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基础医学与临床 2013年第11期33卷 1377-1381页

作者：刘晓玉王瑞张涛庞希宁施萍中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001

目的探讨人脂肪间充质干细胞（hADSCs）皮内移植对小鼠皮肤创面修复的作用，为临床皮肤创伤后修复提供新的细胞治疗方法奠定基础。方法分离培养hADSCs，取3～5代细胞通过免疫荧光法检测间充质干细胞相关的细胞表面标志物CID0、CD105、C... 详细信息

目的探讨人脂肪间充质干细胞（hADSCs）皮内移植对小鼠皮肤创面修复的作用，为临床皮肤创伤后修复提供新的细胞治疗方法奠定基础。方法分离培养hADSCs，取3～5代细胞通过免疫荧光法检测间充质干细胞相关的细胞表面标志物CID0、CD105、CD34和CD45的表达，并分别置于骨、软骨和脂肪诱导分化培养基中进行诱导分化，检测其多向分化潜能。在实验小鼠背部制备一个面积为1cm×1 cm的皮肤创面，将磁性纳米颗粒标记的hADSCs以皮内注射方式移植到小鼠创面四周。分别于伤后0、7和14d观察创面愈合情况，并与对照组进行比较分析。结果人脂肪间充质干细胞表达CD90和CD105，不表达CD34和CD45，具有骨，软骨，脂肪诱导分化潜能；实验小鼠皮肤创伤后3d开始，可见各组创面逐渐缩小，伤后21d创面愈合。移植组于创伤后第7天创面愈合率为（74．6％±4．1％），14d为（96．5％±1．5％），均显著高于对照组7d的（26．7％±1．9％），14d的（47．3％±2．3％），（P〈0．05）。结论hADSCs移植能够提高小鼠皮肤创面愈合的速度。

关键词：脂肪间充质干细胞创伤愈合

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EGF对hAMSCs基因表达谱影响及生物信息学分析

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基础医学与临床 2013年第11期33卷 1391-1397页

作者：庞希宁李彩虹施萍王竟刘晓玉张涛张殿宝赵峰中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院肛肠外科辽宁沈阳110001

目的探讨表皮生长因子(EGF)对人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)基因表达谱影响及分子机制。方法采用基因表达谱测序(Illumina RNA-Seq)技术和生物信息学分析方法,对100 ng/mL EGF干预前后的hAMSCs基因表达测序比对,确定hAMSCs基因表达谱,RT-... 详细信息

目的探讨表皮生长因子(EGF)对人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)基因表达谱影响及分子机制。方法采用基因表达谱测序(Illumina RNA-Seq)技术和生物信息学分析方法,对100 ng/mL EGF干预前后的hAMSCs基因表达测序比对,确定hAMSCs基因表达谱,RT-PCR检测进行验证。结果筛选出差异表达基因104个(FDR≤0.001和|log2Ratio|≥1),其中上调差异表达基因56个,下调差异表达基因48个;GO生物学过程富集分析26个生物学过程具有显著性差异(P≤0.05);KEGG信号通路富集分析细胞因子与细胞因子相互作用信号通路具有显著性差异(Q≤0.05),RT-PCR检测验证与基因表达谱结果一致。结论 EGF干预hAMSCs引起基因表达谱的变化,显著差异表达的基因和信号通路可能在hAMSCs增殖和迁移及促进创伤修复过程中具有重要作用。

关键词：表皮生长因子人羊膜间充质干细胞基因表达谱测序生物信息学

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EGF促进人羊膜间充质干细胞迁移上调MMP14和IL-1β表达

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基础医学与临床 2013年第11期33卷 1404-1409页

作者：谭丽萍庞希宁施萍王竟王喜良中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院肛肠外科辽宁沈阳110001

目的研究表皮细胞生长因子(EGF)促进人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)迁移过程对基质金属蛋白酶14(MMP14)和白细胞介素1β(IL-1β)表达的影响。探讨EGF促进hAMSCs迁移的机制。方法贴壁法分离培养原代细胞流式细胞术鉴定Transwell小室检测EGF... 详细信息

目的研究表皮细胞生长因子(EGF)促进人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)迁移过程对基质金属蛋白酶14(MMP14)和白细胞介素1β(IL-1β)表达的影响。探讨EGF促进hAMSCs迁移的机制。方法贴壁法分离培养原代细胞流式细胞术鉴定Transwell小室检测EGF对hAMSCs迁移能力影响;Western blot和real-time PCR检测MMP14和IL-1β蛋白及mRNA表达。结果原代细胞表达间充质干细胞表面标记CD44,不表达CD45;不同浓度EGF作用hAMSCs 24 h 100μg/L EGF迁移指数最大为2.0;100μg/L EGF作用hAMSCs12、24和48 h迁移指数为1.6、2.0和1.7;MMP14蛋白表达12 h为(0.81±0.20)显著高于对照组的(0.63±0.12)(P<0.05);IL-1β蛋白表达48 h为(0.55±0.16)显著高于对照组的(0.30±0.05)(P<0.05)MMP14和IL-1βmRNA表达上调显著高于对照组(P<0.05)。结论 EGF促进hAMSCs迁移上调MMP14和IL-1β表达;MMP14、IL-1β和EGF协同激活MAPK/ERK、P13K/AKT信号通路参与调控EGF促进hAMSCs迁移。

关键词：基质金属蛋白酶14 白细胞介素1β 表皮生长因子羊膜间充质干细胞细胞迁移

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人羊膜间充质干细胞储备库的构建

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基础医学与临床 2013年第11期33卷 1410-1417页

作者：庞希宁刘晓玉施萍王竟林学文张殿宝谭丽萍中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院肛肠外科辽宁沈阳110001

目的构建人羊膜间充质干细胞库,为间充质干细胞的应用提供充足的细胞来源。方法将胎盘冲洗干净后,分离出羊膜组织,从羊膜组织原代和传代培养羊膜间充质干细胞(hAMSCs)。用MTT法检测细胞生长方式,流式细胞仪分析细胞表型及干细胞标记,使... 详细信息

目的构建人羊膜间充质干细胞库,为间充质干细胞的应用提供充足的细胞来源。方法将胎盘冲洗干净后,分离出羊膜组织,从羊膜组织原代和传代培养羊膜间充质干细胞(hAMSCs)。用MTT法检测细胞生长方式,流式细胞仪分析细胞表型及干细胞标记,使用不同的诱导分化培养基检测鉴定hAMSCs多向分化的能力,细胞周期等鉴定其生物学特性,将磁性纳米颗粒标记的人羊膜间充质干细胞移植到小鼠创面进行细胞功能评价。结果羊膜来源的细胞生长呈典型的成纤维细胞形态。细胞传代过程中未发现细菌、真菌、霉菌、支原体和内毒素等的污染。细胞表达间充质干细胞表面标记CD90和CD105,不表达CD45、CD14、CD34和HLA-DR。在不同的条件培养基培养状态下,细胞可向成骨、成软骨和成脂方向分化。细胞大多数处于G1期,仅少数细胞处于活跃的增殖期G2;建库用人羊膜间充质干细胞可显著促进小鼠创面愈合(P<0.05)。结论所得到的细胞为人羊膜间充质干细胞。羊膜间充质干细胞具有与骨髓间充质干细胞相似的生物学特性。初步建立了库存细胞的生物学特性检测标准和相应的干细胞质量控制体系。

关键词：人羊膜间充质干细胞生物学特性细胞分化表面标记细胞库

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聚乙烯亚胺包被的Fe_3O_4磁纳米颗粒对hAMSCs生物特性的影响

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基础医学与临床 2013年第11期33卷 1382-1386页

作者：王瑞庞希宁施萍刘晓玉王竟苏航中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院肛肠外科辽宁沈阳110001

目的探讨聚乙烯亚胺(PEI)包被的超顺磁性氧化铁(SPIO)标记人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的最佳方法并检测hAMSCs的增殖。方法分别用含铁浓度为6、8、10和12 mg/L的PEI-SPIO标记体外培养的hAMSCs,利用普鲁士蓝染色法和原子吸收分光光度法对... 详细信息

目的探讨聚乙烯亚胺(PEI)包被的超顺磁性氧化铁(SPIO)标记人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的最佳方法并检测hAMSCs的增殖。方法分别用含铁浓度为6、8、10和12 mg/L的PEI-SPIO标记体外培养的hAMSCs,利用普鲁士蓝染色法和原子吸收分光光度法对PEI-SPIO的标记情况进行分析鉴定,将未标记组设为对照组;应用MTT法检测PEI-SPIO标记后hAMSCs的增殖活性。结果 hAMSCs经PEI-SPIO标记后,细胞内可检测到大量铁颗粒。PEI-SPIO标记具有浓度依赖性;10和12 mg/L浓度的PEI-SPIO明显抑制细胞增殖活力(P<0.05)。结论浓度为8 mg/L的PEI-SPIO标记hAMSCs可获得良好的标记效果,并且不影响细胞的增殖活力。

关键词：人羊膜间充质干细胞聚乙烯亚胺超顺磁性氧化铁标记细胞增殖

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水通道蛋白1促进人羊膜间充质干细胞的迁移

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基础医学与临床 2013年第11期33卷 1387-1390页

作者：张涛庞希宁施萍王竟王喜良中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院肛肠外科辽宁沈阳110001

目的探讨水通道蛋白1(AQP1)在人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)迁移中的作用。方法免疫荧光染色、RTqPCR及Western blot检测hAMSCs AQP1的表达,siRNA干扰AQP1后,应用Transwell小室检测hAMSCs的迁移能力。结果 hAMSCs细胞膜上AQP1表达阳性。si... 详细信息

目的探讨水通道蛋白1(AQP1)在人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)迁移中的作用。方法免疫荧光染色、RTqPCR及Western blot检测hAMSCs AQP1的表达,siRNA干扰AQP1后,应用Transwell小室检测hAMSCs的迁移能力。结果 hAMSCs细胞膜上AQP1表达阳性。siRNA干扰AQP1 48 h后AQP1 mRNA表达水平降低60.13%;AQP1的蛋白表达水平降低40.42%。siRNA干扰组穿过细胞数目为23.7±1.45显著低于对照组的33.15±1.15(P<0.01)。结论 AQP1促进人羊膜间充质干细胞的迁移,推测AQP1参与创伤的修复过程。

关键词：水通道蛋白1 细胞迁移人羊膜间充质干细胞创伤修复

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聚乙烯亚胺包被的Fe3O4磁纳米颗粒对hADSCs生物学特性的影响

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基础医学与临床 2013年第11期33卷 1398-1403页

作者：王瑞刘晓玉庞希宁施萍中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室中国医科大学附属第一医院全科医学教研室

目的:探讨聚乙烯亚胺(PEI)包被的超顺磁性氧化铁(SPIO)对人脂肪间充质干细胞(hADSCs)生物学特性的影响。方法:从人皮下脂肪组织中分离、培养hADSCs并鉴定,选取第3代hADSCs,分别用含铁浓度为6、8、10和12mg/L的DMEM/F12培养液共孵育。通... 详细信息

目的:探讨聚乙烯亚胺(PEI)包被的超顺磁性氧化铁(SPIO)对人脂肪间充质干细胞(hADSCs)生物学特性的影响。方法:从人皮下脂肪组织中分离、培养hADSCs并鉴定,选取第3代hADSCs,分别用含铁浓度为6、8、10和12mg/L的DMEM/F12培养液共孵育。通过普鲁士蓝染色、MTT细胞增殖实验、锥虫蓝染色及多向分化诱导实验来探讨***标记后,hADSCs的标记能力、细胞增殖和分化能力。结果:1)当铁终浓度为8、10和12mg/L时,PEI-SPIO对hADSCs的标记率为99%,当铁终浓度<8mg/L时,PEI-SPIO对hADSCs的标记率为96%。2)当铁终浓度为6和8mg/L时,PEI-SPIO标记的hADSCs的活细胞比率为99%,而当铁终浓度为10和12mg/L时,活细胞比率为(79.03±2.25)%和(70.23±1.36)%,显著低于对照组(P<0.01)。3)当铁浓度为10和12mg/L时,在诱导hADSCs分化过程中,细胞绝大多数死亡。结论:铁浓度8mg/L为PEI-SPIO标记的最适宜浓度,既能高效的标记hADSCs,又不影响hADSCs的细胞增殖、多向分化能力等生物学特性。

关键词：聚乙烯亚胺染色与标记铁细胞增殖间充质基质细胞/细胞学脂肪组织/细胞学纳米粒子细胞培养的人类

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高密度接种对转化生长因子β1诱导上皮间充质转化的影响

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中国组织工程研究 2013年第28期17卷 5191-5197页

作者：张殿宝王哲施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁省沈阳市110001 中国医科大学附属盛京医院输血科辽宁省沈阳市110004 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁省沈阳市110001

背景:细胞密度是影响细胞分化状态的因素之一,对于细胞密度在转化生长因子β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化中的作用尚缺乏深入研究。目的:观察细胞密度对转化生长因子β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的影响。方法:将HaCaT细胞分别以低密... 详细信息

背景:细胞密度是影响细胞分化状态的因素之一,对于细胞密度在转化生长因子β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化中的作用尚缺乏深入研究。目的:观察细胞密度对转化生长因子β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的影响。方法:将HaCaT细胞分别以低密度103/cm2和高密度105/cm2接种于六孔板,使用2μg/L的转化生长因子β1作用48h,观察细胞形态变化,应用Realtime PCR检测上皮型钙黏蛋白、紧密连接蛋白1和波形蛋白、神经型钙黏蛋白的转录水平,Western blot检测上皮型钙黏蛋白和波形蛋白表达水平。结果与结论:低密度组的HaCaT细胞在转化生长因子β1处理48h后细胞间隙变大,细胞形态由多角形变为长梭形,高密度组的细胞间隙变大,但形态变化不明显;Realtime PCR结果显示两组上皮细胞标志物上皮型钙黏蛋白和紧密连接蛋白1的转录均较对照组明显下调(P<0.05),但高密度组没有低密度组下调明显(P<0.05),间充质细胞标志物神经型钙黏蛋白和波形蛋白的转录均较对照组明显上调(P<0.05),而高密度组与低密度组间差异无显著性意义;Western blot进一步验证了上述上皮型钙黏蛋白和波形蛋白的变化。说明高接种密度抑制转化生长因子β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化。

关键词：组织构建组织构建与生物活性因子转化生长因子β1 HaCaT细胞生物活性因子细胞密度上皮间充质转化 973项目

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糖基化终末产物调节氧化应激影响脐血间充质干细胞增殖及普罗布考保护作用

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实用药物与临床 2013年第4期16卷 273-276页

作者：王哲王秋实刘晓玉张殿宝中国医科大学附属盛京医院输血科沈阳110004 中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳110001

目的探讨糖基化终末产物(AGEs)对人脐血来源的间充质干细胞(MSCs)增殖的影响及普罗布考的保护作用。方法体外分离培养脐血MSCs,应用流式细胞术对细胞表面抗原CD34、CD45、CD105进行表型鉴定。将MSCs分为白蛋白(BSA)对照组、糖基化修饰... 详细信息

目的探讨糖基化终末产物(AGEs)对人脐血来源的间充质干细胞(MSCs)增殖的影响及普罗布考的保护作用。方法体外分离培养脐血MSCs,应用流式细胞术对细胞表面抗原CD34、CD45、CD105进行表型鉴定。将MSCs分为白蛋白(BSA)对照组、糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)浓度效应组和普罗布考干预组。应用WST法检测各组细胞增殖情况。应用二氯醋酸荧光素探针和氧化应激检测试剂盒检测各组细胞活性氧(ROS)、超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量。结果流式细胞鉴定显示,脐血MSCs不表达CD34、CD45,表达CD105。与对照组相比,AGE-BSA组增殖能力下降,ROS含量增加,SOD和GSH-Px活性下降。与AGE-BSA组相比,普罗布考在10、20、50、100μmol/L范围内促进细胞增殖,降低细胞ROS含量,增加SOD和GSH-Px活性。结论 AGEs能够调节氧化应激,抑制脐血MSCs增殖。普罗布考的作用机制可能是通过抑制ROS生成和提高抗氧化酶活性来保护脐血MSCs增殖能力。

关键词：普罗布考糖基化终末产物脐血间充质干细胞细胞增殖氧化应激

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人羊膜间充质干细胞的超微结构观察

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基础医学与临床 2013年第11期33卷 1371-1376页

作者：庞希宁王竟施萍孟涛霍双枝张殿宝谭丽萍中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院肛肠外科辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院产科辽宁沈阳110001

目的观察羊膜间充质干细胞的超微结构。方法分离和培养人羊膜间充质干细胞(AMSC),进行传代培养、扩增,在显微镜下观察细胞形态。对传代培养至第3代的hAMSC进行流式检测和鉴定细胞表型,并在透射和扫描电子显微镜下进行超微结构的观察。... 详细信息

目的观察羊膜间充质干细胞的超微结构。方法分离和培养人羊膜间充质干细胞(AMSC),进行传代培养、扩增,在显微镜下观察细胞形态。对传代培养至第3代的hAMSC进行流式检测和鉴定细胞表型,并在透射和扫描电子显微镜下进行超微结构的观察。结果人AMSC呈梭形和多角形;高表达表面标志CD44,CD90,CD105和波形蛋白,不表达CD34和CD45。扫描电镜下可见细胞表面有大量小泡和微绒毛突起;透射电镜下见到胞核较大,呈圆形或椭圆形;胞质内线粒体、粗面内质网和高尔基体等细胞器数量丰富,有较多小泡。结论从羊膜中分离培养的细胞具有间充质干细胞的生物学特性的超微结构。丰富的粗面内质网和高尔基体,提示,AMSC具有产生大量分泌蛋白的功能,可能是羊膜间充质干细胞旁分泌作用的基础。

关键词：间充质干细胞羊膜超微结构

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