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华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会

作者：杭赛宇胡鹤娟朱燕马震宇闫石吴士良苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室生化工程研究所苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室生化工程研究所苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室生化工程研究所苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室生化工程研究所苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室生化工程研究所苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室生化工程研究所

为了研究人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)蛋白表达的亚细胞结构定位,制备特异性抗体。我们联合应用了多种方法对多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2的二级结构和表面特性进行了细致地分析,发现其优势抗原表位均位于蓖麻样结... 详细信息

为了研究人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)蛋白表达的亚细胞结构定位,制备特异性抗体。我们联合应用了多种方法对多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2的二级结构和表面特性进行了细致地分析,发现其优势抗原表位均位于蓖麻样结构域中;进一步采用了RT-PCR方法克隆到蓖麻样结构域cDNA片段,将获得的蓖麻样结构域cDNA片段定向插入到表达载体PGEX-5X-3中,且导入大肠杆菌,诱导表达,获重组融合蛋白;将得到的重组融合蛋白免疫新西兰大白兔,我们获得了兔抗人ppGalNAc-T2的多克隆抗体,并进行ELISA法检测抗体效价,抗体滴度为1:3200,并进行了有效性检测;蛋白质印迹实验证实此多克隆抗体具有较好的反应性和特异性。通过荧光免疫细胞化学进行亚细胞定位,发现ppGalNAc-T2主要表达在细胞核旁的Golgi复合体,说明它们主要分布在Golgi复合体上,证实它们是在Golgi复合体参与蛋白质的糖链修饰。本文特异性扩增和表达蓖麻样结构域并制备了抗体,有利于进一步阐明RICIN结构域的功能,为研究多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2及其家族的结构和功能打下基础。

关键词：多肽 N-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAc-T) 抗原表位抗体亚细胞定位

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挤压家兔后肢导致急性肝损伤和抗氧化能力降低

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法医学杂志 2006年第4期22卷 248-250页

作者：韩业兴谷振勇丛斌岑新海刘东旭刘晓苏州大学医学院法医学教研室江苏苏州215123 河北医科大学法医学系河北石家庄050017 张家口市公安局刑警支队河北张家口075000

目的本实验观察挤压家兔后肢导致肝氧化损伤,探讨氧化应激在挤压家兔后肢导致肝损伤中的作用。方法用标准重物间断压迫家兔后肢复制模型。采用生化方法检测ALT和AST活性;分析天平称重方法检测肝脏湿干重比值(W/D);比色法测定肝组织超氧... 详细信息

目的本实验观察挤压家兔后肢导致肝氧化损伤,探讨氧化应激在挤压家兔后肢导致肝损伤中的作用。方法用标准重物间断压迫家兔后肢复制模型。采用生化方法检测ALT和AST活性;分析天平称重方法检测肝脏湿干重比值(W/D);比色法测定肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和总抗氧化能力(T-AOC)以及丙二醛(MDA)含量变化;并观察肝组织病理学改变。结果血清ALT和AST活性明显增高(P<0.01),肝细胞明显肿胀,肝窦轻度淤血,而肝脏湿干重比值(W/D)轻度增加(P<0.05);肝脏氧化损伤明显加重,MDA含量增高,而肝脏抗氧化能力下降,SOD、CAT、GSH-Px活性和T-AOC分别比对照组降低了17%、29%、24%和21%(P均<0.01)。结论挤压家兔后肢引起急性肝损伤及肝脏的抗氧化能力下降;肝脏局部抗氧化能力下降可能是肝损伤的重要因素。

关键词：肝脏氧化应激抗氧化能力挤压伤

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人类β3-半乳糖基转移酶基因β3GALT7的克隆、表达及功能的初步研究

人类β3-半乳糖基转移酶基因β3GALT7的克隆、表达及功能的初步研...

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华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会

作者：吴艳孙其昌周嘉良吴士良苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室苏州大学生化工程研究所苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室苏州大学生化工程研究所苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室苏州大学生化工程研究所苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室苏州大学生化工程研究所

β3GALT7(AY277592,EC2．4．1-)基因是我们实验室利用TBLASTN信息途径,以β3GALT1为信息探针进行同源帅选后从人肺cDNA文库中克隆到的人类β3-半乳糖基转移酶家族的一个新成员。 Northern杂交显示其在肺、喉和回肠组织中高表达而在舌、... 详细信息

β3GALT7(AY277592,EC2．4．1-)基因是我们实验室利用TBLASTN信息途径,以β3GALT1为信息探针进行同源帅选后从人肺cDNA文库中克隆到的人类β3-半乳糖基转移酶家族的一个新成员。 Northern杂交显示其在肺、喉和回肠组织中高表达而在舌、乳房、子宫等组织中表达较低。为了进一步认知该酶的功能,我们进行了一些探索性的研究。方法:通过原核表达系统表达β3GALT7蛋白,以纯化的β3GALT7蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并用Western Blot和免疫组化的方法分析其在多种组织和细胞中的表达情况;通过荧光免疫细胞化学的方法进行亚克隆定位;克隆β3GALT7编码区的基因并构建其真核正义和反义表达载体,并运用脂质体介导将此重组载体转染中度表达该基因的人 SGC7901细胞株,和较高表达β3GALT7的A549细胞株,并通过荧光显微镜,激光共聚焦显微镜,RTPCR, western印迹等方法对其进行了初步的功能研究。结果:获得了较纯的β3GALT7表达蛋白和高效价、高特异性的抗β3GALT7的多克隆抗体,免疫组化显示肿瘤细胞和组织中该酶有较高的表达,与正常组织比较具有一定的差异,亚克隆定位显示β3GALT7大部分位于核膜周围的胞浆。同时获得了β3GALT7的正义、反义的真核重组质粒及稳定转染了这些重组质粒的细胞株,发现转染了正义质粒的 SGC7901细胞其β3GALT7蛋白表达水平增加,MMP2、MMP14的蛋白表达水平随其亦有所上升,而转染了反义β3GALT7的A549细胞其MMP2和MMP14的蛋白表达量随着β3GALT7的被抑制而成正相关下降,提示β3GALT7可能与肿瘤的发生、发展和转移具有一定的相关性。

关键词：半乳糖基转移酶 β3GALT7 多克隆抗体免疫组化原核表达真核表达

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多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族在不同发育阶段的小鼠脑中的mRNA表达差异

多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族在不同发育阶段的小鼠脑中的mRN...

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华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会

作者：胡鹤娟杨静杭赛宇吴士良苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室生化工程研究所苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室生化工程研究所苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室生化工程研究所苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室生化工程研究所

目的:为了观察三个不同发育阶段的小鼠脑中多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族(polypeptide: N-acetylgalactosaminytransferase,ppGalNAc-T)的表达差异,以探讨多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族在脑发育中的功能与作用;方法:取不同发育阶... 详细信息

目的:为了观察三个不同发育阶段的小鼠脑中多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族(polypeptide: N-acetylgalactosaminytransferase,ppGalNAc-T)的表达差异,以探讨多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族在脑发育中的功能与作用;方法:取不同发育阶段(即孕末期,新生期,4周龄)的小鼠各六只, 取脑组织后,我们采用半定量逆转录PCR方法从mRNA水平上粗略地研究了多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族在三个发育阶段的表达情况,以β-actin作为内对照,计算酶家族各成员的相对表达量,从而进行半定量分析;结果:我们发现三个不同发育阶段的小鼠脑中此酶家族的表达谱是不尽相同的。 T1、T2、T3、T4、T9、T10、T13、T14稳定表达,T3、T4、T9、T10在胎鼠中表达较高,在新生鼠和4周龄鼠中表达较低,且在新生鼠和4周龄鼠中的表达基本相同,T1、T2、T14等在各发育阶段鼠脑中表达基本无变化;结论:我们初步认为在小鼠脑的发育过程中多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族的表达有一定的变化,在今后的实验中,将在时间点及脑分区,即时空性表达方面,作更进一步地完善细致的研究, 进一步推动多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族在神经系统发育方面的研究工作,以探讨多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族在脑发育中的功能与作用

关键词： ppGalNAc-T 小鼠脑表达 RT-PCR

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人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族分子进化的初步研究

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江苏大学学报（医学版） 2006年第2期16卷 105-108页

作者：杭赛宇吴士良苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室江苏苏州215123 苏州大学生化工程研究所江苏苏州215123

目的:探讨人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族成员间的同源性,揭示其进化规律。方法:采用生物信息学软件和网上数据库对核酸蛋白质序列进行同源比较,结构域分析和进化树绘制。结果:人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族一级结构、二... 详细信息

目的:探讨人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族成员间的同源性,揭示其进化规律。方法:采用生物信息学软件和网上数据库对核酸蛋白质序列进行同源比较,结构域分析和进化树绘制。结果:人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族一级结构、二级结构均有较高的同源性,系统进化树显示各成员来源于同一祖先并在不同时期分野。结论:各成员来自于同一祖先的同一家族,其进化方式属于趋异性进化。

关键词：多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶序列比较结构域系统进化树

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白介素-24与肺癌

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国际呼吸杂志 2006年第2期26卷 109-111页

作者：朱晔涵杨吉成胡华成苏州大学附属第一医院呼吸科 215006 苏州大学医学院基础医学系细胞和分子生物学教研室 215007 苏州大学附属第二医院呼吸科 215004

白介素-24(IL-24)即是黑色素瘤分化相关基因-7(mda-7),属于IL-10家族成员,除具免疫刺激应答功能外,还被认为是一抑癌基因。IL-24可以抑制多种肺癌细胞的生长,其主要机制是提高肿瘤抑制基因表达,减少原癌基因的表达,促进凋亡,以及抑制肿... 详细信息

白介素-24(IL-24)即是黑色素瘤分化相关基因-7(mda-7),属于IL-10家族成员,除具免疫刺激应答功能外,还被认为是一抑癌基因。IL-24可以抑制多种肺癌细胞的生长,其主要机制是提高肿瘤抑制基因表达,减少原癌基因的表达,促进凋亡,以及抑制肿瘤血管生成。IL-24还具有增加肺癌细胞对射线敏感性的作用。IL-24有望成为肿瘤临床综合治疗的有效手段之一。

关键词：白介素-24 黑色素瘤分化相关基因-7 肺癌

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大鼠视交叉上核与松果体中Clock基因转录的昼夜节律性及不同光反应性(英文)

大鼠视交叉上核与松果体中Clock基因转录的昼夜节律性及不同光反...

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2006全国时间生物医学学术会议

作者：王国卿傅春玲李建祥杜玉珍童建苏州大学医学院基础医学系生理学教研室苏州大学放射医学与公共卫生学院卫生毒理学教研室苏州大学放射医学与公共卫生学院卫生毒理学教研室苏州大学放射医学与公共卫生学院卫生毒理学教研室苏州大学放射医学与公共卫生学院卫生毒理学教研室

目的:探讨12 h光照、12 h黑暗交替(12 h-light:12 h-dark cycle,LD)及持续黑暗(constant darkness,DD)光制下视交叉上核(suoracguasnatuc nucleus,SCN)与松果体(pineal gland,PG)中Clock基因的昼夜节律性表达及其光反应变化。方法:Sprague-Dawley大鼠在LD和DD光制下分别被饲养4周(n＝36)和8周(n＝36)后,在一昼夜内每隔4h 采集一组SCN和PG组织(n＝6),提取总RNA,用竞争性定量RT-PCR测定不同昼夜时点(circadian times,CT or zeitgeber times,ZT)各样品中Clock基因的mRNA相对表达量,通过余弦法和Clock Lab软件获取节律参数,并经振幅检验是否存在昼夜节律。结果:(1)在DD或LD光制下,SCN和PG中Clock基因mRNA的表达均呈现昼夜节律陸振荡(P<0．05)。(2)在DD光制下,SCN和PG之间Clock基因转录显示相似的节律外观(P>0．05),峰值出现于主观夜晚(SCN为CT15,PG为CT18),谷值位于主观白天(SCN为CT3,PG为CT6)。(3)与DD光制下比较,LD光制下松果体Clock基因的转录也展示出上述类似的节律外观,但其表达的振幅及峰值相的mRNA水平均明显降低(P<0．05),而其在SCN中转录的相应参数变化却恰恰相反(P<0．05)。(4)在LD光制下,PG中Clock 基因转录的节律外观反时相于SCN。结论:Clock基因的昼夜转录在SCN和松果体中存在同步的内源性节律本质, 而光导引在这西个中枢核团调节Clock基因昼夜节律性转录方面有着不同的作用。

关键词： Clock基因昼夜节律光照视交叉上核松果体

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GSFs细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立

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江苏大学学报（医学版） 2006年第6期16卷 496-499页

作者：王明华蒋东吴士良王久存苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室江苏苏州215123 苏州大学附属第一人民医院胸外科江苏苏州215006 复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433

目的：建立GSF细胞蛋白质组双向电泳图谱。方法：用含10％胎牛血清的DMEM培养液培养GSF细胞，胰酶消化后收集细胞，加入细胞裂解液使细胞充分裂解，离心后取上清液进行第一向等电聚焦电泳和平衡，再进行第二向SDS-PAGE（十二烷基磺酸钠... 详细信息

目的：建立GSF细胞蛋白质组双向电泳图谱。方法：用含10％胎牛血清的DMEM培养液培养GSF细胞，胰酶消化后收集细胞，加入细胞裂解液使细胞充分裂解，离心后取上清液进行第一向等电聚焦电泳和平衡，再进行第二向SDS-PAGE（十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）和银染显色及图像扫描与分析。结果：通过对GSF细胞蛋白提取液进行双向电泳，在17cm pH5～8IPG胶条上可得到重复性及分辨率均较好的蛋白位点。结论：GSF细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立。为其蛋白质组学的进一步研究奠定了基础。

关键词：双向电泳 GSF细胞蛋白质组

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主动脉夹层动脉瘤合并肾上腺嗜铬细胞瘤、胃平滑肌瘤一例

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江苏医药 2005年第9期31卷 719-719,i0001页

作者：王祖峰卞士中高玉振张志湘苏州大学医学院基础医学系法医学教研室 215007

患者女，43岁，2004年10月8日，无明显诱因忽然意识丧失、神志不清，被急送至张家港市中医院，经抢救20min无效死亡。尸检表面未见异常，内部检验可见左侧胸膜部分粘连，双侧胸腔内有约700ml血性积液；心包腔内有约1000ml积血，并有大... 详细信息

患者女，43岁，2004年10月8日，无明显诱因忽然意识丧失、神志不清，被急送至张家港市中医院，经抢救20min无效死亡。尸检表面未见异常，内部检验可见左侧胸膜部分粘连，双侧胸腔内有约700ml血性积液；心包腔内有约1000ml积血，并有大量凝血块，主动脉根部半月瓣上方2．0cm处有一横行的内膜破裂口，破裂口长度为3．0cm，外膜距根部2．5cm处有-0．2cm大小的破裂口。冠状动脉腔Ⅱ级狭窄；右侧肾上腺有一大小约为0．4cm×0．4cm×0．3cm的肿块，切面呈棕黄色，有包膜包裹，周边仍可见正常肾上腺组织；胃底前壁粘膜隆起，有一3．0cm×2．0cm×2．0cm肿块，表面有出血点。[第一段]

关键词：肾上腺嗜铬细胞瘤主动脉夹层动脉瘤胃平滑肌瘤主动脉根部冠状动脉腔肾上腺组织意识丧失神志不清张家港市

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外周α_1、α_2受体作用减弱脑室注射组胺对颈动脉窦反射的抑制

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中国药理学通报 2005年第2期21卷 178-182页

作者：王国卿周希平蒋星红邹容张玉英苏州大学医学院基础医学系生理学教研室江苏苏州215007 苏州大学医学院基础医学系神经生物学教研室江苏苏州215007

目的　探讨外周α1 和α2 肾上腺素受体 (α1 AR,α2AR)在脑室注射(icv)组胺 (HA)对颈动脉窦压力感受性反射(CSR)重调定中的作用。方法　孤离麻醉SD大鼠的双侧颈动脉窦区,将不同窦内压 (ISP)与其对应的平均动脉压(MAP)值进行Logistic... 详细信息

目的　探讨外周α1 和α2 肾上腺素受体 (α1 AR,α2AR)在脑室注射(icv)组胺 (HA)对颈动脉窦压力感受性反射(CSR)重调定中的作用。方法　孤离麻醉SD大鼠的双侧颈动脉窦区,将不同窦内压 (ISP)与其对应的平均动脉压(MAP)值进行Logistic五参数曲线拟合,求得ISP MAP关系曲线及其特征参数,观察icvHA以及预先在外周静脉注射(iv)α1 或α2 AR拮抗剂对CSR的影响。结果　icvHA( 60μmol·L-1, 5μl)导致ISP MAP关系曲线后半程明显上移(P<0 05),ISP和增益关系曲线中部明显下移 (P<0 05 ),反射参数MAP反射变动范围及反射最大增益减小 (P<0 05),而阈压与饱和压增大(P<0 05);预先外周iv选择性的α1 AR拮抗剂酚苄明 (PBZ, 2 5μmol·L-1, 0 15μl·g-1 )或α2 AR拮抗剂育亨宾(YOH, 5μmol·L-1, 0 15μl·g-1 ),均能明显加强HA的上述效应,YOH的这种加强作用不如PBZ的显著 (P<0 05 );单独外周iv相同剂量的PBZ或YOH对CSR无影响 (P>0 05 )。结论　脑室给HA使CSR产生快速重调定,反射敏感性下降;外周α1、α2 AR作用可减弱icvHA对CSR的重调定;外周α1 AR在调制这种抑制性重调定的过程中可能发挥重要作用。

关键词：颈动脉窦反射重调定组胺脑室注射外周α1-肾上腺素受体外周α2-肾上腺素受体平均动脉压

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