检索结果-内蒙古大学图书馆

中国修复重建外科杂志 2005年第4期19卷 314-317页

作者：董蕊金岩刘源聂鑫王新文赵宇第四军医大学口腔医学院口腔组织病理学教研室西安710032 第四军医大学口腔医学院组织工程实验中心西安710032

目的　筛选合适的保持人表皮干细胞特性的体外培养基,并观察其生物学性状。　方法　按不同培养基分组,配制FAD培养基和FAD加入不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)的培养基,即FAD、FAD1、FAD2、FAD... 详细信息

目的　筛选合适的保持人表皮干细胞特性的体外培养基,并观察其生物学性状。　方法　按不同培养基分组,配制FAD培养基和FAD加入不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)的培养基,即FAD、FAD1、FAD2、FAD3等组,以及角质化细胞专用无血清培养基(keratinocyte- SFM,K- SFM) ,同时应用同一个体的成纤维细胞经丝裂霉素处理后作滋养层,培养人表皮干细胞。通过细胞生长曲线及MTT检测,观察细胞的生长状态。在体外培养扩增表皮干细胞后,利用透射电镜、流式细胞仪分析、Brd U检测,观察细胞的生长状态;结合流式细胞仪分析,观察细胞周期的变化。　结果　人表皮干细胞在FAD组中生长良好,加入b FGF可进一步改善细胞的生长状态。扩增后细胞检测提示,人表皮干细胞在体外培养过程中呈典型的克隆性生长,生长周期长。流式细胞仪检测表明,人表皮干细胞80 .2 %处于G0 /G1 期;透射电镜观察见其细胞器少,细胞核浆比大。　结论　加入b FGF的FAD培养基并同时利用滋养层,更适合人表皮干细胞的生长,在稳定状态下是一种处于静止期的幼稚细胞。

关键词：人表皮干细胞生物学性状生长状态初步探讨碱性成纤维细胞生长因子流式细胞仪分析流式细胞仪检测 factor 无血清培养基细胞生长曲线体外培养扩增透射电镜观察 bFGF FAD 角质化细胞 MTT检测细胞特性不同浓度丝裂霉素

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复合转化生长因子-β的组织工程化周围神经修复坐骨神经缺损

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生物医学工程学杂志 2007年第2期24卷 394-398页

作者：张勇杰金岩聂鑫王彦亮刘鹏沈楠国生辉第四军医大学口腔医学院组织工程实验中心组织病理教研室西安710032 第四军医大学口腔医学院颌面外科西安710032

探讨了转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)在周围神经缺损修复中的作用。将50 ng·ml-1 TGF-β加入体外培养的雪旺细胞(Sehwann cells,SC)中,MTT和流式细胞仪观测到TGF-β能够明显促进SC增殖;ELISA方法检测到T... 详细信息

探讨了转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)在周围神经缺损修复中的作用。将50 ng·ml-1 TGF-β加入体外培养的雪旺细胞(Sehwann cells,SC)中,MTT和流式细胞仪观测到TGF-β能够明显促进SC增殖;ELISA方法检测到TGF-β组上清神经生长因子(NGF)含量高于对照组(P<0．05);将牛去细胞基质(Bovine acellular matrix,BAM)、SC、血清和培养基按一定的比例混合,注入聚乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)神经导管去修复15 mm坐骨神经缺损。30只SD大鼠分为3组,实验组:PLGA导管+SC+TGF-β;空白组PLGA导管+SC;和自体神经移植组。16周后通过电生理、透射电镜等检测方法显示各组坐骨神经均得到再生,修复效果实验组与自体神经移植组无显著性差异,均优于空白组。TGF-β一方面可以明显促进SC的增殖,另一方面可以增强SC分泌NGF的功能。因此周围神经修复过程中使用外源性的TGF-β对修复周围神经缺损有较好的疗效。

关键词：转化生长因子-β 组织工程神经再生

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组织工程角膜生物材料载体制备的比较性研究

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中国修复重建外科杂志 2006年第2期20卷 185-188页

作者：张超金岩聂鑫刘源雷娟胡丹武警陕西总队医院西安710054 第四军医大学口腔医学院组织病理学教研室组织工程实验中心第四军医大学西京医院

目的比较用不同的方法脱细胞处理异种(猪)角膜基质制备组织工程角膜支架材料,并对其生物相容性进行研究。方法成年York猪角膜基质材料,以Triton联合0.25%胰酶,处理30min～3h为材料1;Triton联合DNA-RNA酶,处理8～14h为材料2;Triton联合0.... 详细信息

目的比较用不同的方法脱细胞处理异种(猪)角膜基质制备组织工程角膜支架材料,并对其生物相容性进行研究。方法成年York猪角膜基质材料,以Triton联合0.25%胰酶,处理30min～3h为材料1;Triton联合DNA-RNA酶,处理8～14h为材料2;Triton联合0.25%胰酶、DNA-RNA酶,处理3～5h为材料3。3种材料用无水氯化钙脱水干燥保存。在材料上接种兔角膜基质成纤维细胞,观察细胞生长情况。新西兰大白兔24只,随机分为3组,每组8只。右眼为实验眼,左眼为空白对照眼。将材料植入兔眼角膜基质层中,术后每日裂隙灯检查术眼;1、4、8和12周分别随机取2只兔眼角膜作HE染色,观察材料的生物相容性。结果材料1、2细胞脱出不完全,处理最佳时间分别是2h和10～12h,角膜基质网状间隙无明显增大;接种兔角膜基质成纤维细胞后,3～4d细胞死亡;植入兔角膜基质中有明显的免疫排斥反应。材料3脱出细胞完全,其脱细胞处理的最佳时间为4h,角膜基质纤维结构无破坏,呈三维网状结构,网状间隙明显增大;接种兔角膜基质成纤维细胞后,细胞在材料上贴附生长良好;将其植入兔角膜基质中无炎性及排斥反应,可逐渐降解吸收,有良好的生物相容性。结论Triton联合0.25%胰酶、DNA-RNA酶法处理的异种(猪)角膜基质具有良好的生物相容性,可作为一种组织工程角膜的支架材料。

关键词：组织工程角膜支架材料制备比较

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复合缓释微球的胶原膜促创面愈合的实验研究

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中国修复重建外科杂志 2006年第2期20卷 161-164页

作者：黄沙金岩邓天政吴红刘涛刘建明第四军医大学口腔医学院组织工程实验中心西安710032 第四军医大学口腔医院颌面外科第四军医大学口腔医学院药物化学教研室

目的观察复合缓释微球的胶原膜对猪皮肤创面损伤的促愈合作用。方法将20μl的碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)溶液滴加在2mg的冻干微球上,复合于胶原膜内。取2.5～3月龄健康约克猪6只,随机分为3组,在每只猪... 详细信息

目的观察复合缓释微球的胶原膜对猪皮肤创面损伤的促愈合作用。方法将20μl的碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)溶液滴加在2mg的冻干微球上,复合于胶原膜内。取2.5～3月龄健康约克猪6只,随机分为3组,在每只猪背部制作6个4cm×4cm全层皮肤缺损创面模型。将包裹bFGF的明胶缓释微球与胶原基多孔膜复合制备,作为实验组移植创面,对照组及空白组分别给予复合bFGF的胶原膜和空白胶原膜,术后每日观察创面愈合情况,14、21、28和35d图像分析计算创面愈合率,3、7、14、21、28和35d行组织学染色,观察各组材料对猪皮肤全层缺损创面的影响。结果制备的复合微球的胶原膜内明胶微球大小均一,平均粒径为12.36±3.56μm,孔径为80～150μm。实验组、对照组及空白组创面愈合时间为27.30±1.14、29.18±1.69、31.12±1.36d,3组组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);实验组创面愈合率在术后14、21、28和35d均高于对照组及空白组,差异有统计学意义(P<0.05);术后各时间点组织学观察实验组愈合创面的上皮化程度均优于对照组及空白组。结论复合bFGF缓释微球的胶原膜能有效促进猪皮肤全层缺损创面的愈合,可作为具有应用前景的覆盖材料进一步研究。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子缓释微球胶原膜创面愈合猪

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转化生长因子β及重组人骨形成蛋白2对雪旺细胞生物学行为影响的实验研究

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中国修复重建外科杂志 2005年第11期19卷 871-874页

作者：张勇杰金岩聂鑫孙慧生刘源赵宇刘鹏第四军医大学口腔医学院组织病理学教研室第四军医大学组织工程实验中心西安710032

目的研究转化生长因子β(transformin ggrowth factorβ,TGF-β)、重组人骨形成蛋白2(recom binant humanbonemor phogenetic protein2,rhBMP-2)对雪旺细胞生物学行为的影响。方法体外培养SD乳鼠雪旺细胞,按5×103/孔接种96孔板,分为3组。A组:加入50ng/mlTGF-β;B组:加入50ng/mlrhBMP-2;C组不作任何处理,作为空白对照组。采用MTT法每天取4孔连测9d细胞数,并绘制生长曲线;流式细胞仪测定细胞周期以观察雪旺细胞增殖情况;ELISA双夹心法测定培养液中神经生长因子(nervegrowth factor,NGF)含量。结果MTT法检测显示A、B组细胞生长曲线远离C组,逐渐上升到第8、9天差异明显,A组较B组上升趋势更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪测定显示A组和B组细胞增殖指数较C组高(P<0.05)。ELISA法检测A组上清NGF含量最高,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论外源性TGF-β、rhBMP-2均能促进雪旺细胞增殖和分泌NGF的功能,而TGF-β更优于rhBMP-2。

关键词：转化生长因子β 重组人骨形成蛋白2 雪旺细胞周围神经

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去细胞周围神经移植物的制备及生物相容性评测

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中国临床康复 2006年第21期10卷 82-84页

作者：沈楠金岩张勇杰聂鑫樊立宏刘鹏赵宇解放军第四军医大学口腔医学院组织病理教研室组织工程实验中心陕西省西安市710032

目的:制备去细胞周围神经移植物并评测其生物相容性。方法:实验于2005-05/12在解放军第四军医大学口腔医学院组织病理教研室和组织工程实验中心完成。①将猪肋间神经经低渗、-80℃反复冻融和NaOH裂解等方法制备去细胞神经异体移植物;光... 详细信息

目的:制备去细胞周围神经移植物并评测其生物相容性。方法:实验于2005-05/12在解放军第四军医大学口腔医学院组织病理教研室和组织工程实验中心完成。①将猪肋间神经经低渗、-80℃反复冻融和NaOH裂解等方法制备去细胞神经异体移植物;光、电镜观察其结构特征。②材料细胞毒性试验按照GB/T16886.5-2003《医疗器械生物学评价》体外细胞毒性试验的试验方法进行,毒性程度的评估标准参见美国药典。③大鼠皮下植入试验,取成年SD大鼠9只,于脊柱中线两侧约2cm处平行各取2点作为皮下植入点,植入1cm去细胞异体神经移植物。于手术后第1,2,4周时各取1只大鼠麻醉状态下处死,作组织切片检查。结果:去细胞神经异体移植物的制备:①应用正常猪的周围神经,清除许旺细胞、神经外膜和束膜细胞以及神经纤维的髓鞘和轴突,保存由许旺细胞基底膜管以及神经外膜和束膜的细胞外基质构成的三维支架结构。②生物相容性测试结果:显示去细胞神经异体移植物细胞毒性试验为1级。③SD大鼠皮下植入试验结果:去细胞神经异体移植物无明显的免疫排斥反应。结论:该方法所制备的去细胞神经移植物神经膜管结构保存完好,有良好的组织相容性,可能成为自体神经移植的替代材料。

关键词：组织工程移植,异种材料试验

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大张皮片法与小皮条法培养表皮细胞的比较研究

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中国修复重建外科杂志 2004年第6期18卷 505-507页

作者：卢涛金岩高天文刘源张勇杰雷娟第四军医大学西京医院全军皮肤性病中心西安710032 口腔医学院口腔组织病理学教研室组织工程实验中心

目的　比较研究用大张皮片和小皮条培养表皮细胞的方法。　方法　将皮肤组织切成大张皮片 ,用锐刀网状切割真皮面 ,Dispase酶消化充分后用镊子分离真、表皮 ,然后消化表皮进行表皮细胞培养 (大张皮片法 )。将同样大小的皮肤组织切割成... 详细信息

目的　比较研究用大张皮片和小皮条培养表皮细胞的方法。　方法　将皮肤组织切成大张皮片 ,用锐刀网状切割真皮面 ,Dispase酶消化充分后用镊子分离真、表皮 ,然后消化表皮进行表皮细胞培养 (大张皮片法 )。将同样大小的皮肤组织切割成小皮条 ,消化充分后用镊子分离真、表皮 ,然后进行表皮细胞培养 (小皮条法 )。记录两种方法切割皮肤和分离真、表皮所需时间 ,比较培养出表皮细胞的数量和纯度。　结果　将 5 cm2 大小的皮肤切割成小皮条需要 8～10分钟 ,而将同样大小皮肤切割成大张皮片仅需 1～ 2分钟 ;从小皮条上分离真、表皮耗时 10～ 15分钟 ,大张皮片法仅需2分钟。通过对比培养发现 ,大张皮片法获得的表皮细胞较多 ,活力较强 ,发生成纤维细胞污染的机会少。　结论　大张皮片法较小皮条法操作更简便、快捷 ,培养获得的表皮细胞活性高。

关键词：细胞培养表皮细胞成纤维细胞方法学

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mcpr1基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

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实用口腔医学杂志 2004年第5期20卷 554-557页

作者：轩东英金岩金明轩昆张蓉第四军医大学口腔医学院组织工程实验中心 710032 第四军医大学口腔医学院生物化学教研室 710032 第四军医大学口腔医学院药理教研室 710032

目的 :构建mcpr1基因原核表达载体 ,表达MCPR1蛋白。方法 :采用多聚酶链式反应 (PCR)扩增出mcpr1基因的蛋白编码序列 ,克隆到中间载体中 ,再经双酶切 ,亚克隆到表达载体中 ,构建该基因的融合表达载体pGEX 4T mcpr1,在大肠杆菌中用IPTG... 详细信息

目的 :构建mcpr1基因原核表达载体 ,表达MCPR1蛋白。方法 :采用多聚酶链式反应 (PCR)扩增出mcpr1基因的蛋白编码序列 ,克隆到中间载体中 ,再经双酶切 ,亚克隆到表达载体中 ,构建该基因的融合表达载体pGEX 4T mcpr1,在大肠杆菌中用IPTG诱导表达 ,SDS PAGE电泳。结果 :酶切和测序鉴定 ,表明融合表达载体内插入片段正确 ,在大肠杆菌中诱导后 ,出现一条 3 60 0 0的新蛋白带 ,主要存在于细菌沉淀中 ,占总蛋白的3 9 %。结论 :研究表明mcpr1基因编码的蛋白质能够在原核细胞中表达。

关键词： mcpr1基因基因表达融合蛋白蛋白纯化

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构建神经再生室培养成年SD大鼠许旺细胞

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中国临床康复 2006年第1期10卷 69-71,i0004页

作者：沈楠金岩张勇杰聂鑫赵宇解放军第四军医大学口腔医学院组织病理教研室陕西省西安市710032 解放军第四军医大学口腔医学院组织工程实验中心陕西省西安市710032

目的:探讨从成年SD大鼠坐骨神经分离培养获得大量许旺细胞的有效手段。方法:实验于2005-05/11在解放军第四军医大学口腔医学院组织病理教研室和组织工程实验中心完成。①取成年SD大鼠1只截断坐骨神经5mm,缝接入20mm硅胶管中,形成神经再... 详细信息

目的:探讨从成年SD大鼠坐骨神经分离培养获得大量许旺细胞的有效手段。方法:实验于2005-05/11在解放军第四军医大学口腔医学院组织病理教研室和组织工程实验中心完成。①取成年SD大鼠1只截断坐骨神经5mm,缝接入20mm硅胶管中,形成神经再生室。7d后重新打开伤口,刨开硅胶管,截取再生室内神经段置离心管中作为实验组。②取SD仔鼠5只,无菌条件下取双侧坐骨神经混合于离心管中作为对照组。③将两组坐骨神消化培养。通过相差显微镜活细胞计数和S-100细胞化学标记相结合鉴定了许旺细胞增殖和纯化程度。结果:①两组培养的细胞光镜观察结果:实验组的许旺细胞密度高于对照组,特别是在培养4d后细胞的密度差别尤为显著。实验组的许旺细胞密度大于600个/mm,而对照组密度不足200个/mm。②两22组许旺细胞免疫组织化学染色:实验组衬染后计数许旺细胞的纯度为(98.0±1.2%,对照组许旺细胞的纯度为(93.0±2.1)%(P<0.05)③)而。两组细胞的生长曲线:培养7d,实验组细胞数量较对照组明显增加,达到(49.6±3.5)×10L-1,远高于对照组的(31.7±3.9)×10L。77-1结论:从成年SD大鼠坐骨神经分离培养方法能获得大量高纯度的许旺细胞,为自体许旺细胞在修复周围神经缺损中的应用提供了可能。

关键词：细胞培养许旺细胞组织工程神经再生 SD 大鼠

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出生后大鼠牙胚组织中nfic基因多种选择性剪接体的克隆研究

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实用口腔医学杂志 2005年第3期21卷 307-309页

作者：邢向辉文玲英金岩组轩东英胡世颉西安第四军医大学口腔医学院儿童口腔科 710032 西安第四军医大学口腔医学院织病理学教研室 710032 西安第四军医大学口腔医学院组织工程实验中心 710032

目的:研究nfic基因在牙齿发育中的作用。方法:提取出生后SD大鼠磨牙牙胚组织总mRNA, 反转录合成cDNA。根据NCBIGeneBank中nficcDNA序列,分别设计2对PCR引物,进行nfic基因部分序列的扩增,扩增产物与T载体进行T/A连接,然后转化高效感受态... 详细信息

目的:研究nfic基因在牙齿发育中的作用。方法:提取出生后SD大鼠磨牙牙胚组织总mRNA, 反转录合成cDNA。根据NCBIGeneBank中nficcDNA序列,分别设计2对PCR引物,进行nfic基因部分序列的扩增,扩增产物与T载体进行T/A连接,然后转化高效感受态大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆进行酶切鉴定,并对扩增产物进行序列测定。结果:P1、P2为引物进行PCR扩增,可见大小约350bp的特异扩增产物;以P3、P4为引物进行PCR扩增,电泳可见大小不同的3条特异扩增产物,经克隆后的序列测定,为大鼠nfic基因的3种可变剪接体。结论:nfic基因在大鼠牙齿发育后期、牙根的发育前期有表达,并且存在至少3种大鼠nfic基因选择性剪接体。

关键词： nfic 牙齿发育选择性剪接体

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