生长抑制因子)与转录因子p53和E2F1具有强烈的相互作用,推测Restin也可能作... 详细信息

Restin 是从维甲酸诱导分化的白血病细胞中克隆的一种黑色素瘤相关抗原家族基因,对细胞增殖具有抑制作用.由于该基因定位于细胞核,且其同源基因Necdin(神经细胞生长抑制因子)与转录因子p53和E2F1具有强烈的相互作用,推测Restin也可能作用于某种转录因子.为此,克隆了转录因子p53,AP1,ATF和E2F,研究Restin与这些转录因子的相互作用.结果发现Restin与ATF3表现出强烈的相互作用.ATF3是细胞应激反应中非常重要的转录因子,推测Restin对细胞增殖的抑制作用可能与ATF3活性的抑制有关.

关键词：转录因子细胞增殖抑制作用相关抗原 E2F1 神经细胞生长维甲酸克隆相互作用同源基因

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微生物表面呈现技术及应用

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生物化学与生物物理进展 1997年第5期24卷 422-426页

作者：王雨田胡家露陈苏民杨胜利第四军医大学全军消化疾病研究所西安710033 第四军医大学生物化学教研室西安710032 中国科学院上海生物工程研究中心上海200233

微生物表面呈现技术以其广泛的应用前景 ,日益引起关注 .

关键词：微生物表面呈现方法技术

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小鼠脂多糖应答蛋白LRP的大肠杆菌表达及其兔抗血清抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第3期22卷 371-373,376页

作者：代忠明陈苏民杜可军陈南春宋庆贺骆文静陈景元第四军医大学生物化学与分子生物学教研室第四军医大学劳动卫生与环境卫生学教研室陕西西安710032 第四军医大学劳动卫生与环境卫生学教研室

目的原核表达小鼠脂多糖应答蛋白并制备兔抗mLRP抗血清。方法参考GenBank中已登录的人lrp-cDNA序列,对小鼠的同源表达序列标签(EST)序列进行拼接,预测mlrpcDNA序列。用设计的引物,进行RT-PCR,从脂多糖刺激的NIH3T3细胞中扩增mlrp的cDNA... 详细信息

目的原核表达小鼠脂多糖应答蛋白并制备兔抗mLRP抗血清。方法参考GenBank中已登录的人lrp-cDNA序列,对小鼠的同源表达序列标签(EST)序列进行拼接,预测mlrpcDNA序列。用设计的引物,进行RT-PCR,从脂多糖刺激的NIH3T3细胞中扩增mlrp的cDNA序列,克隆入pTAT载体中,构建mlrp的原核表达载体。以其转化在大肠杆菌中诱导表达后,将获得的His-TAT-mLRP融合蛋白免疫家兔,用丙酮沉淀全菌蛋白吸附法制备纯化的抗mLRP血清,用West-ernblot鉴定抗体的特异性。结果预测的mlrpcDNA的长度为1905bp。将克隆获得的1554bp大小的mlrp-cDNA编码区序列插入pTAT质粒中,在大肠杆菌中表达出His-TAT-mL-RP融合蛋白。以其免疫家兔,制备了特异性兔抗mLRP的血清。结论mlrp的原核表达及特异性兔抗mLRP血清的制备,为进一步研究mLRP的功能奠定了基础。

关键词：脂多糖应答蛋白原核表达多克隆抗体

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跨膜前列腺雄激素诱导蛋白1(PMEPA1)促进乳腺癌细胞迁移并维持乳腺癌细胞的间质样特性

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第2期32卷 158-162页

作者：邹远康张一萌王婷王杉杨安钢贾林涛王磊第四军医大学生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 第四军医大学学员旅陕西西安710032 第四军医大学免疫学教研室陕西西安710032

目的探究转化生长因子β(TGF-β)信号下游重要靶分子跨膜前列腺雄激素诱导蛋白1(PMEPA1)对乳腺癌细胞运动迁移能力的影响及其在上皮间质转化(EMT)过程中的作用。方法用TGF-β刺激MDA-MB-231乳腺癌细胞,并用小分子抑制剂SB431542抑制TGF... 详细信息

目的探究转化生长因子β(TGF-β)信号下游重要靶分子跨膜前列腺雄激素诱导蛋白1(PMEPA1)对乳腺癌细胞运动迁移能力的影响及其在上皮间质转化(EMT)过程中的作用。方法用TGF-β刺激MDA-MB-231乳腺癌细胞,并用小分子抑制剂SB431542抑制TGF-β信号通路后,采用Western blot法检测PMEPA1的表达水平;设计针对PMEPA1分子的特异性小干扰RNA(siRNA),采用实时定量PCR检测干涉效率;干涉MDA-MB-231细胞中PMEPA1的表达后,采用划痕实验和TranswellTM实验检测PMEPA1基因沉默对乳腺癌细胞迁移能力的影响;采用鬼笔环肽对细胞骨架进行标记,观察PMEPA1基因沉默后MDAMB-231乳腺癌细胞的形态变化。结果乳腺癌细胞中,PMEPA1分子受经典TGF-β/Smad信号途径的作用发生显著上调;沉默PMEPA1的表达能显著抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁移能力,并使细胞形态由间质样向上皮样转变。结论 PMEPA1促进乳腺癌细胞迁移并维持乳腺癌细胞的间质样特性。

关键词： TGF-β PMEPA1 乳腺癌肿瘤转移

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抗人黑色素瘤单链抗体基因在大肠杆菌中的融合表达

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生物工程学报 1999年第2期15卷 221-224页

作者：王字玲邓健蓓韩骅陈萍苏成芝第四军医大学生物化学及分子生物学教研室

应用ＲＴＰＣＲ技术从分泌抗人黑色素瘤单克隆抗体的杂交瘤细胞ＨＢ８７６０中克隆了抗体轻、重链可变区基因，用（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３连接肽基因将ＶＨ、ＶＬ连接成ＳｃＦｖ基因，并进行了序列测定。ＳｃＦｖ基因全长９２７ｂｐ，其... 详细信息

应用ＲＴＰＣＲ技术从分泌抗人黑色素瘤单克隆抗体的杂交瘤细胞ＨＢ８７６０中克隆了抗体轻、重链可变区基因，用（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３连接肽基因将ＶＨ、ＶＬ连接成ＳｃＦｖ基因，并进行了序列测定。ＳｃＦｖ基因全长９２７ｂｐ，其中ＶＨ基因长３６０ｂｐ，编码１２０个氨基酸，ＶＬ基因长３２４ｂｐ，编码１０８个氨基酸。在大肠杆菌融合表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ１中表达了ＧＳＴＳｃＦｖ融合蛋白，表达产量占菌体总蛋白的２９％。凝血酶消化后的产物具有黑色素瘤细胞结合活性。

关键词：单链抗体克隆表达黑色素瘤大肠杆菌

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新基因Restin的克隆及比较生物学分析

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中国科学（C辑） 2002年第1期32卷 89-96页

作者：赵忠良路凡朱峰杨辉柴玉波陈苏民第四军医大学生物化学及分子生物学教研室西安710032

采用PCR介导的减法杂交技术,从全反式维甲酸诱导的HL-60细胞中克隆得到一新基因,该基因编码219个氨基酸.借助生物信息学分析技术,发现该基因表达蛋白与神经细胞生长抑制因子（Necdin）的功能结构域高度同源（49％）,均为碱性蛋白,命名为... 详细信息

采用PCR介导的减法杂交技术,从全反式维甲酸诱导的HL-60细胞中克隆得到一新基因,该基因编码219个氨基酸.借助生物信息学分析技术,发现该基因表达蛋白与神经细胞生长抑制因子（Necdin）的功能结构域高度同源（49％）,均为碱性蛋白,命名为Restin（细胞静息相关蛋白）.更有意义的是,同源搜索发现Restin,Necdin和Mages（黑色素瘤相关抗原家族）为同一蛋白家族,提示Restin和Mages是两类具有某种联系而功能又不同的蛋白质.对所有这些蛋白进行综合分析发现,它们分别属于两个不同的亚家族,碱性蛋白家族和酸性蛋白家族,其中Restin,Necdin和Mage D1含有碱性同源结构域（理论pI为8.6～10.1）,主要在终末分化细胞中表达,在肿瘤组织极少表达或不表达,实验结果表明,Necdin可以与转录因子（E2F1）及p53相互作用,从而抑制细胞增殖,推测此类蛋白可能与细胞静息状态相关;而 Mage A,C等表现为酸性同源结构域（理论pI为4.2～4.9）,主要在肿瘤组织和胎儿组织中表达,推测此类蛋白可能与细胞增值有关.这两类蛋白是否构成一对与细胞周期调控相关的正负系统值得进一步深入研究.

关键词：基因克隆比较生物学功能细构域生物信息学黑色素瘤相关抗原神经细胞生长抑制因子细胞静息相关基因

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