目的构建人转化生长因子1β(transform ing grow th factor1β,TGF-1β)及骨形成蛋白7(bonem orphogenetic prote in 7,BM P-7)基因共表达腺病毒真核表达载体,并观察感染骨髓基质干细胞(m arrow strom a l stemce lls,M SC s)后目的基...
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目的构建人转化生长因子1β(transform ing grow th factor1β,TGF-1β)及骨形成蛋白7(bonem orphogenetic prote in 7,BM P-7)基因共表达腺病毒真核表达载体,并观察感染骨髓基质干细胞(m arrow strom a l stemce lls,M SC s)后目的基因的表达和对细胞生物学行为的影响。方法以复制缺陷的腺病毒A dE asy为基因载体,制备携带TGF-1β及BM P-7基因的高滴度腺病毒液感染人M SC s,通过免疫细胞化学、原位杂交、RT-PCR及己糖醛酸水平检测等方法鉴定外源基因的表达,分析外源性基因共表达对M SC s定向软骨分化的调控机制。结果腺病毒感染72 h后,TGF-1β和BM P-7免疫细胞化学染色可见大部份M SC s胞浆内均出现棕黄色粗颗粒,通过原位杂交检测出Ⅱ型胶原蛋白基因mRNA,感染10 d后细胞培养液中己糖醛酸含量为68.03±3.34μg/m l与感染前的53.20±3.70μg/m l明显升高有统计学意义(P<0.01)。结论成功构建了人TGF-1β及BM P-7共表达基因腺病毒表达载体,证实其在M SC s中的表达和具有向软骨细胞定向分化的诱导作用,为软骨缺损修复的局部基因治疗奠定实验基础。
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