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2N型血管性血友病家系的基因诊断和遗传连锁分析

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中华血液学杂志 2000年第2期21卷 102-103页

作者：王迎春顾建明万海英张敬宇程大卫张威阮长耿苏州医学院附属第一医院江苏省血液研究所血栓与止血研究室215006

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2A型血管性血友病vWF的基因突变

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中华医学遗传学杂志 2000年第4期17卷 229-232页

作者：王迎春张敬宇张威程大卫万海英阮长耿苏州医学院附属第一医院江苏省血液研究所血栓与止血研究室 215006

目的　研究中国人 2 A型血管性血友病 (von Willebrand disease,v WD)的分子病理机理 ,了解 v WD的临床表现型和基因型的相关性。方法　对 12 6例先天性出血性疾病患者进行了出血时间、v WF∶Ag、F ∶CAg、瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集... 详细信息

目的　研究中国人 2 A型血管性血友病 (von Willebrand disease,v WD)的分子病理机理 ,了解 v WD的临床表现型和基因型的相关性。方法　对 12 6例先天性出血性疾病患者进行了出血时间、v WF∶Ag、F ∶CAg、瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集率的检测和 v WF的血浆多聚物分析。对 2 A型血管性血友病的患者用多聚酶链反应、变性梯度凝胶电泳 ,结合测序的方法进行了基因突变的研究。结果　确诊 2 A型血管性血友病 14例 ,在 3个家系发现了 4例 v WF的基因突变 ,它们是 Arg6 11His、Ala737Glu、Arg834 Trp,其中 Ala737Glu是 1例新的基因突变。结论　 2 A型 v WD的基因突变存在高度的异质性 ,对其分子病理机理的研究有助于了解 v WF的基因结构和功能的关系。

关键词： vWF基因 2A型血管性血友病 PCR 基因突变

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ELISA法vWF-FⅧ结合试验的建立及其临床应用

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中华血液学杂志 2000年第2期21卷 105-106页

作者：张敬宇王迎春张威阮长耿苏州医学院附属第一医院江苏省血液研究所血栓与止血研究室215006

目的观察复方樟柳碱注射液对原发性和继发性缺血性视神经视网膜脉络膜病变的疗效和安全性.方法采用多中心、随机对照方法,将原发性和继发性缺血性视神经视网膜脉络膜病变患者(分别为217例和186例)403例随机分为对照组(112例)、治疗组(... 详细信息

目的观察复方樟柳碱注射液对原发性和继发性缺血性视神经视网膜脉络膜病变的疗效和安全性.方法采用多中心、随机对照方法,将原发性和继发性缺血性视神经视网膜脉络膜病变患者(分别为217例和186例)403例随机分为对照组(112例)、治疗组(112例)和开放组(179例),对照组采用妥拉苏林注射液25 mg,治疗组及开放组采用复方樟柳碱注射液2 ml,均作患眼侧颞浅动脉旁皮下注射,每日1次,疗程为21 d.以视力、视野、眼底改变为疗效判断指标,以眼压、血压、心电图、肝肾功能及血、尿常规等检测作为安全性的判断指???????????????????

关键词：血友病 vWD 诊断 ELISA 临床应用

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一种新型重组抗体导向溶栓剂的体外溶栓研究

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中国免疫学杂志 2000年第4期16卷 187-189,202页

作者：万海英刘征辉顾津明朱明清李佩霞阮长耿苏州医学院附属第一医院江苏省血液研究所血栓与止血研究室苏州215006 苏州医学院重点实验室苏州215007

目的 :探讨一种新型重组融合基因抗体导向溶栓剂SZ5 1Hu scuPA的体外溶栓效力。方法 :通过转瓶扩大生产获得的大量基因重组融合蛋白SZ5 1Hu scuPA ,通过抗体竞争结合实验确定融合蛋白的抗体亲和力 ;进而与尿激酶进行不同浓度血小板血浆... 详细信息

目的 :探讨一种新型重组融合基因抗体导向溶栓剂SZ5 1Hu scuPA的体外溶栓效力。方法 :通过转瓶扩大生产获得的大量基因重组融合蛋白SZ5 1Hu scuPA ,通过抗体竞争结合实验确定融合蛋白的抗体亲和力 ;进而与尿激酶进行不同浓度血小板血浆凝块体外溶栓比较。结果 :该融合蛋白体外纤溶活性为 390 0 0U mg ;其抗体亲和力是鼠源性单抗的 6 7% ;体外溶栓效力较uPA提高 4.1～ 8.4倍。结论 :体外溶栓结果证明 ,融合蛋白SZ5 1Hu scuPA既兼有与人活化血小板结合特性又有纤溶酶原激活剂特性的双功能分子。

关键词：导向溶栓单克隆抗体基因重组体外溶栓

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一种新型单克隆抗体导向血栓显像剂的基因工程制备

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细胞与分子免疫学杂志 2000年第4期16卷 349-353页

作者：夏晓波季顺东顾津明万海英李佩霞阮长耿苏州医学院附属第一医院血栓与止血研究室江苏省血液研究所江苏苏州215006

目的为简化抗血小板P 选择素鼠/人嵌合单克隆抗体SZ 51/Hu的99mTc标记过程 ,并提高其99mTc标记效率 ,利用金属硫蛋白(MT)可与金属稳定结合的特点 ,通过基因工程的手段制备融合蛋白SZ 51/Hu MT。方法构建了SZ 51/Hu与MT的重组表达载体 ,... 详细信息

目的为简化抗血小板P 选择素鼠/人嵌合单克隆抗体SZ 51/Hu的99mTc标记过程 ,并提高其99mTc标记效率 ,利用金属硫蛋白(MT)可与金属稳定结合的特点 ,通过基因工程的手段制备融合蛋白SZ 51/Hu MT。方法构建了SZ 51/Hu与MT的重组表达载体 ,并在小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0中进行了目的融合蛋白的表达。结果该融合蛋白在Sp2/0细胞中的表达量为3mg/L。对融合蛋白的各项性质分析表明 ,该融合蛋白的相对分子质量(Mr)为180000 ,且具有双向结合的特异性 :即一方面保持了SZ 51与活化血小板P 选择素的特异结合能力 ;另一方面又具有MT高效结合金属的特性。99mTc标记研究表明 ,该分子不需预处理即可被99m Tc直接标记 ,标记率可达79 %。结论获得具有双向结合特异性的融合蛋白SZ 51/Hu MT ,为研制新型血栓导向显像剂开辟了新途径。

关键词：单克隆抗体金属硫蛋白血栓显像剂基因重组

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2A型血管性血友病的临床诊断

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苏州医学院学报 2000年第7期20卷 630-632页

作者：王迎春张威程大卫张敬宇阮长耿苏州医学院附属第一医院血栓与止血研究室江苏省血液研究所苏州215006

目的　探讨 2A型血管性血友病的临床特征和诊断方法。方法　用出血时间 (BT)、血浆凝血酶原时间(PT)、全血凝固时间 (CT)、活化的部分凝血活酶时间 (APTT)、vWF :Ag、FⅧ :C、FⅧC :Ag、瑞斯脱霉素诱导的血小板凝集试验和血浆多聚物分... 详细信息

目的　探讨 2A型血管性血友病的临床特征和诊断方法。方法　用出血时间 (BT)、血浆凝血酶原时间(PT)、全血凝固时间 (CT)、活化的部分凝血活酶时间 (APTT)、vWF :Ag、FⅧ :C、FⅧC :Ag、瑞斯脱霉素诱导的血小板凝集试验和血浆多聚物分析 ,对 12 6例有先天性出血倾向的患者进行了研究。结果　确诊为 2A型血管性血友病 14例。皆有初期止血障碍的出血特点 ,表现为BT延长 ,PT、CT正常 ,APTT轻度延长 ,vWF :Ag下降 ,FⅧ :C、FⅧC :Ag轻度下降 ,瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集明显降低。血浆中缺乏大中分子量的多聚物。结论　BT、CT、PT、APTT、vWF :Ag、FⅧ :C、瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集试验可作为血管性血友病的初筛试验。

关键词： 2A型血管性血友病临床特点诊断

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重组SZ51Hu-scuPA融合蛋白的体外溶栓研究

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江苏医药 2000年第10期26卷 772-774页

作者：万海英刘征辉顾津明朱明清李佩霞阮长耿苏州医学院附属第一医院江苏省血液研究所血栓与止血研究室 215006 苏州医学院核医学重点实验室

目的　获得大量人源化抗人活化血小板单抗SZ5 1Hu和尿激酶原 (scuPA)融合蛋白SZ5 1Hu scuPA并测定该基因重组抗体导向溶栓剂的导向溶栓性。方法　通过转瓶扩大培养系统获得大量SZ5 1Hu scuPA ;通过抗体竞争结合实验证明融合蛋白的抗体... 详细信息

目的　获得大量人源化抗人活化血小板单抗SZ5 1Hu和尿激酶原 (scuPA)融合蛋白SZ5 1Hu scuPA并测定该基因重组抗体导向溶栓剂的导向溶栓性。方法　通过转瓶扩大培养系统获得大量SZ5 1Hu scuPA ;通过抗体竞争结合实验证明融合蛋白的抗体亲和力 ;进而与尿激酶进行比较对不同浓度血小板血浆凝块的溶栓研究。结果　该融合蛋白在培养上清中的表达量为 5mg/ml;其纤溶活性为 390 0 0IU/mg ;抗体亲和力是鼠源性单抗的 6 7% ;体外溶栓效力较uPA提高 4 1～ 8 4倍。结论　该融合蛋白比uPA具有更高、更快的溶栓效率。

关键词：重组SZ51Hu-scuPA 融合蛋白体外溶栓

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凝血因子Ⅷ基因内二核苷酸重复序列在云南省傣、彝和汉族人群中的多态性研究

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中国实验血液学杂志 2000年第2期8卷 142-144页

作者：台虹甸自金欧阳红梅李震宇万海英阮长耿云南省第一人民医院检验科昆明650032 江苏省血液学研究所苏州医学院第一附属医院血栓与止血研究室苏州215006

研究云南省傣、彝和汉族人凝血因子Ⅷ基因内含子 2 2 (CA)n二核苷酸重复序列的多态性 ,获取高多态信息量的分子遗传标志。应用聚合酶链反应 (PCR)和DNA序列分析技术及聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)对该位点的基因频率及多态信息量进行调查... 详细信息

研究云南省傣、彝和汉族人凝血因子Ⅷ基因内含子 2 2 (CA)n二核苷酸重复序列的多态性 ,获取高多态信息量的分子遗传标志。应用聚合酶链反应 (PCR)和DNA序列分析技术及聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)对该位点的基因频率及多态信息量进行调查。结果发现 ,傣族和彝族中至少有 (CA)n拷贝数为 2 4 ,2 5和 2 6的 3种等位基因片段 ,两民族中的频率分布分别为 1 2 % -5 7 5 %和 16 .4 3% - 6 3 0 0 % ;汉族人群中至少有 5种等位基因片段 ,(CA)n拷贝数分别为 2 4 ,2 5 ,2 6 ,2 7和 2 8,频率分布在 8 97% - 32 0 0 %。在上述三种民族人群中均未发现FⅧ基因内含子 2 2二核苷酸重复序列的杂合子。本研究的结果提示 ,目前至少可认为该位点不宜作为云南省傣。

关键词：凝血因子Ⅷ基因血友病A 多态性

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2A型血管性血友病vWF基因Ala737→Glu的突变

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中华血液学杂志 1999年第3期20卷 117-119页

作者：王迎春张敬宇万海英施纪文李震宇阮长耿苏州医学院附属第一医院江苏省血液研究所血栓与止血研究室

目的阐明２Ａ型血管性血友病（ｖＷＤ）临床表现型与基因型的相关性。方法研究来自同一家系的２例患者，他们具有初期止血障碍的出血特点，ｖＷＦ∶Ａｇ和ＦⅧ∶ＣＡｇ减少，瑞斯托霉素诱导的血小板聚集明显降低，大、中多聚物分子消失... 详细信息

目的阐明２Ａ型血管性血友病（ｖＷＤ）临床表现型与基因型的相关性。方法研究来自同一家系的２例患者，他们具有初期止血障碍的出血特点，ｖＷＦ∶Ａｇ和ＦⅧ∶ＣＡｇ减少，瑞斯托霉素诱导的血小板聚集明显降低，大、中多聚物分子消失，临床表型符合２Ａ型血管性血友病。用聚合酶链反应方法扩增患者的ｖＷＦ基因的２８号外显子，并用特异性内切酶的方法获得真基因，变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）筛选突变基因，对电泳行为异常的片段进行测序。结果该２Ａ型ｖＷＤ家系ｖＷＦ基因的４３７０～４５９０区域ＤＧＧＥ有明显减慢的条带。ＤＮＡ序列测定，表明在ｖＷＦ基因４４９９位Ｃ→Ａ致ｖＷＦ蛋白Ａ２区域Ａｌａ７３７→Ｇｌｕ。结论该突变有助于研究ｖＷＦ蛋白功能域的精细功能及ｖＷＤ表型与基因型的相关性。

关键词：血友病血管性血友病 vWF基因点突变 PCR

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SZ-51单链抗体与金属硫蛋白的融合基因构建及其在大肠杆菌中的表达

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中华血液学杂志 1999年第3期20卷 156-157页

作者：万海英夏晓波张敬宇王斌刘征辉顾津明王迎春阮长耿苏州医学院附属第一医院江苏省血液研究所血栓与止血研究室

近年来，对活化血小板膜糖蛋白１４０（ＧＭＰ１４０）的单抗ＳＺ５１进行了系列基因工程抗体的研究，首先克隆出抗体的可变区基因［１］，从而获得了系列基因组抗体［２］，使鼠源性抗体对人体的免疫原性大大降低。我们利用金属硫... 详细信息

近年来，对活化血小板膜糖蛋白１４０（ＧＭＰ１４０）的单抗ＳＺ５１进行了系列基因工程抗体的研究，首先克隆出抗体的可变区基因［１］，从而获得了系列基因组抗体［２］，使鼠源性抗体对人体的免疫原性大大降低。我们利用金属硫蛋白（ＭＴ）的低相对分子质量（６０...

关键词：大肠杆菌 SZ-51 单链抗体金属硫蛋白基因构建

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