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江苏大学学报（医学版） 2004年第4期14卷 282-284页

作者：孙其昌周嘉梁王秀珍周迎会吴士良苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室苏州大学医学院生化工程研究所江苏苏州215007

目的 :研究体外干扰素 (INF)对瘢痕组织成纤维细胞 (FB)中转化生长因子 β1(TGF β1)、血小板衍生生长因子BB(PDGF BB)、基质金属蛋白酶 (MMP 1)以及糖基转移酶 (ppGalNAc T2 )的mRNA表达的影响 ,以求阐明干扰素对病理性瘢痕的作用机理... 详细信息

目的 :研究体外干扰素 (INF)对瘢痕组织成纤维细胞 (FB)中转化生长因子 β1(TGF β1)、血小板衍生生长因子BB(PDGF BB)、基质金属蛋白酶 (MMP 1)以及糖基转移酶 (ppGalNAc T2 )的mRNA表达的影响 ,以求阐明干扰素对病理性瘢痕的作用机理。方法 :组织块法培养瘢痕组织FB ,传代后分成 3组①对照组 :生理盐水处理 ;②低浓度组 :10 0U/mlINF α2b处理 ;③高浓度组 :10 0 0 0U/mlINF α2b处理 ;RT PCR检测TGF β1、MMP 1、PDGF BB及ppGalNAc T2表达。结果 :体外培养瘢痕FB经 10 0U/ml及 10 0 0 0U/ml干扰素α 2b处理后 ,RT PCR检测TGF β1、PDGF BB及pp GalNAc T2表达降低 ,MMP 1表达升高 ,呈显著差异 ,且具有浓度依赖性。结论 :干扰素α2b对瘢痕FB具有抑制作用 ,其机理可能与多种细胞因子有关 ,如TGF β1、PDGF BB。

关键词：增生性瘢痕干扰素α2b TGF-β1 PDGF-BB MMP-1 ppGalNAcT2 治疗病理性瘢痕实验转化生长因子β1 血小板衍生生长因子BB 糖基转移酶基质金属蛋白酶

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人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族分子进化的初步研究

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江苏大学学报（医学版） 2006年第2期16卷 105-108页

作者：杭赛宇吴士良苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室江苏苏州215123 苏州大学生化工程研究所江苏苏州215123

目的:探讨人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族成员间的同源性,揭示其进化规律。方法:采用生物信息学软件和网上数据库对核酸蛋白质序列进行同源比较,结构域分析和进化树绘制。结果:人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族一级结构、二... 详细信息

目的:探讨人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族成员间的同源性,揭示其进化规律。方法:采用生物信息学软件和网上数据库对核酸蛋白质序列进行同源比较,结构域分析和进化树绘制。结果:人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族一级结构、二级结构均有较高的同源性,系统进化树显示各成员来源于同一祖先并在不同时期分野。结论:各成员来自于同一祖先的同一家族,其进化方式属于趋异性进化。

关键词：多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶序列比较结构域系统进化树

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人类多肽 N-乙酰氨基半乳糖转移酶2抗原表位分析、抗体制备及亚细胞定位

人类多肽 N-乙酰氨基半乳糖转移酶2抗原表位分析、抗体制备及亚细...

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华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会

作者：杭赛宇胡鹤娟朱燕马震宇闫石吴士良苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室生化工程研究所苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室生化工程研究所苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室生化工程研究所苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室生化工程研究所苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室生化工程研究所苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室生化工程研究所

为了研究人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)蛋白表达的亚细胞结构定位,制备特异性抗体。我们联合应用了多种方法对多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2的二级结构和表面特性进行了细致地分析,发现其优势抗原表位均位于蓖麻样结... 详细信息

为了研究人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)蛋白表达的亚细胞结构定位,制备特异性抗体。我们联合应用了多种方法对多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2的二级结构和表面特性进行了细致地分析,发现其优势抗原表位均位于蓖麻样结构域中;进一步采用了RT-PCR方法克隆到蓖麻样结构域cDNA片段,将获得的蓖麻样结构域cDNA片段定向插入到表达载体PGEX-5X-3中,且导入大肠杆菌,诱导表达,获重组融合蛋白;将得到的重组融合蛋白免疫新西兰大白兔,我们获得了兔抗人ppGalNAc-T2的多克隆抗体,并进行ELISA法检测抗体效价,抗体滴度为1:3200,并进行了有效性检测;蛋白质印迹实验证实此多克隆抗体具有较好的反应性和特异性。通过荧光免疫细胞化学进行亚细胞定位,发现ppGalNAc-T2主要表达在细胞核旁的Golgi复合体,说明它们主要分布在Golgi复合体上,证实它们是在Golgi复合体参与蛋白质的糖链修饰。本文特异性扩增和表达蓖麻样结构域并制备了抗体,有利于进一步阐明RICIN结构域的功能,为研究多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2及其家族的结构和功能打下基础。

关键词：多肽 N-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAc-T) 抗原表位抗体亚细胞定位

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多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族在不同发育阶段的小鼠脑中的mRNA表达差异

多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族在不同发育阶段的小鼠脑中的mRN...

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华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会

作者：胡鹤娟杨静杭赛宇吴士良苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室生化工程研究所苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室生化工程研究所苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室生化工程研究所苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室生化工程研究所

目的:为了观察三个不同发育阶段的小鼠脑中多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族(polypeptide: N-acetylgalactosaminytransferase,ppGalNAc-T)的表达差异,以探讨多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族在脑发育中的功能与作用;方法:取不同发育阶... 详细信息

目的:为了观察三个不同发育阶段的小鼠脑中多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族(polypeptide: N-acetylgalactosaminytransferase,ppGalNAc-T)的表达差异,以探讨多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族在脑发育中的功能与作用;方法:取不同发育阶段(即孕末期,新生期,4周龄)的小鼠各六只, 取脑组织后,我们采用半定量逆转录PCR方法从mRNA水平上粗略地研究了多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族在三个发育阶段的表达情况,以β-actin作为内对照,计算酶家族各成员的相对表达量,从而进行半定量分析;结果:我们发现三个不同发育阶段的小鼠脑中此酶家族的表达谱是不尽相同的。 T1、T2、T3、T4、T9、T10、T13、T14稳定表达,T3、T4、T9、T10在胎鼠中表达较高,在新生鼠和4周龄鼠中表达较低,且在新生鼠和4周龄鼠中的表达基本相同,T1、T2、T14等在各发育阶段鼠脑中表达基本无变化;结论:我们初步认为在小鼠脑的发育过程中多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族的表达有一定的变化,在今后的实验中,将在时间点及脑分区,即时空性表达方面,作更进一步地完善细致的研究, 进一步推动多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族在神经系统发育方面的研究工作,以探讨多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族在脑发育中的功能与作用

关键词： ppGalNAc-T 小鼠脑表达 RT-PCR

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β3GalT7基因的小干扰RNA筛选及其表达载体构建

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江苏大学学报（医学版） 2007年第2期17卷 93-96页

作者：朱琍燕仇灏岳爱环马珍妮吴艳胡鹤娟吴士良苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室生化工程研究所江苏苏州215123

目的:以β3GalT7(人β1,3-半乳糖基转移酶7)基因为研究对象,运用RNA干扰技术平台,筛选出该基因的有效小干扰siRNA并构建该基因的RNA干扰表达载体,建立其下调表达模型。方法:通过PCR方法筛选针对β3GalT7基因的有效小干扰siRNA,并合成带... 详细信息

目的:以β3GalT7(人β1,3-半乳糖基转移酶7)基因为研究对象,运用RNA干扰技术平台,筛选出该基因的有效小干扰siRNA并构建该基因的RNA干扰表达载体,建立其下调表达模型。方法:通过PCR方法筛选针对β3GalT7基因的有效小干扰siRNA,并合成带有荧光标记的RNA oligo进一步验证其有效性,进而构建该基因的RNA干扰表达载体建立其下调表达模型。结果:成功筛选到β3GalT7基因的有效小干扰siRNA,并进一步成功构建β3GalT7的RNA干扰真核表达载体。结论:成功构建β3GalT7的真核干扰表达载体,继而可以获得β3GalT7表达受抑制的人胃癌细胞SGC7901克隆,为研究该基因在肿瘤发生发展中的作用提供实验模型。

关键词：人β1,3-半乳糖基转移酶7基因小干扰RNA RNA干扰表达载体

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人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)RNA干扰载体的构建及鉴定

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江苏大学学报（医学版） 2007年第2期17卷 102-104,110页

作者：仇灏刘可人朱琍燕吴士良苏州大学医学院生化工程研究所基础医学系生物化学与分子生物学教研室江苏苏州215123

目的:构建稳定的转染人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)基因的RNA i载体。方法:遵循RNA干扰目标序列的选取原则,对ppGalNAc-T2基因mRNA序列设计五条可能的小干扰RNA(siRNA),PCR方法扩增得到siRNA内源表达系统,转染至人胃癌... 详细信息

目的:构建稳定的转染人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)基因的RNA i载体。方法:遵循RNA干扰目标序列的选取原则,对ppGalNAc-T2基因mRNA序列设计五条可能的小干扰RNA(siRNA),PCR方法扩增得到siRNA内源表达系统,转染至人胃癌细胞株SGC7901,运用RT-PCR方法检测筛选得到其中能高效引起ppGal-NAc-T2基因表达沉默的siRNA;化学合成带荧光标记的该段RNA O ligo,转染细胞并用荧光显微镜观察转染情况,进一步鉴定该siRNA对ppGalNAc-T2的抑制作用;构建ppGalNAc-T2的RNA干扰真核表达载体,酶切及测序鉴定后转染SGC7901细胞并经G418筛选得到稳定的ppGalNAc-T2基因敲减细胞株,RT-PCR方法检测该转染细胞株ppGalNAc-T2表达水平。结果:采用RNA i技术,将高表达ppGalNAc-T2的SGC7901细胞的T2表达水平明显降低。结论:成功构建稳定的ppGalNAc-T2基因敲减细胞株,为今后进一步深入研究ppGalNAc-T2的生物学功能奠定了基础。

关键词：多肽 N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2) RNAi SGC7901细胞

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糖基转移酶的结构生物学

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生命的化学 2003年第5期23卷 369-371页

作者：丁向明吴士良陈惠黎(指导) 苏州大学医学院生物化学与分子生物学教研室苏州大学生化工程研究所苏州215007 复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系卫生部糖复合物重点实验室上海200032

随着糖组学的提出,糖基转移酶已成为人们的研究热点。糖基转移酶参与二糖、聚糖、糖苷和复合糖类中糖部分的合成。糖基转移酶的催化活性及其高度的底物专一性都与其结构密切相关。糖基转移酶在糖类酶促合成中具有应用前景。

关键词：糖基转移酶结构与功能

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