检索结果-内蒙古大学图书馆

重庆医学 2019年第15期48卷 2528-2531页

作者：苏倩吴洁杜佳慧杨凡袁濮玉刘松柏邱秀芹苏州卫生职业技术学院苏州检验医学生物技术重点实验室

目的探讨DNA分枝结构特异性内切酶-1(FEN1)基因敲低细胞株及对照细胞株的差异表达基因,用实时荧光定量PCR方法进行结果验证。方法从293T野生型及293T FEN1敲低细胞株中提取RNAs,并反转录成cDNA;挑选10个转录组测序中差异表达的基因,设... 详细信息

目的探讨DNA分枝结构特异性内切酶-1(FEN1)基因敲低细胞株及对照细胞株的差异表达基因,用实时荧光定量PCR方法进行结果验证。方法从293T野生型及293T FEN1敲低细胞株中提取RNAs,并反转录成cDNA;挑选10个转录组测序中差异表达的基因,设计引物,利用SYBR Green染料法,定量检测挑选基因的表达情况。结果挑选的10个差异表达基因中,成功扩增了其中7个基因;通过实时荧光定量PCR方法对两组细胞的7个基因进行定量检测发现,与转录组测序结果相比较,其中有2个没有明显差异,另外5个基因荧光定量方法的检测结果与转录组测序结果一致。结论在细胞内基因表达水平检测中,为提高转录组测序结果的可靠性,还需通过实时荧光定量PCR方法对其结果进一步验证。

关键词：荧光定量PCR FEN1 RNA,信使转录组测序基因敲低技术

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FLT3及FLT3-ITD突变体在HEK293T细胞的表达和纯化

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细胞与分子免疫学杂志 2018年第3期34卷 242-246页

作者：杨凡杜佳慧吴洁袁濮玉苏倩撖荣邱桥成薛胜利刘松柏孙中文苏州卫生职业技术学院苏州检验医学生物技术重点实验室江苏苏州215009 苏州大学附属第一医院血液科江苏苏州215006

目的构建fms相关酪氨酸激酶3(FLT3)及FLT3-内部串联重复序列(FLT3-ITD)突变体的真核表达载体,在HEK293T细胞中稳定表达并通过免疫沉淀技术对蛋白进行纯化。方法从正常人及FLT3-ITD阳性急性髓系白血病患者骨髓干细胞中提取RNA,反转录为cD... 详细信息

目的构建fms相关酪氨酸激酶3(FLT3)及FLT3-内部串联重复序列(FLT3-ITD)突变体的真核表达载体,在HEK293T细胞中稳定表达并通过免疫沉淀技术对蛋白进行纯化。方法从正常人及FLT3-ITD阳性急性髓系白血病患者骨髓干细胞中提取RNA,反转录为cDNA,使用带有流感病毒血凝素(HA)标签序列的特异性引物,采用PCR扩增出人FLT3及FLT3-ITD突变体编码区全长并克隆到CD530A-T2A-GFP载体上。重组的FLT3及突变体FLT3-ITD表达质粒,通过脂质体polyJ et转染到HEK293T细胞进行表达。使用HA抗体结合微珠沉淀带HA标签的FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白。然后,通过HA肽段将蛋白竞争洗脱下来,洗脱下来的蛋白经银染染色。结果 FLT3及FLT3-ITD突变体全长编码序列成功构建到CD530A-T2A-GFP载体上,Western blot法及聚丙烯酰胺凝胶银染法成功检测到FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白的表达、纯化。结论在HEK293T细胞中成功表达并纯化FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白。

关键词： FMS样的酪氨酸激酶3 突变体蛋白纯化 FMS样的酪氨酸激酶3-内部串联重复

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MC-1586的合成

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浙江化工 2018年第4期49卷 9-11页

作者：张立光尤彩芬刘雪梅苏州卫生职业技术学院药学院江苏苏州215009 苏州市检验医学生物技术重点实验室江苏苏州215009

以N-甲基吡咯-2-甲醛为原料,经缩合,Vilsmeier-Haack反应,缩合水解,再经缩合,脱保护等五步反应最终制得MC-1586,总收率52.8%。该工艺原料价廉易得,操作简单,后处理容易,副产物较少。

关键词： N-甲基吡咯-2-甲醛 Vilsmeier-Haack反应 MC-1586 合成

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FANCJ在HEK293T细胞中的表达、纯化及活性检测

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重庆医学 2018年第36期47卷 4584-4587页

作者：袁濮玉撖荣杜佳慧储小玲吴洁杨凡苏倩邱桥成薛胜利刘松柏苏州卫生职业技术学院苏州检验医学生物技术重点实验室 215009 苏州大学附属第一医院血液科苏州215006

目的构建包含FANCJ野生型(wt)及其突变体N196S蛋白的真核表达载体,并对纯化的野生型蛋白及突变体蛋白进行活性检测。方法从HEK293T中提取RNA,并反转录为cDNA,使用带有3xFlag标签序列的特异性引物通过PCR方法扩增出人FANCJ编码区全长,并... 详细信息

目的构建包含FANCJ野生型(wt)及其突变体N196S蛋白的真核表达载体,并对纯化的野生型蛋白及突变体蛋白进行活性检测。方法从HEK293T中提取RNA,并反转录为cDNA,使用带有3xFlag标签序列的特异性引物通过PCR方法扩增出人FANCJ编码区全长,并克隆到plvx-EF1-MCS-PGK-PURO载体上;突变体N196S利用NEBaseChanger TM引物设计工具,并利用NEB公司的点突变构建试剂盒Q5? SiteDirected Mutagenesis Kit技术进行操作。重组的FANCJ及突变体N196S表达质粒通过脂质体polyJet转染到HEK293T细胞中进行表达。使用免疫沉淀及竞争洗脱的方法纯化FANCJ及N196S突变体蛋白。利用荧光标记DNA底物的方法检测FANCJ及N196S突变体蛋白的DNA解旋酶活性。结果 FANCJwt基因及N196S突变体全长编码序列成功构建到plvx-EF1-MCS-PGK-PURO载体上,蛋白质印迹法(Western blot)及PAGE胶银染方法成功检测到了FANCJwt及N196S突变体蛋白的表达、纯化,荧光标记Oligo DNA底物方法发现FANCJwt与N196S突变体蛋白DNA解旋酶活性存在差异。结论成功构建了FANCJwt及N196S突变体真核表达载体,通过生化实验发现FANCJ及N196S突变体蛋白存在差异的DNA解旋酶活性。

关键词： FANCJ 突变体蛋白纯化活性检测

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AGEs-RAGE通路阻断对血管平滑肌细胞迁移能力的影响

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中国药科大学学报 2016年第2期47卷 199-203页

作者：向敏张雅琴吴萍萍高振宇苏州卫生职业技术学院药学教研室苏州市检验医学生物技术重点实验室苏州215009

研究AGEs-RAGE通路阻断对糖尿病大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移能力的影响并探讨其可能机制。以晚期糖基化终产物受体(RAGE)抗体预孵VSMCs后,再用晚期糖基化终产物(AGEs)刺激VSMCs细胞,Transwell法检测VSMCs迁移能力变化,MTT法及E... 详细信息

研究AGEs-RAGE通路阻断对糖尿病大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移能力的影响并探讨其可能机制。以晚期糖基化终产物受体(RAGE)抗体预孵VSMCs后,再用晚期糖基化终产物(AGEs)刺激VSMCs细胞,Transwell法检测VSMCs迁移能力变化,MTT法及ELISA分别检测VSMCs增殖及p27蛋白表达的变化,DCFH法测定VSMCs细胞内活性氧(ROS)水平,RT-PCR法测定NOX1 mRNA表达水平。结果显示:RAGE抗体可以明显抑制AGEs诱导的VSMCs迁移作用(P<0.01),且抑制迁移作用较其抑制增殖作用强,细胞ROS水平降低(P<0.01),NOX1 mRNA表达量下降但P27蛋白表达变化不大。实验结果表明,用RAGE抗体阻断AGEs-RAGE通路可以抑制VSMCs的迁移,其机制可能与其下调NOX1mRNA表达从而降低细胞内氧化应激水平有关。

关键词：晚期糖基化终产物晚期糖基化终产物受体糖尿病血管平滑肌细胞迁移靶点信号传导

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苦瓜皂苷对糖尿病肾病PI3K/Akt信号通路的影响

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江苏医药 2015年第7期41卷 750-753,F0003页

作者：张雅琴李小宁吴萍萍郭云娣苏州卫生职业技术学院苏州检验医学生物技术重点实验室江苏省215009

目的探讨苦瓜皂苷对糖尿病肾病(DN)PI3K/Akt信号通路的影响。方法 50只雄性小鼠采用高脂饮食联合链尿佐菌素85mg/kg腹腔注射建立DN模型。除模型组(A组)10只外,DN小鼠采用格列本脲0.16g-1·kg-1·d-1灌胃(B组,10只)及30、60、120... 详细信息

目的探讨苦瓜皂苷对糖尿病肾病(DN)PI3K/Akt信号通路的影响。方法 50只雄性小鼠采用高脂饮食联合链尿佐菌素85mg/kg腹腔注射建立DN模型。除模型组(A组)10只外,DN小鼠采用格列本脲0.16g-1·kg-1·d-1灌胃(B组,10只)及30、60、120mg-1·kg-1·d-1苦瓜皂苷灌胃(D1、D2、D3组,各10只)连续治疗14d;另设10只雄性小鼠为空白对照(C组)。采用组织芯片联合免疫组化观察小鼠肾脏组织中p-PI3Kp85(Y458)、p-Akt(Ser473)和负调控基因PTEN表达;Western blot检测小鼠肾脏组织中p-PI3Kp85(Y458)、p-Akt(Ser473)和PTEN蛋白的表达。结果p-PI3Kp85(Y458)和p-Akt(Ser473)主要分布在肾小管上皮细胞质中,PTEN主要分布在肾小管上皮细胞核中。与C组相比,A组p-Akt(Ser 473)和p-PI3Kp85(Y458)表达水平升高,而PTEN表达水平降低(P<0.05)。与A组相比,B组及D2、D3组p-PI3Kp85(Y458)和p-Akt(Ser 473)表达水平均降低(P<0.05),B组和D3组PTEN表达水平升高(P<0.05)。结论苦瓜皂苷可以上调PTEN的表达,抑制PI3K/Akt通路的活化,对DN小鼠的肾脏有保护作用。

关键词：苦瓜皂苷糖尿病肾病 PI3K Akt

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FLNA和细胞周期素D1在乳腺浸润性导管癌组织中表达

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江苏医药 2015年第5期41卷 549-551,F0002页

作者：郭云娣陈建华苏州卫生职业技术学院苏州检验医学生物技术重点实验室江苏省215008 苏州市立医院普通外科

目的探讨细丝蛋白A(FLNA)和细胞周期素D1在乳腺浸润性导管癌组织中表达。方法免疫组织化学方法检测68例乳腺浸润性导管癌组织标本和30例非癌乳腺组织标本中FLNA和细胞周期素D1的表达,分析两者表达相关性及其与临床病理特征的关系。结果... 详细信息

目的探讨细丝蛋白A(FLNA)和细胞周期素D1在乳腺浸润性导管癌组织中表达。方法免疫组织化学方法检测68例乳腺浸润性导管癌组织标本和30例非癌乳腺组织标本中FLNA和细胞周期素D1的表达,分析两者表达相关性及其与临床病理特征的关系。结果 68例乳腺浸润性导管癌组织中,FLNA和细胞周期素D1的阳性表达率分别为50.0%和48.5%。FLNA和细胞周期素D1在非癌乳腺组织中呈阴性或弱表达。FLNA和细胞周期素D1表达均与肿瘤淋巴结转移和TNM分期密切相关(P<0.01和P<0.05)。FLNA和细胞周期素D1蛋白表达呈正相关(r=0.324,P<0.01)。结论 FLNA可能通过上调细胞周期素D1表达而影响乳腺浸润性导管癌的发生和发展。

关键词：乳腺浸润性导管癌细丝蛋白A 细胞周期素D1

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PIN1蛋白在胃癌组织中表达及其临床意义

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江苏医药 2015年第18期41卷 2128-2130页

作者：张雅琴白光辉郭云娣苏州卫生职业技术学院苏州检验医学生物技术重点实验室江苏省215009 苏州市立医院普通外科

目的探讨肽基脯氨酰顺反异构酶1(PIN1)蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法应用MaxEnvision免疫组化法检测213例胃癌组织及40例正常胃黏膜组织中PIN1蛋白表达,分析其与临床病理参数及患者术后生存率的关系。结果胃癌组织中PIN1蛋... 详细信息

目的探讨肽基脯氨酰顺反异构酶1(PIN1)蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法应用MaxEnvision免疫组化法检测213例胃癌组织及40例正常胃黏膜组织中PIN1蛋白表达,分析其与临床病理参数及患者术后生存率的关系。结果胃癌组织中PIN1蛋白阳性表达率高于正常胃黏膜组织(34.3%vs.17.5%)(P<0.05)。有淋巴结转移者(97例)的胃癌组织PIN1蛋白阳性表达率低于无淋巴结转移者(116例)(26.80%vs.40.52%)(P<0.05),PIN1蛋白阳性表达患者(73例)5年生存率低于阴性表达患者(140例)(17.8%vs.45.0%)(P<0.05)。结论胃癌组织PIN1蛋白表达可作为筛选高危淋巴结转移患者和预测胃癌预后的有用指标。

关键词：胃癌肽基脯氨酰顺反异构酶1

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BRCA1核蛋白和p53蛋白在乳腺浸润性导管癌的表达

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江苏医药 2015年第19期41卷 2267-2269,F0002页

作者：郭云娣白光辉苏州卫生职业技术学院苏州检验医学生物技术重点实验室江苏省215009 苏州市立医院普通外科

目的探讨乳腺癌易感基因1(BRCA1)核蛋白和p53蛋白在乳腺浸润性导管癌组织中表达及其相关性。方法免疫组织化学方法检测64例乳腺浸润性导管癌组织标本中BRCA1核蛋白和p53蛋白的表达,分析二者在肿瘤临床病理参数分组中表达水平及其相关性... 详细信息

目的探讨乳腺癌易感基因1(BRCA1)核蛋白和p53蛋白在乳腺浸润性导管癌组织中表达及其相关性。方法免疫组织化学方法检测64例乳腺浸润性导管癌组织标本中BRCA1核蛋白和p53蛋白的表达,分析二者在肿瘤临床病理参数分组中表达水平及其相关性。结果 BRCA1核蛋白和p53蛋白阳性表达率分别为85.9%和34.4%,均表达于细胞核。BRCA1核蛋白阳性表达与肿瘤的淋巴结转移及临床TNM分期密切相关(P<0.05);p53蛋白阳性表达与乳腺癌临床病理参数无明显相关(P>0.05)。BRCA1核蛋白表达和p53蛋白表达呈正相关(r=0.29,P<0.05)。结论乳腺浸润性导管癌组织中BRCA1核蛋白阳性表达与肿瘤的淋巴结转移、TNM分期相关;BRCA1核蛋白与p53蛋白相互作用影响肿瘤的发生和发展。

关键词：乳腺癌易感基因1 p53蛋白乳腺浸润性导管癌

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胃癌组织HMGB1和RAGE蛋白表达与临床病理因素相关性分析

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中华肿瘤防治杂志 2014年第9期21卷 684-687,691页

作者：郭云娣白光辉苏州卫生职业技术学院.苏州检验医学生物技术重点实验室江苏苏州215009 苏州市立医院普外科江苏苏州215008

目的:探讨HMGB1和RAGE蛋白在胃癌组织中的表达及其与临床病理因素的相关性。方法:收集2005-01-01-2008-12-30苏州市立医院手术切除的240例胃癌标本及同期患者40例正常胃黏膜组织(距离癌组织≥7cm),制成组织芯片蜡块,免疫组织化学法检测... 详细信息

目的:探讨HMGB1和RAGE蛋白在胃癌组织中的表达及其与临床病理因素的相关性。方法:收集2005-01-01-2008-12-30苏州市立医院手术切除的240例胃癌标本及同期患者40例正常胃黏膜组织(距离癌组织≥7cm),制成组织芯片蜡块,免疫组织化学法检测石蜡包埋的正常胃黏膜及胃癌组织HMGB1及RAGE蛋白表达。多因素分析采用Cox回归模型,HMGB1和RAGE蛋白表达的相关性采用Spearman等级相关分析法。结果:正常胃黏膜组织中HMGB1和RAGE蛋白的表达率分别为17.5%和20.0%,且均为弱阳性;胃癌组织中阳性表达率分别为43.8%和44.6%;HMGB1和RAGE蛋白在正常胃黏膜组织和胃癌组织中的阳性表达比较,差异有统计学意义,P<0.01。HMGB1表达与肿瘤TNM分期(χ2=4.911,P=0.027)和淋巴结转移(χ2=3.893,P=0.048)相关;RAGE表达仅与淋巴结转移(χ2=4.887,P=0.027)相关;两蛋白表达与患者年龄、性别、肿瘤分化程度以及浸润深度无关,P>0.05。多因素分析结果显示,淋巴结转移是HMGB1蛋白表达的独立因素。HMGB1及RAGE蛋白表达呈正相关,r=0.138,P=0.032。结论:HMGB1和RAGE蛋白可能是预测胃癌组织浸润和转移的有用指标;联合检测HMGB1和RAGE蛋白可作为判断胃癌预后和筛选高危转移患者的有效标志,并有可能用于指导胃癌的个体化治疗。

关键词：胃肿瘤高迁移率族蛋白B1 晚期糖基化终末产物受体免疫组织化学

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