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中国生物化学与分子生物学报 2005年第4期21卷 476-481页

作者：金美芳丁向明仇灏吴士良周嘉梁郭向红潘浩苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室

多肽∶N乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAcT)是催化O糖基化的起始酶,在O聚糖的形成中起着关键的作用.为更好地研究该家族酶的结构与功能,采用PCR技术从pDONR201T2得到ppGalNAcT2全长编码序列,亚克隆至原核表达载体pGEX4T1,转化大肠杆菌BL21... 详细信息

多肽∶N乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAcT)是催化O糖基化的起始酶,在O聚糖的形成中起着关键的作用.为更好地研究该家族酶的结构与功能,采用PCR技术从pDONR201T2得到ppGalNAcT2全长编码序列,亚克隆至原核表达载体pGEX4T1,转化大肠杆菌BL21,获得相应表达产物,用谷胱甘肽S转移酶(GST)亲和层析柱进行纯化,并进行了Western印迹检测和初步的酶活测定.为进一步研究其功能还在结构研究上利用网络结构模拟SWISSMODEL服务器对ppGalNAcT2的蓖麻蛋白样结构域进行结构模拟.成功构建了原核表达载体pGEX4T1T2,获得有效表达和纯化,并初步鉴定了其活性,同时预测了其可能的三维结构和活性位点.

关键词：多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶融合表达谷胱甘肽S-转移酶亲和柱蛋白印迹蓖麻蛋白样结构域结构模拟

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大鼠蓝斑组胺受体在应激导致颈动脉窦反射重调定中的作用

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中国应用生理学杂志 2007年第2期23卷 168-172页

作者：王国卿李建祥傅春玲孙万平童建苏州大学医学院基础医学系生理学教研室苏州大学放射医学与公共卫生学院卫生毒理学教研室江苏苏州215123 苏州大学放射医学与公共卫生学院卫生毒理学教研室

目的揭示蓝斑(LC)的H1和H2受体在足底电击应激对颈动脉窦反射(CBR)重调定中的作用。方法足底电击应激1周的SD大鼠,麻醉后孤离双侧颈动脉窦区,将不同窦内压(ISP)与其对应的平均动脉压(MAP)值进行Logistic五参数曲线拟合,求得ISP-MAP、ISP... 详细信息

目的揭示蓝斑(LC)的H1和H2受体在足底电击应激对颈动脉窦反射(CBR)重调定中的作用。方法足底电击应激1周的SD大鼠,麻醉后孤离双侧颈动脉窦区,将不同窦内压(ISP)与其对应的平均动脉压(MAP)值进行Logistic五参数曲线拟合,求得ISP-MAP、ISP-增益(Gain)关系曲线及反射特征参数,观察LC微量注射选择性H1或H2受体拮抗剂氯苯吡胺(CHL)或西咪替丁(CIM)对应激状态下CBR的影响。结果应激导致ISP-MAP关系曲线显著全面上移(P<0.05),ISP-Gain关系曲线中部明显下移(P<0.05),反射参数中阈压、饱和压、调定点和最大增益时的ISP值增大(P<0.05),而MAP反射变动范围及反射最大增益减小(P<0.05);LC内注射CHL(0.5μg/μl)或CIM(1.5μg/μl)20min内均可明显减弱应激对CBR的上述改变(P<0.05),CIM的减弱效应不如CHL的显著(P<0.05);LC注射上述相同剂量的CHL或CIM对非应激大鼠的CBR无明显影响(P>0.05);LC内注射CHL或CIM均不能使应激的CBR水平完全恢复到相应的非应激对照水平。结论应激引起CBR重调定,反射敏感性下降;部分机制可能是激活中枢组胺能系统,LC的H1和H2受体尤为H1受体在应激对CBR的重调定机制中发挥重要作用,下丘脑-LC的组胺能通路可能是应激所致CBR重调定的下行通路之一;除此之外,应激作用中尚有其他因素的参与。

关键词：颈动脉窦反射重调定应激蓝斑H1受体蓝斑H2受体平均动脉压

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人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2基因反义RNA表达质粒的构建及其功能的初步研究

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中国生物化学与分子生物学报 2006年第1期22卷 43-48页

作者：仇灏金美芳周迎会孙其昌刘可人沈宏杰吴士良苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室苏州215007

反义封闭人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2)的基因表达,对胃癌细胞SGC7901中转化生长因子-β1(TGF-β1)与基质金属蛋白酶2(MMP2)基因表达及细胞增殖有影响.在对几株肿瘤细胞的pp-GalNAc-T2基因表达水平进行分析后,以高表达pp... 详细信息

反义封闭人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2)的基因表达,对胃癌细胞SGC7901中转化生长因子-β1(TGF-β1)与基质金属蛋白酶2(MMP2)基因表达及细胞增殖有影响.在对几株肿瘤细胞的pp-GalNAc-T2基因表达水平进行分析后,以高表达pp-GalNAc-T2的人胃癌细胞株SGC7901的总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增两段不同长度pp-GalNAc-T2基因片段,构建反义表达载体转染胃癌细胞SGC7901,通过G418筛选,建立一系列旨在封闭胃癌细胞SGC7901ppGalNAc-T2基因表达的亚细胞克隆.通过流式细胞术、荧光显微镜、RT-PCR及Western印迹检测反义封闭pp-GalNAc-T2基因RNA表达后胃癌细胞SGC7901增殖以及TGF-β1、MMP2表达水平的变化.反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达后,胃癌细胞SGC7901 pp-GalNAc-T2的表达水平明显降低,细胞分裂增殖减慢,表明反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达对胃癌细胞SGC7901的生长增殖有影响.结果还显示,反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达可使TGF-β1、MMP2基因在mRNA与蛋白质表达水平均增加,提示pp-GalNAc-T2基因表达可能对胃癌细胞SGC7901浸润转移产生影响.以上结果表明,pp-GalNAc-T2基因在肿瘤细胞中广泛表达,并可能与肿瘤的增殖及浸润转移相关.

关键词：多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶基质金属蛋白酶转化生长因子-β1 SGC7901细胞

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外周α_1受体作用参与应激对颈动脉窦反射的抑制

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中国临床康复 2004年第24期8卷 5022-5023页

作者：王国卿周希平孙万平邹容苏州大学医学院基础医学系生理学教研室江苏省苏州市215007

目的探讨外周α1受体是否影响应激对颈动脉窦反射(carotidsinusreflex,CSR)的重调定。方法应激1周的SD大鼠,麻醉后孤离双侧颈动脉窦区,将不同窦内压(intracarotidsinuspressure,ISP)与其对应的平均动脉压(meanarterialpressure,MAP)值进行Logistic五参数曲线方程拟合,求得ISP-MAP关系曲线及其特征参数,观察外周静脉注射选择性α1受体拮抗剂酚苄明(phenoxybenzamine,PBZ)对CSR的影响。结果静脉注射PBZ(3μmoL/L,0.15μL/g)导致应激大鼠ISP(MAP关系曲线的后半程显著下移(P<0.05),反射参数中阈压、饱和压和最大增益时的窦内压值分别从(128.37±10.05)mmHg(1mmHg=0.133kPa)、(205.15±12.18)和(166.72±11.35)mmHg减少至(116.41±8.51),(188.15±11.77)和(152.28±9.30)mmHg(F=6.60、8.05和7.75,P<0.05);静脉注射相同剂量的PBZ对非应激大鼠的CSR无明显影响(P>0.05);静脉注射PBZ不能使应激的CSR水平恢复到非应激给药后水平。结论外周α1受体参与应激对CSR的抑制性重调定;除此之外,应激作用中尚有其他因素的参与。

关键词：外周α1受体应激颈动脉窦反射抑制作用

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阴离子交换蛋白2功能异常对结肠分泌及蠕动功能的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2010年第7期30卷 788-792页

作者：张翠王博蔡璇杨希赵欧龙喜带傅国辉上海交通大学医学院临床医学系上海200025 上海交通大学基础医学院病理学教研室上海200025

目的探讨阴离子交换蛋白2(AE2)功能异常对结肠黏膜上皮细胞分泌功能及肠管蠕动功能的影响。方法通过复方地芬诺酯灌胃建立SD大鼠便秘模型(模型组,n=17),以未建模SD大鼠作为对照(对照组,n=28)。体外分离培养大鼠结肠黏膜上皮细胞,单细胞... 详细信息

目的探讨阴离子交换蛋白2(AE2)功能异常对结肠黏膜上皮细胞分泌功能及肠管蠕动功能的影响。方法通过复方地芬诺酯灌胃建立SD大鼠便秘模型(模型组,n=17),以未建模SD大鼠作为对照(对照组,n=28)。体外分离培养大鼠结肠黏膜上皮细胞,单细胞离子成像技术比较两组大鼠结肠黏膜上皮细胞培养液中加入AE2抑制剂DIDS前后pH变化值。利用Powerlab系统及Chart5软件绘制离体肠管蠕动曲线,比较两组大鼠离体肠管的蠕动幅度和频率,评价肠管蠕动功能。通过急性滴加试验观察和比较在对照组离体肠管培养液中滴加AE2抑制剂DIDS前后肠管蠕动功能的变化。结果单细胞离子成像技术检测显示,结肠黏膜上皮细胞培养液中加入DIDS后,模型组细胞内pH值继续升高,与加入DIDS后对照组细胞内pH值比较差异有统计学意义(P<0.01)。肠管蠕动曲线观测显示,模型组大鼠离体结肠平滑肌蠕动幅度和频率均明显低于对照组(P<0.05或P<0.01);急性滴加试验表明,培养液中滴加DIDS后,对照组离体结肠平滑肌蠕动幅度和频率均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论 AE2离子转运活性下降可导致结肠分泌功能紊乱及蠕动功能障碍。

关键词：阴离子交换蛋白2 结肠蠕动分泌

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大鼠颈段脊髓灰质板层及其细胞构筑

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动物学杂志 2007年第5期42卷 106-114页

作者：李东印陆志方夏春林苏州大学基础医学系解剖学教研室苏州215123 苏州大学医学院博习临床解剖学研究所苏州215123

取12只SD(Sprague-Dawley)大鼠颈段脊髓横断面冰冻切片,用焦油紫和Pal-Weigert染色法染色,光镜观察SD大鼠颈段脊髓的组织结构,对SD大鼠脊髓灰质板层的细胞构筑进行研究。结果显示,Ⅰ层边界呈长弧形,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ层呈层叠状排列,细胞... 详细信息

取12只SD(Sprague-Dawley)大鼠颈段脊髓横断面冰冻切片,用焦油紫和Pal-Weigert染色法染色,光镜观察SD大鼠颈段脊髓的组织结构,对SD大鼠脊髓灰质板层的细胞构筑进行研究。结果显示,Ⅰ层边界呈长弧形,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ层呈层叠状排列,细胞多为椭圆形。Ⅴ、Ⅵ层均可分为内侧部和外侧部,外侧部分布大型细胞,Ⅴ层内侧部以中型椭圆形、三角形细胞为主,Ⅵ层内侧部以中型梭形细胞为主。Ⅶ层位于中间带,C5-C7Ⅶ层向前角延伸和Ⅷ层一起占据前角大部,Ⅶ及Ⅷ层的中型和大型细胞呈集中分布。Ⅷ层在C1-C4及C8占前角大部,在C5-C7位于前角内侧部。Ⅸ层主要由含大型运动神经元的核团组成。Ⅹ层由中型梭形细胞和小型星状细胞组成。对比观察发现,SD大鼠脊髓颈段板层类似于猫的Rexed分层,但灰质轮廓、板层出现节段、板层形态及其变化等方面均有所不同。

关键词：大鼠脊髓灰质板层细胞构筑

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ING4的原核表达及多克隆抗体的制备

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苏州大学学报（医学版） 2006年第6期26卷 930-932,935页

作者：王金志缪竞诚盛伟华谢宇锋杨吉成苏州大学医学院基础医学系细胞与分子生物学教研室江苏苏州215123

目的在原核系统中表达并纯化ING4蛋白,制备多克隆抗体。方法构建表达载体pET-21a(+)-ING4,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳检测。结果构建的表达载体pET-21a(+)-hGDNF经酶切、PCR鉴定均出现750 bp左右的条带,测序结... 详细信息

目的在原核系统中表达并纯化ING4蛋白,制备多克隆抗体。方法构建表达载体pET-21a(+)-ING4,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳检测。结果构建的表达载体pET-21a(+)-hGDNF经酶切、PCR鉴定均出现750 bp左右的条带,测序结果正确,用IPTG诱导转化菌有30KD大小的目的条带,表达的目的蛋白占菌体总蛋白10%以上,以包涵体形式存在,纯化后其纯度可达70%以上。用纯化的ING4蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结论制备的多克隆抗体为下阶段的研究提供了重要的实验材料。

关键词：原核表达抗体 ING4

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环氧化酶-2在皮肤肿瘤中的表达及其临床意义

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中华皮肤科杂志 2008年第7期41卷 476-477页

作者：华海康王修珍金城胡佳尹兴平朱小红杨莉佳陶诗沁李明南京医科大学附属无锡第二医院皮肤科江苏无锡214002 苏州大学医学院基础医学系病理教研室

研究发现，在长期使用非甾体抗炎药（NSAIDs）治疗的类风湿性关节炎患者中结肠癌的发病率下降40％-60％。体内外及动物模型等研究表明，NSAIDs的作用靶点是环氧化酶（cyclooxygenase，COX）。COX有两种异构体：COX-1和COX-2，已证明COX-... 详细信息

研究发现，在长期使用非甾体抗炎药（NSAIDs）治疗的类风湿性关节炎患者中结肠癌的发病率下降40％-60％。体内外及动物模型等研究表明，NSAIDs的作用靶点是环氧化酶（cyclooxygenase，COX）。COX有两种异构体：COX-1和COX-2，已证明COX-2在多种内脏肿瘤中存在过表达，因此，COX-2与肿瘤的关系得到了普遍关注。我们应用免疫组化方法检测了COX-2在几种常见皮肤肿瘤组织中的表达，并探讨其临床意义。

关键词：环氧化酶-2 皮肤肿瘤临床意义类风湿性关节炎患者 COX-2 非甾体抗炎药 NSAIDs 免疫组化方法

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一株新的鼠抗人2IgB7-H3功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定

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现代免疫学 2006年第4期26卷 278-282页

作者：饶爱华周迎会陈永井马震宇张学光苏州大学基础医学系生物化学教研室苏州大学医学院生物技术研究所苏州215007

研制功能性鼠抗人2IgB7-H3单克隆抗体。以人2IgB7-H3基因转染细胞1．929／2IGB7-H3为免疫原，常规免疫6～8周龄的雌性BALB／c小鼠；利用B淋巴杂交瘤技术，将免疫小鼠脾脏细胞和骨髓瘤细胞株SP2／0融合，1．929／2IGB7-H3细胞为抗原筛选... 详细信息

研制功能性鼠抗人2IgB7-H3单克隆抗体。以人2IgB7-H3基因转染细胞1．929／2IGB7-H3为免疫原，常规免疫6～8周龄的雌性BALB／c小鼠；利用B淋巴杂交瘤技术，将免疫小鼠脾脏细胞和骨髓瘤细胞株SP2／0融合，1．929／2IGB7-H3细胞为抗原筛选阳性细胞；经间接免疫荧光标记法对杂交瘤细胞进行反复筛选和多次克隆化培养；采用快速定性试纸法鉴定单抗Ig亚类；利用竞争抑制性实验分析该单抗识别的抗原表位；采用MTT法分析该单抗在体外阻断DC对T细胞的促增殖效应。结果：获得了1株持续稳定分泌鼠抗人2IgB7-H3单克隆抗体的杂交瘤细胞株（命名为7D7），该单抗可特异识别1．929／2IGB7-H3分子和介导有效的共刺激信号。该单抗的成功获得和其生物学特性的初步鉴定，为进一步研究B7-H3两个异构体在DC细胞及肿瘤细胞上的作用机制奠定了物质基础。

关键词： 2IgB7-H3 单克隆抗体共刺激信号杂交瘤细胞株

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线粒体动力学改变对APP/PS1小鼠移植黑色素瘤生长的抑制作用

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吉林大学学报（医学版） 2020年第3期46卷 476-481页

作者：林久涵田琳张娜娜董营吕航王丹曲萌张勇孙连坤于春艳刘希北华大学医学院病理教研室吉林吉林132013 北华大学医学院临床医学系吉林吉林132013 北华大学医学院分子生物教研室吉林吉林132013 吉林大学基础医学院病理生理学系吉林长春130021 北华大学医学院细胞生物教研室吉林吉林132013

目的:探讨线粒体动力学的变化对APP/PS1转基因小鼠移植黑色素瘤生长的抑制作用及其机制。方法:将C57BL/6J(C57)和APP/PS1雄性小鼠分为C57移植瘤组(n=7)和APP/PS1移植瘤组(n=7)。观察2组小鼠肿瘤出现时间并计算肿瘤体积,绘制移植瘤生长... 详细信息

目的:探讨线粒体动力学的变化对APP/PS1转基因小鼠移植黑色素瘤生长的抑制作用及其机制。方法:将C57BL/6J(C57)和APP/PS1雄性小鼠分为C57移植瘤组(n=7)和APP/PS1移植瘤组(n=7)。观察2组小鼠肿瘤出现时间并计算肿瘤体积,绘制移植瘤生长曲线。光学显微镜观察2组小鼠肿瘤组织形态表现,Western blotting法检测2组小鼠肿瘤组织中线粒体融合蛋白2(Mfn2)、动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体分裂蛋白1(Fis1)、泛素化及多泛素化蛋白、LC3、PINK1及Parkin蛋白表达水平。结果:C57移植瘤组和APP/PS1移植瘤组小鼠皮肤下均见肿瘤组织,肿瘤细胞内呈现黑色素颗粒。与C57移植瘤组比较,APP/PS1移植瘤组小鼠出瘤时间晚,肿瘤组织体积小(P<0.05)。小鼠肿瘤组织中Mfn2表达水平降低(P<0.05),Fis1和Drp1表达水平升高(P<0.05),泛素化及多聚泛素化蛋白、LC3-Ⅱ、PINK1和Parkin蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:APP/PS1小鼠移植瘤模型肿瘤生长缓慢,其机制可能与PINK1/Parkin通路参与线粒体自噬有关。

关键词： APP/PS1小鼠移植黑色素瘤线粒体动力学线粒体分裂融合线粒体自噬

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