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丹参素对CD11b、P-selectin、ICAM-1、VCAM-1、E-selectin表达的影响

中国药理学通报 2000年第6期16卷 682-685页

作者：姜开余顾振纶阮长耿苏州医学院附属第一医院临床药理研究室苏州2150062 苏州医学院药理学教研室苏州215007 江苏省血液病研究所南京210000

目的　考察丹参素对血小板、白细胞和血管内皮细胞表达细胞粘附分子CD11b、P selectin、ICAM 1、VCAM 1、E selectin的影响 ,以期探明其抗血栓形成作用的机制。方法　用流式细胞仪测定由TNFα、fMLP和凝血酶诱导细胞表面细胞粘附分子的... 详细信息

目的　考察丹参素对血小板、白细胞和血管内皮细胞表达细胞粘附分子CD11b、P selectin、ICAM 1、VCAM 1、E selectin的影响 ,以期探明其抗血栓形成作用的机制。方法　用流式细胞仪测定由TNFα、fMLP和凝血酶诱导细胞表面细胞粘附分子的表达。结果　人粒细胞受到fMLP刺激后 ,细胞表面CD11b表达明显增加。丹参素与粒细胞预孵30min后 ,则剂量依赖性地抑制CD11b的表达。血小板与凝血酶 (1× 10 3U·L-1)共孵 2 0min ,可明显增加血小板表面P selectin的表达。丹参素 (10 0～ 30 0mg·L-1)与血小板预孵 30min ,对凝血酶诱导的血小板表面P selectin的表达未见明显抑制作用。人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)经TNFα处理后 ,明显增加细胞表面ICAM 1、VCAM 1和E selectin的表达 ,不同浓度的丹参素与HUVEC预孵 2h ,对TNFα诱导HUVEC表面ICAM 1的表达未见明显抑制作用 ,对TNFα诱导的VCAM 1、E selectin表达则可产生明显的抑制作用。结论　丹参素可抑制血管内皮细胞和粒细胞表达细胞粘附分子。这可能是丹参素发挥抗血栓形成作用的机制之一。

关键词：丹参素细胞粘附分子 CD116 抗血栓形成 ICAM-1

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2A型血管性血友病的临床诊断

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苏州医学院学报 2000年第7期20卷 630-632页

作者：王迎春张威程大卫张敬宇阮长耿苏州医学院附属第一医院血栓与止血研究室江苏省血液研究所苏州215006

目的　探讨 2A型血管性血友病的临床特征和诊断方法。方法　用出血时间 (BT)、血浆凝血酶原时间(PT)、全血凝固时间 (CT)、活化的部分凝血活酶时间 (APTT)、vWF :Ag、FⅧ :C、FⅧC :Ag、瑞斯脱霉素诱导的血小板凝集试验和血浆多聚物分... 详细信息

目的　探讨 2A型血管性血友病的临床特征和诊断方法。方法　用出血时间 (BT)、血浆凝血酶原时间(PT)、全血凝固时间 (CT)、活化的部分凝血活酶时间 (APTT)、vWF :Ag、FⅧ :C、FⅧC :Ag、瑞斯脱霉素诱导的血小板凝集试验和血浆多聚物分析 ,对 12 6例有先天性出血倾向的患者进行了研究。结果　确诊为 2A型血管性血友病 14例。皆有初期止血障碍的出血特点 ,表现为BT延长 ,PT、CT正常 ,APTT轻度延长 ,vWF :Ag下降 ,FⅧ :C、FⅧC :Ag轻度下降 ,瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集明显降低。血浆中缺乏大中分子量的多聚物。结论　BT、CT、PT、APTT、vWF :Ag、FⅧ :C、瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集试验可作为血管性血友病的初筛试验。

关键词： 2A型血管性血友病临床特点诊断

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重组SZ51Hu-scuPA融合蛋白的体外溶栓研究

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江苏医药 2000年第10期26卷 772-774页

作者：万海英刘征辉顾津明朱明清李佩霞阮长耿苏州医学院附属第一医院江苏省血液研究所血栓与止血研究室 215006 苏州医学院核医学重点实验室

目的　获得大量人源化抗人活化血小板单抗SZ5 1Hu和尿激酶原 (scuPA)融合蛋白SZ5 1Hu scuPA并测定该基因重组抗体导向溶栓剂的导向溶栓性。方法　通过转瓶扩大培养系统获得大量SZ5 1Hu scuPA ;通过抗体竞争结合实验证明融合蛋白的抗体... 详细信息

目的　获得大量人源化抗人活化血小板单抗SZ5 1Hu和尿激酶原 (scuPA)融合蛋白SZ5 1Hu scuPA并测定该基因重组抗体导向溶栓剂的导向溶栓性。方法　通过转瓶扩大培养系统获得大量SZ5 1Hu scuPA ;通过抗体竞争结合实验证明融合蛋白的抗体亲和力 ;进而与尿激酶进行比较对不同浓度血小板血浆凝块的溶栓研究。结果　该融合蛋白在培养上清中的表达量为 5mg/ml;其纤溶活性为 390 0 0IU/mg ;抗体亲和力是鼠源性单抗的 6 7% ;体外溶栓效力较uPA提高 4 1～ 8 4倍。结论　该融合蛋白比uPA具有更高、更快的溶栓效率。

关键词：重组SZ51Hu-scuPA 融合蛋白体外溶栓

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凝血因子Ⅷ基因内二核苷酸重复序列在云南省傣、彝和汉族人群中的多态性研究

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中国实验血液学杂志 2000年第2期8卷 142-144页

作者：台虹甸自金欧阳红梅李震宇万海英阮长耿云南省第一人民医院检验科昆明650032 江苏省血液学研究所苏州医学院第一附属医院血栓与止血研究室苏州215006

研究云南省傣、彝和汉族人凝血因子Ⅷ基因内含子 2 2 (CA)n二核苷酸重复序列的多态性 ,获取高多态信息量的分子遗传标志。应用聚合酶链反应 (PCR)和DNA序列分析技术及聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)对该位点的基因频率及多态信息量进行调查... 详细信息

研究云南省傣、彝和汉族人凝血因子Ⅷ基因内含子 2 2 (CA)n二核苷酸重复序列的多态性 ,获取高多态信息量的分子遗传标志。应用聚合酶链反应 (PCR)和DNA序列分析技术及聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)对该位点的基因频率及多态信息量进行调查。结果发现 ,傣族和彝族中至少有 (CA)n拷贝数为 2 4 ,2 5和 2 6的 3种等位基因片段 ,两民族中的频率分布分别为 1 2 % -5 7 5 %和 16 .4 3% - 6 3 0 0 % ;汉族人群中至少有 5种等位基因片段 ,(CA)n拷贝数分别为 2 4 ,2 5 ,2 6 ,2 7和 2 8,频率分布在 8 97% - 32 0 0 %。在上述三种民族人群中均未发现FⅧ基因内含子 2 2二核苷酸重复序列的杂合子。本研究的结果提示 ,目前至少可认为该位点不宜作为云南省傣。

关键词：凝血因子Ⅷ基因血友病A 多态性

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2A型血管性血友病vWF基因Ala737→Glu的突变

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中华血液学杂志 1999年第3期20卷 117-119页

作者：王迎春张敬宇万海英施纪文李震宇阮长耿苏州医学院附属第一医院江苏省血液研究所血栓与止血研究室

目的阐明２Ａ型血管性血友病（ｖＷＤ）临床表现型与基因型的相关性。方法研究来自同一家系的２例患者，他们具有初期止血障碍的出血特点，ｖＷＦ∶Ａｇ和ＦⅧ∶ＣＡｇ减少，瑞斯托霉素诱导的血小板聚集明显降低，大、中多聚物分子消失... 详细信息

目的阐明２Ａ型血管性血友病（ｖＷＤ）临床表现型与基因型的相关性。方法研究来自同一家系的２例患者，他们具有初期止血障碍的出血特点，ｖＷＦ∶Ａｇ和ＦⅧ∶ＣＡｇ减少，瑞斯托霉素诱导的血小板聚集明显降低，大、中多聚物分子消失，临床表型符合２Ａ型血管性血友病。用聚合酶链反应方法扩增患者的ｖＷＦ基因的２８号外显子，并用特异性内切酶的方法获得真基因，变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）筛选突变基因，对电泳行为异常的片段进行测序。结果该２Ａ型ｖＷＤ家系ｖＷＦ基因的４３７０～４５９０区域ＤＧＧＥ有明显减慢的条带。ＤＮＡ序列测定，表明在ｖＷＦ基因４４９９位Ｃ→Ａ致ｖＷＦ蛋白Ａ２区域Ａｌａ７３７→Ｇｌｕ。结论该突变有助于研究ｖＷＦ蛋白功能域的精细功能及ｖＷＤ表型与基因型的相关性。

关键词：血友病血管性血友病 vWF基因点突变 PCR

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SZ-51单链抗体与金属硫蛋白的融合基因构建及其在大肠杆菌中的表达

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中华血液学杂志 1999年第3期20卷 156-157页

作者：万海英夏晓波张敬宇王斌刘征辉顾津明王迎春阮长耿苏州医学院附属第一医院江苏省血液研究所血栓与止血研究室

近年来，对活化血小板膜糖蛋白１４０（ＧＭＰ１４０）的单抗ＳＺ５１进行了系列基因工程抗体的研究，首先克隆出抗体的可变区基因［１］，从而获得了系列基因组抗体［２］，使鼠源性抗体对人体的免疫原性大大降低。我们利用金属硫... 详细信息

近年来，对活化血小板膜糖蛋白１４０（ＧＭＰ１４０）的单抗ＳＺ５１进行了系列基因工程抗体的研究，首先克隆出抗体的可变区基因［１］，从而获得了系列基因组抗体［２］，使鼠源性抗体对人体的免疫原性大大降低。我们利用金属硫蛋白（ＭＴ）的低相对分子质量（６０...

关键词：大肠杆菌 SZ-51 单链抗体金属硫蛋白基因构建

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尿激酶受体反义寡核苷酸抑制乳腺癌细胞的浸润

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中华医学杂志 1999年第11期79卷 877-878页

作者：徐杰奚晓东白霞王爱青陆长明朱明清阮长耿苏州医学院附属第一医院江苏省血液研究所血栓与止血研究室

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中国汉族人群vWF基因G2805A多态性研究

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中国实验血液学杂志 1999年第4期7卷 292-295页

作者：张敬宇王迎春万海英程大卫阮长耿苏州医学院附属第一医院江苏省血液研究所血栓与止血研究室苏州215006

为研究中国汉族人群vWF基因G2805A多态性特点,应用PCR-DGGE技术结合Nla Ⅳ酶切分析,研究了60名中国汉族人120条染色体vWF基因G2805A的等位基因发生频率及杂合情况,并对28例DGGE电泳行为异常中的4例进行了DNA序列分析。结果发现,在中国... 详细信息

为研究中国汉族人群vWF基因G2805A多态性特点,应用PCR-DGGE技术结合Nla Ⅳ酶切分析,研究了60名中国汉族人120条染色体vWF基因G2805A的等位基因发生频率及杂合情况,并对28例DGGE电泳行为异常中的4例进行了DNA序列分析。结果发现,在中国汉族人群中存在vWF基因G2805A多态性,其等位基因发生频率分别为0.73(G)和0.23(A),理论杂合率为0.39,实际杂合率为0.40。这表明vWF基因G2805A多态性在中国汉族人群中具有较高的理论杂合率,可用于血管性血友病的遗传咨询和产前诊断。

关键词： vonWillebrand因子基因多态性变性梯度凝胶电泳限制性片段长度多态性 DNA测序

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3型血管性血友病的基因突变与临床研究

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中华血液学杂志 1998年第3期19卷 122-124页

作者：李震宇王泳万海英 JMLavergne DMeyer 阮长耿苏州医学院附属第一医院江苏省血液研究所血栓与止血研究室法国巴黎Bicetre医院

目的：研究３型血管性血友病（ｖＷＤ）的分子病理机制。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）筛选了３型ｖＷＤ患者ｖｏｎＷｉｌｅｂｒａｎｄ因子（ｖＷＦ）基因编码区的基因突变，对ＰＣＲ－ＤＧＧＥ行... 详细信息

目的：研究３型血管性血友病（ｖＷＤ）的分子病理机制。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）筛选了３型ｖＷＤ患者ｖｏｎＷｉｌｅｂｒａｎｄ因子（ｖＷＦ）基因编码区的基因突变，对ＰＣＲ－ＤＧＧＥ行为发生改变的片段直接进行ＤＮＡ序列分析。结果：检测到１例基因突变，在ｖＷＦ基因外显子３第２１２号核苷酸，发生了Ｃ→Ａ的替换，使Ｓｅｒ７１突变为终止密码子。该突变创造了ＸｂａⅠ酶切位点，消除了原有的ＴａｑⅠ位点。结论：ＰＣＲ－ＤＧＧＥ和酶切分析均证实，患者为该突变的纯合子，其父母则均为该突变的携带者。

关键词：血管性血友病血友病 OGGF 基因突变临床研究

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变性梯度凝胶电泳检测到四例新的FⅨ基因突变

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中华血液学杂志 1998年第3期19卷 125-128页

作者：王泳李震宇万海英程大卫阮长耿苏州医学院附属第一医院江苏省血液研究所血栓与止血研究室

目的：研究凝血因子Ⅸ的基因突变。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）筛选技术，分析了１２例血友病Ｂ患者ＦⅨ基因的全部８个外显子，剪接区及３′，５′端部分非编码区，并对ＤＧＧＥ行为异常片段进行... 详细信息

目的：研究凝血因子Ⅸ的基因突变。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）筛选技术，分析了１２例血友病Ｂ患者ＦⅨ基因的全部８个外显子，剪接区及３′，５′端部分非编码区，并对ＤＧＧＥ行为异常片段进行双脱氧链终止法ＤＮＡ序列分析。结果：发现４例新的基因突变，分别位于ＦⅨ基因第１号外显子Ｔ（ＴＧＴ）１１１Ｇ（ＧＧＴ），导致Ｃｙｓ－１９Ｇｌｙ；第３号内含子剪接位点Ｃ１０３８０Ｔ和第８号外显子Ａ（ＴＡＣ）３０９１８Ｇ（ＴＧＣ），导致Ｔｙｒ２６６Ｃｙｓ；第８号外显子Ａ（ＡＣＧ）３１００７Ｃ（ＣＣＧ），导致Ｔｈｒ２９９Ｐｒｏ。结论：阐明血友病Ｂ的点突变有助于进一步了解ＦⅨ蛋白各功能域的精细功能，并为血友病Ｂ家系携带者检测和产前诊断提供了一个重要的遗传信息。

关键词：血友病B FⅨ基因基因突变 DGGE

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