检索结果-内蒙古大学图书馆

中国肺癌杂志 2014年第2期17卷 142-147页

作者：黄锦宏杨吉成凌春华赵大国谢宇锋由振华常熟市第二人民医院呼吸内科常熟215500 苏州大学医学部基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室苏州215123 苏州大学附属第一医院呼吸内科苏州215006

背景与目的肿瘤生长抑制因子4(inhibitor of growth 4,ING4)基因是一种重要的肿瘤抑制因子,研究发现ING4基因对多种肿瘤细胞具有抑癌作用。本研究旨在探讨ING4基因对人肺腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其潜在的作用机制。方法采用SPC-A... 详细信息

背景与目的肿瘤生长抑制因子4(inhibitor of growth 4,ING4)基因是一种重要的肿瘤抑制因子,研究发现ING4基因对多种肿瘤细胞具有抑癌作用。本研究旨在探讨ING4基因对人肺腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其潜在的作用机制。方法采用SPC-A1细胞株建立肺腺癌裸鼠移植瘤模型,15只荷瘤裸鼠随机等分为PBS组、腺病毒组(Ad-GFP组)、腺病毒介导的ING4组(Ad-ING4组),上述各组进行局部干预用药,动态测量肿瘤体积,治疗结束后摘取瘤体称重并计算瘤重抑瘤率;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测瘤体内细胞凋亡情况,免疫组织化学SP法检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、环氧化酶-2(COX-2)、Fas与FasL的表达。结果 Ad-ING4组的肿瘤体积、瘤重均呈现明显下降,与Ad-GFP组抑瘤率(1.31%±0.31%)比较,差异有统计学意义(P<0.05),其抑瘤率为(33.17%±5.24%);Ad-ING4组的凋亡指数为(69.23%±6.53%),与PBS组(17.04%±1.10%)、Ad-GFP组(18.81%±1.93%)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。SP法检测结果显示,Ad-ING4可明显上调Caspase-3、Fas与FasL表达,下调COX-2表达。结论 ING4具有抑制肺腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用,该作用机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。

关键词：生长抑制因子4 肺肿瘤移植瘤

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人类多重剪接RNA结合蛋白类基因的克隆和分析

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江苏医药 2013年第6期39卷 624-628页

作者：张雅娟肖娟娟鲁德意王尉平苏州卫生职业技术学院检验药学系江苏省215009 苏州大学医学部基础医学与生物科学学院生物化学与分子生物学教研室

目的通过同源筛选的方法拼接并克隆人类多重剪接RNA结合蛋白2(RBPMS2)基因。方法采用同源筛选策略,以人RBPMS2基因作为信息探针,在GeneBank数据库中进行分析,将获得的高度同源的表达序列标签(EST)用VECTOR NTI软件拼接成重叠群。通过UCS... 详细信息

目的通过同源筛选的方法拼接并克隆人类多重剪接RNA结合蛋白2(RBPMS2)基因。方法采用同源筛选策略,以人RBPMS2基因作为信息探针,在GeneBank数据库中进行分析,将获得的高度同源的表达序列标签(EST)用VECTOR NTI软件拼接成重叠群。通过UCSCGenome Blat Server分析,确定RBPMS2基因的染色体定位,SMART网上分析工具进行结构域预测,Unigene数据库进行表达谱分析。结果电子克隆到人类RBPMS2新基因cDNA序列,含完整的开放阅读框(ORF)。RBPMS2基因编码的多肽由209个氨基酸组成,分子量22.5KDa,等电点8.63。SMART分析显示RBPMS2蛋白包含1个RNA识别模体(RRM)结构域。RBPMS2基因位于第15号染色体,定位在15q22.31,由7个外显子和6个内含子组成。电子表达谱分析显示RBPMS2在卵细胞、受精卵、囊胚、不同发育阶段的胚胎、膀胱、肾脏等组织中高表达。结论分析并克隆到了一个新的人类RBPMS2基因。

关键词：多重剪接RNA结合蛋白克隆

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B7-H4实时荧光定量PCR检测方法的建立及其在人胃癌组织中的初步应用

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中国医药生物技术 2013年第2期8卷 81-87页

作者：王琦蒋敬庭魏文祥苏州大学医学部基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室 215123 苏州大学附属第三医院肿瘤生物诊疗中心常州213003

目的建立实时荧光定量PCR检测B7-H4的方法并初步应用于人胃癌组织。方法将B7-H4和内参GAPDH的PCR扩增产物经测序鉴定正确后克隆入载体pMD19－T，构建重组质粒标准品，并纯化、定量及梯度稀释，分别建立B7．H4和GAPDH的标准曲线，应用实... 详细信息

目的建立实时荧光定量PCR检测B7-H4的方法并初步应用于人胃癌组织。方法将B7-H4和内参GAPDH的PCR扩增产物经测序鉴定正确后克隆入载体pMD19－T，构建重组质粒标准品，并纯化、定量及梯度稀释，分别建立B7．H4和GAPDH的标准曲线，应用实时荧光定量PCR检测8例人胃癌组织中的B7一H4相对于GAPDH的表达情况。结果B7．H4的最低检测拷贝数为5．27拷贝，线性范围5．27×10^1～5．27×10^7拷贝，标准曲线方程Y=-3．1395X＋41．805，直线回归相关系数r=0．994904，批间变异系数范围2.39％～3．59％，扩增效率108．2％；GAPDH的最低检测拷贝数为38．6拷贝，线性范围3．86×10^2～3．86×10^7拷贝，标准曲线方程Y=-3．2436x＋41．083，直线回归相关系数r=0．998913，批间变异系数范围2．26％～3．86％，扩增效率103．4％。8例人胃癌组织的B7．H4相对于GAPDHmRNA表达水平在0．044～0．888之间。结论荧光定量PCR检测B7．H4的方法具备较高的敏感性和特异性，且系统有良好的重复性和线性范围。

关键词：胃肿瘤实时荧光定量PCR B7-H4

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腺病毒载体介导IL-24基因对肺癌细胞的化疗增敏效应

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苏州大学学报（医学版） 2012年第3期32卷 322-325页

作者：李畅赵军李印梁光辉盛伟华杨吉成苏州大学附属第一医院心胸外科江苏苏州215006 河南省肿瘤医院胸外科河南郑州450052 苏州大学医学部基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室江苏苏州215123

目的研究携带人IL-24基因腺病毒载体(Ad-IL-24)联用顺铂(DDP)对人非小细胞肺癌NCI-H460细胞生长和凋亡的影响。方法取对数生长期的NCI-H460细胞,MTT比色法检测Ad-IL-24联合DDP对细胞生长的影响,流式细胞仪分析细胞周期及检测细胞凋亡率... 详细信息

目的研究携带人IL-24基因腺病毒载体(Ad-IL-24)联用顺铂(DDP)对人非小细胞肺癌NCI-H460细胞生长和凋亡的影响。方法取对数生长期的NCI-H460细胞,MTT比色法检测Ad-IL-24联合DDP对细胞生长的影响,流式细胞仪分析细胞周期及检测细胞凋亡率。结果 Ad-IL-24联合DDP对NCI-H460细胞的生长抑制作用和诱导凋亡效应均明显优于单用Ad-IL-24和单用化疗药物DDP,且G2/M期细胞比例显著增加(P<0.05或<0.01)。结论 Ad-IL-24能提高NCI-H460肺癌细胞对化疗药物DDP的敏感性。

关键词：腺病毒人白细胞介素-24 肺癌基因治疗顺铂

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Ad-LIF-OSM双基因转染饲养细胞对脐血造血细胞体外增殖和分化的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2011年第10期31卷 865-869页

作者：包婉蓉郁心盛伟华张凤娟王家融杨吉成缪竞诚苏州大学医学部基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室 215123

目的构建表达人白血病抑制因子（LIF）和抑瘤素M（OSM）双基因的WI-38人胚肺成纤维细胞，并以此细胞作为饲养层细胞观察其对CD34造血干／祖细胞体外增殖和分化的影响。方法以双启动子转移载体pAdTrack-CMV-LIF-polyA＋promoter。为基础... 详细信息

目的构建表达人白血病抑制因子（LIF）和抑瘤素M（OSM）双基因的WI-38人胚肺成纤维细胞，并以此细胞作为饲养层细胞观察其对CD34造血干／祖细胞体外增殖和分化的影响。方法以双启动子转移载体pAdTrack-CMV-LIF-polyA＋promoter。为基础，将OSM基因片段酶切后插入，构建出转移质粒pAdTrack-CMV-LIF-polyA＋promoter。OSM。将构建正确的转移质粒与腺病毒骨架质粒共转化，获得重组腺病毒载体pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-LIF-polyA＋promoter。OSM，通过包装，收获重组腺病毒（Ad-LIF-OSM）。将重组腺病毒感染饲养层细胞，经***、ELISA法检测外源基因在细胞中的表达；体外与CD34造血干／祖细胞共培养后，通过Transwell法和细胞计数检测，比较各实验组干／祖细胞体外扩增与分化情况。结果测序结果显示重组载体中的LIF和OSM基因序列正确；转基因饲养层细胞中能检测到外源LIF和OSM基因的转录和表达；外源LIF和OSM基因在造血干／祖细胞体外培养中能够发挥作用。结论成功构建携带人LIF和OSM的双基因重组腺病毒载体（Ad-LIF-OSM），***在造血干／祖细胞体外培养的过程中能够有效地扩增CD34造血干／祖细胞，并延缓其分化。

关键词：腺病毒白血病抑制因子抑瘤素M 共表达载体造血干/祖细胞

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核受体相关因子1基因过表达诱导神经干细胞分化为多巴胺能神经元

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解剖学报 2011年第2期42卷 159-163页

作者：谭雪锋田美玲金国华秦建兵朱蕙霞张蕾李浩明苏州大学医学部基础医学与生物科学学院苏州215123 南通大学医学院人体解剖学教研室神经生物学研究所江苏南通226001

目的探讨核受体相关因子1(Nurr1)基因对大鼠中脑神经干细胞(NSCs)体外诱导分化为多巴胺能神经元的作用。方法通过基因重组技术构建pEGFP-N1-Nurr1真核表达载体,用电穿孔法将重组质粒转染第3代NSCs,用荧光显微镜观察转染效率,免疫印迹法... 详细信息

目的探讨核受体相关因子1(Nurr1)基因对大鼠中脑神经干细胞(NSCs)体外诱导分化为多巴胺能神经元的作用。方法通过基因重组技术构建pEGFP-N1-Nurr1真核表达载体,用电穿孔法将重组质粒转染第3代NSCs,用荧光显微镜观察转染效率,免疫印迹法检测基因表达效果;并对转染后的NSCs进行体外分化培养3周,用免疫荧光双标技术检测酪氨酸羟化酶(TH)和微管相关蛋白-2(MAP-2)的表达。结果电穿孔法转染NSCs48h后转染效率达35%,1周后免疫印迹法检测到Nurr1蛋白高表达,约为对照组的5倍;Nurr1基因转染的NSCs分化为TH阳性神经元的比率为15.45%,明显高于对照组,而MAP-2阳性神经元数量与对照组相似。结论 Nurr1基因过表达可以诱导NSCs向TH阳性的多巴胺能神经元分化。

关键词：核受体相关因子1 神经干细胞多巴胺能神经元分化细胞培养大鼠

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1,25-(OH)_2D_3对1型糖尿病小鼠主要脏器的保护作用

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苏州大学学报（医学版） 2011年第5期31卷 713-717页

作者：周正宇吴淑燕李新寅薛智谋童建苏州大学医学部实验动物中心江苏苏州215123 苏州大学医学部基础医学与生物科学学院病原生物学系江苏苏州215123 苏州大学医学部公共卫生学院卫生毒理学教研室江苏苏州215123

目的研究1,25-(OH)2D3对1型糖尿病(T1DM)小鼠的作用及可能机制。方法 40 mg/kg STZ腹腔注射C57BL/6小鼠连续5 d建立T1DM模型,5μg/kg 1,25-(OH)2D3隔日腹腔注射,监测血糖、体质量、饮水及饲料消耗,分析各脏器的病理及超微结构。结果 1,2... 详细信息

目的研究1,25-(OH)2D3对1型糖尿病(T1DM)小鼠的作用及可能机制。方法 40 mg/kg STZ腹腔注射C57BL/6小鼠连续5 d建立T1DM模型,5μg/kg 1,25-(OH)2D3隔日腹腔注射,监测血糖、体质量、饮水及饲料消耗,分析各脏器的病理及超微结构。结果 1,25-(OH)2D3治疗14 d后,T1DM小鼠的血糖、饮食、饮水量显著下降(均P<0.05);1,25-(OH)2D3可减轻胰岛炎症状及各脏器的超微结构病变,诱导淋巴细胞的凋亡,并在胰腺中可见典型自噬现象。结论 1,25-(OH)2D3可诱导胰腺细胞的自噬,同时诱导淋巴细胞凋亡,从而减轻T1DM症状。

关键词：糖尿病 1,25-(OH)2D3 自噬

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脐血CD34+造血干/祖细胞在再生丝素膜上向内皮细胞分化的研究

脐血CD34+造血干/祖细胞在再生丝素膜上向内皮细胞分化的研究

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2011 International Conference on Biomedicine and Engineering

作者：陈瑶田丽娜张晓峰盛伟华韩亚丽刘铁连杨吉成缪竞诚苏州大学医学部基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室

目的:以人脐血CD34造血干/祖细胞为种子细胞,探讨其体外分离、纯化、诱导扩增和分化为内皮细胞的可行性,以及丝素材料对其生长、粘附、分化等情况的影响。方法:采集新鲜脐血,磁珠分选方法（MACS）分离出CD34单个核细胞,分别接种到再生... 详细信息

目的:以人脐血CD34造血干/祖细胞为种子细胞,探讨其体外分离、纯化、诱导扩增和分化为内皮细胞的可行性,以及丝素材料对其生长、粘附、分化等情况的影响。方法:采集新鲜脐血,磁珠分选方法（MACS）分离出CD34单个核细胞,分别接种到再生丝素膜（SF）和明胶包被的培养皿上,用含有内皮细胞生长因子（VEGF）和纤维细胞生长因子（bF GF）的M199培养基诱导分化,并比较不同材料上D34细胞的贴壁率及向内皮细胞分化比率。结果:细胞形态学观察发现,SF组和明胶组CD34细胞培养2周细胞长满瓶底并达到增殖高峰,细胞呈"铺路石"状排列;经诱导培养10d后,SF组和明胶组内皮细胞表型CD31阳性率分别为（75.53±4.89）%和（74.59±3.58）%,培养14d后,两组细胞vW F阳性率均可达80%以上;透射电镜两组细胞胞浆内均可见内皮细胞的Weibel-Palade小体;CD34+细胞在明胶和SF上均可较快贴壁,平均贴壁率为90.8%和85.2%,同时两组内皮细胞的分化比率均能达到60%以上,无明显差异。结论:脐血D34造血干/祖细胞在VEGF等细胞因子的诱导下有可能定向分化为内皮细胞,同时可用SF作为其向内皮细胞分化的支架材料,最终用于具有快速形成毛细血管网能力的组织化器官替代品。

关键词：脐血 CD34+造血干/祖细胞诱导分化内皮细胞丝素

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Ad-VEGF165-Ang-1转基因细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成效应及分子机制研究

Ad-VEGF165-Ang-1转基因细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成效应及...

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2011 International Conference on Biomedicine and Engineering

作者：陈瑶田丽娜张晓峰刘铁连韩亚丽盛伟华杨吉成缪竞诚苏州大学医学部基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室

目的:构建VEGF165及Ang-1双基因共表达腺病毒载体并研究该转基因细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成活性及其分子机制。方法:首先在科室已构建的IRES和双启动子介导的腺病毒空载体间分别插入Ang-1和VEGF165基因,由此构建出Ad-VEGF165-Pol... 详细信息

目的:构建VEGF165及Ang-1双基因共表达腺病毒载体并研究该转基因细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成活性及其分子机制。方法:首先在科室已构建的IRES和双启动子介导的腺病毒空载体间分别插入Ang-1和VEGF165基因,由此构建出Ad-VEGF165-PolyA-promoter-Ang-1、Ad-Ang-1-PolyA-promoter-VEGF165和Ad-VEGF165-IRES-Ang-1重组腺病毒载体。ELISA法检测比较IRES及PolyA-promoter二个不同载体中目的基因的表达;同时结合兔角膜缘注射病毒诱导血管新生的结果,挑选出一个最佳Ang-1与VEGF165双基因共表达腺病毒载体。将此最佳双基因共表达腺病毒感染在再生丝素膜上培养的兔骨髓基质细胞,用荧光显微镜、RT-PCR及ELISA法检测VEGF165及Ang-1基因在兔骨髓基质细胞中的转录和表达;转基因细胞修饰的再生丝素膜植入兔角膜层,检测角膜新生血管生长面积;HE染色及免疫组化法检测兔角膜层中血管密度及血管形成相关因子的表达。结果:(1)并成功获得了高效价的Ad-VEGF165-PolyA-promoter-Ang-1、Ad-Ang-1-PolyA-promoter-VEGF165和Ad-VEGF165-IRES-Ang-1重组病毒子。(2)ELISA法及兔角膜缘注射病毒法挑选与血管形成相关的最佳双基因腺病毒共表达载体Ad-VEGF165-PolyA-promoter-Ang-1。(3)培养于再生丝素膜上生长的兔骨髓基质细胞经上述挑选的病毒感染后,将该转基因细胞修饰的再生丝素膜植入兔角膜层,2周新生血管长入再生丝素膜植入区域的角膜内,新生血管维持1月以上,HE染色与免疫组化显示血管密度明显增多,CD34在兔角膜层中获得成功表达,与转Ad-GFP细胞修饰的再生丝素膜组和单纯再生丝素膜组比较呈显著性差异(P<0.05),由此证明Ad-VEGF165-PolyA-promoter-Ang-1转基因兔骨髓基质细胞修饰的丝素材料可促进血管生成。结论:成功构建并挑选出VEGF165和Ang-1最佳双基因共表达腺病毒载体,转VEGF165及Ang-1基因修饰的再生丝素膜有利于新生血管形成,为今后利用转基因种子细胞修饰的再生丝素膜,或构建诱导血管形成的生物膜材料提供了分子依据。

关键词：再生丝素膜血管生成素-1 血管内皮生长因子腺病毒转基因

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吞噬烟曲霉对巨噬细胞活性变化的影响

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苏州大学学报（医学版） 2011年第1期31卷 26-29,34页

作者：陶莎韩雪琳张称徐培君黄德辉韩黎苏州大学医学部基础医学与生物科学学院病原生物学教研室江苏苏州215123 中国人民解放军军事医学科学院疾病预防控制所医院感染监控中心北京100071 中国人民解放军总医院神经内科北京100853

目的研究烟曲霉对巨噬细胞吞噬能力及细胞活性的影响规律。方法通过免疫荧光法测定巨噬细胞吞噬烟曲霉后吞噬量的变化,同时利用MTT比色法测定巨噬细胞的细胞活性变化。结果在吞噬初期(20min),巨噬细胞吞噬乳胶颗粒的速度明显高于吞噬孢... 详细信息

目的研究烟曲霉对巨噬细胞吞噬能力及细胞活性的影响规律。方法通过免疫荧光法测定巨噬细胞吞噬烟曲霉后吞噬量的变化,同时利用MTT比色法测定巨噬细胞的细胞活性变化。结果在吞噬初期(20min),巨噬细胞吞噬乳胶颗粒的速度明显高于吞噬孢子(P<0.05),然而最终(70min)吞噬两种颗粒的能力无明显差异(P>0.05);巨噬细胞吞噬休眠孢子及热灭活孢子的量无显著差异(P>0.05);另外,休眠孢子、热灭活休眠孢子及膨胀孢子均可显著降低巨噬细胞的细胞活性(均P<0.05),而烟曲霉菌丝和乳胶颗粒对巨噬细胞的细胞活性无明显影响(P>0.05)。无色素的烟曲霉白化株休眠孢子不能使巨噬细胞活性降低(P>0.05)。结论烟曲霉孢子表面色素可能是降低巨噬细胞活性的影响因素。

关键词：烟曲霉巨噬细胞细胞活性

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