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结核分枝杆菌抗原Ag85B-Mpt64 190-198-HspX融合蛋白免疫原性的初步观察

中华微生物学和免疫学杂志 2009年第2期29卷 103-107页

作者：李青姜雯雯雒彧于红娟宋楠楠王秉翔刘昕张颖祝秉东兰州大学结核病研究中心暨病理生理学研究所 730000 兰州大学结核病研究中心暨病原生物学研究所 730000 兰州生物制品研究所 730046 美国霍普金斯大学布隆博格公共卫生学院分子微生物学与免疫学系

目的为了建立对潜伏感染细菌的保护性免疫应答，本研究选择结核分枝杆菌休眠期、对数生长期最重要的保护性抗原HspX、Mpt64的190～198位的氨基酸多肽（CD8^＋T细胞表位）及Ag85B，构建融合蛋白Ag85B-Mpt64 190-198-HspX（AMH），并对其... 详细信息

目的为了建立对潜伏感染细菌的保护性免疫应答，本研究选择结核分枝杆菌休眠期、对数生长期最重要的保护性抗原HspX、Mpt64的190～198位的氨基酸多肽（CD8^＋T细胞表位）及Ag85B，构建融合蛋白Ag85B-Mpt64 190-198-HspX（AMH），并对其免疫原性进行研究。方法PCR分别扩增Ag85B、Mpt64 190-198-HspX基因，并依次插入pET-28a质粒中，在大肠杆菌BL21中表达纯化AMH蛋白。将该蛋白和佐剂二甲基三十六烷基铵和卡介苗多糖核酸（DDA＋BCG—PSN）混合构建亚单位疫苗，分别于1、4、7周皮下免疫C57BL／6小鼠3次，最后一次免疫5周后检测体液免疫与细胞免疫反应。结果该融合蛋白以包涵体形式能在大肠杆菌中稳定表达，经Ni—NTA层析柱纯化得到纯度较高的蛋白；构建的亚单位疫苗免疫动物能产生针对结核杆菌特定抗原（PPD、Ag85B、Mpt64 190-198和HspX）的特异性的细胞免疫和体液免疫应答，具有较强的免疫原性。结论融合蛋白AMH作为结核亚单位疫苗候选的融合蛋白抗原有必要进一步研究。

关键词：结核分枝杆菌亚单位疫苗融合蛋白 Ag85B HspX

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结核病免疫机制及疫苗研究进展

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微生物与感染 2011年第3期6卷 169-178页

作者：达泽蛟祝秉东张颖兰州大学结核病研究中心暨病原生物学研究所兰州730000 美国约翰.霍普金斯大学布隆博格公共卫生学院分子微生物学与免疫学系马里兰州21205

结核病是一种棘手的重大传染病。虽然存在一些有一定疗效的治疗药物,亦有预防性疫苗———卡介苗(BCG);但结核病仍在世界范围流行,且发病率和病死率居高不下。结核病的免疫病理机制及疫苗研究近年来取得了一定的进展。结核分枝杆菌通过T... 详细信息

结核病是一种棘手的重大传染病。虽然存在一些有一定疗效的治疗药物,亦有预防性疫苗———卡介苗(BCG);但结核病仍在世界范围流行,且发病率和病死率居高不下。结核病的免疫病理机制及疫苗研究近年来取得了一定的进展。结核分枝杆菌通过Toll样受体(TLR)等模式识别受体,激活巨噬细胞的天然免疫反应,清除细菌和调节获得性免疫反应。包括主要组织相容性复合物(MHC)限制的CD4+和CD8+T细胞,以及CD1限制的T细胞和γδT细胞参与抗结核获得性免疫反应,其中记忆性T细胞与调节性T细胞具有重要的免疫调节作用。但是,人们对结核病发生机制的认识仍然不足,限制了对结核病治疗药物和新型疫苗的研发。由于BCG对成人缺乏有效的保护力,故研制新型的结核疫苗是预防结核病的当务之急。当前处于实验阶段的候选疫苗包括重组BCG、减毒结核分枝杆菌和可用于加强BCG的亚单位疫苗,后者又包括痘苗病毒载体疫苗、核酸疫苗、新型佐剂辅助的蛋白疫苗。目前可行的疫苗免疫策略主要是使用BCG或其他疫苗初次免疫,然后选择亚单位疫苗加强免疫。然而,疫苗的免疫策略、免疫剂量、免疫途径、强化免疫次数和免疫时机都有待研究。反映疫苗保护力的免疫指标不明确、很难确定哪类疫苗进入临床试验、缺乏临床试验场地、疫苗效果评价需要很长时间及耗资巨大,增加了结核疫苗研究的难度和风险。

关键词：结核病免疫学疫苗

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结核分枝杆菌ESAT6-RpfE亚单位疫苗的构建与免疫原性研究

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中国防痨杂志 2012年第3期34卷 154-160页

作者：李志达泽蛟章国平李瑞营刘万波苏娟张颖祝秉东兰州大学结核病研究中心暨病原生物学研究所 730000 美国霍普金斯大学布隆博格公共卫生学院分子微生物学与免疫学系

目的构建Mtb ESAT6-RpfE(早期分泌抗原靶6-复活促进因子E)的原核表达载体,表达和纯化融合蛋白,并对其免疫原性进行研究。方法分别以Mtb H37Rv及临床株的基因组为模板,PCR扩增esat6、rpfE基因,依次插入pET30a质粒并在大肠埃希菌BL21中表... 详细信息

目的构建Mtb ESAT6-RpfE(早期分泌抗原靶6-复活促进因子E)的原核表达载体,表达和纯化融合蛋白,并对其免疫原性进行研究。方法分别以Mtb H37Rv及临床株的基因组为模板,PCR扩增esat6、rpfE基因,依次插入pET30a质粒并在大肠埃希菌BL21中表达纯化ESAT6-RpfE蛋白。采用完全随机的方法将C57BL/6小鼠分组,每组6只,共进行了两次实验,第一次实验分为ESAT6、RpfE、ESAT6-RpfE、PBS、BCG五组,佐剂为二甲基三十六烷基胺(dimethyl-dioctyldecyl ammonium bromide,DDA);第二次实验有ESAT6-RpfE、PBS、BCG三组,佐剂为DPG[DDA+poly(I:C)+明胶]。分别于0、3、6周皮下免疫C57BL/6小鼠。末次免疫8周后,用特异性抗原ESAT6及RpfE刺激,检测其分泌IFN-γ的水平;ELISA检测血清特异性抗体IgG2b、IgG1。结果PCR扩增的esat6、rpfE基因序列与GenBank报道一致;融合蛋白主要以包涵体形式表达;亚单位疫苗免疫动物能够分泌RpfE特异性IFN-γ的脾淋巴细胞数量[(427.13±100.46)]显著高于PBS组(26.13±22.34;q=7.924,P<0.001);分泌ESAT6刺激特异性IFN-γ的脾淋巴细胞数量[(506.50±140.40)]明显高于PBS组(19.25±14.75;q=11.36,P<0.001)和BCG组(125.5±46.41;q=8.882,P<0.001)。ESAT6-RpfE免疫组能诱导产生特异性抗体。结论成功构建并表达ESAT6-RpfE融合蛋白。此融合蛋白可在C57BL/6小鼠中诱导抗原特异性的免疫应答,可作为新型结核亚单位疫苗的候选疫苗予以进一步研究。

关键词：疫苗亚单位重组融合蛋白质类细菌蛋白质类细胞因子类免疫活性

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结核融合蛋白AMM亚单位疫苗强化BCG初始免疫的免疫效应

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第7期29卷 631-635页

作者：姜雯雯景涛于红娟李青易娟雒彧宋楠楠张颖祝秉东兰州大学病原生物学研究所 730000 兰州大学结核病研究中心 730000 兰州大学基础医学院实验中心 730000 兰州大学病理生理学研究所 730000 兰州大学免疫学研究所 730000 甘肃省新药临床前研究重点实验室兰州730000 美国霍普金斯大学布隆博格公共卫生学院分子微生物学与免疫学系

目的研究结核融合蛋白Ag85B—Mpt64190-198-Mtb8．4（AMM）和佐剂二甲基三十六烷基铵（DDA）、卡介苗多糖核酸（BCG—PSN）构建的亚单位疫苗强化BCG初始免疫的免疫效应。方法将融合蛋白AMM、佐剂DDA和BCG—PSN混合构建AMM亚单位疫苗。实... 详细信息

目的研究结核融合蛋白Ag85B—Mpt64190-198-Mtb8．4（AMM）和佐剂二甲基三十六烷基铵（DDA）、卡介苗多糖核酸（BCG—PSN）构建的亚单位疫苗强化BCG初始免疫的免疫效应。方法将融合蛋白AMM、佐剂DDA和BCG—PSN混合构建AMM亚单位疫苗。实验1组BCG初免后第10周用AMM亚单位疫苗加强免疫小鼠一次；实验2组BCG初免后分别于第8周、第10周用AMM亚单位疫苗加强免疫小鼠一次。同时设立生理盐水及仅BCG免疫两个对照组。BCG初免后第14周、第22周，应用ELISPOT、ELISA检测免疫小鼠的细胞及体液免疫反应。同时在第22周用BCG活菌攻击被免疫小鼠，间隔4周后用流式细胞术和ELISA技术检测T细胞分型及体液免疫反应。结果（1）IFN-γ水平：BCG初免后14周，特异性抗原Ag85B刺激后实验2组分泌IFN-γ的细胞数（135±14）明显高于仅BCG免疫组（19±16），t=10．98，P〈0．01；BCG初免后22周，实验2组（208±11）同样高于仅BCG免疫组（57±18），t=6．43，P〈0．01。（2）体液免疫应答水平：实验2组的IgG1抗体滴度明显高于实验1组，而作为反映Th1型免疫反应指标的IgG2a／IgG1比值，强化免疫两次组低于强化一次组。（3）BCG模拟攻击被免疫小鼠后，CD4^＋CD25^＋调节性T细胞含量：实验1、2组均高于仅BCG免疫组（t1=3．08，t2=3．16，P〈0．05）。结论BCG免疫-AMM亚单位疫苗加强免疫两次能够引起较强的细胞及体液免疫反应，同时激活调节性免疫反应。

关键词：亚单位疫苗融合蛋白 BCG 免疫策略加强免疫

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电子香烟宜合法？

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环球科学 2016年第9期 91-91页

作者：托马斯·哈通薄锦美国约翰斯·霍普金斯大学布隆博格公共卫生学院不详

吸烟能置人于死地，没有人会对此有任何异议，只是很多人也许并没有意识到它到底有多么致命。世界卫生组织估计。烟草可导致多达半数的经常吸烟者死于心血管疾病、肺癌和其他癌症，以及呼吸道疾病。美国现有的癌症致死病例中。约有30％... 详细信息

吸烟能置人于死地，没有人会对此有任何异议，只是很多人也许并没有意识到它到底有多么致命。世界卫生组织估计。烟草可导致多达半数的经常吸烟者死于心血管疾病、肺癌和其他癌症，以及呼吸道疾病。美国现有的癌症致死病例中。约有30％都是因吸烟所致。

关键词：合法香烟电子世界卫生组织心血管疾病呼吸道疾病吸烟者有意识

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医患共享决策在医学美容行业的研究进展

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上海医药 2023年第11期44卷 32-36,55页

作者：李思源范菁朱庆庆王瑞平上海中医药大学公共健康学院上海201203 上海市皮肤病医院临床研究与创新转化中心上海200443 美国约翰斯·霍普金斯大学布隆博格公共卫生学院美国马里兰州21205 上海市松江区妇幼保健院儿保科上海201620

医患共享决策是一个基于医生和患者共同参与,双方进行信息交流并考虑医疗结局各种可能情况的医疗方案选择过程。在医患共享决策的各个阶段,医生和患者都保持着互动,医生和患者都是决策者。因此,医患共享决策是一种更强调“以患者为中心... 详细信息

医患共享决策是一个基于医生和患者共同参与,双方进行信息交流并考虑医疗结局各种可能情况的医疗方案选择过程。在医患共享决策的各个阶段,医生和患者都保持着互动,医生和患者都是决策者。因此,医患共享决策是一种更强调“以患者为中心”的新型诊疗模式。医学美容作为跨专科的消费医疗服务类型,患者以自费支付获取医疗服务,他们参与诊疗决策的动机强烈。不过,医学美容领域至今仍存在着患者在诊疗过程中参与度低的问题,医患共享决策并未在医学美容行业中得到充分的实施。本文概要介绍医患共享决策在医学美容领域中的开展情况以及实施过程中存在的问题和障碍,为研究与开发规范化的医学美容医患共享决策临床实施路径提供参考。

关键词：医患共享决策以患者为中心医学美容

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结核分枝杆菌融合蛋白亚单位疫苗对BCG初始免疫的加强效应及保护效力

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中国生物制品学杂志 2010年第3期23卷 280-285页

作者：李青傅林锋王秉翔姜雯雯于红娟雒彧张颖祝秉东兰州人学结核病研究中心暨病理生理学研究所兰州730000 兰州生物制品研究所兰州730046 兰州大学结核病研究中心暨病原生物学研究所兰州730000 兰州大学结核病研究中心暨病原生物学研究所兰州730000 美国霍普金斯大学布隆博格公共卫生学院分子微生物学与免疫学系

目的探讨结核分枝杆菌融合蛋白亚单位疫苗对BCG初始免疫的加强效应及保护效力.方法将Ag85B、Ag85B-Mpt64_(190-198)-HspX(AMH)、Ag85B-Mpt64_(190-198)-Mth8.4(AMM)以及AMH+AMM蛋白分别与佐剂二甲基三十六烷基铵(DDA)和卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)混合,制备亚单位疫苗.第0周用BCG皮下免疫C57BL/6小鼠,第8、10周分别用各蛋白疫苗皮下加强免疫,以PBS和BCG(仅免疫1次)作为对照.末次免疫后4周,采血检测血清抗体水平,并分离脾淋巴细胞,检测分泌IFNγ的水平;末次免疫后12周,经尾静脉注射H37Rv株,6周后取肺,进行菌落计数,抗酸及HE染色观察.结果各亚单位疫苗加强组诱导产生的特异性抗Ag85B IgG抗体水平均明显高于BCG组;融合蛋白疫苗加强组免疫小鼠脾细胞经Ag85B和PPD刺激后,产生分泌IFNγ的淋巴细胞数明显多于BCG组;融合蛋白加强组免疫小鼠肺组织结核结节面积与BCG组比较,差异无统计学意义;仅AMM+AMH加强组免疫小鼠肺组织菌落计数明显低于BCG组,其抗酸染色阳性细菌数明显低于PBS、BCG及AMH、Ag85B加强组.结论 AMH和AMM疫苗联合加强BCG免疫,能诱导小鼠特异性的细胞免疫和体液免疫应答,具有较强的免疫原性,可增强BCG的保护效力.

关键词：结核分枝杆菌融合蛋白亚单位疫苗初始-强化免疫策略

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MRPS5基因的罕见错义变异在中国人群中使麻风病风险增高

MRPS5基因的罕见错义变异在中国人群中使麻风病风险增高

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2019年全国麻风皮肤病学术年会

作者：邢燕何珺温艳刘健尤元刚陈小华袁联潮熊立翁小满张颖李桓英首都医科大学附属北京友谊医院北京热带医学研究所热带病防治研究北京市重点实验室云南省疾病预防控制中心麻风病研究中心美国约翰·霍普金斯布隆博格公共卫生学院分子微生物学和免疫学系

目的:麻风病是由麻风杆菌引起的一种慢性传染病,全世界每年新发麻风病约20万例。尽管全基因组关联研究（GWAS）已经发现了许多风险位点,但常见变异的效应值相对较小。因此需要鉴定出对疾病发生风险影响较大的罕见的功能性基因变异。方法... 详细信息

目的:麻风病是由麻风杆菌引起的一种慢性传染病,全世界每年新发麻风病约20万例。尽管全基因组关联研究（GWAS）已经发现了许多风险位点,但常见变异的效应值相对较小。因此需要鉴定出对疾病发生风险影响较大的罕见的功能性基因变异。方法:我们对8个麻风病家系的26人进行全外显子测序分析（WES）,并在更多的病例对照样本中对候选变异进行后续基因分型验证。结果:发现线粒体核糖体蛋白S5（MRPS5）基因中的一个罕见错义变异可能引发麻风病的病发风险。而且外周血单个核细胞（PBMC）受到麻风杆菌脂阿拉伯甘露聚糖（LAM）的刺激后,MRPS5mRNA表达水平上调。结论:以上结果提示MRPS5在麻风病发病机制中发挥积极作用。

关键词：麻风病易感性全外显子测序分析线粒体核糖体蛋白S5基因

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结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-Mpt64190-198-HspX亚单位疫苗免疫特性及其保护效应研究

结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-Mpt64190-198-HspX亚单位疫苗免疫特...

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第十次全国生物制品学术会议

作者：李青姜雯雯于红娟雒彧王秉翔张颖祝秉东兰州大学结核病研究中心暨病理生理学研究所 730000 兰州大学结核病研究中心暨病原生物学研究所 730000 兰州生物制品研究所 730046 兰州大学结核病研究中心暨病原生物学研究所 730000 美国霍普金斯大学布隆博格公共卫生学院分子微生物学与免疫学系

目的：为了建立对潜伏感染细菌的保护性免疫应答，本研究选择结核分枝杆菌休眠期、对数生长期最重要的保护性抗原HspX、Mpt64的190-198位的氨基酸多肽(CD8+T细胞表位)及Ag85B，构建融合蛋白Ag85B—Mpt64190-198-HspX(AMH)，并对其免疫... 详细信息

目的：为了建立对潜伏感染细菌的保护性免疫应答，本研究选择结核分枝杆菌休眠期、对数生长期最重要的保护性抗原HspX、Mpt64的190-198位的氨基酸多肽(CD8+T细胞表位)及Ag85B，构建融合蛋白Ag85B—Mpt64190-198-HspX(AMH)，并对其免疫原性及保护效应进行研究。方法：PCR分别扩增Ag85B、Mpt64190_198-HspX基因，并依次插入pE128质粒中，在大肠杆菌BL21中表达纯化AMH蛋白。将该蛋白和佐剂二甲基三十六烷基铵和卡介苗多糖核酸(DDA+BCG-PSN)混合构建亚单位疫苗，分别于1、4、7周皮下免疫C57BL/6小鼠三次，最后一次免疫5周后检测体液免疫与细胞免疫反应;最后一次免疫12周后尾静脉攻毒，6周后取肺、脾，部分经细菌培养进行菌落计数，部分固定切片后经HE及抗酸染色进行组织学观察。结果：该融合蛋白以包涵体形式能在大肠杆菌中稳定表达，经Ni-NTA层析柱纯化得到纯度较高的蛋白;AMH亚单位疫苗免疫小鼠脾细胞受到特定抗原(HspX、Mpt64190-195和PPD)刺激后，产生分泌IFN-γ的淋巴细胞数明显高于单个抗原Ag85B免疫组和另一个融合蛋白AMM组;AMH免疫组所产生的特异性抗HspX IgG抗体水平也明显高于其他组，所产生的抗Ag85B抗体水平与AMM组相当，而高于Ag85B组和BCG组。AMM+AMH疫苗免疫小鼠肺组织菌落计数，结核结节面积及抗酸染色阳性度均较低。结论：AMH融合蛋白疫苗能诱导特异性的细胞免疫和体液免疫应答，具有较强的免疫原性。AMH和AMM疫苗联合免疫，可增强疫苗保护效应。

关键词：结核分枝杆菌亚单位疫苗融合蛋白免疫特性保护效应

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