检索结果-内蒙古大学图书馆

针对各种肿瘤发生、发展机制，肿瘤基因治疗大致从以下几个方面着手，包括抑制癌基因的表达活性，补偿肿瘤抑制基因的活性，抑制血管生成，免疫基因治疗，自杀基因疗法，肿瘤多药耐药基因治疗等。本文介绍了肿瘤基因治疗的策略，对目前肿瘤基因治疗研究面临的主要问题及展望进行了论述，并就ING4,hIL24的肿瘤基因治疗情况进行了简述。

关键词： Ad-ING4 IL-24 肿瘤基因治疗细胞因子基因表达

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用无细胞蛋白合成系统重组表达恶性疟原虫蛋白的研究

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中国人兽共患病学报 2008年第9期24卷 816-819,823页

作者：曹俊金子修坪井敬文鸟居本美诸葛洪祥夏超明高琪苏州大学医学院基础医学系苏州215123 日本长崎大学热带病研究所日本爱媛大学无细胞技术研究中心日本爱媛大学分子寄生虫教研室江苏省血吸虫寄生虫病防治研究所卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室江苏省寄生虫分子生物学重点实验室

目的探索无细胞麦芽体外蛋白合成系统重组表达恶性疟原虫蛋白可行性,并检测用重组蛋白制备的免疫血清对原虫蛋白的特异性反应。方法将目的蛋白PfRON2的部分片断克隆连接到重组表达载体后,用无细胞麦芽体外蛋白合成系统进行重组表达并纯... 详细信息

目的探索无细胞麦芽体外蛋白合成系统重组表达恶性疟原虫蛋白可行性,并检测用重组蛋白制备的免疫血清对原虫蛋白的特异性反应。方法将目的蛋白PfRON2的部分片断克隆连接到重组表达载体后,用无细胞麦芽体外蛋白合成系统进行重组表达并纯化,用纯化的重组蛋白免疫小鼠制备免疫血清,并用免疫斑点实验(Western blot)和免疫荧光抗体实验(IFA)检测该血清对恶性疟蛋白的特异性反应。结果成功克隆的重组质粒能在无细胞麦芽体外蛋白合成系统中生成大小相符的GST融合蛋白,并能较好地纯化。免疫斑点实验中,用该重组蛋白制备的免疫血清能检测到重组蛋白和恶性疟目标蛋白,免疫荧光抗体实验显示该免疫血清能成功地标记恶性疟目标蛋白所在部位。结论无细胞麦芽体外蛋白合成系统可应用于恶性疟原虫蛋白的重组表达,获得的免疫血清能特异性识别疟原虫蛋白。

关键词：无细胞蛋白合成恶性疟原虫重组表达免疫血清

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全龟酶解液抗疲劳的初步研究

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实验动物与比较医学 2007年第4期27卷 255-256页

作者：顾范博吴士良苏州大学医学院基础医学系机能实验室苏州215123 苏州大学医学院生化与分子生物学教研室苏州215123

目的初步探索全龟水解液的耐疲劳作用。方法利用酶降解全龟酸抽提物,采用DABS-C1柱前衍生HPLC法,测定全龟酶水解液的游离氨基酸组份,以Folin-酚试剂法测定全龟抽提液的蛋白质与部分微量元素的含量,并观察了服用了全龟酶解液的小鼠耐疲... 详细信息

目的初步探索全龟水解液的耐疲劳作用。方法利用酶降解全龟酸抽提物,采用DABS-C1柱前衍生HPLC法,测定全龟酶水解液的游离氨基酸组份,以Folin-酚试剂法测定全龟抽提液的蛋白质与部分微量元素的含量,并观察了服用了全龟酶解液的小鼠耐疲劳效果。结果全龟酸抽提液含较高的蛋白质和钙,酶降解液含丰富的二十种氨基酸。结论全龟酶解液富含丰富的氨基酸,具有明显的抗疲劳作用。

关键词：龟 HPLC 酶解液氨基酸

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人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)RNA干扰载体的构建及鉴定

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江苏大学学报（医学版） 2007年第2期17卷 102-104,110页

作者：仇灏刘可人朱琍燕吴士良苏州大学医学院生化工程研究所基础医学系生物化学与分子生物学教研室江苏苏州215123

目的:构建稳定的转染人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)基因的RNA i载体。方法:遵循RNA干扰目标序列的选取原则,对ppGalNAc-T2基因mRNA序列设计五条可能的小干扰RNA(siRNA),PCR方法扩增得到siRNA内源表达系统,转染至人胃癌... 详细信息

目的:构建稳定的转染人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)基因的RNA i载体。方法:遵循RNA干扰目标序列的选取原则,对ppGalNAc-T2基因mRNA序列设计五条可能的小干扰RNA(siRNA),PCR方法扩增得到siRNA内源表达系统,转染至人胃癌细胞株SGC7901,运用RT-PCR方法检测筛选得到其中能高效引起ppGal-NAc-T2基因表达沉默的siRNA;化学合成带荧光标记的该段RNA O ligo,转染细胞并用荧光显微镜观察转染情况,进一步鉴定该siRNA对ppGalNAc-T2的抑制作用;构建ppGalNAc-T2的RNA干扰真核表达载体,酶切及测序鉴定后转染SGC7901细胞并经G418筛选得到稳定的ppGalNAc-T2基因敲减细胞株,RT-PCR方法检测该转染细胞株ppGalNAc-T2表达水平。结果:采用RNA i技术,将高表达ppGalNAc-T2的SGC7901细胞的T2表达水平明显降低。结论:成功构建稳定的ppGalNAc-T2基因敲减细胞株,为今后进一步深入研究ppGalNAc-T2的生物学功能奠定了基础。

关键词：多肽 N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2) RNAi SGC7901细胞

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β3GalT7基因的小干扰RNA筛选及其表达载体构建

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江苏大学学报（医学版） 2007年第2期17卷 93-96页

作者：朱琍燕仇灏岳爱环马珍妮吴艳胡鹤娟吴士良苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室生化工程研究所江苏苏州215123

目的:以β3GalT7(人β1,3-半乳糖基转移酶7)基因为研究对象,运用RNA干扰技术平台,筛选出该基因的有效小干扰siRNA并构建该基因的RNA干扰表达载体,建立其下调表达模型。方法:通过PCR方法筛选针对β3GalT7基因的有效小干扰siRNA,并合成带... 详细信息

目的:以β3GalT7(人β1,3-半乳糖基转移酶7)基因为研究对象,运用RNA干扰技术平台,筛选出该基因的有效小干扰siRNA并构建该基因的RNA干扰表达载体,建立其下调表达模型。方法:通过PCR方法筛选针对β3GalT7基因的有效小干扰siRNA,并合成带有荧光标记的RNA oligo进一步验证其有效性,进而构建该基因的RNA干扰表达载体建立其下调表达模型。结果:成功筛选到β3GalT7基因的有效小干扰siRNA,并进一步成功构建β3GalT7的RNA干扰真核表达载体。结论:成功构建β3GalT7的真核干扰表达载体,继而可以获得β3GalT7表达受抑制的人胃癌细胞SGC7901克隆,为研究该基因在肿瘤发生发展中的作用提供实验模型。

关键词：人β1,3-半乳糖基转移酶7基因小干扰RNA RNA干扰表达载体

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一个中国雄性激素不敏感综合征大家系中AR-Arg^(840)Cys突变的生物学效应

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中国生物化学与分子生物学报 2007年第2期23卷 160-166页

作者：王明华叶璐夷蒋东吴士良赵志民王久存苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室苏州大学附属第一人民医院胸外科贵阳中医学院第一附属医院普外科复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433

雄性激素不敏感综合征在中国有一个患者大家系.遗传分析表明,雄性激素受体(AR)的Arg840Cys突变是引起本家系疾病的原因.家系中的患者个体呈现高度变异的表型特征.选择具有显著代表性的3个患者个体,成功建立了这些个体的生殖器皮肤成纤... 详细信息

雄性激素不敏感综合征在中国有一个患者大家系.遗传分析表明,雄性激素受体(AR)的Arg840Cys突变是引起本家系疾病的原因.家系中的患者个体呈现高度变异的表型特征.选择具有显著代表性的3个患者个体,成功建立了这些个体的生殖器皮肤成纤维细胞系(GSF),并研究了各细胞系的生长动力曲线和生长周期的分布,发现这些指标和个体病症的严重程度呈一定的正相关性.通过比较野生型与突变性AR的空间结构变化以及转激活能力的变化,结合个体表型的差异性,推测由于个体的基因背景差异,相关AR辅调控因子的表达也会存在着差异,可能最终导致该家系患者显著的表型变化.目前,已利用蛋白质双向电泳,观察到个体间差异表达的蛋白,并在其中寻找AR的辅调控因子,以期进一步阐明AR-Arg840Cys突变一因多效性的机制.

关键词：雄性激素不敏感综合征生殖器皮肤成纤维细胞辅调控因子转激活

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人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2基因反义RNA表达质粒的构建及其功能的初步研究

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中国生物化学与分子生物学报 2006年第1期22卷 43-48页

作者：仇灏金美芳周迎会孙其昌刘可人沈宏杰吴士良苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室苏州215007

反义封闭人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2)的基因表达,对胃癌细胞SGC7901中转化生长因子-β1(TGF-β1)与基质金属蛋白酶2(MMP2)基因表达及细胞增殖有影响.在对几株肿瘤细胞的pp-GalNAc-T2基因表达水平进行分析后,以高表达pp... 详细信息

反义封闭人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2)的基因表达,对胃癌细胞SGC7901中转化生长因子-β1(TGF-β1)与基质金属蛋白酶2(MMP2)基因表达及细胞增殖有影响.在对几株肿瘤细胞的pp-GalNAc-T2基因表达水平进行分析后,以高表达pp-GalNAc-T2的人胃癌细胞株SGC7901的总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增两段不同长度pp-GalNAc-T2基因片段,构建反义表达载体转染胃癌细胞SGC7901,通过G418筛选,建立一系列旨在封闭胃癌细胞SGC7901ppGalNAc-T2基因表达的亚细胞克隆.通过流式细胞术、荧光显微镜、RT-PCR及Western印迹检测反义封闭pp-GalNAc-T2基因RNA表达后胃癌细胞SGC7901增殖以及TGF-β1、MMP2表达水平的变化.反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达后,胃癌细胞SGC7901 pp-GalNAc-T2的表达水平明显降低,细胞分裂增殖减慢,表明反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达对胃癌细胞SGC7901的生长增殖有影响.结果还显示,反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达可使TGF-β1、MMP2基因在mRNA与蛋白质表达水平均增加,提示pp-GalNAc-T2基因表达可能对胃癌细胞SGC7901浸润转移产生影响.以上结果表明,pp-GalNAc-T2基因在肿瘤细胞中广泛表达,并可能与肿瘤的增殖及浸润转移相关.

关键词：多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶基质金属蛋白酶转化生长因子-β1 SGC7901细胞

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ING4的原核表达及多克隆抗体的制备

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苏州大学学报（医学版） 2006年第6期26卷 930-932,935页

作者：王金志缪竞诚盛伟华谢宇锋杨吉成苏州大学医学院基础医学系细胞与分子生物学教研室江苏苏州215123

目的在原核系统中表达并纯化ING4蛋白,制备多克隆抗体。方法构建表达载体pET-21a(+)-ING4,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳检测。结果构建的表达载体pET-21a(+)-hGDNF经酶切、PCR鉴定均出现750 bp左右的条带,测序结... 详细信息

目的在原核系统中表达并纯化ING4蛋白,制备多克隆抗体。方法构建表达载体pET-21a(+)-ING4,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳检测。结果构建的表达载体pET-21a(+)-hGDNF经酶切、PCR鉴定均出现750 bp左右的条带,测序结果正确,用IPTG诱导转化菌有30KD大小的目的条带,表达的目的蛋白占菌体总蛋白10%以上,以包涵体形式存在,纯化后其纯度可达70%以上。用纯化的ING4蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结论制备的多克隆抗体为下阶段的研究提供了重要的实验材料。

关键词：原核表达抗体 ING4

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