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第十一届全国免疫学学术大会

作者：吴介恒韩东晖杨发郑国旭张玲玲杨安钢秦卫军温伟红第四军医大学免疫学教研室第四军医大学西京医院泌尿外科

研究背景:前列腺癌是严重威胁男性健康的泌尿系肿瘤。前列腺特异性膜抗原(prostate specific membrane antigen,PSMA)特异性高表达于前列腺癌细胞,是理想的治疗靶点。抗体偶联药物(antibody-drug conjugates,ADC)由抗体、细胞毒性药物及... 详细信息

研究背景:前列腺癌是严重威胁男性健康的泌尿系肿瘤。前列腺特异性膜抗原(prostate specific membrane antigen,PSMA)特异性高表达于前列腺癌细胞,是理想的治疗靶点。抗体偶联药物(antibody-drug conjugates,ADC)由抗体、细胞毒性药物及"连接物"(Linker)构成,可实现细胞毒性药物对肿瘤细胞的特异性杀伤,是非常有前景的抗肿瘤药物。研究目的:构建抗人PSMA全抗体的真核表达载体,在CHO-S细胞中表达纯化后,检测其生物学活性,将该抗体与细胞毒性药物DM1偶联制备出抗体偶联药物,并验证其对PSMA阳性细胞的特异性杀伤活性。方法:根据从抗体库中筛选获得的抗人PSMA单链抗体的基因序列,人工合成重链可变区和轻链可变区基因,依次克隆入真核表达载体。瞬时转染CHO-S细胞后收集培养上清,亲和层析纯化获得抗人PSMA的全抗体,命名为PSMAb,利用间接ELISA、流式细胞术及间接免疫荧光染色检测其生物学活性。将PSMAb与微管抑制剂DM1偶联制备出抗体偶联药物(PSMAb-DM1),并在体外验证其特异性杀伤活性。利用PSMA阳性及PSMA阴性前列腺癌荷瘤裸鼠模型,检测PSMAb在体内的特异性定位,及PSMAb-DM1对PSMA阳性前列腺肿瘤生长的抑制作用。结果:成功表达并纯化获得了抗人PSMA全抗体PSMAb,SDS-PAGE和Western blot证实其具有较高的纯度;间接ELISA、流式细胞术和间接免疫荧光染色证实PSMAb亲和力高、能特异性结合并有效内化入PSMA阳性细胞;将其与DM1偶联后,间接ELISA及流式细胞术证实药物偶联没有破坏抗体的结合能力,Alamar Blue染色及凋亡检测证实PSMAb-DM1可特异性杀伤PSMA阳性细胞。体内实验证实PSMAb可特异性定位于PSMA阳性肿瘤组织,且PSMAb-DM1治疗后PSMA阳性肿瘤的体积明显缩小,而PSMA阴性肿瘤体积未见缩小,提示PSMA-DM1可在体内有效抑制PSMA阳性肿瘤的生长。结论:成功获得了抗人PSMA全抗体PSMAb,该抗体亲和力高、特异性好、有较好的内化活性,且在体内可特异性定位于PSMA阳性肿瘤组织。所制备的PSMAb-DM1可在体外特异性杀伤PSMA阳性细胞,在体内有效抑制PSMA阳性肿瘤的生长。这些结果为该抗体的进一步应用奠定了基础。

关键词：前列腺癌 PSMA 人源性抗体抗体偶联药物 ADC

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带血管髂骨移植建立嵌合现象的研究

带血管髂骨移植建立嵌合现象的研究

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2016中国器官移植大会暨第三届中国器官移植医师年会

作者：魏迪张更闫飞吴介恒张克克张磊袁建林第四军医大学西京医院泌尿外科第四军医大学免疫学教研室

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免疫促凋亡蛋白Immuno-caspase-6可选择性杀伤HER2阳性SGC-7901胃癌细胞

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第5期32卷 646-649页

作者：胡萍萍任君琳李玉芳陈旭席文锦杨安钢王涛崔立红安徽医科大学海军临床学院北京100048 中国人民解放军海军总医院医务部北京100048 第四军医大学免疫学教研室陕西西安710032 第四军医大学医学遗传学与发育生物学教研室陕西西安710032

目的构建融合白喉毒素转位序列的免疫促凋亡蛋白Immuno-caspase-6的真核表达载体,真核表达纯化该重组蛋白后验证其对人表皮生长因子受体2(HER2)阳性细胞的选择性杀伤活性。方法把Kozak序列与单链抗体e23sfv、白喉毒素的促转位片段白喉... 详细信息

目的构建融合白喉毒素转位序列的免疫促凋亡蛋白Immuno-caspase-6的真核表达载体,真核表达纯化该重组蛋白后验证其对人表皮生长因子受体2(HER2)阳性细胞的选择性杀伤活性。方法把Kozak序列与单链抗体e23sfv、白喉毒素的促转位片段白喉毒素弗林蛋白酶识别位点(fdt)、caspase-6以及免疫球蛋白Ig G Fc段基因重组,克隆入真核表达载体pc DNA3.1(+)中,命名为pc DNA3.1(+)-AFC。瞬时转染CHO-S细胞,Western blot法检测上清中目的蛋白的表达;收集培养上清并利用蛋白A纯化柱对目的蛋白进行纯化;流式细胞术验证目的蛋白对HER2阳性SGC-7901细胞的杀伤作用。结果成功构建pc DNA3.1(+)-AFR真核表达载体;瞬时转染悬浮CHO-S细胞后,Western blot法证实目的蛋白可分泌性表达于细胞培养上清中,流式细胞术结果显示纯化后的目的蛋白可以显著促进HER2阳性SGC-7901细胞凋亡。结论真核细胞表达的免疫促凋亡蛋白Immuno-caspase-6可选择性高效杀伤HER2阳性SGC-7901细胞。

关键词：人表皮生长因子受体2(HER2) e23sfv 胃癌分子靶向治疗

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RSA患者流产绒毛组织中miR-133a通过调控HLA-G影响蜕膜NK细胞的功能

RSA患者流产绒毛组织中miR-133a通过调控HLA-G影响蜕膜NK细胞的功...

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第十一届全国免疫学学术大会

作者：郭雯娓方亮王晓红陈丽华第四军医大学基础部免疫学教研室第四军医大学唐都医院妇产科

研究背景:复发性流产RSA是指与同一性伴侣两次或两次以上的自发流产,导致RSA的原因复杂,免疫学异常是导致RSA的重要原因之一。妊娠时母胎界面聚集了大量的NK细胞,这群NK细胞不同于外周血NK细胞,它们具有低的细胞毒性和高的细胞因子分泌... 详细信息

研究背景:复发性流产RSA是指与同一性伴侣两次或两次以上的自发流产,导致RSA的原因复杂,免疫学异常是导致RSA的重要原因之一。妊娠时母胎界面聚集了大量的NK细胞,这群NK细胞不同于外周血NK细胞,它们具有低的细胞毒性和高的细胞因子分泌能力,分泌的许多细胞因子都有利于成功妊娠。NK细胞表面存在受体可以结合HLA-G,HLA-G限制性表达在母胎界面的胎儿面,对于妊娠时免疫耐受起到了重要的作用,

关键词：复发性流产 miR-133a HLA-G dNK细胞 KIR2DL4 侵袭

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CD226分子参与调节小鼠体内骨植入材料周围骨结合的研究

CD226分子参与调节小鼠体内骨植入材料周围骨结合的研究

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第十一届全国免疫学学术大会

作者：王津津王颖王宁金敬一方亮王勤涛张玉梅陈丽华第四军医大学基础部免疫学教研室第四军医大学口腔医院牙周科

研究背景:CD226是2000年被命名的白细胞分化抗原分子,前期实验结果表明其与自身免疫性疾病、肿瘤、病毒感染等多种疾病的发生发展密切关系;Cd226-/-小鼠的疾病模型中IL-10的表达和浸润显著减少,从而具有抑制炎症发生的作用,而该种抑炎... 详细信息

研究背景:CD226是2000年被命名的白细胞分化抗原分子,前期实验结果表明其与自身免疫性疾病、肿瘤、病毒感染等多种疾病的发生发展密切关系;Cd226-/-小鼠的疾病模型中IL-10的表达和浸润显著减少,从而具有抑制炎症发生的作用,而该种抑炎作用对小鼠骨植入材料周围骨结合的影响以及CD226在参与骨形成中的作用至今鲜有报道。研究目的:观测Cd226-/-小鼠骨植入材料周围骨结合情况,明确CD226分子对小鼠BMMSCs成骨分化的调节作用。研究方法:Cd226-/-和WT小鼠股骨远端植入表面纳米化处理的种植体,2周后处死小鼠并取材。MicroCT检测种植体周围骨结合情况,组织学观察种植体周围骨小梁形成情况及炎症反应。取Cd226-/-和WT小鼠BMMSCs原代培养并进行成骨诱导,RT-PCR和ALP染色检测两组细胞成骨分化情况。研究结果:***-CT结果显示Cd226-/-小鼠种植体周围骨体积分数显著高于WT组(46.39±1.27%vs39.05±3.14%,P<0.05)。2.石蜡组织切片HE染色显示Cd226-/-组小鼠种植体周围炎性细胞浸润较少,骨小梁结构整齐致密,而WT组小鼠种植体周围有较多炎性细胞浸润,骨小梁结构紊乱疏松。***-PCR结果显示Cd226-/-小鼠BMMSCs的骨细胞特异转录因子Runx2及成骨相关转录因子抗体Osterix表达水平显著高于WT组。***染色结果显示Cd226-/-小鼠相比WT组有较多的蓝色结节。研究结论:Cd226-/-可以促进小鼠BMMSCs的成骨分化,抑制局部炎症反应,从而有利于骨植入材料周围骨结合。

关键词： CD226 BMMSCs 骨植入材料骨结合

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皮肤烧伤痛机制研究进展

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神经解剖学杂志 2016年第6期32卷 774-776页

作者：傅豪赵欢韩士超解营利杨涛卢昌波徐晖第四军医大学基础部神经生物学教研室和脑科学协同创新中心西安710032 菏泽市立医院麻醉科菏泽274000 第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科西安710032

烧伤是生活中一种常见的意外伤害，据估计，全世界有1100万烧伤患者需要得到医疗救治。烧伤会使机体出现休克、组织坏死、脏器衰竭等严重不良反应，并可能留下严重的后遗症，对患者的身体和心理健康造成较大损害，甚至导致死亡。

关键词：皮肤烧伤痛烧伤模型

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颈背根节神经元异位自发放电增强诱致大鼠慢性颈椎根性痛的作用机制研究

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神经解剖学杂志 2016年第3期32卷 357-362页

作者：张昱琦陈荣贵孔微微曹智胡三觉董辉罗层第四军医大学西京医院麻醉科西安710032 第四军医大学基础部神经生物学教研室暨脑科学协同创新中心西安710032 温州医学院第二附属医院麻醉科温州325027 第四军医大学学员旅临床医学系西安710032

目的：建立慢性压迫颈背根神经节诱致的颈椎根性痛（cervical radiculopathic pain,CRP）模型,观察颈背根节神经元产生异位自发放电诱致颈椎根性痛的作用。方法：采用体重为100~150 g的成年SD大鼠,在椎间孔内植入L型不锈钢钢柱形成慢性... 详细信息

目的：建立慢性压迫颈背根神经节诱致的颈椎根性痛（cervical radiculopathic pain,CRP）模型,观察颈背根节神经元产生异位自发放电诱致颈椎根性痛的作用。方法：采用体重为100~150 g的成年SD大鼠,在椎间孔内植入L型不锈钢钢柱形成慢性压迫C7/C8背根节,建立颈椎根性痛模型。用Von Frey细丝刺激大鼠前足足底来检测机械痛敏。用热辐射刺激仪刺激大鼠前足足底来检测热痛敏,其热缩足反射潜伏期由自动计时器读出。用丙酮刺激大鼠前足足底来观察冷刺激反应级别;同时检测大鼠前足肌肉的瞬间肌力;进行在体C7/C8 DRG背根纤维胞外电生理记录。结果：（1）CRP大鼠损伤侧前足表现出对机械刺激、热刺激以及冷刺激明显的痛觉过敏现象。（2）在C7/C8 DRG慢性压迫损伤后有62.7%的神经元发生异位自发放电,而对照组只有22.5%的神经元发生自发放电。与对照组相比,CRP组发生异位自发放电的比例明显增加。受损神经元的自发放电呈现三种不同的放电模式,即阵发性放电,周期性放电以及非周期性放电。结论：我们通过对C7/C8 DRG神经元施加稳固的慢性机械压迫建立了一个新的CRP模型,CRP大鼠表现出明显的痛行为学过敏反应。这种痛觉过敏可能由受损DRG神经元异位自发放电增强介导。

关键词：颈椎根性痛背根节痛觉过敏触诱发痛自发放电大鼠

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MicroRNA-101通过靶向SOX9抑制人胶质母细胞瘤的增殖、迁移和侵袭

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转化医学电子杂志 2017年第7期4卷 37-43页

作者：刘楠张磊王震成迎端张鹏幸王欣温伟红杨宏伟刘辉金卫林张永生涂艳阳第四军医大学唐都医院实验外科陕西西安710038 西安儿童医院矫形外科陕西西安710003 北布伦瑞克医院研究部新泽西美国08902 哈佛医学院布莱根妇女医院神经外科波士顿美国02115 第四军医大学免疫学教研室陕西西安710032 上海交通大学电子信息与电子工程学院薄膜与微细技术教育部重点实验室仪器科学与工程中心纳米生物医学与工程研究室上海200240

多形性胶质母细胞瘤(GBM)起源于大脑皮质,是最常见的原发性恶性肿瘤.尽管当今的治疗手段不断进步,包括手术、放疗、化疗和光动力治疗等,然而GBM患者的预后情况仍然较差.最近的研究表明,microRNA-101(miR-101)在人肿瘤中显著下调,并与肿... 详细信息

多形性胶质母细胞瘤(GBM)起源于大脑皮质,是最常见的原发性恶性肿瘤.尽管当今的治疗手段不断进步,包括手术、放疗、化疗和光动力治疗等,然而GBM患者的预后情况仍然较差.最近的研究表明,microRNA-101(miR-101)在人肿瘤中显著下调,并与肿瘤细胞的增殖和肿瘤干细胞的自我更新有关.另外,miR-101在神经胶质瘤标本和细胞系中显著下调,但胶质瘤中miR-101的这种下调现象的分子机制尚不明确.本研究发现miR-101可以通过靶向SOX9在体内和体外抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭.沉默SOX9对胶质瘤细胞的增殖和侵袭影响与miR-101类似.qRT-PCR和Western blot检测发现在人神经胶质瘤细胞系U251MG和U87MG中miR-101与SOX9呈负相关,荧光素酶报告分析发现miR-101可以通过靶向SOX9的3’UTR区抑制SOX9的表达.研究结果表明miR-101通过靶向抑制SOX9的表达在体内和体外调节人神经胶质瘤的增殖、迁移和侵袭,说明miR-101是未来神经胶质瘤治疗的潜在靶标.

关键词： miR-101 SOX9 侵袭迁移增殖

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血小板抗表皮葡萄球菌生长的研究

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现代检验医学杂志 2016年第5期31卷 42-45,49页

作者：李贞贞徐金梅顾顺利张辉洁胡兴斌尹文第四军医大学西京医院输血科西安710032 第四军医大学基础部微生物学教研室西安710032

目的：探讨血小板对表皮葡萄球菌（staphylococcus epidermidis ，SE）的抗菌效果及相关机制。方法体外建立105 CFU／ml表皮葡萄球菌接种浓度的BHI培养体系，分别加入终浓度为400×10^9／L血小板（PLT组）、血浆（阳性对照组）与BH... 详细信息

目的：探讨血小板对表皮葡萄球菌（staphylococcus epidermidis ，SE）的抗菌效果及相关机制。方法体外建立105 CFU／ml表皮葡萄球菌接种浓度的BHI培养体系，分别加入终浓度为400×10^9／L血小板（PLT组）、血浆（阳性对照组）与BHI培养基（阴性对照组）共培养12 h以后，观察比较各组菌液的浑浊程度，并采用倍比稀释、涂布计数法检测血小板体外抗菌的效果，同时绘制血小板抗菌曲线。通过透射电镜观察细菌亚显微结构的完整性，并初步探究血小板的抗菌机制。结果血小板对表皮葡萄球菌有明显的抑制作用，且其抑制效果虽较血浆组出现的晚，但持续时间更久；透射电镜结果显示血小板抗菌组表皮葡萄球菌染色质结构异常、发生凝集并有部分断裂，且处于分裂期的细菌比例明显降低。结论血小板可能通过破坏表皮葡萄球菌染色质的结构，进而影响细菌的分裂，发挥抗菌作用。

关键词：血小板表皮葡萄球菌抗菌透射电镜

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单核细胞介导的固有免疫在丙型肝炎感染中的作用

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肝脏 2016年第8期21卷 685-689页

作者：梁彦张沛欣贾战生陈丽华张颖第四军医大学唐都医院感染科陕西西安710038 第四军医大学基础医学部免疫学教研室

全球目前有1．3～1．7亿丙肝患者，每年以300～400万的速度增长［1］，主要是由于输注污染血液制品、毒品注射和不安全的治疗感染和传播病毒。丙型肝炎病毒（hepatitis C virus， HCV）感染人体后，首先经历一个急性感染过程，在急性感... 详细信息

全球目前有1．3～1．7亿丙肝患者，每年以300～400万的速度增长［1］，主要是由于输注污染血液制品、毒品注射和不安全的治疗感染和传播病毒。丙型肝炎病毒（hepatitis C virus， HCV）感染人体后，首先经历一个急性感染过程，在急性感染的早期，HCV 强烈复制，激活固有免疫反应，在肝脏诱导干扰素刺激基因（IFN-stimulated genes，ISGs）的形成，诱导和激活 I和 III 型干扰素（interferon，IFN），限制病毒复制，但不能完全清除病毒。在急性感染晚期，HCV 特异性 T 细胞招募至肝脏，通过细胞毒性和γ-IFN 介导的非细胞毒性机制有效地抑制病毒复制，之后30％的患者自发完全清除了病毒，约70％的患者病毒持续感染发展为慢性，此期病毒难以自发清除［2］。病毒感染宿主后产生不同结果的机制目前尚不清楚，这与宿主免疫细胞与 HCV 相互作用有直接关系，通过理解免疫系统不同细胞和病毒之间相互作用可以将丙型肝炎潜在的治疗目标确定为克服免疫失调和控制病毒感染。T 淋巴细胞介导的适应性免疫在丙型肝炎研究多有报道，病毒感染后几周甚至几个月才能启动，且会介导免疫损伤，以至难以清除病毒［3］。当 HCV 感染人体后，固有免疫反应依靠抗原和关键感知通路相互识别激活，诱导产生 IFN、促炎因子和趋化因子以抑制病毒复制和传播，固有免疫不仅为启动适应性免疫赢得时间，而且在后者的激活发挥了重要的作用［4］。相对于适应性免疫而言，之前研究认为固有免疫是机体遇到外来抗原后首先迅速启动的免疫反应［2］，最近越来越多的研究表明固有免疫在宿主和病毒相互作用的整个免疫时相亦发挥了重要的作用。单核细胞是固有免疫的代表性细胞，在抗击外来抗原包括病毒入侵、复制等发挥着极其重要的作用。

关键词：丙型肝炎感染细胞介导固有免疫单核细胞抑制病毒复制病毒感染宿主干扰素刺激基因 γ-IFN

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