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解剖学报 2022年第2期53卷 160-165页

作者：张佳罗潇潇郭忻然吴锋郑兰荣皖南医学院发育生物学研究室安徽芜湖241002 皖南医学院细胞电生理学研究室安徽芜湖241002 皖南医学院人体解剖学教研室安徽芜湖241002 皖南医学院病理解剖学教研室安徽芜湖241002

目的观察叉头框蛋白N2(FOXN2)与叉头框蛋白F2(FOXF2)在正常脑组织和各级别胶质瘤中的表达情况,探讨两者与胶质瘤级别的关系,推测其在胶质瘤发生发展中的作用,为胶质瘤的治疗寻找可能的药物治疗靶点。方法从皖南医学院弋矶山医院病理... 详细信息

目的观察叉头框蛋白N2(FOXN2)与叉头框蛋白F2(FOXF2)在正常脑组织和各级别胶质瘤中的表达情况,探讨两者与胶质瘤级别的关系,推测其在胶质瘤发生发展中的作用,为胶质瘤的治疗寻找可能的药物治疗靶点。方法从皖南医学院弋矶山医院病理科调取36例2016年1月~2020年12月脑胶质瘤患者手术切除的胶质瘤组织标本,双盲法进行免疫组织化学和免疫荧光染色检测FOXN2、FOXF2的表达情况;采用SPSS 18.0统计学软件进行分析,以P<0.05为差异有统计学意义。再对2020年1月~2021年1月皖南医学院弋矶山医院神经外科手术中获取的新鲜正常脑组织、低级别胶质瘤组织和高级别胶质瘤组织进行Western blotting、Real-time PCR实验(正常脑组织均来自外伤手术患者)。结果免疫组织化学与免疫荧光结果表明,胶质瘤级别越高FOXN2与FOXF2的表达越低(P<0.05);Western blotting实验显示,正常脑组织及低级别胶质瘤中FOXN2和FOXF2表达都高于高级别胶质瘤组(P<0.05);Real-time PCR结果显示,正常脑组织中FOXN2和FOXF2的表达同样高于高级别胶质瘤组(P<0.01)。结论 FOXN2和FOXF2在正常脑组织中有表达,在胶质瘤中低表达且呈级别依赖性,提示FOXN2和FOXF2与胶质瘤的级别及不良预后有关,增强FOXN2和FOXF2的表达有望成为胶质瘤治疗的靶点。

关键词：叉头框蛋白N2 叉头框蛋白F2 胶质瘤免疫组织化学免疫荧光免疫印迹法实时定量聚合酶链反应人

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AK-7对脑缺血大鼠杏仁核NLRP3蛋白表达的影响

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齐齐哈尔医学院学报 2022年第20期43卷 1906-1911页

作者：罗潇潇郭忻然汪琴琴赵健缪化春丁见郑兰荣皖南医学院发育生物学研究室、皖南医学院细胞电生理学研究室安徽芜湖241000 皖南医学院人体解剖学教研室安徽芜湖241000

目的研究SIRT2(沉默信息调节因子2相关酶2)的特异性抑制剂AK-7对脑缺血大鼠杏仁核NLRP3(核苷酸结合寡聚域样受体蛋白3)蛋白表达的影响,初步探讨其作用机制。方法将36只成年雄性SPF级SD大鼠,适应性饲养1周后,随机分为假手术组、模型组和... 详细信息

目的研究SIRT2(沉默信息调节因子2相关酶2)的特异性抑制剂AK-7对脑缺血大鼠杏仁核NLRP3(核苷酸结合寡聚域样受体蛋白3)蛋白表达的影响,初步探讨其作用机制。方法将36只成年雄性SPF级SD大鼠,适应性饲养1周后,随机分为假手术组、模型组和抑制剂组共三组,每组各12只。模型组给予栓塞大鼠右侧大脑中动脉法制造局灶性脑缺血的模型。造模成功后,抑制剂组大鼠分别在造模前30分钟、造模后6小时、24小时腹腔注射AK-7(20 mg/kg),假手术组及模型组大鼠在上述时间点腹腔注射同等体积的生理盐水。采用Longa评分于造模后第1、3、7天评估各组大鼠的神经功能缺损情况,通过尼氏染色法检测各组大鼠杏仁核内神经元形态变化;免疫组织化学方法和Western bolt法检测各组大鼠杏仁核SIRT2、NLRP3表达情况;ELISA法检测各组大鼠动脉血液中炎症因子IL-1β、IL-18的含量。结果与假手术组相比较,模型组与抑制剂组大鼠神经功能评分均显著增加(P<0.0001);尼氏染色结果显示模型组杏仁核内神经元细胞明显皱缩,细胞排列不规则,抑制剂组神经元形态与假手术组趋近;免疫组织化学染色和Western bolt结果显示模型组杏仁核SIRT2、NLRP3蛋白表达显著增加(P<0.05);ELISA法显示炎性因子IL-1β、IL-18含量显著增加。与模型组相比较,抑制剂组在脑缺血第7天时神经功能评分显著降低(P<0.01),免疫组织化学染色和Western bolt结果显示杏仁核SIRT2、NLRP3蛋白表达显著降低(P<0.05);ELISA法显示炎性因子IL-1β、IL-18含量显著降低。结论抑制SIRT2表达可对短期脑缺血大鼠起到神经保护作用,其机制可能与抑制NLRP3及其下游炎症因子IL-1β、IL-18的表达有关。

关键词：脑缺血杏仁核 SIRT2 NLRP3 AK-7

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白藜芦醇甙增强大鼠心室肌细胞内向整流钾通道电流(英文)

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生理学报 2013年第3期65卷 285-292页

作者：魏燕周京京杨晶张娇张利萍张翼河北医科大学生理学教研室石家庄050017 泸州医学院心血管病研究所电生理研究室泸州646000 河北省医学生物技术重点实验室石家庄050017

本研究旨在应用全细胞膜片钳技术观察白藜芦醇甙(polydatin)对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾通道电流(Ito)、稳态外向钾通道电流(Iss)和内向整流钾通道电流(IK1)的影响。结果显示:(1)白藜芦醇甙(10μmol/L以上浓度)可通过非浓度依赖性方式... 详细信息

本研究旨在应用全细胞膜片钳技术观察白藜芦醇甙(polydatin)对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾通道电流(Ito)、稳态外向钾通道电流(Iss)和内向整流钾通道电流(IK1)的影响。结果显示:(1)白藜芦醇甙(10μmol/L以上浓度)可通过非浓度依赖性方式增加心室肌细胞IK1。(2)白藜芦醇甙对心室肌细胞Ito无影响,对Ito的激活、失活和失活后的恢复动力学亦无影响。(3)白藜芦醇甙对心室肌细胞Iss无明显影响。以上结果提示,白藜芦醇甙对大鼠心室肌细胞IK1具有激活作用,可增加IK1,但对Ito和Iss无明显影响;白藜芦醇甙对IK1的作用可能是其抗心律失常作用的离子机制之一。

关键词：白藜芦醇甙瞬时外向钾通道稳态外向钾通道内向整流钾通道心肌细胞大鼠

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PKC在UTP调节猪冠状动脉平滑肌细胞BK_(Ca)通道中的作用

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泸州医学院学报 2013年第3期36卷 207-210页

作者：张维维曾晓荣杨艳刘智飞李鹏云唐云安泸州医学院心肌电生理学研究室四川泸州646000 四川中医药高等专科学校生理教研室

目的:研究UTP对急性酶分离的猪冠状动脉平滑肌细胞上BKCa通道的作用,探讨PKC在其过程中的作用机制。方法:应用cell-attached技术记录急性酶分离的猪冠状动脉平滑肌细胞上BKCa电流。用pCLAMP10.0软件系统进行数据采集及分析。结果:在cell... 详细信息

目的:研究UTP对急性酶分离的猪冠状动脉平滑肌细胞上BKCa通道的作用,探讨PKC在其过程中的作用机制。方法:应用cell-attached技术记录急性酶分离的猪冠状动脉平滑肌细胞上BKCa电流。用pCLAMP10.0软件系统进行数据采集及分析。结果:在cell-attached膜片上,80μMUTP可明显激活BKCa通道(P<0.05,n=21)。PLC抑制剂U73122可抑制UTP对BKCa的激活作用(P<0.05,n=5)。PKC激动剂PMA(10nM),可使BKCa通道开放概率明显降低(P<0.05,n=9)。UTP(80μM)预处理细胞之后,PKC特异性抑制剂Bis-Ⅰ(1μM),可使BKCa通道开放概率进一步增加(P<0.05,n=9)。结论:在cell-attached膜片上,UTP经由PLC信使转导通路激活猪冠脉平滑肌细胞BKCa通道;PKC对此过程具有干预作用。

关键词：大电导钙激活钾通道三磷酸尿苷蛋白激酶C 猪冠状动脉平滑肌细胞 cell-attached膜片钳技术

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赶黄草对体外诱导的酒精性脂肪肝细胞的影响

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泸州医学院学报 2013年第1期36卷 35-38页

作者：袁叶飞胡祥宇欧贤红泸州医学院药物化学教研室四川泸州646000 泸州医学院心肌电生理学研究室四川泸州646000

目的:建立酒精性脂肪肝细胞模型,探讨赶黄草体外对酒精性脂肪肝细胞的影响。方法:采用0.5%乙醇和0.01%的硫酸亚铁(FeSO4)加入L-02正常人肝细胞培养液,建立酒精性脂肪肝细胞模型。采用CCK-8方法筛选赶黄草的最佳作用浓度,利用酒精性脂肪... 详细信息

目的:建立酒精性脂肪肝细胞模型,探讨赶黄草体外对酒精性脂肪肝细胞的影响。方法:采用0.5%乙醇和0.01%的硫酸亚铁(FeSO4)加入L-02正常人肝细胞培养液,建立酒精性脂肪肝细胞模型。采用CCK-8方法筛选赶黄草的最佳作用浓度,利用酒精性脂肪肝细胞模型评价赶黄草体外对酒精性脂肪肝细胞的作用。结果:用含0.5%的乙醇和0.01%的FeSO4的RPMI-1640培养液诱导L-02正常人肝细胞,诱导至第3代,即可使肝细胞产生明显甘油三酯堆积。CCK-8方法筛选赶黄草的最佳作用浓度为40μ***-1,40μ***-1的赶黄草可显著降低酒精性脂肪肝细胞的甘油三酯。结论:采用0.5%乙醇和0.01%硫酸亚铁混合物体外诱导L-02正常人肝细胞,可短时间内建立酒精性脂肪肝细胞模型,赶黄草有减轻体外诱导的酒精性脂肪肝细胞脂肪变的作用。

关键词：酒精性脂肪肝细胞模型赶黄草

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运用新的体视学方法研究老年大鼠胼胝体有髓神经纤维中的分区方式

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泸州医学院学报 2013年第4期36卷 337-339页

作者：兰欢郭侃赵宏贤王巧稚徐瑲泸州医学院心肌电生理学研究所四川泸州646000 泸州医学院神经生物学研究室四川泸州646000 泸州医学院组织胚胎学教研室四川泸州646000

目的:基于新的体视学方法的基本要求,建立胼胝体有髓神经纤维定量研究的分区方法。方法:大鼠大脑连续组织切片后,基于改良Witelson分区的方法,定义胼胝体的分区。结果:研究发现老年大鼠胼胝体有髓神经纤维额区体积较年轻大鼠显著下降28.... 详细信息

目的:基于新的体视学方法的基本要求,建立胼胝体有髓神经纤维定量研究的分区方法。方法:大鼠大脑连续组织切片后,基于改良Witelson分区的方法,定义胼胝体的分区。结果:研究发现老年大鼠胼胝体有髓神经纤维额区体积较年轻大鼠显著下降28.6%,有髓神经纤维总体积显著下降17.4%。结论:采用这一建立在新的体视学方法要求之上的胼胝体纤维分区方式,能准确地从微观上解释不同胼胝体区域内神经纤维的直径、数量等信息以及相关变化与功能变化之间的联系。

关键词：胼胝体体视学分区有髓神经纤维

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UTP对猪冠状动脉平滑肌细胞BK_(Ca)通道作用机制的研究

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四川生理科学杂志 2012年第3期34卷 97-100页

作者：张维维曾晓荣四川中医药高等专科学校生理教研室四川绵阳621000 泸州医学院心肌电生理学研究室四川泸州646000

目的:利用膜片钳技术,研究UTP对急性酶分离的猪冠状动脉平滑肌细胞上BKCa通道的作用,探讨生理条件下UTP调节BKCa通道的机制。方法:应用Cell-attached技术记录急性酶分离的猪冠状动脉平滑肌细胞上BKCa电流。用pCLAMP9.0软件系统进行数据... 详细信息

目的:利用膜片钳技术,研究UTP对急性酶分离的猪冠状动脉平滑肌细胞上BKCa通道的作用,探讨生理条件下UTP调节BKCa通道的机制。方法:应用Cell-attached技术记录急性酶分离的猪冠状动脉平滑肌细胞上BKCa电流。用pCLAMP9.0软件系统进行数据采集及分析。结果:在Cell-attached膜片上,80μM UTP可明显激活BKCa通道(P<0.05,n=21)。PLC抑制剂U73122可抑制UTP对BKCa的激活作用(P<0.05,n=5)。PKC激动剂PMA(10nM),可使BKCa通道开放概率明显降低(P<0.05,n=9)。UTP(80μM)预处理细胞之后,IP3抑制剂2APB(80μM),可使BKCa通道开放受抑(P<0.05,n=6)。结论:在Cell-attached膜片上,UTP能激活猪冠脉平滑肌细胞BKCa通道。PLC信使转导通路中的IP3介导的胞内Ca2+释放是UTP激活BKCa通道的重要途径。

关键词： BKCa通道 UTP IP3 猪冠状动脉平滑肌细胞 Cell-attached膜片钳技术

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急性缺氧增强豚鼠小脑前下动脉平滑肌细胞外向电流并抑制缝隙连接

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生理学报 2011年第6期63卷 533-539页

作者：李新芝司军强张忠双赵磊李丽马克涛石河子大学医学院新疆地方与民族高发病教育部重点实验室电生理研究室石河子832002 石河子大学医学院生理学教研室石河子832002

本文旨在研究急性缺氧对微动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)膜电生理特性的影响。分离出豚鼠小脑前下动脉(anterior inferior cerebellar artery,AICA)段,胶原酶A消化后用显微镊去除微动脉外层结缔组织,然后给... 详细信息

本文旨在研究急性缺氧对微动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)膜电生理特性的影响。分离出豚鼠小脑前下动脉(anterior inferior cerebellar artery,AICA)段,胶原酶A消化后用显微镊去除微动脉外层结缔组织,然后给予无糖低氧的灌流液,同时应用全细胞膜片钳技术观察VSMCs膜电流的变化。结果显示:(1)当钳制电压在40mV时,急性缺氧引起一个反应幅度为(36.4±9.2)pA的外向电流,细胞静息膜电位从(33.2±1.9)mV超极化到(38.4±1.5)mV。急性缺氧电压依赖性地增强VSMCs外向电流,主要增强0～+40mV电压区间的激活电流幅度,+40mV激活电流幅度从(650±113)pA增加到(1900±197)pA。背景灌流K+通道阻断剂tetraethylammonium(TEA,1mmol/L)后,急性缺氧对VSMCs外向电流的增强作用显著减小。(2)急性缺氧使AICA上VSMCs的细胞膜电阻(R input)从(234±63)MΩ增加到(1211±201)MΩ,细胞膜电容(C input)从(279.3±83.2)pF减少至(25.4±1.9)pF。联合应用30μmol/L非选择性缝隙连接阻断剂18β-甘草次酸(18β-glycyrrhetinic acid,18βGA)和10mmol/L TEA后,急性缺氧对VSMCs外向电流的影响基本消失。以上结果提示,豚鼠AICA急性缺氧可能通过激活VSMCs大电导钙激活钾通道(BK Ca)引起K+外向电流,舒张血管,从而保障脑部血流供应;同时通过抑制细胞间缝隙连接使急性缺氧造成的伤害限制在局部。

关键词：急性缺氧小脑前下动脉缝隙连接大电导钙激活钾通道

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18β-甘草次酸抑制微动脉平滑肌细胞外向电流

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生理学报 2011年第6期63卷 549-554页

作者：马克涛李新芝李丽张忠双石文艳司军强石河子大学医学院新疆地方与民族高发病教育部重点实验室电生理研究室石河子832002 石河子大学医学院生理学教研室石河子832002

本文旨在观察18β-甘草次酸(18β-glycyrrhetinic acid,18βGA)对微动脉平滑肌细胞膜电流的影响。分离出豚鼠小脑前下动脉(anterior inferior cerebellar artery,AICA)和肠系膜动脉(mesenteric artery,MA)后,用酶消化法制备单个血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs),应用全细胞膜片钳技术记录平滑肌细胞外向电流的变化。结果显示:(1)1mmol/L4氨基吡啶(4-aminopyridine,4-AP)和1mmol/L tetraethylammonium(TEA)都可以部分抑制微动脉平滑肌细胞的外向电流。(2)18βGA电压和浓度依赖性地抑制微动脉平滑肌细胞外向电流。18βGA主要抑制0～+40mV电压区间的激活电流,其中对+40mV激活电流的抑制作用最强。10、30和100μmol/L18βGA对AICA平滑肌细胞外向电流(+40mV)的抑制率分别为(25.3±7.1)%、(43.1±10.4)%和(68.4±3.9)%,对MA平滑肌细胞外向电流(+40mV)的抑制率分别为(13.2±5.6)%、(34.2±4.0)%和(59.3±7.3%),相同钳制电压下,相同浓度的18βGA对两种微动脉平滑肌外向电流的抑制程度之间无明显差异。(3)预灌流10mmol/L TEA能显著逆转18βGA对微动脉平滑肌细胞外向电流的抑制作用。上述结果提示豚鼠AICA和MA微动脉平滑肌细胞外向电流由电压依赖的K+通道(K V)和大电导钙激活K+通道(BK Ca)介导,而18βGA能够浓度和电压依赖性地抑制该外向电流。

关键词：微动脉平滑肌细胞 18β-甘草次酸大电导钙激活钾通道膜片钳

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微动脉段标本的全细胞膜片钳技术

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山东大学学报（医学版） 2011年第3期49卷 33-36页

作者：李新芝司军强李丽赵磊马克涛石河子大学医学院新疆地方与民族高发病教育部重点实验室电生理研究室新疆石河子832002 石河子大学医学院生理学教研室新疆石河子832002

目的介绍一种在微动脉段标本上进行全细胞膜片钳记录的技术。方法在离体豚鼠耳蜗螺旋动脉(SMA)、小脑前下动脉(AICA)和肠系膜动脉(MA)分支微动脉(直径小于100μm)的原位平滑肌细胞上,应用全细胞膜片钳技术。结果微动脉段上平滑肌细胞静... 详细信息

目的介绍一种在微动脉段标本上进行全细胞膜片钳记录的技术。方法在离体豚鼠耳蜗螺旋动脉(SMA)、小脑前下动脉(AICA)和肠系膜动脉(MA)分支微动脉(直径小于100μm)的原位平滑肌细胞上,应用全细胞膜片钳技术。结果微动脉段上平滑肌细胞静息膜电位平均值在-25～-37 mV之间,细胞膜电容(Cinput)平均值在70～250 pF之间,均高于消化分离的单个平滑肌细胞。应用缝隙连接阻断剂DPBA(100μmol/L)后,SMA、AICA和MA微动脉段上平滑肌细胞膜电阻(Rinput)分别为(4 937±741)MΩ(n=12)、(3 703±367)MΩ(n=8)和(3336±479)MΩ(n=12),细胞Cinput分别为(4.5±0.2)pF(n=9)、(7.1±0.7)pF(n=5)和(9.6±0.9)pF(n=7),与单个平滑肌细胞相似,表明微动脉细胞间存在着丰富的缝隙连接。结论微动脉段标本全细胞膜片钳记录技术适用于微动脉细胞间缝隙连接、神经递质和药物对微动脉作用机制的研究。

关键词：微动脉缝隙连接膜片钳平滑肌细胞

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