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HL-60分化细胞表面标志、活性及其对肺炎链球菌调理吞噬杀菌能力的动态变化

微生物学免疫学进展 2012年第5期40卷 10-14页

作者：王浩乔瑞洁史晓玲林纪胜谢贵林赵志强兰州生物制品研究所有限责任公司兰州730046 阿拉巴马大学伯明翰分校病理系伯明翰亚拉巴马美国35294

目的分析HL-60分化细胞的表面标志、活性及其对肺炎球菌调理吞噬杀菌能力的动态变化。方法以流式细胞仪连续监测分化1～7 d的HL-60细胞表面标志CD11b、CD35和CD71的表达以及活细胞、凋亡细胞和死亡细胞的比例,同时用09CS、QC2、B、C和F ... 详细信息

目的分析HL-60分化细胞的表面标志、活性及其对肺炎球菌调理吞噬杀菌能力的动态变化。方法以流式细胞仪连续监测分化1～7 d的HL-60细胞表面标志CD11b、CD35和CD71的表达以及活细胞、凋亡细胞和死亡细胞的比例,同时用09CS、QC2、B、C和F 5份质控血清以调理吞噬杀菌试验检测肺炎链球菌血清型6B、7F、14和23F的杀菌滴度。结果分化3～6 d的HL-60细胞表面标志、活细胞比例可达到实验室要求,5份质控血清的调理吞噬杀菌滴度稳定而且在质控范围之内。结论分化3～6 d的HL-60细胞可以用于评价肺炎链球菌疫苗免疫血清的调理吞噬杀菌试验,为调理吞噬杀菌试验的建立和标准化提供了依据。

关键词： HL-60细胞分化细胞表面标志肺炎链球菌调理吞噬杀菌试验

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表面分析法对直接印模及石膏模型扫描获得数字模型的一致性分析

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南京医科大学学报（自然科学版） 2016年第9期36卷 1132-1135页

作者：李青奕 Chung How Kau 南京医科大学口腔疾病研究江苏省重点实验室南京医科大学附属口腔医院正畸科江苏南京210029 阿拉巴马大学伯明翰分校牙学院正畸系美国阿拉巴马州伯明翰AL35294

目的：用表面分析方法对三维激光扫描仪分别扫描石膏模型和印模获得的数字模型的准确性和一致性进行比较。方法：对20个病例分别采用两种方法采集上颌和下颌数字模型。将同一病例的两种数字模型输入Rapid Form软件以最佳配对算法进行叠... 详细信息

目的：用表面分析方法对三维激光扫描仪分别扫描石膏模型和印模获得的数字模型的准确性和一致性进行比较。方法：对20个病例分别采用两种方法采集上颌和下颌数字模型。将同一病例的两种数字模型输入Rapid Form软件以最佳配对算法进行叠加,并采用表面分析方法对叠加结果加以分析。测量两模型上各点的线性距离,在容差设定为0.05、0.10、0.25、0.50、0.75、1.00 mm的情况下,确定相关模型之间的重叠百分率。此外,对6个预定的线性测量指标也进行测量和分析。结果：平均上颌模型的线性距离是0.097~0.191 mm,而下颌模型的平均线性距离是0.092~0.257 mm。在0.50 mm容差值水平,可以得到超过94%的表面相关性。组内相关系数（intraclass correlation coefficients,ICCs）统计表明两种方法获得的数字模型间有很好的一致性（0.972≤ICCs≤0.998）。结论：两种方法生成的数字模型在软件中有很好的重叠,经表面分析方法分析统计两者一致性较好,表明直接从印模获取数字模型是可行的。

关键词：表面分析数字模型石膏模型

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副血链球菌fap1-orf4基因座位编码的ORF3调控Fap1糖基化与成熟的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第5期29卷 460-465页

作者：李一荣黄翔吴辉胡丽华华中科技大学同济医学院附属协和医院检验系武汉430022 美国阿拉巴马大学伯明翰分校口腔医学院小儿牙科伯明翰35294 华中科技大学同济医学院附属协和医院耳鼻喉科

目的研究副血链球菌fap1-orf4基因座位编码的ORF3是否调控Fap1的糖基化与成熟，并探讨其对副血链球菌黏附功能的影响。方法采用基因置换技术构建副血链球菌arf3等位基因置换突变株，利用互补分析和Western blot检测副血链球菌Fap1的表... 详细信息

目的研究副血链球菌fap1-orf4基因座位编码的ORF3是否调控Fap1的糖基化与成熟，并探讨其对副血链球菌黏附功能的影响。方法采用基因置换技术构建副血链球菌arf3等位基因置换突变株，利用互补分析和Western blot检测副血链球菌Fap1的表达水平，并采用全唾液包被的羟磷灰石黏附试验检测副血链球菌的黏附能力。结果（1）副血链球菌orf3基因置换突变株VT1774未发生极化；（2）Western blot检测菌株VT1774显示成熟的Fap1（M，约220×10^3）被不成熟的Fap1（M，约470×10^3）所取代，互补分析显示VT1774的互补株VT1775能恢复表达成熟的Fap1；（3）菌株VT1774黏附能力显著下降。结论副血链球菌fap1—orf4基因座位编码的ORF3是Fap1糖基化与成熟所必需的，orf3基因置换导致Fap1成熟障碍与菌株黏附力显著下降。

关键词：副血链球菌糖基化 ORF3 黏附

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GST-Jab1融合蛋白表达载体的构建及表达纯化

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石河子大学学报（自然科学版） 2007年第5期25卷 585-588页

作者：黄瑾郑玉建鲁重元万梅新疆医科大学公共卫生学院阿拉巴马大学医学院病理系美国阿拉巴马州伯明翰35294

目的获取GST-Jab1蛋白,进一步研究Jab1的功能。方法以pMSCVneo-Jab1为模板,PCR扩增Jab1 DNA片断,EcoRI和XhoI双酶切后克隆至pGEX-5X-1表达载体,测序验证。将正确重组的pGEX-5X-1-Jab1表达质粒转化*** BL21,IPTG诱导后,超声破碎细胞,用GST琼脂糖珠对上述表达产物进行纯化,SDS-PAGE、Western Blot分析和鉴定诱导表达和纯化的GST-Jab1蛋白质。结果成功构建了pGEX-5X-1-Jab1重组表达载体,SDS-PAGE分析结果显示表达和纯化的蛋白质与融合蛋白GST-Jab1预期分子量一致,Western Blot鉴定结果证实纯化的蛋白质为GST-Jab1。结论成功地表达、纯化了GST-Jab1融合蛋白。

关键词： Jab1 GST融合蛋白原核表达蛋白质纯化

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b型流感嗜血杆菌疫苗及新型疫苗或联合疫苗的免疫原性评价方法

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中国生物制品学杂志 2015年第10期28卷 1097-1104页

作者：朱朗刘一非陆玮林纪胜高强蔡芳北京科兴生物制品有限公司北京100085 美国阿拉巴马大学伯明翰分校病理学系NIH呼吸道病原参考实验室美国阿拉巴马州伯明翰35294 北京科兴中维生物技术有限公司北京100085 北京市新型人用预防性疫苗工程技术研究中心北京100085

b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza type b,Hib)是全球范围内引起3个月到5岁龄儿童肺炎、脑膜炎和败血症等严重疾病的重要病原菌。接种疫苗是唯一有效的预防和控制Hib引起疾病的公共卫生措施,将Hib结合疫苗纳入儿童常规免疫程序的... 详细信息

b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza type b,Hib)是全球范围内引起3个月到5岁龄儿童肺炎、脑膜炎和败血症等严重疾病的重要病原菌。接种疫苗是唯一有效的预防和控制Hib引起疾病的公共卫生措施,将Hib结合疫苗纳入儿童常规免疫程序的国家,Hib发病率和携带率均明显降低。本文现对Hib疫苗种类、免疫学特性、临床效力以及Hib新型疫苗或联合疫苗的免疫原性评价方法作一综述。

关键词： b型流感嗜血杆菌疫苗免疫原性

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A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗对5～59岁健康人群的免疫原性再评价

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中华微生物学和免疫学杂志 2014年第3期34卷 228-234页

作者：赵志强乔瑞洁王欣茹王浩杨进权怡史晓玲刘佳林纪胜谢贵林兰州生物制品研究所有限责任公司 730046 广西壮族自治区疾病预防控制中心阿拉巴马大学伯明翰分校病理系中国生物技术股份有限公司北京100029

目的：对A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗在5～59岁健康人群中的免疫原性进行再评价。方法对2005年在广西河池市进行的临床试验中采集的血清，采用国际标准化的酶联免疫吸附试验（ELISA）和血清体外杀菌试验（SBA）方法检测血清中抗A群C群脑... 详细信息

目的：对A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗在5～59岁健康人群中的免疫原性进行再评价。方法对2005年在广西河池市进行的临床试验中采集的血清，采用国际标准化的酶联免疫吸附试验（ELISA）和血清体外杀菌试验（SBA）方法检测血清中抗A群C群脑膜炎球菌荚膜多糖的特异性IgG抗体含量和对A群C群脑膜炎球菌的抗体杀菌功能。结果免疫前、后，A群血清中抗荚膜多糖特异性IgG抗体平均几何浓度（GMC）分别为23．66μg/ml和78．83μg/ml （P＜0．05），C群分别为1．23μg/ml和51．25μg/ml （P＜0．05）；免疫前、后血清中抗荚膜多糖IgG抗体浓度≥2μg/ml的比例，A群分别为99％和100％（P＞0．05），C群为20％和99％（P＜0．05）；免疫后较免疫前抗荚膜多糖IgG抗体浓度≥4倍升高的比例，A群为34％和C群为100％。免疫前、后血清中针对脑膜炎球菌的杀菌抗体平均几何滴度（GMT），A群分别为1164和5530（P＜0．05），C群分别为4和6225（P＜0．05）；免疫前、后血清杀菌抗体GMT≥128的比例，A群分别为91％和99％（P＞0．05），C群分别为14％和96％（ P＜0．05）；免疫后较免疫前血清杀菌抗体滴度≥4倍升高的比例分别为A群53％和C群100％。免疫前、后血清中抗荚膜多糖IgG抗体浓度和杀菌抗体滴度之间的Pearson相关系数，A群分别为r＝0．15和r＝0．23，C群r＝-0．14和r＝0．58（P＜0．05）。结论本研究以标准化检测方法产生的具体免疫原性数据，证明A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗良好的免疫原性。

关键词： A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗免疫原性酶联免疫吸附试验血清杀菌试验 (SBA)

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不同来源HL60细胞用于调理吞噬杀菌试验的比较

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微生物学免疫学进展 2013年第6期41卷 1-6页

作者：王浩乔瑞洁刘佳王欣茹林纪胜谢贵林赵志强兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃省疫苗工程技术研究中心兰州730046 阿拉巴马大学伯明翰分校病理系

目的通过比较不同来源的HL60细胞分化后细胞的表面标志、活性及其对肺炎链球菌调理吞噬杀菌指数的动态变化，评价HL60细胞的来源对肺炎链球菌调理吞噬杀菌能力的影响。方法使用流式细胞仪连续监测来源于美国ATCC和中国科学院上海细胞研... 详细信息

目的通过比较不同来源的HL60细胞分化后细胞的表面标志、活性及其对肺炎链球菌调理吞噬杀菌指数的动态变化，评价HL60细胞的来源对肺炎链球菌调理吞噬杀菌能力的影响。方法使用流式细胞仪连续监测来源于美国ATCC和中国科学院上海细胞研究所的HL60细胞在分化后1～7d的表面标志CDllb、CD35和CD71的表达情况，并观察活细胞、凋亡细胞和死亡细胞的比例；同时使用两种不同来源的细胞检测09CS和B两份质控血清对肺炎链球菌血清型6B、7F、14和23F菌株的调理吞噬杀菌指数，同时观察09CS对13价结合疫苗血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F菌株的调理吞噬杀菌指数。结果两种不同来源HL60细胞分化3～6d细胞的表面标志、活细胞比例均可达到国际实验室的要求指标；两份质控血清对检测菌株的调理吞噬杀菌指数均能稳定于质控范围之内；两种细胞检测的09CS对13价肺炎链球菌结合疫苗血清型菌株的调理吞噬杀菌指数具可比性。结论两种来源不同的HL60细胞分化3-6d均能用于评价肺炎链球菌疫苗免疫血清的调理吞噬杀菌试验，这为调理吞噬杀菌试验及其标准化在国内的建立提供了便利。

关键词： HL60细胞分化细胞表面标志肺炎链球菌调理吞噬杀菌试验

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骨髓来源的抑制性细胞在慢性牙周炎中的作用研究

骨髓来源的抑制性细胞在慢性牙周炎中的作用研究

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第十三届全国免疫学学术大会

作者：宿凌恺段铸辉袁健张平邓淑丽浙江大学医学院附属口腔医院浙江大学医学院美国阿拉巴马大学伯明翰分校牙学院

研究背景:骨髓来源的抑制性细胞（MDSC）是一群具有免疫抑制能力且未分化成熟的骨髓起源的细胞,在肿瘤、炎症和慢性感染等病理状态下可在体内积聚并产生强烈的免疫抑制能力,最近还有研究认为MDSC可以具有分化成为破骨细胞的潜能。慢性... 详细信息

研究背景:骨髓来源的抑制性细胞（MDSC）是一群具有免疫抑制能力且未分化成熟的骨髓起源的细胞,在肿瘤、炎症和慢性感染等病理状态下可在体内积聚并产生强烈的免疫抑制能力,最近还有研究认为MDSC可以具有分化成为破骨细胞的潜能。慢性牙周炎是临床上最常见的口腔内的慢性感染性疾病,具有局部组织炎症反应和牙槽骨丧失两个典型的临床表现,这与MDSC的作用相一致。因此,本课题探讨在慢性牙周炎过程中,MDSC在抑制免疫反应发生和增强破骨细胞活性上是否发挥作用,以期为慢性牙周炎发病机制进行深入的理解。研究目的 :探讨小鼠慢性牙周炎条件下,体内MDSC的扩增情况;并探讨不同亚型的MDSC在发挥免疫抑制和诱导破骨细胞生成中的不同能力;对MDSC抑制T细胞增殖和破骨活性增强的机制进行初步探索方法 :C57BL/6小鼠经种植在小鼠腰背区的小型微渗透泵持续感染牙龈卟啉单胞菌2周,模拟慢性感染过程。对感染后的小鼠骨髓和脾脏细胞进行流式分析,筛选出CD11b、Ly6G和Ly6C阳性细胞,检测MDSC的扩增情况、各个亚群增殖情况。利用OVA特异性转基因小鼠OT-Ⅱ脾脏T细胞与筛选后的细胞共培养,经OVA刺激后,检测MDSC对T细胞的抑制能力。在含RANKL和M-CSF培养基中对筛选后细胞培养,TRAP染色对破骨细胞分化进行检测;利用Transwell检测MDSC与T细胞共培养后,T细胞的增殖、上清细胞因子水平的变化情况;利用诱导破骨细胞的小分子药物阻断剂加入破骨细胞培养基,观察破骨细胞生成情况的改变。结果 :慢性牙周炎过程中的MDSC显著扩增,三种亚型的MDSC中,Ly6GLy6C具有明显的免疫抑制作用和生成破骨细胞的作用,其他两种亚群无明显效果;失去细胞间接触,MDSC对T细胞的增殖无明显抑制作用;加入小分子阻断剂可使MDSC形成破骨细胞过程受到明显抑制。结论 :本研究证明了慢性牙周炎过程中,MDSC参与了抑制免疫反应发生和促进破骨细胞活性的过程,并对这两种作用的机制进行了初步探索。

关键词： MDSC 免疫抑制破骨细胞慢性牙周炎

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成人免疫ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗后血清中抗体水平的动态分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2014年第9期34卷 680-686页

作者：王欣茹赵志强王浩刘佳刘爱萍于旭博何彦林乔瑞洁林纪胜谢贵林甘肃省疫苗工程技术研究中心、国药中生兰州生物制品研究所有限责任公司 730046 美国阿拉巴马大学伯明翰分校病理学系呼吸道病原参考实验室、WHO肺炎链球菌参考实验室中国生物技术股份有限公司北京100029

目的：从血清抗体体外杀菌功能和IgG含量角度观察健康成人接种一剂ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗后不同时间体内抗体的动态水平，探讨抗体功能和含量的相关性和疫苗的保护期限。方法对20名健康成人接种一剂四价脑膜炎多糖疫苗，分别采集... 详细信息

目的：从血清抗体体外杀菌功能和IgG含量角度观察健康成人接种一剂ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗后不同时间体内抗体的动态水平，探讨抗体功能和含量的相关性和疫苗的保护期限。方法对20名健康成人接种一剂四价脑膜炎多糖疫苗，分别采集免疫前和免疫后不同时期的血清。采用血清杀菌试验（SBA）和标准定量酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中杀菌抗体滴度和抗荚膜多糖IgG抗体含量。结果成人免疫前血清中存在一定水平的抗A、C、Y和W135群荚膜多糖抗体，并且除C群外，血清中针对A、Y和W135群球菌的杀菌抗体滴度都较高。免疫15d后，各群荚膜多糖抗体的含量和血清杀菌抗体滴度都较免疫前有了明显的升高（P＜0．05），并且在30～160d维持在较高的水平；免疫后近3年时杀菌抗体滴度和IgG抗体浓度降至免疫前水平。血清杀菌抗体滴度和IgG抗体浓度之间相关关系较弱（r＜0．3，P＞0．05），但免疫前后不同时间的受试者的血清杀菌抗体几何均数滴度（GMTs）和IgG抗体几何均数浓度（GMCs）之间具有良好的相关关系（r＞0．7，P＜0．05）。结论受试者免疫前后不同时间血清杀菌抗体GMTs和IgG抗体GMCs，在评价疫苗效果时具有一致性。接种ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗有效期大约3年。

关键词： ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗血清杀菌实验(SBA) 酶联免疫吸附试验

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A、C、Y、W135群脑膜炎奈瑟菌血清抗体特异性体外杀菌试验方法的建立及其验证

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中国生物制品学杂志 2014年第11期27卷 1435-1442页

作者：乔瑞洁赵志强王浩王欣茹刘佳刘方蕾吴兵于旭博林纪胜李亚南叶强谢贵林兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃省疫苗工程技术研究中心甘肃兰州730046 美国阿拉巴马大学伯明翰分校病理系NIH细菌性呼吸道病原参考实验室伯明翰35294 中国食品药品检定研究院北京100050 中国生物技术集团公司北京100029

目的建立A、C、W135和Y群脑膜炎奈瑟菌血清抗体特异性体外杀菌试验方法 (serum bactericidal assay,SBA),并进行验证。方法对SBA中活菌收获时间、靶菌的制备、反应时间及补体进行优化,并确定质控血清Men10的质控范围。对优化后的方法进... 详细信息

目的建立A、C、W135和Y群脑膜炎奈瑟菌血清抗体特异性体外杀菌试验方法 (serum bactericidal assay,SBA),并进行验证。方法对SBA中活菌收获时间、靶菌的制备、反应时间及补体进行优化,并确定质控血清Men10的质控范围。对优化后的方法进行特异性、线性、精密度验证。结果确定A600值为0.5~0.8时为收获细菌最佳收获时间;冻存菌种可替代新鲜制备菌种作为靶菌;最佳杀菌反应时间为60 min;17830和84321N批补体均可用于试验。质控血清Men10的质控范围A群为521~4 689,C群为1 047~9 423,W135群为1 779~16 008,Y群为1 416~12 741。A、C、W135和Y同群多糖吸收血清样品后能够抑制≥80%的同群SBA滴度,而异群多糖则<20%;血清样品稀释倍数与对应的SBA滴度呈显著负相关,斜率在-0.90^-1.10之间,Pearson相关系数在0.90~1.0之间,P均<0.001;同一实验内相同样品检测结果 CV≤25%,实验间相同样品的95%的检测结果落在检测值中位数3倍(一个稀释度)的范围内,CV≤40%,不同实验室间相同样品的检测结果至少有70%落在美国CDC公布结果的3倍(一个稀释度)范围内。结论建立了标准化的具国际间可比性的A、C、W135和Y群脑膜炎奈瑟菌SBA,该方法特异性、线性和精密度良好。

关键词：血清抗体杀菌试验脑膜炎奈瑟菌

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