检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物化学与分子生物学报 2019年第1期35卷 51-60页

作者：王梦汝沈莹李园园王宜强苏州大学医学部苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所卫生部血栓与止血重点实验室江苏苏州215006

基质重塑相关7(matrix remodeling associated 7,MXRA7)基因于2002年被命名,但无论在人类或其他动物体系,该基因或其蛋白质产物的功能均未知。直至我们最近的研究表明,该基因可能参与眼睛发育或肝损伤及修复。在本研究中,应用酵母双杂... 详细信息

基质重塑相关7(matrix remodeling associated 7,MXRA7)基因于2002年被命名,但无论在人类或其他动物体系,该基因或其蛋白质产物的功能均未知。直至我们最近的研究表明,该基因可能参与眼睛发育或肝损伤及修复。在本研究中,应用酵母双杂交策略,用小鼠MXRA7诱饵载体对小鼠肝cDNA文库进行筛选,发现23种蛋白质(MUP1, Cpt1a, Mat1a, aldh1l1, Cytb, H2-K1, Psmb1, marc2, Atp5j2, Sec24D, Trf, Rdh7, Apoe, Glud1, Gmfb, Alb, Hdlbp, Pzp, Etnk2, Nrn1, Serpina1a, Apoa2, GNMT)可能直接或间接地与MXRA7蛋白发生相互作用。其中,主要尿蛋白1(major urinary protein,MUP1)或其同家族蛋白质占所有候选克隆的1/6,提示其很可能是小鼠肝内与MXRA7蛋白有较强相互作用的蛋白质。通过基因重组在Hepa 1-6肝癌细胞系中同时过表达MXRA7和MUP1蛋白,荧光染色证明这两种蛋白质在细胞内共定位,应用抗MXRA7或MUP1的抗体进行Pull-down检测,则证明二者共同存在于细胞裂解液中。另外,重组MXRA7蛋白和MUP1蛋白在无任何其他蛋白质的缓冲液体系中直接形成复合体。因此,至少在小鼠肝组织体系中,MXRA7蛋白可能通过与MUP1等蛋白质的相互作用而发挥作用。

关键词：基质重塑相关7(MXRA7 肝主要尿蛋白1(MUP1 酵母双杂交

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C-kit、NPM1、FLT3基因突变在656例中国急性髓系白血病患者中的分布及其对预后的影响

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中华血液学杂志 2012年第10期33卷 829-834页

作者：丁子轩沈宏杰缪竞诚陈苏宁邱桥成祁小飞金正明吴德沛何军苏州大学附属第一医院、江苏省血液研究所卫生部血栓与止血重点实验室 215006 苏州大学医学部基础医学与生物科学学院

目的探讨急性髓系白血病（AML）患者中C—kit、NPM1、FLT3基因突变的发生率和分布情况，并分析其对预后的影响。方法应用基因测序方法分别检测656例AML患者***基因8、17号外显子，NPM1基因12号外显子，FLT3基因20（酪氨酸激酶区，TKD）... 详细信息

目的探讨急性髓系白血病（AML）患者中C—kit、NPM1、FLT3基因突变的发生率和分布情况，并分析其对预后的影响。方法应用基因测序方法分别检测656例AML患者***基因8、17号外显子，NPM1基因12号外显子，FLT3基因20（酪氨酸激酶区，TKD）、14、15号外显子（内部串联重复，ITD）基因突变情况，并随访患者的预后。结果656例AML患者中检出C—kit基因8号外显子突变6例（0．9％），17号外显子突变33例（5．0％），NPM1基因突变169例（25．8％），***突变46例（7．1％），FLT3-ITD突变178例（27．1％）。至少有1个突变的患者341例（50．3％）。C—kit的8号外显子检测到6种突变类型；C—kit的17号外显子检测到8种突变类型；NPMI检测到15种突变类型，其中10种类型已有报道（A、B、C、D、Nm、I、J、J＋、S、13），5种类型未见报道；TKD检测到11种突变类型。t（8；21）／M：患者常伴有C—kit的17号外显子突变；inv（16）／M。患者常伴有C—kit的8号外显子突变；M3患者中除FLT3基因突变外未检测到其他突变。NPM1和ITD基因突变多见于正常核型患者，在形态学亚型中多见于M5和M1，阳性病例多伴随高白细胞计数、骨髓原始细胞增多、CD34低表达和CD33高表达。随着发病年龄的增长，突变数量增多，白细胞计数平均值增高，高白细胞计数的患者比例升高。在正常核型的群体中突变阳性的比例较其他群体增高，2种、3种突变的比例增多，差异均有统计学意义（P值均〈0．01）。FLT3-ITD突变阳性病例中位生存时间（10．0±1．2）个月，与阴性群体中位生存时间（17．0±2．4）个月相比差异有统计学意义（P=0．004），单独NPM1突变与否对总生存率没有显著影响，但NPM1／ITD-患者的总生存率最高。结论c—kit、NPM1、FLT3基因突变类型及数量在MICM分型中都有特殊的分布，并与白细胞计数、骨髓原始细胞数和预后均有相关性。对染色体核型正常的患者，基因突变可作为判断预后新的分子标志。

关键词：白血病非淋巴细胞急性 DNA突变分析预后基因 c—kit

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多供体造血干细胞移植术后的嵌合率定量检测

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中国实验血液学杂志 2013年第2期21卷 436-440页

作者：冯宇锋张翔陈广华徐杨龚斐然朱子玲戴丽君宋铁梅周佳子唐晓文常惠荣缪竞诚吴德沛苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所卫生部血栓与止血重点实验室江苏苏州215006 苏州大学医学部基础医学与生物科学学院江苏苏州215124

本研究旨在建立检测多供体造血干细胞移植术后供体细胞嵌合率(DD-CHM%)的计算模型并简化计算方法。以接受异基因造血干细胞移植的血液系统疾病患者为研究对象,采用STR-PCR结合毛细管电泳的方法,检测移植术后供体细胞嵌合率。结果表明:... 详细信息

本研究旨在建立检测多供体造血干细胞移植术后供体细胞嵌合率(DD-CHM%)的计算模型并简化计算方法。以接受异基因造血干细胞移植的血液系统疾病患者为研究对象,采用STR-PCR结合毛细管电泳的方法,检测移植术后供体细胞嵌合率。结果表明:在混合嵌合状态下,同一个体来源的等位基因的双峰面积和高度是近似的,可以互相替代;对构建的计算模型中各等位基因的峰面积进行赋值,得到的嵌合率准确值和近似值在可接受的计量系统自身误差范围内(5%-20%)是基本没有差异的。结论:在混合嵌合状态下,来自于同一个体的等位基因在STR位点上的非共享峰是可以替代共享峰面积,此设想可以用作于计算多供体造血干细胞移植术后嵌合率的检测;在计算位点选择上,受体位点的选择比供体位点选择更为重要,能更加有效的简化计算步骤,并能更准确的得到供体细胞嵌合率的结果。

关键词：异基因造血干细胞移植多供体嵌合率共享峰

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Zyxin在调节血小板细胞骨架蛋白分布中的作用

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中国实验血液学杂志 2021年第3期29卷 876-880页

作者：成斌闫荣张素勤杨梦楠戴克胜苏州大学医学部江苏省血液研究所苏州大学附属第一医院血液学协同创新中心放射医学与防护国家重点实验室卫生部血栓与止血重点实验室江苏苏州215006

目的:探讨斑联蛋白(zyxin)对血小板细胞骨架分布的调节作用。方法:分别取zyxin基因敲除(Zyx^(-/-))和野生型(WT)小鼠的血小板,分离血小板细胞骨架组分,应用Western blot分别检测细胞骨架组分中β-actin、α-actinin、filamin A及myosin... 详细信息

目的:探讨斑联蛋白(zyxin)对血小板细胞骨架分布的调节作用。方法:分别取zyxin基因敲除(Zyx^(-/-))和野生型(WT)小鼠的血小板,分离血小板细胞骨架组分,应用Western blot分别检测细胞骨架组分中β-actin、α-actinin、filamin A及myosinⅡA的表达;肌动蛋白聚合诱导剂(Jasplakinolide,Jas)诱导血小板肌动蛋白聚合,同法检测WT和Zyx^(-/-)小鼠血小板细胞骨架组分中相关骨架蛋白的表达;将WT和Zyx^(-/-)小鼠血小板于纤维蛋白原表面进行铺展,用Alexa Fluor 488偶联的鬼笔环肽标记肌动蛋白丝,比较WT和Zyx^(-/-)小鼠血小板荧光强度。结果:Zyxin基因敲除后,血小板主要细胞骨架蛋白β-actin、α-actinin、filamin A及myosinⅡA在静息以及Jas诱导的血小板细胞骨架组分中的含量较WT小鼠血小板明显增多。在纤维蛋白原表面铺展的血小板中,Zyx^(-/-)小鼠血小板肌动蛋白丝含量较WT小鼠血小板增多。结论:Zyxin显著调节血小板细胞骨架分布,在维持血小板细胞骨架稳态中起着重要作用。

关键词：斑联蛋白血小板细胞骨架小鼠

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血小板铺展的主要影响因素

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中国实验血液学杂志 2022年第3期30卷 919-923页

作者：袁柳霞叶红磊杨梦楠葛鑫鑫闫荣戴克胜苏州大学医学部江苏省血液研究所苏州大学第一附属医院卫生部血栓与止血重点实验室放射医学与防护国家重点实验室血液学协同创新中心江苏苏州215006

目的:探索血小板铺展的主要影响因素,为相关疾病研究奠定基础。方法:体外分离C57BL/6J小鼠的血小板(2×10^(7)/ml),室温静置1-2 h后,将血小板样本均匀的铺在纤维蛋白原包被的载玻片上,利用鬼笔环肽标记骨架蛋白F-actin,封片后通过... 详细信息

目的:探索血小板铺展的主要影响因素,为相关疾病研究奠定基础。方法:体外分离C57BL/6J小鼠的血小板(2×10^(7)/ml),室温静置1-2 h后,将血小板样本均匀的铺在纤维蛋白原包被的载玻片上,利用鬼笔环肽标记骨架蛋白F-actin,封片后通过荧光共聚焦显微镜观察血小板铺展状态,分析不同浓度的纤维蛋白原和激动剂等因素对血小板铺展的影响。实验中纤维蛋白原浓度为10、30和100μg/ml,激动剂为凝血酶(0.01、0.05和0.1 U/ml)、ADP(5、10和20μmol/L)和U46619(0.125、0.25和0.5μmol/L)。若激动剂处理后的血小板呈树突状并且铺展率较高,则说明血小板铺展的方法构建成功。结果:与10和100μg/ml的纤维蛋白原组相比,在包被了30μg/ml纤维蛋白原的载玻片上粘附的血小板数目最优;另外,在凝血酶、ADP和U46619的刺激下,血小板铺展与刺激剂浓度呈正相关(ADP:r=0.925,U46619:r=0.937)。结论:血小板的铺展受到很多因素的影响,30μg/ml的纤维蛋白原、0.1 U/ml的凝血酶、20μmol/L的ADP和0.5μmol/L的U46619可成功诱导2×10^(7)/ml血小板的铺展。

关键词：粘附纤维蛋白原整合素铺展

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实时荧光定量-PCR检测Notch信号通路相关分子在急性T淋巴细胞白血病中的表达

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肿瘤 2009年第5期29卷 433-437页

作者：周亚南陈子兴小池健一坂下一夫岑建农姚莉苏州大学附属第一医院江苏省血液病研究所卫生部血栓与止血重点实验室苏州215006 日本国立信州大学医学部附属医院儿科松本日本

目的:检测Notch信号通路相关分子在急性T淋巴细胞白血病(T cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)中的表达,并探讨其在T-ALL中的致病机制。方法:采用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)法检测了15例初诊的T-ALL患者的骨髓和11例正常骨髓移植供者细胞中Notch1、Notch2,Notch信号配体分子Jagged1、Delta1,Notch信号途径效应分子Hes1及内参GAPDH的表达水平。结果:T-ALL组患者的骨髓中Notch1的均数表达水平明显高于健康供体组,分别为15105.3±5961.3和1735.5±936.6(P=0.002);Jagged1的表达水平在T-ALL组明显低于健康供体组,分别为231.6±78.4和2192.3±971.6,差异有统计学意义(P=0.000)。Notch2、Delta1和Hes1的表达水平在T-ALL组分别为63067.8±9437.5、368.2±142.5和252.7±94.2,健康供体组为52078.2±8476.3、2189.8±802.3和1006.2±806.0(P值分别为0.452、0.752和0.561),差异无统计学意义;T-ALL组、健康供体组中Notch1和Notch2的表达差异均无统计学意义。结论:Notch1在T-ALL中高表达,而Jagged1在T-ALL则为中低表达,提示T-ALL发病与异常与Notch1信号通路有关;而Notch2与Notch1的表达并不平行。

关键词：白血病,淋巴细胞,急性受体,Notch 反转录聚合酶链反应

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蛋白激酶A活化对血小板聚集功能的影响

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中国实验血液学杂志 2020年第3期28卷 899-903页

作者：江梦枭刘俊周康熙叶红磊胡仁萍闫荣阮长耿戴克胜苏州大学医学部江苏省血液学研究所、苏州大学第一附属医院血液学协同创新中心放射医学与防护国家重点实验室卫生部血栓与止血重点实验室江苏苏州215006

目的:研究蛋白激酶A(Protein kinase A,PKA)对体外血小板聚集功能的影响。方法:收集健康成年人外周血并获取洗涤血小板;采用PKA活化剂Forskolin体外处理洗涤血小板;利用瑞斯托霉素(Ristocetin),凝血酶(Thrombin),胶原(Collagen),二磷酸... 详细信息

目的:研究蛋白激酶A(Protein kinase A,PKA)对体外血小板聚集功能的影响。方法:收集健康成年人外周血并获取洗涤血小板;采用PKA活化剂Forskolin体外处理洗涤血小板;利用瑞斯托霉素(Ristocetin),凝血酶(Thrombin),胶原(Collagen),二磷酸腺苷(ADP)诱导血小板聚集,利用血小板聚集仪检测血小板聚集情况。结果:与对照组相比较,5μmol/L的Forskolin可显著抑制ADP和Collagen诱导的血小板聚集(P<0.001);对Thrombin诱导的血小板聚集也具有一定抑制作用(P<0.05)。而2.5-10μmol/L的Forskolin对Ristocetin诱导的血小板聚集无明显抑制作用(P>0.05);对ADP和Collagen诱导的血小板聚集也具有显著抑制作用(P<0.001)。结论:蛋白激酶A活化能抑制血小板的聚集功能。

关键词：血小板聚集蛋白激酶A 诱导剂

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不同浓度PKA抑制剂对血小板凋亡的诱导作用及机制

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中国实验血液学杂志 2020年第5期28卷 1694-1698页

作者：张素勤赵丽丽成斌戴克胜苏州大学医学部江苏省血液学研究所、苏州大学第一附属医院血液学协同创新中心放射医学与防护国家重点实验室卫生部血栓与止血重点实验室江苏苏州215006

目的:探讨不同浓度PKA抑制剂H89对血小板凋亡的诱导作用和机制。方法:取健康志愿者外周静脉血分离血小板,选择不同浓度梯度的PKA抑制剂H89与经洗涤的血小板共同孵育,应用酶联免疫吸附试验、流式细胞术等检测不同浓度PKA抑制剂H89对血小... 详细信息

目的:探讨不同浓度PKA抑制剂H89对血小板凋亡的诱导作用和机制。方法:取健康志愿者外周静脉血分离血小板,选择不同浓度梯度的PKA抑制剂H89与经洗涤的血小板共同孵育,应用酶联免疫吸附试验、流式细胞术等检测不同浓度PKA抑制剂H89对血小板线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,Δψm)、磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)和活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的影响。结果:不同浓度PKA抑制剂H89均能诱导血小板发生Δψm去极化和PS暴露,但高浓度(100μmol/L)PKA抑制剂H89可诱导血小板产生ROS,而中低浓度则不会诱导血小板内ROS的产生,并且多种ROS抑制剂均可抑制高浓度H89诱导的凋亡。结论:高浓度的PKA抑制剂H89能诱导血小板凋亡,但是作用机制不同于中低浓度。

关键词：血小板凋亡活性氧

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人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab抗体的研制及其对血小板聚集功能的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第1期25卷 65-67页

作者：董宁征崔宇杰阮长耿苏州大学附属第一医院、江苏省血液研究所、卫生部血栓与止血重点实验室江苏苏州215006 天津医科大学医学检验系天津300020

目的:构建人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPI-Ib/IIIa)Fab噬菌体抗体库,筛选抗GPⅡb/Ⅲa特异性的噬菌体抗体,并对其功能进行研究。方法:取血小板膜糖蛋白抗体(抗GPIIb/IIIa)阳性的特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者脾细胞,采用噬菌体抗... 详细信息

目的:构建人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPI-Ib/IIIa)Fab噬菌体抗体库,筛选抗GPⅡb/Ⅲa特异性的噬菌体抗体,并对其功能进行研究。方法:取血小板膜糖蛋白抗体(抗GPIIb/IIIa)阳性的特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者脾细胞,采用噬菌体抗体库技术构建人源性抗GPⅡb/Ⅲa Fab噬菌体抗体库,以表达GPⅡb/Ⅲa的CHO123细胞筛选抗体库,并以ELISA法检测噬菌体抗体;用Western blot对抗体进行鉴定,并测定其与血小板抗原的结合;观察筛选到Fab抗体对血小板聚集的影响。结果:筛选出2株能够与血小板膜GPⅡb/Ⅲa特异性结合的Fab抗体,其序列与人免疫球蛋白轻、重链可变区序列具有高度同源性,表达纯化的Fab抗体能抑制血小板聚集。结论:成功地从人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab抗体库筛选出特异性识别GPⅡb/Ⅲa,具有抑制血小板聚集作用的人源性抗体。

关键词：血小板膜糖蛋白IIb/IIIa 噬菌体展示 Fab 血小板聚集

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5-氟尿嘧啶诱导的造血损伤中骨髓基质重建相关基因的表达及其意义

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中国实验血液学杂志 2015年第3期23卷 848-851页

作者：赵路吴坤宁金玲王婷沈莹胡雅彬邵联波李园园王宜强沈若武青岛大学医学院解剖学教研室山东青岛266071 苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所卫生部血栓与止血重点实验室江苏苏州215007

目的:探究胞外基质重建相关基因在氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)诱导的造血损伤重建中的表达及其意义。方法:采用C57BL/6小鼠腹腔注射5-FU(200 mg/kg)建立造血损伤模型。注射后3、6、9、15、21、27 d常规检测外周血象;在相同时间点用TR... 详细信息

目的:探究胞外基质重建相关基因在氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)诱导的造血损伤重建中的表达及其意义。方法:采用C57BL/6小鼠腹腔注射5-FU(200 mg/kg)建立造血损伤模型。注射后3、6、9、15、21、27 d常规检测外周血象;在相同时间点用TRIzol法提取骨髓总RNA,反转录后以实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测胞外基质重建相关基因的mRNA水平,包括细胞外基质(ECM-1)、明胶酶(MMP-2)、基质降解素(MMP-3)、胶原酶(MMP-13)、组织金属酶抑制剂(TIMP-1)基因。结果:小鼠经5-FU注射后外周血出现典型的造血损伤与修复过程,且红细胞、白细胞、血小板损伤修复的动态不同;RT-q PCR显示在5-FU损伤期骨髓胞外基质重建相关基因的表达均显著上调,MMP-2在注射5-FU后第3天时表达最高,MMP-3、MMP-13、TIMP-1、ECM-1在第6天表达最高;MMP-3在骨髓中表达较低,但损伤后上升幅度最大。结论:在5-FU建立的骨髓造血损伤模型中,胞外基质重建相关基因可能参与造血损伤和随后骨髓基质的重构过程,且不同基因发挥的时段和作用对象不同,但彼此协同为造血损坏后重建奠定基础。

关键词： 5-氟尿嘧啶造血损伤细胞外基质 MMP TIMP-1

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