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现代生物医学进展 2018年第22期18卷 4213-4218页

作者：纪奇峰祝春来王伟毛壮汪钦成珊颜真第四军医大学药学院药物基因组学教研室陕西西安710032 肿瘤生物学国家重点实验室陕西西安710032 第四军医大学药学院药事管理与药物信息学教研室陕西西安710032 第四军医大学学员一旅一营三连陕西西安710032

目的:探讨肝癌细胞外泌体中差异表达的microRNAs(miRNAs)在肝细胞癌(HCC)诊断中的应用价值。方法:通过高通量测序筛选肝癌细胞外泌体中差异表达的miRNAs。实时定量PCR验证差异表达分子;检测差异表达的miRNAs在健康人(Health)、慢性乙型... 详细信息

目的:探讨肝癌细胞外泌体中差异表达的microRNAs(miRNAs)在肝细胞癌(HCC)诊断中的应用价值。方法:通过高通量测序筛选肝癌细胞外泌体中差异表达的miRNAs。实时定量PCR验证差异表达分子;检测差异表达的miRNAs在健康人(Health)、慢性乙型肝炎患者(CHB)、肝硬化患者(LC)及乙型肝炎病毒阳性的肝细胞癌患者(HCC)血清外泌体中的表达。结果:高通量测序筛选到肝癌细胞外泌体中差异表达的miRNA共88种,其中58种表达上调,30种表达下调。选择其中8种差异表达的miRNAs进行q RT-PCR验证,结果显示,此8种miRNAs在细胞上清外泌体、细胞内、癌与癌旁组织中的表达趋势与测序结果一致。miR-221-3p和miR-224-5p在HCC组外泌体中的表达水平显著高于Health组、CHB组和LC组(P<0.01),miR-124-3p和let-7a-5p在HCC组外泌体中的表达水平显著低于其他各组(P<0.05)。四个组中,miR-21-5p、miR-191-5p、miR-34a-5p和miR-122-5p的表达水平不存在显著性差异(P>0.05)。结论:血清外泌体中的miR-221-3p、miR-224-5p、miR-124-3p和let-7a-5p可能成为肝细胞癌的候选标志物。

关键词：肝细胞癌外泌体 miRNAs 肿瘤标志物

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肝癌细胞外泌体miRNA鉴定及hsa-miR-1246功能研究

肝癌细胞外泌体miRNA鉴定及hsa-miR-1246功能研究

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第十一届生物产业技术研讨会暨全军第十四届生物技术学术研讨会

作者：祝春来纪奇峰王伟汪钦颜真第四军医大学(空军军医大学)药学院药物基因组学教研室/肿瘤生物学国家重点实验室西安710032

目的：筛选肝癌细胞与正常肝细胞有显著差异表达的miRNA,预测其靶基因与干预信号通路,研究miRNA与肝癌发生发展等相关的功能,为肝癌的早期诊断以及治疗提供依据。方法：PEG富集肝癌细胞与正常肝细胞外泌体并予以鉴定,Illumina Hiseq250... 详细信息

目的：筛选肝癌细胞与正常肝细胞有显著差异表达的miRNA,预测其靶基因与干预信号通路,研究miRNA与肝癌发生发展等相关的功能,为肝癌的早期诊断以及治疗提供依据。方法：PEG富集肝癌细胞与正常肝细胞外泌体并予以鉴定,Illumina Hiseq2500高通量测序外泌体miRNA,筛选差异表达miRNA分子;qRT-PCR验证肝癌细胞系和肝癌患者血液标本;候选目标miRNA生物信息分析;与肝癌发生发展相关功能的体外细胞学研究。

关键词：肝癌外泌体 miRNA hsa-miR-1246 信号通路

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双功能3p-siRNA沉默HER2基因表达并激活RIG-I信号通路的胃癌靶向治疗研究

双功能3p-siRNA沉默HER2基因表达并激活RIG-I信号通路的胃癌靶向...

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第十一届生物产业技术研讨会暨全军第十四届生物技术学术研讨会

作者：汪钦张文涛王伟颜真第四军医大学(空军军医大学)药学院药物基因组学教研室/肿瘤生物学国家重点实验室西安710032

背景与目的：胃癌是全球范围内最常见的癌症之一，也是导致我国癌症相关死亡的常见原因.目前手术切除和放化疗仍是胃癌治疗的主要手段，但其治愈性差，复发率高，积极探寻靶向治疗将为胃癌治疗提供新的方法.HER2为位于染色体17q21上的... 详细信息

背景与目的：胃癌是全球范围内最常见的癌症之一，也是导致我国癌症相关死亡的常见原因.目前手术切除和放化疗仍是胃癌治疗的主要手段，但其治愈性差，复发率高，积极探寻靶向治疗将为胃癌治疗提供新的方法.HER2为位于染色体17q21上的原癌基因，当原癌基因激活过度表达，使得细胞膜上的HER2受体表达增多，促进细胞癌变，最终导致癌症的发生.

关键词：胃癌 HER2 3p-siRNA RIG-I 靶向治疗

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重组dsRNA依赖的RLR受体介导的程序性坏死能有效激活广谱抗病毒免疫应答

重组dsRNA依赖的RLR受体介导的程序性坏死能有效激活广谱抗病毒免...

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中国细胞生物学学会细胞工程与转基因生物分会2016年年会

作者：王伟王伟华汪钦张文涛代鹏孙建斌杨静华颜真第四军医大学药学院药物基因组学教研室肿瘤生物学国家重点实验室

病毒感染会导致宿主细胞内dsRNA大量产生.在哺乳动物细胞中,这些dsRNA会被一套特异的dsRNA受体识别成危险信号,其中主要的胞内受体是RLR家族受体.本研究中,提出了一种新的抗病毒策略,即通过识别dsRNA、并以类似于RLR受体的方式激活下游... 详细信息

病毒感染会导致宿主细胞内dsRNA大量产生.在哺乳动物细胞中,这些dsRNA会被一套特异的dsRNA受体识别成危险信号,其中主要的胞内受体是RLR家族受体.本研究中,提出了一种新的抗病毒策略,即通过识别dsRNA、并以类似于RLR受体的方式激活下游信号,诱导程序性坏死以快速清除被感染的细胞,从而达到广谱高效抗病毒的目的.

关键词：病毒感染抗病毒免疫应答双链核糖核酸 RLR受体程序性坏死

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Alu RNA在高糖诱导的血管内皮病变过程中大量累积并促进内皮细胞氧化应激和功能紊乱

Alu RNA在高糖诱导的血管内皮病变过程中大量累积并促进内皮细胞...

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中国生物工程学会第十届学术年会暨2016年全国生物技术大会

作者：王伟王伟华张文涛汪钦束毅祝春来杨静华颜真中国人民解放军第四军医大学药学院药物基因组学教研室肿瘤生物学国家重点实验室

在高血糖引起的血管病变过程中,氧化应激和炎症导致的血管内皮功能紊乱是主要发病诱因。然而目前尚没有研究报道dsRNA是否以及如何参与高血糖诱导的血管内皮病变。本研究旨在探索内源性dsRNA是否参与血管内皮细胞的氧化应激及功能紊乱,... 详细信息

在高血糖引起的血管病变过程中,氧化应激和炎症导致的血管内皮功能紊乱是主要发病诱因。然而目前尚没有研究报道dsRNA是否以及如何参与高血糖诱导的血管内皮病变。本研究旨在探索内源性dsRNA是否参与血管内皮细胞的氧化应激及功能紊乱,探讨内源性dsRNA参与调控的信号通路。我们首先运用dsRNA特异性抗体J2通过免疫组化的方法检测了在高糖刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中产生的dsRNA,结果显示在高糖刺激的HUVEC细胞中均有大量的dsRNA产生。通过免疫沉淀、构建文库和DNA测序,我们捕获了在高糖刺激的HUVEC细胞中产生的dsRNA,并通鉴定出这些dsRNA与AluRNASc亚家族高度同源。通过基因克隆、实时定量PCR、ELISA、WesternBlotting等分子生物学方法,我们比较了高糖刺激的HUVEC细胞与Alu RNA转染的HUVEC细胞的抗氧化酶系统和氧化应激标志物,结果显示,Alu RNA过表达促进了ROS产生,上调了IL-1β的表达和分泌,而且Alu RNA抑制了内皮细胞中eNOS和SOD2的表达。通过化学清除ROS和化学抑制NFκB的活化,我们发现Alu RNA通过促进ROS产生和激活NFκB来抑制抗氧化酶的表达;通过构建Alu RNA的功能缺失突变体,我们发现Alu RNA对多种酶的表达抑制是依赖于Alu RNA在转录和翻译水平的负调控机制。在本研究中我们揭示了内源性AluRNA在高糖刺激下在血管内皮细胞中大量积累的现象,阐述了AluRNA激活NFκB通路促进氧化应激和炎症,并通过NFκB通路、转录和(或)翻译水平两种方式负调控抗氧化酶eNOS和SOD2表达,从而进一步加重细胞内氧化应激的分子机制。我们的研究提出了一种dsRNA调控内皮细胞功能紊乱的新机制。

关键词： Alu RNA 高糖血管内皮氧化应激

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应用Logistic回归与多因子降维法分析胃癌易感基因多态性

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中国生物制品学杂志 2014年第5期27卷 679-683页

作者：张文涛梁平代鹏王伟华汪钦孙建斌王伟颜真肿瘤生物学国家重点实验室第四军医大学药学系药物基因组学教研室陕西西安710032

目的应用Logistic回归与多因子降维法(multifactor dimensionality reduction,MDR)分析胃癌易感基因多态性,为胃癌的早期诊断和预警奠定基础。方法采用病例-对照研究,以中国西北476例汉族胃癌患者为病例组,361名非肿瘤、非消化系统疾病... 详细信息

目的应用Logistic回归与多因子降维法(multifactor dimensionality reduction,MDR)分析胃癌易感基因多态性,为胃癌的早期诊断和预警奠定基础。方法采用病例-对照研究,以中国西北476例汉族胃癌患者为病例组,361名非肿瘤、非消化系统疾病个体为对照组;通过候选基因策略,应用MassARRAY质谱平台分析与代谢、炎症相关的18个基因的37个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点;利用Logistic回归与MDR对基因分型结果进行分析。结果 Logistic回归分析显示,磷脂酶Cε1(phospholipase C epsilon 1,PLCE1)_rs3765524[OR=1.341,95%CI(1.003,1.792)]、还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ醌氧化还原酶1[NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1,NQO1]_rs1800566[OR=0.615,95%CI(0.418,0.903)]、X线修复交叉互补基因1(X ray repair cross complementing gene 1,XRCC1)_rs25487[OR=0.688,95%CI(0.490,0.967)]3个SNP位点的基因型分布与胃癌易感性显著相关(P<0.05);MDR分析显示,PSCA_rs10216533-XRCC1_rs25487[模型Ⅰ:OR=3.566,95%CI(2.614,4.863)]、MTHFR_rs1801131-PSCA_rs2976392-CYP17A1_rs6163-CYP19A1_rs4646-CYP19A1_rs1902586-MMP2_rs243865[模型Ⅱ:OR=7.257,95%CI(5.337,9.870)]、IL1B_rs16944-PSCA_rs10216533-CYP17A1_rs6163-NQO1_rs1800566-ENOSF1_rs2298581-XRCC1_rs25487[模型Ⅲ:OR=15.837,95%CI(11.252,22.289)]3个模型内部各位点之间具有显著交互作用(P<0.000 1)。结论 PLCE1、NQO1、XRCC1、PSCA、MTHFR、CYP17A1、CYP19A1、MMP2、IL1B、ENOSF1等基因多态性与我国西北地区汉族人群胃癌发病风险相关;在胃癌的早期诊断与预警中应联合Logistic回归和MDR等方法,兼顾单因素与多因素交互的影响进行综合分析。

关键词：胃癌单核苷酸多态性 Logistic回归多因子降维法

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蛋白质翻译后修饰研究进展

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中国细胞生物学学报 2014年第7期36卷 1027-1037页

作者：阮班军代鹏王伟孙建斌张文涛颜真杨静华肿瘤生物学国家重点实验室第四军医大学药学院药物基因组学教研室西安710032 美国波斯顿大学肿瘤外科实验室及VA临床蛋白组学实验室

蛋白质是执行细胞功能的基本功能单元,其表达受基因组和表观遗传学的调控。通常,蛋白质在表达以后还需要经过不同程度的修饰才能发挥所需要的功能。这种翻译后修饰过程受到一系列修饰酶和去修饰酶的严格调控,使得在某一瞬间细胞中蛋白... 详细信息

蛋白质是执行细胞功能的基本功能单元,其表达受基因组和表观遗传学的调控。通常,蛋白质在表达以后还需要经过不同程度的修饰才能发挥所需要的功能。这种翻译后修饰过程受到一系列修饰酶和去修饰酶的严格调控,使得在某一瞬间细胞中蛋白质表现出某种稳定或动态的特定功能。最新的研究表明,真核细胞中存在着各种各样的蛋白质修饰过程,其中大约70%目前还无法解释。有理由认为,这种经过了特定修饰的蛋白质,更客观地反映了细胞的各种生理以及病理过程。因此,除了基因组所编码的"裸"蛋白质组的表达以外,更需要对经过翻译后修饰的蛋白质及蛋白质组的调控过程进行深入的研究。该文对常见翻译后修饰以及研究方法进行了综述。

关键词：蛋白质组蛋白质翻译后修饰基因组分子鉴定

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HeLa细胞中可溶性MHCⅠ产生于晚期内体

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基础医学与临床 2013年第6期33卷 773-774页

作者：赵锦荣刘永兰颜真第四军医大学药学系药物基因组学教研室肿瘤生物学国家重点实验室陕西西安710032

可溶性主要组织相容性复合体I （ soluble major histocom-patibility complex class I , sMHC I ）,近年来逐渐成为研究热点。该类分子II司造血系统恶性肿瘤疾病相关…，在患者的m清中，其水平显著升高。柜功能E，sMHCI可通过诱导凋亡... 详细信息

可溶性主要组织相容性复合体I （ soluble major histocom-patibility complex class I , sMHC I ）,近年来逐渐成为研究热点。该类分子II司造血系统恶性肿瘤疾病相关…，在患者的m清中，其水平显著升高。柜功能E，sMHCI可通过诱导凋亡的方式清除抗肿瘤细胞，具有免疫逃逸分子功能，然而其产生机制还不清楚。

关键词： HeLa细胞可溶性主要组织相容性复合体内体晚期抗肿瘤细胞肿瘤疾病造血系统

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重组双链RNA依赖的Caspase募集蛋白的表达、纯化及其活性

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中国生物制品学杂志 2012年第5期25卷 557-561页

作者：王伟王伟华崔杰杨静华颜真肿瘤生物学国家重点实验室第四军医大学药学院药物基因组学教研室西安710032 美国波士顿大学肿瘤外科实验室波士顿02215

目的表表达并纯化重组双链RNA依赖的Caspase募集蛋白,并鉴定其生物学活性。方法将重组质粒pRSET-dsCARE转化大肠杆菌BL21(DE3),分别于37、28℃表达目的蛋白,Ni-NTA亲和层析纯化,纯化产物经SDS-PAGE、Western blot、HPLC鉴定目的蛋白,MT... 详细信息

目的表表达并纯化重组双链RNA依赖的Caspase募集蛋白,并鉴定其生物学活性。方法将重组质粒pRSET-dsCARE转化大肠杆菌BL21(DE3),分别于37、28℃表达目的蛋白,Ni-NTA亲和层析纯化,纯化产物经SDS-PAGE、Western blot、HPLC鉴定目的蛋白,MTT法检测dsCARE对转染poly(I∶C)细胞的增殖抑制作用。结果dsCARE重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中呈组成性稳定表达,平均每升培养基可收获湿菌体约10 g;纯化产物的SDS-PAGE纯度达95.8%;纯化的目的蛋白能与抗-His多抗发生特异性反应;HPLC纯度达95.1%;每10 g湿菌体可纯化dsCARE重组蛋白约7.5 mg,浓度约220μg/ml;纯化的dsCARE重组蛋白与转染poly(I∶C)的HeLa细胞共同孵育,可剂量依赖性抑制HeLa细胞的增殖活性。结论成功建立了重组dsCARE蛋白的表达、纯化工艺及活性鉴定方法,为其应用和后续研究奠定了基础。

关键词：双链RNA Caspase 病毒细胞凋亡

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siRNA沉默SOCS1表达增强IFN-α2a-NGR的抗肿瘤效应

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第5期26卷 412-415页

作者：黄启超雷小英刘艳隋文君李慎张英起颜真国家肿瘤生物学重点实验室第四军医大学药学系药物基因组学教研室陕西西安710032 国家肿瘤生物学重点实验室第四军医大学药学系生物制药学教研室陕西西安710032

目的:研究肿瘤血管导向性干扰素IFN-α2a-NGR抗肿瘤效应的分子机制,发现影响干扰素敏感性的关键信号分子,提高耐药肿瘤细胞敏感性。方法:培养IFNAR高表达细胞株A549、IFNAR低表达细胞株MKN-45,通过MTT检测IFN-α2a-NGR的抗细胞增殖活性... 详细信息

目的:研究肿瘤血管导向性干扰素IFN-α2a-NGR抗肿瘤效应的分子机制,发现影响干扰素敏感性的关键信号分子,提高耐药肿瘤细胞敏感性。方法:培养IFNAR高表达细胞株A549、IFNAR低表达细胞株MKN-45,通过MTT检测IFN-α2a-NGR的抗细胞增殖活性,流式细胞术(FCM)、Western blot检测IFN-α2a-NGR处理前后STAT1、p-STAT1、p53、OAS与SOCS1的表达变化,合成siRNA靶向干涉SOCS1。结果:IFN-α2a-NGR刺激后,A549中,p-STAT1、p53、OAS与SOCS1表达上调;MKN-45中P53、OAS无显著变化,SOCS1显著上调。靶向干涉SOCS1后,MKN-45对IFN-α2a-NGR的敏感性增加[抑制率从(14.69±1.05)%提高到(36.97±2.05)%]。结论:IFN-α2a-NGR与IFN-α2a在细胞和分子水平的效应基本一致,p-STAT1、p53与SOCS1可影响细胞对干扰素的敏感性,通过siRNA沉默技术可提高耐药细胞株敏感性,为IFN-α2a-NGR的进一步研发奠定了基础。

关键词：干扰素 IFN-α2a-NGR 肿瘤信号转导

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