检索结果-内蒙古大学图书馆

现代生物医学进展 2013年第17期13卷 3230-3233页

作者：杨乐张健张璟刘文超刘军叶西安市中心医院肿瘤内科陕西西安710003 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室肿瘤生物学国家重点实验室陕西西安710032 第四军医大学西京医院肿瘤中心陕西西安710032 第四军医大学放射医学教研室陕西西安710032

目的:NDRG2是N-Myc downstream regulated gene家族的成员之一,与细胞增殖和分化相关。前期研究发现,抑制NDRG2表达可以提高宫颈癌Hela细胞对于顺铂的化疗敏感性,本研究采用RNA干扰技术抑制人宫颈癌Hela细胞中NDRG2基因的表达研究其对H... 详细信息

目的:NDRG2是N-Myc downstream regulated gene家族的成员之一,与细胞增殖和分化相关。前期研究发现,抑制NDRG2表达可以提高宫颈癌Hela细胞对于顺铂的化疗敏感性,本研究采用RNA干扰技术抑制人宫颈癌Hela细胞中NDRG2基因的表达研究其对Hela细胞紫杉醇化疗敏感性的影响。方法:利用化学合成的针对NDRG2特异性siRNA瞬时转染Hela细胞株,采用RT-PCR和Western Blot检测NDRG2 mRNA和蛋白表达情况,通过MTT法检测其与对照细胞在顺铂作用下的体外存活率差异。SPSS11.0统计包处理,采用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果:在mRNA和蛋白水平,化学合成的NDRG2特异性siRNA oligomer可使Hela细胞的NDRG2表达水平明显降低。在0.1、1、10、100、500、1000μg/mL紫杉醇浓度组,Negative-control和NDRG2siRNA细胞的相应细胞存活率分别为97.21±2.38、90.09±2.42、83.35±3.86、62.93±3.75、18.22±5.46、1.14±0.67和99.62±3.15、94.91±3.83、85.71±2.93、58.59±3.36、17.99±3.40、0.73±0.34,组间比较P值均大于0.05,差异无统计学意义。结论:抑制NDRG2表达不影响宫颈癌Hela细胞在紫杉醇作用下的细胞存活率,不能提高其对紫杉醇的化疗敏感性。进一步拓展了对该基因的功能认知。

关键词： NDRG2 RNA干涉化疗敏感性紫杉醇 Hela细胞

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重组泛素连接酶SH2-U—box／RING的构建与表达

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医学分子生物学杂志 2012年第1期9卷 6-10页

作者：茹懿李瑗春王秦豪钟代星李霞第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室肿瘤生物学国家重点实验室西安市710032

目的构建重组泛素连接酶SH2-U—box、SH2-RING，并克隆进入pFlag—CMV4真核表达载体，为研究靶向降解慢性粒细胞白血病（chronic myelocytic leukemia，CML）患者瘤细胞中过度活化的BCR／ABL，抑制肿瘤细胞的生长提供基础。方法设计引... 详细信息

目的构建重组泛素连接酶SH2-U—box、SH2-RING，并克隆进入pFlag—CMV4真核表达载体，为研究靶向降解慢性粒细胞白血病（chronic myelocytic leukemia，CML）患者瘤细胞中过度活化的BCR／ABL，抑制肿瘤细胞的生长提供基础。方法设计引物，扩增接头分子Grb2的SH2结构域以及E3泛素连接酶CHIP的U—box、Cb1的RING结构域，通过重组PCR，将SH2分别与U—box、RING进行融合，融合片段双酶切之后插入真核表达载体pFlag—CMV4，经过酶切鉴定及测序后，转染HEK293T细胞，Western印迹验证重组质粒的表达。结果PCR结果提示SH2-U—box条带大小888bp，SH2一RING大小为633bp，重组质粒酶切鉴定和测序结果均正确，转染后可见融合蛋白的表达。结论成功构建真核重组表达载体pFlag—CMV4-SH2-U—box和pFlag—CMV4-SH2-RING，转染HEK293T细胞后能够正确表达，为后续研究奠定了基础。

关键词：泛素慢性粒细胞白血病重组质粒

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曲古抑菌素A通过上调KLF4表达诱导人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡

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中国肿瘤生物治疗杂志 2012年第1期19卷 52-55页

作者：赵智凝周强白久旭闫博秦炜炜王涛贾林涛杨安钢第四军医大学基础医学部免疫学教研室肿瘤生物学国家重点实验室陕西西安710032 第四军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 第四军医大学口腔医院综合急诊科陕西西安710032 解放军第451医院临床实验室陕西西安710054

目的:观察组蛋白乙酰基转移酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的影响,并研究其与Krupell样因子4(Krupell-like factor 4,KLF4)的关系。方法:0、50、100、200、300、500ng/ml TSA作用于Ishikawa细胞24 h,或100 ng/ml TSA作用于Ishikawa细胞0、4、8、12、24、48 h,流式细胞术检测Ishikawa细胞凋亡情况,qRT-PCR检测Ishikawa细胞中KLF4 mRNA的表达情况;将KLF4真核表达载体pcDNA3-KLF4转染Ishikawa细胞,流式细胞术检测Ishikawa细胞凋亡情况。结果:100 ng/ml TSA作用于Ishikawa细胞24 h后,Ishikawa细胞的凋亡率显著高于对照组[(30.6±4.5)%vs(7.53±0.93)%,P<0.05];不同质量浓度TSA处理Ishikawa细胞24 h后或100 ng/ml TSA作用Ishikawa细胞不同时间后,KLF4 mRNA表达水平以剂量依赖和时间依赖方式明显增高(P<0.05);pcDNA3-KLF4转染后Ishikawa细胞凋亡率显著增加[(27.3±2.7)%vs(4.53±1.75)%,P<0.05]。结论:TSA能通过诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞中KLF4的表达,促进Ishikawa细胞发生凋亡。

关键词：曲古抑菌素A 子宫内膜癌 Ishikawa细胞 Krupell样因子4 凋亡

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MDA-7/IL-24真核表达载体的构建和重组腺病毒的制备及其对肝癌细胞生长抑制作用的研究

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第12期27卷 1277-1279页

作者：张翔孟艳玲王磊赵晶闫博陈锐张瑞杨安钢第四军医大学肿瘤生物学国家重点实验室陕西西安710032 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 第四军医大学免疫学教研室陕西西安710032

目的:构建含有MDA-7基因的的真核表达载体并制备重组腺病毒,转染/感染肝癌细胞后,观察其对细胞增殖的影响。方法:构建MDA-7的真核表达载体,将表达质粒转染肝癌细胞,利用平板克隆形成实验观察MDA-7分子对肿瘤细胞系克隆形成能力的影响。... 详细信息

目的:构建含有MDA-7基因的的真核表达载体并制备重组腺病毒,转染/感染肝癌细胞后,观察其对细胞增殖的影响。方法:构建MDA-7的真核表达载体,将表达质粒转染肝癌细胞,利用平板克隆形成实验观察MDA-7分子对肿瘤细胞系克隆形成能力的影响。利用Adeasy-1腺病毒重组系统构建、包装并扩增含有MDA-7基因的重组腺病毒。利用MTT实验检测Ad-MDA-7对肿瘤细胞增殖的影响。结果:成功构建了MDA-7真核表达载体,利用平板克隆形成实验证实其可抑制肝癌细胞的克隆形成能力。成功地构建并包装了含有MDA-7基因的重组腺病毒,利用MTT实验证明其可抑制肝癌细胞的增殖。结论:MDA-7对肝癌细胞的增殖具有显著的抑制作用,为进一步研究其在肝癌细胞中的功能提供了重要的实验依据。

关键词：黑色素瘤分化相关抗原-7 肝癌腺病毒细胞增殖

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小鼠α1,3-半乳糖糖基化修饰对人肝癌HuH7细胞生物学特性的影响

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现代肿瘤医学 2011年第5期19卷 832-836页

作者：喻凤喻召才刘文超茹懿杨静悦申兴勇刘新平第四军医大学西京医院肿瘤中心陕西西安710032 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室肿瘤生物学国家重点实验室陕西西安710032

目的:探讨利用小鼠α1,3半乳糖基转移酶基因进行肝癌基因治疗的可行性。方法:将pcDNA3.1-α1,3GT真核表达载体以脂质体介导法转染人肝癌细胞HuH7,经G418压力筛选出稳定表达的阳性克隆,经生长曲线法,平板克隆形成试验,流式细胞仪等试验... 详细信息

目的:探讨利用小鼠α1,3半乳糖基转移酶基因进行肝癌基因治疗的可行性。方法:将pcDNA3.1-α1,3GT真核表达载体以脂质体介导法转染人肝癌细胞HuH7,经G418压力筛选出稳定表达的阳性克隆,经生长曲线法,平板克隆形成试验,流式细胞仪等试验分析稳定表达株相关生物学特性变化。结果:转染有α1,3GT的HuH7经RT-PCR法检测到有α1,3GT的表达,免疫荧光镜检测其细胞表面有明显的Galα(1,3)Gal糖表位表达,转染细胞的增殖能力明显降低,同时促进细胞凋亡。结论:转染α1,3-半乳糖基转移酶基因可明显抑制人肝癌细胞HuH7的恶性生物学行为,具有潜在的临床应用价值。

关键词： α1,3-半乳糖基转移酶 Galα(1,3)Gal 基因肝癌

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转录因子JunB在肝癌细胞中的表达、定位及其转录作用研究

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第1期26卷 5-8页

作者：王磊张瑞孟艳玲余桂戎王涛赵晶杨安钢第四军医大学肿瘤生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 第四军医大学肿瘤生物学国家重点实验室免疫学教研室陕西西安710032

目的:构建表达转录因子JunB的真核表达质粒,观察外源JunB分子在细胞中的表达、亚细胞定位及其对下游分子的转录调控作用。方法:采用PCR方法从人源肝cDNA文库中扩增JunB基因片段,克隆入T载体进行测序鉴定。而后将测序正确的基因片段分别... 详细信息

目的:构建表达转录因子JunB的真核表达质粒,观察外源JunB分子在细胞中的表达、亚细胞定位及其对下游分子的转录调控作用。方法:采用PCR方法从人源肝cDNA文库中扩增JunB基因片段,克隆入T载体进行测序鉴定。而后将测序正确的基因片段分别亚克隆入pcDNA3.1(-)和pEGFP-C3真核表达载体中,获得重组载体pcDNA-JunB和pEGFP-JunB。采用脂质体瞬时转染法分别将pEGFP-JunB和pcDNA-JunB导入肝癌细胞HepG2中,用Westernblot法观察外源JunB在肝癌细胞中的表达;用荧光显微镜观察其在细胞内的定位;用双荧光素酶报告基因检测法观察JunB对下游靶分子VEGF的转录调控作用。结果:分别构建表达转录因子JunB和增强型绿色荧光蛋白融合JunB分子的重组表达质粒,并经KpnI/BamHI双酶切鉴定正确。将重组表达质粒转染HepG2细胞后,经免疫印迹法和荧光显微镜检测,可见外源导入的JunB分子在细胞中成功表达并特异性定位定位于细胞核内。荧光素酶报告系统检测显示:JunB对VEGF分子在转录水平具有明显的激活作用。结论:成功构建了增强型绿色荧光蛋白基因和转录因子JunB基因融合表达的重组质粒。在肝癌细胞中观察到外源瞬时表达的JunB定位于细胞核中,提示其可能发挥转录因子的活性。报告基因结果显示其对肿瘤血管生成密切相关的分子VEGF发挥转录激活的作用,提示JunB分子有可能成为抑制肝癌血管生成的新靶点。

关键词： JunB 转录调控肝癌细胞 VEGF

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荧光内参在校正Caspase-3/7活性检测偏差中的应用

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医学分子生物学杂志 2010年第1期7卷 6-10页

作者：晋亮杨国栋傅海燕卢晓昭韦梦影于芳卢兹凡第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室国家肿瘤生物学重点实验室陕西西安 710032

目的改进Caspase-3/7活性检测方法.方法在顺铂诱导的HeLa细胞凋亡模型中,分别利用传统的和改良的实验方法检测Caspase-3/7的活性变化,并与Western印迹实验结果进行方法学比较.结果改良的实验方法显示不同剂量顺铂诱导下,HeLa细胞Casp... 详细信息

目的改进Caspase-3/7活性检测方法.方法在顺铂诱导的HeLa细胞凋亡模型中,分别利用传统的和改良的实验方法检测Caspase-3/7的活性变化,并与Western印迹实验结果进行方法学比较.结果改良的实验方法显示不同剂量顺铂诱导下,HeLa细胞Caspase-3/7活性有剂量依赖性增高,与Western印迹实验结果相一致,但传统实验方法显示HeLa细胞Caspase-3/7活性呈现先增高后降低的趋势.结论由于参测细胞数不同,导致这种Caspase-3/7活性检测方法不能真实反映细胞凋亡程度.本研究成功建立了一种新的改良型Caspase-3/7活性检测方式,这种检测方法可以排除不同凋亡诱导方式诱导细胞凋亡时所产生的因参测细胞数不同所造成的Caspase-3/7活性检测的误差.

关键词：凋亡 Caspase-3/7 内参顺铂 PARP

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胃癌下调新基因GDDR表达特性及功能研究

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科学技术与工程 2009年第7期9卷 1696-1701页

作者：褚光辉杜建军杨国栋窦科峰卢兹凡第四军医大学西京消化病医院西安710032 第四军医大学第四军医大学西京消化病医院肿瘤生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学教研室西安710032 第四军医大学西京医院肝胆外科西安710032

明确胃癌下调新基因GDDR的亚细胞定位、分泌特性及生物学功能研究。与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达明确GD-DR表达产物亚细胞定位;GES细胞系转染上清检测分泌蛋白表达;胃癌7901细胞系稳定转染GDDR,观察其生物学作用。发现GDDR表达产物定位... 详细信息

明确胃癌下调新基因GDDR的亚细胞定位、分泌特性及生物学功能研究。与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达明确GD-DR表达产物亚细胞定位;GES细胞系转染上清检测分泌蛋白表达;胃癌7901细胞系稳定转染GDDR,观察其生物学作用。发现GDDR表达产物定位于胞浆,是一分泌蛋白。四甲基偶氮唑盐比色法(MTTassay)检测描绘生长曲线及流式细胞计数仪(FACS)细胞周期检测表明,GDDR对胃癌7901细胞增值显著抑制(96h(1.233±0.017)vs(0.618±0.015),t=2.447,P=2.63×10-9),并且可以引起细胞的周期阻滞。说明胃癌下调新基因GDDR产物为胞浆分布,具有分泌特性,能通过阻滞细胞周期显著抑制胃癌细胞生长,可能为新的候选抑癌基因。

关键词：胃肿瘤分泌蛋白细胞周期功能研究

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运用组织芯片技术检测ndrg2、c-myc在人甲状腺肿瘤中的表达及分析

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现代生物医学进展 2009年第24期9卷 4605-4608页

作者：赵华栋巩丽张健李燕廖博药立波第四军医大学唐都医院普外科陕西西安710038 第四军医大学唐都医院病理科陕西西安710038 第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室国家肿瘤生物学重点实验室陕西西安710032 第四军医大学唐都医院骨科陕西西安710038

目的:检测ndrg2、c-myc在人甲状腺肿瘤中的表达,探讨ndrg2、c-myc在人甲状腺肿瘤中的表达模式。方法:运用甲状腺组织芯片,通过免疫组化染色,检测ndrg2、c-myc在人甲状腺肿瘤中的表达,并进行量化评分,分析ndrg2表达与c-myc表达两者之间... 详细信息

目的:检测ndrg2、c-myc在人甲状腺肿瘤中的表达,探讨ndrg2、c-myc在人甲状腺肿瘤中的表达模式。方法:运用甲状腺组织芯片,通过免疫组化染色,检测ndrg2、c-myc在人甲状腺肿瘤中的表达,并进行量化评分,分析ndrg2表达与c-myc表达两者之间可能存在的负调控关系。结果:ndrg2在甲状腺癌组织中呈阴性表达,在甲状腺腺瘤组织中呈弱表达或不表达趋势,在正常甲状腺组织中高表达。而c-myc在甲状腺癌组织中呈高表达,在甲状腺腺瘤组织中不表达或仅呈部分弱表达,在正常甲状腺组织中呈阴性表达。统计结果分析显示,ndrg2与c-myc在人甲状腺组织中的表达呈负相关。结论:ndrg2、c-myc在人甲状腺肿瘤中的表达呈负相关,由此推测NDRG2可能受到C-MYC的负调控。

关键词：甲状腺肿瘤 ndrg2 c-myc 组织芯片

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Restin基因启动子的克隆及其在HeLa细胞中的转录活性

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第四军医大学学报 2006年第1期27卷 46-48页

作者：王瑞华傅海燕杨国栋路凡赵忠良第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室国家肿瘤生物学重点实验室陕西西安710033

目的:扩增细胞静息因子(restin)基因启动子并构建该启动子的荧光报告系统,探讨其对全反式维甲酸(all-transretinoicacid,ATRA)刺激的反应.方法:①对restin基因上游约2000bp基因组序列进行计算机生物信息学分析.②利用PCR技术扩增restin... 详细信息

目的:扩增细胞静息因子(restin)基因启动子并构建该启动子的荧光报告系统,探讨其对全反式维甲酸(all-transretinoicacid,ATRA)刺激的反应.方法:①对restin基因上游约2000bp基因组序列进行计算机生物信息学分析.②利用PCR技术扩增restin基因上游序列,将其克隆入pG5-luc中,插入荧光素酶报告基因上游,取代5个GAL-4结合位点及腺病毒启动子,构建Rp-luc质粒.③将构建的质粒转染入He-La细胞,ATRA诱导检测该质粒中荧光素酶的表达.结果:酶切及测序结果均证实成功克隆了restin基因上游序列,已将该序列插入到荧光素酶基因的上游;ATRA诱导转入HeLa细胞中的真核表达载体Rp-luc,荧光素酶表达明显增加.结论:成功构建了含有restin基因启动子序列的荧光报告系统,为进一步研究restin基因功能及其转录调控奠定了基础.

关键词： restin 转录调控启动子全反式维甲酸

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